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中国流行风疹野病毒E1糖蛋白编码基因的分祈 被引量:9
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作者 许文波 郑渡平 +5 位作者 毕胜利 朱贞 周淑洁 何维宽 TerylK.Frey 《中国计划免疫》 2003年第2期65-71,共7页
为确定现阶段中国流行的风疹野病毒E1糖蛋白编码基因的变异和基因型别,1999年用Vero细胞从安徽省2起风疹爆发病例的咽喉拭子中分离到5株风疹病毒。用逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)从5株风疹病毒中扩增出E1糖蛋白编码基因l185个核苷酸... 为确定现阶段中国流行的风疹野病毒E1糖蛋白编码基因的变异和基因型别,1999年用Vero细胞从安徽省2起风疹爆发病例的咽喉拭子中分离到5株风疹病毒。用逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)从5株风疹病毒中扩增出E1糖蛋白编码基因l185个核苷酸片段。通过对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,提示这5株风疹病毒为基因I型,该型为北美和欧洲的优势毒株。首次证实风疹病毒基因I型在中国大陆流行。这5株风疹病毒辽1糖蛋白编码基因与基因I型代表株RA—27核苷酸差异为2.7%一3.2%;与中国1980年分离的风疹病毒基因Ⅱ型代表株取BRDⅡ的核苷酸差异为8.5%一8.6%。但这5株病毒的重要抗原位点未发生变异,E1糖蛋白氨基酸在所有的分离株中的变异<3%。开展中国风疹病毒监测和建立风疹病毒毒株库及基因数据库,对未来先天性风疹综合征和风疹的控制及消除十分必要。 展开更多
关键词 中国 风疹病毒 E1糖蛋白 编码基因 分祈
树应用于疾病动物模型的研究进展 预览 被引量:7
2
作者 秦雪 +1 位作者 毕胜利 李瑗 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期 97-98,共2页
树鼩(tupaia,tree shrew)是最低等的灵长类哺乳动物,主要分布于亚洲东南部的热带和亚热带地区.由于具有体小、比较容易饲养、价廉及新陈代谢和大体解剖远比啮齿类动物更接近人类等优点,树鼩已广泛用于病毒、细菌、寄生虫和神经、内分... 树鼩(tupaia,tree shrew)是最低等的灵长类哺乳动物,主要分布于亚洲东南部的热带和亚热带地区.由于具有体小、比较容易饲养、价廉及新陈代谢和大体解剖远比啮齿类动物更接近人类等优点,树鼩已广泛用于病毒、细菌、寄生虫和神经、内分泌、泌尿、肿瘤等方面的研究.疾病动物模型为研究疾病的发病机理、治疗及防治提供了平台.本文对树鼩作为疾病动物模型的研究作一概述。 展开更多
关键词 疾病动物模型 树鼩 亚热带地区 亚洲东南部 啮齿类动物 哺乳动物 大体解剖 新陈代谢 发病机理 灵长类
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丙型肝炎病毒的病毒学检测方法 被引量:9
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作者 王晓艳 +2 位作者 陈斯勇 沈丽萍 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期158-161,共4页
丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)感染引起的丙型病毒性肝炎呈全球分布,世界人口的3%即大约1.7亿人为丙肝感染者,且发展中国家高于发达国家。1992-1995年全国病毒性肝炎血清流行病学调查显示,我国人群丙肝感染率为3.2%。... 丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)感染引起的丙型病毒性肝炎呈全球分布,世界人口的3%即大约1.7亿人为丙肝感染者,且发展中国家高于发达国家。1992-1995年全国病毒性肝炎血清流行病学调查显示,我国人群丙肝感染率为3.2%。HCV感染自然转阴率低,极易慢性化,治疗效果差,且与肝硬化肝癌的发生及发展密切相关。丙型病毒性肝炎不仅严重危害人民健康,而且给社会带来了巨大的经济损失。因此,丙肝感染仍是我国重要的公共卫生问题之一。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 病毒学检测 丙型病毒性肝炎 血清流行病学调查 公共卫生问题 肝感染者 丙肝感染 发展中国家
用杆状病毒系统表达戊型肝炎病毒全长结构基因的研究 预览 被引量:8
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作者 张明程 +1 位作者 刘崇柏 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期 354-356,共3页
目的获取含有戊型肝炎病毒(HEV)全长结构基因的重组杆状病毒,表达戊型肝炎病毒结构蛋白.方法将HEV全长结构基因(5 147~7 126 nt)插入杆状病毒表达载体pAcUW51,与线性化杆状病毒DNA(Baculo Gold DNA)共转染Sf9昆虫细胞,挑病毒斑进一步感... 目的获取含有戊型肝炎病毒(HEV)全长结构基因的重组杆状病毒,表达戊型肝炎病毒结构蛋白.方法将HEV全长结构基因(5 147~7 126 nt)插入杆状病毒表达载体pAcUW51,与线性化杆状病毒DNA(Baculo Gold DNA)共转染Sf9昆虫细胞,挑病毒斑进一步感染Sf9细胞,用SDS-PAGE,Western Blot及免疫荧光检测戊型肝炎病毒结构蛋白的表达及活性.结果 SDS-PAGE分析表明HEV结构基因在杆状病毒系统中高效表达,有相对分子质量约为73 000和63 000两种形式;Western Blot及免疫荧光检测证明表达产物可与HEV阳性血清特异反应,说明具有HEV特异抗原性.结论应用杆状病毒表达系统成功表达了HEV结构蛋白. 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 杆状病毒系统 戊型肝炎 基因表达 重组戊型肝炎结构蛋白
