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草鱼脂酰辅酶A合成酶4基因全长cDNA分子克隆及表达调控 预览
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作者 韩振 高琦 +4 位作者 许建和 易乐飞 申欣 程汉良 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期2442-2450,共9页
本试验采用反转录PCR(RT-PCR)技术克隆草鱼脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)基因全长cDNA,利用实时荧光定量PCR技术研究ACSL4基因在草鱼大脑、心脏、脾脏、肝胰脏、肌肉、肾脏、肠系膜脂肪、前肠、中肠、后肠10种组织中的表达情况,并对投喂不同... 本试验采用反转录PCR(RT-PCR)技术克隆草鱼脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)基因全长cDNA,利用实时荧光定量PCR技术研究ACSL4基因在草鱼大脑、心脏、脾脏、肝胰脏、肌肉、肾脏、肠系膜脂肪、前肠、中肠、后肠10种组织中的表达情况,并对投喂不同淀粉源饲料以及饥饿再投喂0、3、6、12和24h后草鱼肝胰脏中ACSL4基因表达情况进行研究。结果显示:草鱼ACSL4基因cDNA全长2418bp,其开放阅读框2121bp,共编码706个氨基酸;草鱼ACSL4蛋白的氨基酸序列包含1个跨膜结构域、1个脂肪酸绑定基序和1个ATP/AMP绑定基序。草鱼ACSL4mRNA在大脑和脾脏中相对表达量较高,显著高于其他组织(P<0.05),在肌肉中相对表达量最低;投喂不同淀粉源饲料对草鱼肝胰脏中ACSL4mRNA相对表达量无显著影响(P>0.05);饥饿再投喂12h后,草鱼肝胰脏中ACSL4mRNA相对表达量达到最高值,显著高于其他时间段(P<0.05),24h后恢复至最初水平。本试验从草鱼10种混合组织中克隆了ACSL4基因全长cDNA,其所编码的氨基酸序列的主要功能性位点脂肪酸绑定基序和ATP/AMP绑定基序在不同物种间高度保守;草鱼ACSL4基因主要在大脑和脾脏中表达;饲料中淀粉源对草鱼肝胰脏中ACSL4基因的表达无显著影响;在饥饿再投喂12h后,草鱼肝胰脏中ACSL4mRNA相对表达量达到最高值,随后显著下降至最初水平。 展开更多
关键词 草鱼 长链脂酰辅酶A合成酶4 分子克隆 表达调控
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日粮中血粉替代鱼粉对草鱼生长和肌肉氨基酸组成的影响
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作者 孙树奎 高琦 +4 位作者 仲召延 韩振 许建和 程汉良 《饲料研究》 CAS 北大核心 2019年第6期31-34,共4页
试验旨在研究血粉替代部分鱼粉对草鱼生长及肌肉营养成分的影响。以含鱼粉12%日粮为对照组,以血粉分别替代对照组饲料中25%、50%和75%的鱼粉,配制3种试验饲料,投喂平均体质量194.0 g的草鱼64 d。结果表明,各试验组草鱼摄食量下降,增重... 试验旨在研究血粉替代部分鱼粉对草鱼生长及肌肉营养成分的影响。以含鱼粉12%日粮为对照组,以血粉分别替代对照组饲料中25%、50%和75%的鱼粉,配制3种试验饲料,投喂平均体质量194.0 g的草鱼64 d。结果表明,各试验组草鱼摄食量下降,增重率显著低于对照组(P<0.05),但25%血粉替代组草鱼饲料系数、肝体比、脏体比、肌肉粗脂肪的含量与对照组无显著性差异(P>0.05),而50%和75%血粉替代组的饲料系数、肌肉粗脂肪明显升高;与对照组相比较,各血粉替代组的粗蛋白含量、粗灰分含量、必需氨基酸总量和鲜味氨基酸总量均无显著性差异(P>0.05)。综合分析表明,血粉代替草鱼日粮中鱼粉的量为25%时,可以获得较好的效果。 展开更多
关键词 血粉 鱼粉 草鱼 生长性能
对分课堂模式在水生生物学教学中的探索和反思 预览 被引量:1
