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人呼吸道合胞病毒快速抗原检测方法的床旁检测适用性探讨 被引量:4
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作者 丁雅 田润 +5 位作者 钱渊 孙宇 邓洁 王芳 朱汝南 赵林清 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期139-143,共5页
目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)快速抗原检测方法的临床实用性,为临床选择床旁检测方法提供依据。方法收集2015年1月5日至2月7日首都儿科研究所附属儿童医院临床疑为病毒感染的急性呼吸道感染(ARI)住院患儿呼吸道标本209份,其中包... 目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)快速抗原检测方法的临床实用性,为临床选择床旁检测方法提供依据。方法收集2015年1月5日至2月7日首都儿科研究所附属儿童医院临床疑为病毒感染的急性呼吸道感染(ARI)住院患儿呼吸道标本209份,其中包括咽拭子标本78份、鼻咽分泌物标本131份。应用免疫层析方法,对上述标本进行RSV快速抗原检测,应用转录(1iT)-巢式PCR进行RSV核酸检测。对其中的鼻咽分泌物标本,同时应用直接免疫荧光进行RSV抗原检测。统计学分析快速抗原检测方法的灵敏度、特异度及与对照方法间的一致性。结果RSV快速抗原检测方法与直接免疫荧光相比较,在鼻咽分泌物检测中特异度为97.3%,灵敏度为83.9%,两种方法的一致性检验Kappa=0.86;X^2=73.9561,P〈0.01;与RT-巢式PCR相比较,特异度在鼻咽分泌物中为100.0%,咽拭子中为92.0%,灵敏度在鼻咽分泌物中为74.2%,咽拭子中为77.8%,两种方法的一致性检验在鼻咽分泌物中Kappa=0.74,X^2=73.9561,P〈0.01,在咽拭子中Kappa=0.62,X^2=25.2478,P〈0.01。采用RSV快速抗原和RT-巢式PCR检测,咽拭子标本的RSV阳性检出率(21.7%、7.3%)均明显低于鼻咽分泌物标本(78.3%、78.0%)。RSV快速抗原检测方法可床旁、手工操作,整体操作所需时间约为10min。结论RSV快速抗原检测方法与直接免疫荧光及RT-巢式PCR方法相比较,有很好的灵敏度与特异度,RSV快速抗原检测为RSV阳性的标本可确定为阳性,但阴性结果需要进一步经直接免疫荧光及RT-巢式PCR方法确证;对临床诊断为急性呼吸道感染的儿童进行RSV检测时更适合用鼻咽分泌物标本;RSV快速抗原检测方法具有快速、高效、操作方便等特点,适合于床旁检测。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 床旁检测 抗原检测
护生人际信任与核心自我、安全感的相关性分析 预览
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作者 丁雅 李艳 《当代护士:综合版(上旬刊)》 2016年第6期136-138,共3页
目的探讨护生人际信任与核心自我、安全感的相关性,为提高护生的人际信任度提供参考。方法采用人际信任量表、核心自我评价量表及安全感量表对大二本科护生进行统计分析。结果护生的人际信任、核心自我、安全感无性别差异。护生的人际... 目的探讨护生人际信任与核心自我、安全感的相关性,为提高护生的人际信任度提供参考。方法采用人际信任量表、核心自我评价量表及安全感量表对大二本科护生进行统计分析。结果护生的人际信任、核心自我、安全感无性别差异。护生的人际信任与核心自我呈正相关,护生的人际信任与安全感不相关。结论核心自我是影响护生人际信任的一个重要因素,提高护生的核心自我评价水平可以促进护生人际信任水平的提高,在校护生的安全感对人际信任没有影响。 展开更多
关键词 护生 人际信任 核心自我 安全感
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中枢神经系统感染和脓毒症患儿人副肠孤病毒和非脊髓灰质炎肠道病毒感染的特征 被引量:1
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作者 吴迪 宋秦伟 +7 位作者 张又 钱渊 丁雅 赵林清 邓洁 王芳 孙宇 朱汝南 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2016年第2期153-156,共4页
目的 通过检测患儿脑脊液和血清标本中的HPeV和NPEV,结合临床探讨其在儿童中的感染特征.方法 收集2014年1月至12月首都儿科研究所附属儿童医院来自600例16岁以下怀疑中枢神经系统感染或脓毒症患儿的脑脊液标本543份和血清标本173份,其中... 目的 通过检测患儿脑脊液和血清标本中的HPeV和NPEV,结合临床探讨其在儿童中的感染特征.方法 收集2014年1月至12月首都儿科研究所附属儿童医院来自600例16岁以下怀疑中枢神经系统感染或脓毒症患儿的脑脊液标本543份和血清标本173份,其中116例患儿同时收集到脑脊液和血清标本.通过实时荧光RT-PCR和巢式RT-PCR的方法对HPeV和NPEV进行筛查及分型.结果 在最终诊断为CNS感染的136例患儿中,HPeV阳性率为1.5%,NPEV阳性率为16.9%;诊断为脓毒症的51例患儿中,HPeV阳性率为5.9%,NPEV阳性率为3.9%;其他诊断的413例患儿中,HPeV阳性率为3.4%,NPEV阳性率为2.9%.HPeV感染患儿以0月~<3月年龄组最多,而NPEV则以3岁~<7岁组最多.NPEV感染的高峰为7月~9月,而HPeV感染的高峰为11月和12月.结论 HPeV感染患儿年龄低于NPEV感染患儿,HPeV和NPEV可在儿童中引起脓毒症或CNS感染等严重疾病. 展开更多
关键词 人副肠孤病毒 非脊髓灰质炎肠道病毒 中枢神经系统感染 脓毒症 儿童
安徽省科学技术行业发展研究
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作者 丁雅 《安徽科技》 2016年第11期32-33,共2页
分析安徽省科技行业发展概况和科研机构数量变化,结合对长三角城市群其他省市和安徽其他行业的分析.指出安徽科技行业发展中存在科研机构以小微型企业为主、资金投入不足、生产总值较低、贡献率有待提高等问题,提出扶植小微科研机构... 分析安徽省科技行业发展概况和科研机构数量变化,结合对长三角城市群其他省市和安徽其他行业的分析.指出安徽科技行业发展中存在科研机构以小微型企业为主、资金投入不足、生产总值较低、贡献率有待提高等问题,提出扶植小微科研机构做大做强、建立多元化资金投入机制、加强监管等措施。 展开更多
关键词 安徽 科技行业 科研机构
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北京脓毒症患儿血清中发现的3型人副肠孤病毒的全基因组序列分析 被引量:1
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作者 朱汝南 罗雷 +6 位作者 钱渊 赵林清 邓洁 王芳 孙宇 宋秦伟 丁雅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期541-548,共8页
3型人副肠孤病毒(Human parechovirus 3,HPeV3)是2004年发现的与儿童脓毒症密切相关的一种病原体。HPeV基因组是不分节段的单股正链线性RNA。测定其全基因组序列有助于了解北京儿科患者中流行的HPeV3的遗传背景和进化地位。方法采用... 3型人副肠孤病毒(Human parechovirus 3,HPeV3)是2004年发现的与儿童脓毒症密切相关的一种病原体。HPeV基因组是不分节段的单股正链线性RNA。测定其全基因组序列有助于了解北京儿科患者中流行的HPeV3的遗传背景和进化地位。方法采用将一名脑脊液和血清中HPeV3核酸检测均为阳性的脓毒症患儿(编号:BJC3174)的血清标本接种到细胞后从培养上清中检测到HPeV3核酸,随后分段扩增HPeV3BJ-C3174株的全基因组序列,并进行序列测定、拼接及分析。