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作者 高迎莉 +1 位作者 程汉良 阎斌伦 《科技创新导报》 2018年第12期212-214,共3页
针对当前高校讲授式课堂存在的弊端,2013年,复旦大学张学新教授提出了"对分课堂"的教学改革模式。自2014年推广以来,对分课堂在教育界引起广泛的关注并引导不同学科的教师进行了实践。笔者在水产养殖专业课程《水生生物学》的教学过程... 针对当前高校讲授式课堂存在的弊端,2013年,复旦大学张学新教授提出了"对分课堂"的教学改革模式。自2014年推广以来,对分课堂在教育界引起广泛的关注并引导不同学科的教师进行了实践。笔者在水产养殖专业课程《水生生物学》的教学过程中,初步探索对分课堂的教学模式,发现在该教学模式下,学生学习的积极性和主动性有很大的提升,课堂气氛活跃,学生的课堂参与度以及课堂互动大大提高。与此同时,在实践的过程中,笔者也发现一些问题并进行反思,以便更好地提升教学质量。 展开更多
关键词 对分课堂 水生生物学 教学模式探索
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以需求为导向推进水产养殖学专业教育改革 预览
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作者 许建和 +4 位作者 高迎莉 王兴强 董志国 程汉良 阎斌伦 《科技创新导报》 2018年第15期236-237,共2页
根据社会需求,调整培养目标,通过理论教学、实验教学和生产实习等各个环节的协调与互补,确定专业优势明显、特色鲜明的办学理念是淮海工学院水产养殖学专业作为江苏省品牌专业正在探索的教育教学改革内容之一。首先,按照理论基础扎实、... 根据社会需求,调整培养目标,通过理论教学、实验教学和生产实习等各个环节的协调与互补,确定专业优势明显、特色鲜明的办学理念是淮海工学院水产养殖学专业作为江苏省品牌专业正在探索的教育教学改革内容之一。首先,按照理论基础扎实、实践能力出众的要求,建立一支教学、科研和实践能力均过硬的专业师资队伍。通过专家讲座和优秀校友经验分享,培养学生的专业兴趣,提高学生的学习热情。通过理论和实践教学与社会需求的"无缝对接",实现专业建设的与时俱进发展。总而言之,面向需求的水产养殖学专业教育教学改革将从调整办学定位和培养目标、建设双师型教师队伍、建立知名专家讲座平台、加强校企合作及实践教学基地建设、完善教学和科研平台等方面进行探索。 展开更多
关键词 水产养殖学 地方高校 需求 改革
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草鱼乙酰辅酶A羧化酶β基因全长cDNA分子克隆与表达分析 预览 被引量:2
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作者 严媛 程汉良 +4 位作者 许建和 韩振 易乐飞 申欣 《动物营养学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期1827-1836,共10页
本试验采用反转录PCR(RT-PCR)和c DNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得草鱼乙酰辅酶A羧化酶β(ACC2)基因全长c DNA,并采用实时荧光定量PCR技术研究ACC2基因在肝胰脏、脾脏、大脑、前肠、中肠、后肠、肾脏、肌肉、心脏和肠系膜脂肪... 本试验采用反转录PCR(RT-PCR)和c DNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得草鱼乙酰辅酶A羧化酶β(ACC2)基因全长c DNA,并采用实时荧光定量PCR技术研究ACC2基因在肝胰脏、脾脏、大脑、前肠、中肠、后肠、肾脏、肌肉、心脏和肠系膜脂肪等组织中的表达,同时,还对饲喂不同脂肪源饲料12周后草鱼肝胰脏和肌肉中以及饥饿再次投喂后3、6、12和24 h肝胰脏中ACC2 mRNA的表达变化进行了研究。结果显示:草鱼ACC2基因c DNA全长7 533 bp,含1个7 149 bp的开放阅读框,编码2 382个氨基酸,ACC2蛋白计算分子质量为268.34 ku,等电点为6.13。