结果表明BJ-C3174株基因组全长(未包括3′末端的PolyA尾)7 329个核苷酸(nt),其中5′和3′编码区(UTR)分别长707nt和91nt,编码区长6 531nt,可编码一个长为2 177个氨基酸的多聚蛋白。BJ-C3174病毒株与已发表的HPeV3型病毒株位于同一进化分枝,而与HPeV8、HPeV6和HPeV1等型别进化距离较远。BJ-C3174株与德国HPeV3BONN-2株亲缘关系最为密切,两者核苷酸相似性达到99.3%,氨基酸相似性达到99.8%,均高于其与HPeV3原型株A308/99的相似性(89.6%和98.6%)。各基因片段中,BJC3174株均与BONN-2株相似性最高,核苷酸和氨基酸相似性分别达到98.3%和99.3%以上。未发现BJ-C3174株存在基因重组现象。 展开更多
关键词 3型人副肠孤病毒 全基因组 系统进化树及同源性分析
人副肠孤病毒与儿童脓毒症和中枢神经系统感染的相关性 被引量:5
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作者 罗雷 朱汝南 +6 位作者 赵林清 邓洁 王芳 孙宇 宋秦伟 丁雅 钱渊 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期444-448,共5页
目的 了解疑似中枢神经系统(CNS)感染患儿中人副肠孤病毒(HPeV)的感染状况及脓毒症感染的关系.方法 回顾性收集2012年因疑似CNS感染而在首都儿科研究所附属儿童医院住院患儿的脑脊液标本.采用针对HPeV基因组相对保守的5'端非编码... 目的 了解疑似中枢神经系统(CNS)感染患儿中人副肠孤病毒(HPeV)的感染状况及脓毒症感染的关系.方法 回顾性收集2012年因疑似CNS感染而在首都儿科研究所附属儿童医院住院患儿的脑脊液标本.采用针对HPeV基因组相对保守的5'端非编码区和变异显著的衣壳蛋白基因3和1交界区的通用引物和分型引物,分别对脑脊液标本核酸进行反转录巢式PCR (RT-nPCR)扩增.阳性标本的PCR产物直接进行核苷酸序列测定,与GenBank中的序列进行比对分析并建立系统进化树.对HPeV筛查阳性的脑脊液标本进行肠道病毒(EV)、EB病毒(EBV)和人巨细胞病毒(HCMV)的检测.同时收集HPeV筛查阳性患儿的其他类型标本(包括血清、鼻咽洗液、粪便标本等)进行上述检测.结果 577份脑脊液标本中检测到18份HPeV阳性标本,检出率为3.1%.阳性患儿中男12例,女6例,年龄范围为15 d~14岁,其中3个月以下患儿最多,占7例;其次是3个月~1岁年龄组5例;另有3例阳性患儿>9岁.对分型成功的10份脑脊液标本中HPeV的序列分析显示7份为HPeV 3型,3份为HPeV 1型.18份HPeV筛查阳性的脑脊液标本中EV、EBV和HCMV检测均为阴性.脑脊液HPeV筛查阳性患儿的其他类型标本中,8份血清标本中检出2份阳性(均为HPeV3),其中1份与脑脊液标本检出及分型结果一致,而另1份对应脑脊液标本筛查为阳性,但未分出型别;2份粪便标本中检出1份阳性(HPeV1),但对应脑脊液标本未分出型别.HPeV阳性患儿临床诊断主要是脓毒症(7/18)和CNS感染(4/18).其中6例(6/8) HPeV3阳性患儿诊断为脓毒症.HPeV3感染多集中于8月份,而HPeV1则集中于1月份.结论 HPeV与北京儿童脓毒症和CNS感染性疾病相关.1岁以下儿童为易感人群.HPeV3型为脑脊液中主要的检出型别. 展开更多
关键词 中枢神经系统感染 脓毒症 儿童 人副肠孤病毒
血清特异性抗体检测在儿童呼吸道病毒感染病原诊断中应用的探讨 被引量:29
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作者 宋秦伟 朱汝南 +5 位作者 邓洁 王芳 赵林清 孙宇 丁雅 钱渊 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期 440-444,共5页
目的探讨常见呼吸道病毒特异性IgM抗体检测在儿童急性下呼吸道感染(ALRI)病原快速诊断中的实际应用价值。方法2009年3月至2010年9月在首都儿科研究所附属儿童医院就诊患儿207例,符合ALRI诊断标准,采集鼻咽分泌物用直接免疫荧光法(... 目的探讨常见呼吸道病毒特异性IgM抗体检测在儿童急性下呼吸道感染(ALRI)病原快速诊断中的实际应用价值。方法2009年3月至2010年9月在首都儿科研究所附属儿童医院就诊患儿207例,符合ALRI诊断标准,采集鼻咽分泌物用直接免疫荧光法(DFA)检测呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV)、甲型流感病毒(IFVA)、乙型流感病毒(IFVB)和副流感病毒1、2、3型(PIV1、PIV2、PIV3)7种常见呼吸道病毒抗原,同时收集患儿急性期血清,采用ELISA和间接免疫荧光方法(IFA)分别检测血清中常见呼吸道病毒的特异性IgM。结果DFA、ELISA和IFA检测结果的阳性率分别为67.6%、57.5%和39.6%。ELISA和IFA与DFA检测结果符合率分别为21.7%和31.4%。ELISA和IFA与DFA检出病毒相符的患儿采血时发病天数平均值从高到低依次分别为ADV(12.0d)、PIV2(9.6d)、IFV(9.5d)、RSV(5.3d)和PIV3(15.0d)、ADV(9.2d)、RSV(7.4d)。3岁以下年龄组患儿血清IgM阳性和抗原检测的符合率较高。结论尽管血清IgM抗体检测的结果与抗原检测的结果有差异,但对儿科ALRI的早期快速诊断有一定的应用价值,尤其对于低年龄儿童;另外可以提供呼吸道病毒感染的血清学证据,如与病毒抗原诊断方法联合应用可提高病原确诊率。 展开更多
关键词 儿童 呼吸道感染 免疫球蛋白M 抗体 抗原
急性呼吸道感染儿童中WU多瘤病毒基因组序列特征分析 被引量:1
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作者 赵林清 钱渊 +5 位作者 朱汝南 邓洁 王芳 孙宇 丁雅 张尼娜 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期447-452,共6页
为了解从北京地区急性呼吸道感染儿童中发现的WU多瘤病毒的基因组编码特征,并对其进行基因序列多样性分析,应用针对基因组5'端非编码区、衣壳蛋白VP1、VP2编码基因以及LTAg编码基因的引物对,从已确证为WU病毒阳性的来自北京地区急性呼... 为了解从北京地区急性呼吸道感染儿童中发现的WU多瘤病毒的基因组编码特征,并对其进行基因序列多样性分析,应用针对基因组5'端非编码区、衣壳蛋白VP1、VP2编码基因以及LTAg编码基因的引物对,从已确证为WU病毒阳性的来自北京地区急性呼吸道感染儿童的编号为BJF5276的临床标本中经聚合酶链反应扩增得到预期的基因片段,直接测序后将序列拼接得到全基因组序列,进而推导其基因组编码特征;随后从其它21例已确证为WU多瘤病毒阳性的急性呼吸道感染儿童标本中扩增得到衣壳蛋白VP2编码区基因,进行基因序列测定以及基因序列多样性分析。得到了WU病毒BJF5276全基因组序列。序列分析结果显示WU病毒BJF5276基因组序列全长为5229bp,共有5个主要的CDS(Coding domain sequences),分别编码衣壳蛋白VP2、VP3、VP1,并以其互补序列为模板,编码STAg和LTAg;所得到的22例VP2蛋白编码区基因序列同源性比较结果显示病毒VP2基因编码区序列与GenBank中已有的64个序列之间同源性很高;Mega4.0NJ进化树(Neighbor-joiningtree)分析显示这22个VP2基因序列分属于不同的基因进化簇,其中20个序列属于进化簇I中的Ia,另外2个序列属于进化簇III,其中的一个序列在IIIb基因进化簇中,另外一个序列独立成簇,不属于现有的IIIa或IIIb,暂时将其命名为IIIc。本研究结果提示北京地区的WU病毒具有多瘤病毒科的基因组编码特性;序列非常保守,有分属于不同基因进化簇的WU病毒在北京地区流行,与文献报道的以Ib流行为主所不同的是北京地区的WU病毒以Ia为主,且有新的基因进化簇出现。 展开更多
关键词 WU多瘤病毒(WU病毒) 基因序列分析 急性呼吸道感染 儿童
人Boca病毒外壳蛋白VP2在杆状病毒中的表达及病毒样颗粒的构建
9
作者 赵林清 钱渊 +5 位作者 丁雅 朱汝南 邓洁 王芳 孙宇 LiYan 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期333-338,共6页