草鱼ACC2基因存在可变剪接,形成另外1个同工型(isoforms),比分子质量为268.34 ku的ACC2蛋白少8个氨基酸。ACC2基因在所有检测组织中均有表达,ACC2 mRNA的相对表达量在肌肉中最高,为29.13,在肝胰脏中最低,仅为1.90。肌肉中ACC2 mRNA的相对表达量与大脑、前肠和心脏差异不显著(P〉0.05),但显著高于其他组织(P〈0.05)。投喂不同脂肪源饲料对草鱼肝胰脏及肌肉中ACC2 mRNA相对表达量无显著影响(P〉0.05);饥饿再投喂后草鱼肝胰脏中ACC2 mRNA相对表达量在12 h达到高峰值,为6.17,之后明显下降,24 h时仅为2.84。本试验成功克隆了草鱼ACC2基因全长c DNA,其主要的功能位点ATP结合位点、生物素结合位点与其他脊椎动物相比基本保守。草鱼ACC2基因主要在肌肉等脂肪分解活跃的组织中表达,投喂不同脂肪源饲料对草鱼肝胰脏中ACC2 mRNA的相对表达量无显著影响;饥饿再投喂后,肝胰脏中ACC2 mRNA的相对表达量在投喂12 h后最高。 展开更多
关键词 草鱼 乙酰辅酶A羧化酶β 分子克隆 基因表达
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团头鲂NK-lysin基因鉴定和表达分析 预览 被引量:2
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作者 詹柒凤 +3 位作者 崔蕾 范君 王卫民 刘红 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1145-1155,共11页
为研究抗菌肽NK-LYSIN在团头鲂免疫系统中的可能功能,本实验从团头鲂转录组中钓取到2个NK-lysin基因(nkla和nklb),通过PCR扩增并测序验证其ORF序列。通过荧光定量PCR检测其在健康组织和嗜水气单胞菌感染后免疫组织中的表达,并构建其... 为研究抗菌肽NK-LYSIN在团头鲂免疫系统中的可能功能,本实验从团头鲂转录组中钓取到2个NK-lysin基因(nkla和nklb),通过PCR扩增并测序验证其ORF序列。通过荧光定量PCR检测其在健康组织和嗜水气单胞菌感染后免疫组织中的表达,并构建其原核表达体系。结果显示,团头鲂nkla和nklb分别编码122和136个氨基酸,NKLA和NKLB均属于鞘脂激活蛋白样蛋白家族成员,各含有6个高度保守的半胱氨酸及1个Sap B结构域。在健康团头鲂各组织中,nkla在脾脏中表达量极高,在肌肉和血液中表达量极低;而nklb则在肠中表达量较高,在头肾中表达量较低,在其他组织均有表达。nkla和nklb不同的表达模式暗示它们可能存在功能上的分化。经嗜水气单胞菌感染后,团头鲂nkla与nklb表达变化模式相似,头肾中,表达量在4 h时显著下降;肝脏中,表达量在4 h达到最高,而后回落到正常水平;在脾脏和肠中4 h时开始下降,72 h时达到峰值,暗示NK-lysin可能在团头鲂抗嗜水气单胞菌感染过程中发挥重要作用。另外,本实验对nkla和nklb进行了原核表达,为进一步研究NK-lysin的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 团头鲂 嗜水气单胞菌 抗菌肽 NK-lysin 荧光定量 原核表达
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团头鲂白细胞介素6基因启动子报告载体的构建及活性分析 预览 被引量:2
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作者 扶晓琴 +2 位作者 饶友亮 王卫民 刘红 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期86-91,共6页