为了得到结构与功能更接近于天然病毒的人Boca病毒(HBoV)主要外壳蛋白VP2,将来源于北京急性呼吸道感染患儿标本(BJ3722)的HBoV VP2基因编码区克隆至杆状病毒表达转移载体(pFastBac1),通过转座反应获得重组Bacmid DNA,以这种DNA转... 为了得到结构与功能更接近于天然病毒的人Boca病毒(HBoV)主要外壳蛋白VP2,将来源于北京急性呼吸道感染患儿标本(BJ3722)的HBoV VP2基因编码区克隆至杆状病毒表达转移载体(pFastBac1),通过转座反应获得重组Bacmid DNA,以这种DNA转染昆虫细胞Sf9。收获重组病毒及其昆虫细胞培养物,经SDS-PAGE并应用兔抗HBoV VP2高价免疫血清进行Western blot,以检测所表达的VP2蛋白。昆虫细胞经重组病毒感染后7~10d细胞完全裂解时,收获培养上清(VLPs-A),或在感染后4~5d细胞裂解前收获细胞并将其裂解(VLPs-B),经两次40%的蔗糖垫超速离心,所得的样品经Western blot和间接免疫荧光方法(IFA)检测,以确定VLPs的组分,然后应用免疫电镜观察病毒样颗粒的形态结构。通过考马斯亮蓝染色和Western blot检测,均可检测到分子量约61kD的目的蛋白;通过IFA在重组杆状病毒感染的Sf9细胞中检测到特异性荧光,表明HBoV VP2蛋白得到了表达并具有抗原特异性。纯化后的样品在电镜下可见类似于天然细小病毒B19的直径20nm左右的具有空壳结构的球形颗粒。本研究成功构建了HBoV VP2重组杆状病毒,得到了具有抗原特异性的HBoV VP2蛋白表达并形成了HBoV的VLPs。 展开更多
关键词 人Boca病毒 外壳蛋白VP2 重组杆状病毒 病毒样颗粒(VLPs)
北京地区两株人偏肺病毒M蛋白基因的原核表达及抗原活性分析 预览 被引量:1
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作者 曹守春 钱渊 +3 位作者 李国华 朱汝南 赵林清 丁雅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期 60-62,共3页
人偏肺病毒(Human metapneumovirus,hMPV)是最近发现的可引起人类呼吸道感染的一种副粘病毒,现被归类于偏肺病毒属(Metapneumovirus),是至今发现的第一个与人类疾病相关的偏肺病毒属成员。目前已经受到世界范围的重视,已有十多... 人偏肺病毒(Human metapneumovirus,hMPV)是最近发现的可引起人类呼吸道感染的一种副粘病毒,现被归类于偏肺病毒属(Metapneumovirus),是至今发现的第一个与人类疾病相关的偏肺病毒属成员。目前已经受到世界范围的重视,已有十多个国家报道了不同年龄组人群中hMPV的感染情况。研究结果显示,hMPV是人类,特别是婴幼儿急性呼吸道感染的常见病原之一,是导致婴幼儿发病率和死亡率升高的重要原因之一。婴幼儿hMPV感染患者的临床症状类似于呼吸道合胞病毒感染,从中度上呼吸道感染症状到毛细支气管炎和肺炎。我们课题组也于2003年在北京地区患急性呼吸道感染的儿童标本中检测到hMPV的感染,并发现北京地区存在以原始标本BJ1816和BJ1887为代表的两种不同的基因型。 展开更多
关键词 人偏肺病毒 基质蛋白M 原核表达 抗原活性分析
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北京地区人偏肺病毒核蛋白基因的原核表达及抗原活性分析 预览 被引量:1
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作者 曹守春 钱渊 +3 位作者 朱汝南 李国华 赵林清 丁雅 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期 1027-1030,共4页
目的用大肠杆菌表达获得人偏肺病毒主要结构蛋白N蛋白,为下一步的深入研究奠定基础.方法从重组质粒pUCm-N1816中PCR扩增获得N基因,用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后插入到原核表达载体pET30a(+)中,得到重组表达质粒pET30a-N1816,转化大肠杆菌BL... 目的用大肠杆菌表达获得人偏肺病毒主要结构蛋白N蛋白,为下一步的深入研究奠定基础.方法从重组质粒pUCm-N1816中PCR扩增获得N基因,用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后插入到原核表达载体pET30a(+)中,得到重组表达质粒pET30a-N1816,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导培养.SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白的表达和抗原性.结果经双酶切和测序证明1.2kb N1816基因正确插入pET30a中,并具有正确的读码框架,得到预期的pET30a-N1816重组原核表达质粒.37℃,1 mmol/LIPTG诱导培养6 h后产生大量带6个组氨酸标记的重组N蛋白,主要以包涵体形式存在,占细胞总蛋白的20%左右.N蛋白粗提物经Co2+亲和层析获得较理想纯化.Western blot结果显示,体外所表达的蛋白能和特异性抗血清及人血清反应.结论本研究成功构建了重组pET30a-N1816原核表达质粒,N蛋白获得了高效表达,并且具有特异抗原活性,可用于人偏肺病毒的深人研究. 展开更多
关键词 人偏肺病毒 核蛋白 原核表达 抗原活性分析
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上海地区婴幼儿腹泻的轮状病毒分子流行病学研究 预览 被引量:32
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作者 曾玫 朱启镕 +4 位作者 张又 李国华 陈冬梅 丁雅 钱渊 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期 10-15,共6页
目的了解上海地区婴幼儿腹泻轮状病毒感染的分子流行病学特点.方法收集复旦大学儿科医院1999年11月~2001年12月,住院的腹泻病儿童粪便标本1230份.采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测轮状病毒基因组,用核酸杂交确定轮状病毒G血清型别.采用Kru... 目的了解上海地区婴幼儿腹泻轮状病毒感染的分子流行病学特点.方法收集复旦大学儿科医院1999年11月~2001年12月,住院的腹泻病儿童粪便标本1230份.采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测轮状病毒基因组,用核酸杂交确定轮状病毒G血清型别.采用Kruskal-Wallis非参数统计法对不同G血清型别的临床变量作分析.结果 1230份标本中轮状病毒基因阳性493份(40.1%),其中RNA长型397份(80.5%),短型55份(11.2%),混合型18份(3.7%),未能分型23份(4.7%).328份含有足量RNA的标本行RT-PCR扩增VP7全基因,254份标本(77.4%)获得阳性产物,进一步作杂交分型显示G1血清型141例(55.5%),占第一位;G3血清型70例 (27.6%),占第二位;G2血清型24例(9.4%), 占第三位;混合感染血清型16例(6.3%), 占第四位;仅发现1例G4 型 (0.4%), 未分型2例(0.8%).所有G2型均为电泳短型,而G1、G3、G4均为电泳长型.四种型别轮状病毒感染患儿的平均发病年龄以及发热峰值、热程、每天腹泻峰次数、腹泻天数、呕吐天数差异无显著意义.结论 A组轮状病毒是目前上海地区腹泻儿童的主要致病原.在不同的3年中,轮状病毒的电泳型均以长型为主,流行血清型为G1-G3型 ,G4型很少见.未发现轮状病毒感染的临床特征与不同G血清型有关. 展开更多
关键词 上海 婴幼儿腹泻 轮状病毒分子 流行病学 病毒基因
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