为了解鱼类白细胞介素6(IL-6)基因的转录调控原理及其免疫作用机制,构建5个团头鲂il-6基因启动子的荧光素酶报告质粒(PGL3-IL-6P),以PGL3-basic质粒作为阴性对照,将它们分别与内参质粒pRL-TK共转染进鲤EPC细胞,并用100ng/mL的LPS诱... 为了解鱼类白细胞介素6(IL-6)基因的转录调控原理及其免疫作用机制,构建5个团头鲂il-6基因启动子的荧光素酶报告质粒(PGL3-IL-6P),以PGL3-basic质粒作为阴性对照,将它们分别与内参质粒pRL-TK共转染进鲤EPC细胞,并用100ng/mL的LPS诱导转染过重组载体的细胞,24h后检测荧光素酶的活性.结果显示与阴性对照组相比,质粒转染组PGL3-IL-6P-0、PGL3-IL-6P-1、PGL3-IL-6P-2、PGL3-IL-6P-3与PGL3-IL-6P-4的荧光素酶活性均明显升高,其中PGL3-IL-6P-4组的荧光素酶活性最高,表明该启动子缺失体(-379至+34)包含il-6的核心启动子.用LPS刺激转染过重组载体的细胞后发现,与未经LPS刺激的对照组相比,仅PGL3-IL-6P-4组的活性明显增强,而其余缺失体的活性则没有显著变化,这进-步表明PGL3-IL-6P-4缺失体包含核心启动子区,并推测该核心启动子区域存在的潜在转录因子NFGκB与C/EBPβ等可能是响应LPS刺激的重要作用元件. 展开更多
关键词 团头鲂 白细胞介素6 荧光素酶报告质粒 启动子活性 LPS
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团头鲂Dmrt4基因的克隆与表达分析 预览 被引量:3
8
作者 苏利娜 +3 位作者 李鸿 周凤娟 王卫民 刘红 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期110-116,共7页
为研究团头鲂Dmrt4基因的可能作用,采用RACE-PCR技术克隆了团头鲂卵巢Dmrt4基因的cDNA全长序列,采用实时荧光定量PCR技术对其胚胎及出膜后30d内各期、成鱼不同组织、雌雄性腺各分期的表达进行研究。结果表明,团头鲂Dmrt4基因至少存在2... 为研究团头鲂Dmrt4基因的可能作用,采用RACE-PCR技术克隆了团头鲂卵巢Dmrt4基因的cDNA全长序列,采用实时荧光定量PCR技术对其胚胎及出膜后30d内各期、成鱼不同组织、雌雄性腺各分期的表达进行研究。结果表明,团头鲂Dmrt4基因至少存在2种不同的剪接形式,分别命名为Dmrt4a和Dmrt4b。其中,Dmrt4acDNA全长1 265bp,编码352个氨基酸,含DM和DMA 2个结构域;Dmrt4b cDNA全长1 081bp,编码281个氨基酸,仅含DMA结构域。氨基酸序列同源性分析显示,团头鲂Dmrt4与牙鲆、奥利亚罗非鱼的同源性最高。实时荧光定量PCR结果表明,Dmrt4基因在团头鲂胚胎期至出膜后30d内均有表达,且在受精后32h的表达量最高;成鱼卵巢的表达量显著高于其他组织(P〈0.01);Ⅱ期卵巢的表达量显著高于其他时期,也显著高于精巢各分期(P〈0.01)。上述结果表明,Dmrt4基因可能对团头鲂卵母细胞初期的生长起到重要作用,在雌鱼性腺发育过程中亦发挥一定的作用。 展开更多
关键词 团头鲂 Dmrt4基因 分子克隆 基因差异表达 胚胎发育 性别决定与分化
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淮海工学院水产养殖学专业本科生导师制改革成果与展望 预览 被引量:3
9
作者 许建和 +3 位作者 高迎莉 董志国 程汉良 阎斌伦 《考试周刊》 2018年第4期188-188,共1页
水产养殖学专业新生学习热情不高、思想状态不稳已成为制约专业建设和学科发展的重要因素。因此,淮海工学院海洋生命与水产学院从2013级水产养殖学专业新生开始实施本科生科研导师制改革探索,经过4年多的教育改革实践,在学生专业兴趣引... 水产养殖学专业新生学习热情不高、思想状态不稳已成为制约专业建设和学科发展的重要因素。因此,淮海工学院海洋生命与水产学院从2013级水产养殖学专业新生开始实施本科生科研导师制改革探索,经过4年多的教育改革实践,在学生专业兴趣引导、实践和创新能力培养、提高毕业论文质量等方面都取得了显著的效果。同时,本文也对教育改革实践中可以完善的4个方面进行了简要分析,期待学院在本科生科研导师制改革道路上能取得更好的效果。 展开更多
关键词 水产养殖学 导师制 改革
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