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杆状病毒表达EV71病毒样颗粒的装配、制备纯化与鉴定 被引量:7
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作者 曹蕾 +6 位作者 宋敬东 田苗苗 田瑞光 孟庆玲 邱丰 贾志远 毕胜利 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期 201-206,共6页
将EV71 P1和3CD基因片段克隆入同一杆状病毒穿梭质粒Bacmid中,构建出重组杆状病毒表达质粒Bacmid-P1-3CD;脂质体介导其转染Sf9昆虫细胞获得共表达P1和3CD的重组杆状病毒(AcMNPV-P1-3CD)。用IFA和Western-blot法对表达产物进行鉴定... 将EV71 P1和3CD基因片段克隆入同一杆状病毒穿梭质粒Bacmid中,构建出重组杆状病毒表达质粒Bacmid-P1-3CD;脂质体介导其转染Sf9昆虫细胞获得共表达P1和3CD的重组杆状病毒(AcMNPV-P1-3CD)。用IFA和Western-blot法对表达产物进行鉴定分析。电镜结果显示P1经3CD切割装配成了大小约为27nm的类球形颗粒(即EV71 VLPs)。进一步分析影响杆状病毒表达系统的因素以对表达条件进行优化,结果显示MOI值和时间均可影响目的蛋白的表达,其中时间是主要因素。选择优化后条件利用无血清培养基对贴壁Sf9细胞在多层细胞培养器中进行VLPs的大量表达,密度梯度离心法纯化,SDS-PAGE结果可见三条大小约为39kD、34kD和26kD的VP1、VP0和VP3特异性条带。纯化后EV71 VLPs颗粒结构完好,为下一步EV71蛋白结构的基础研究和基因工程疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 杆状病毒 肠道病毒71型(EV71) 病毒样颗粒(VLPs) 制备 鉴定 纯化
山西省乙型肝炎病毒基因型别的初步研究 预览 被引量:6
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作者 郭瑜 刘晓燕 +4 位作者 胡惠梅 陈斯勇 陈向伟 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期 361-363,共3页
目的 初步确定流行于山西地区的乙肝病毒的基因型的基本情况。方法 采集山西地区乙型肝炎表面抗原阳性的血清,利用PCR扩增得到HBV的S基因和C基因;用MEGA3软件对其进行核苷酸序列分析,构建系统发生树,分析基因型。结果 约93%样本的H... 目的 初步确定流行于山西地区的乙肝病毒的基因型的基本情况。方法 采集山西地区乙型肝炎表面抗原阳性的血清,利用PCR扩增得到HBV的S基因和C基因;用MEGA3软件对其进行核苷酸序列分析,构建系统发生树,分析基因型。结果 约93%样本的HBVS基因和C基因序列均位于HBV系统发生树的基因型C,近7%的样本其S基因和C基因序列位于系统发生树的基因型B。结论 流行于山西地区的乙肝病毒多数为基因型C,少数为基因型B,未发现基因重组现象。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 基因型
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严重急性呼吸综合征(SARS)病人血清抗体水平的初步探讨 预览 被引量:5
7
作者 高阳 邵育晓 +5 位作者 狄飚 王鸣 周永东 张明程 毕胜利 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期 203-204,共2页
为了了解严重急性呼吸综合征(SARS)病人血清中的抗体产生规律,对56份病人血清和36份健康人血清,分别采用间接酶联免疫吸附试验(EIA)检测IgG抗体和捕获法检测IgM抗体.结果显示:56份病人血清中有48份IgG抗体阳性,7份IgM抗体阳性.
关键词 严重急性呼吸综合征 SARS 血清 冠状病毒 IGG抗体 IGM抗体
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严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒刺突蛋白基因片段的表达及其初步应用 预览 被引量:2
8
作者 段淑敏 +5 位作者 张明程 周永东 高阳 杨焕明 董小平 毕胜利 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期 267-268,共2页
严重急性呼吸综合征(SARS)病毒为冠状病毒科.该病毒主要引起以破坏呼吸道肺上皮细胞为主的全身性疾病,引发免疫抑制和全身感染.同时,SARS病毒感染与全身血管病变有关.目前,在我国SARS感染后的免疫学诊断尚无完善的方法,细胞培养的抗原... 严重急性呼吸综合征(SARS)病毒为冠状病毒科.该病毒主要引起以破坏呼吸道肺上皮细胞为主的全身性疾病,引发免疫抑制和全身感染.同时,SARS病毒感染与全身血管病变有关.目前,在我国SARS感染后的免疫学诊断尚无完善的方法,细胞培养的抗原面临纯化困难和操作的危险性.我们利用基因重组的方法,表达了SARS冠状病毒S1蛋白的C端部分,此区域包含主要中和抗原位点[1].利用原核表达系统快速高效的特点,可以迅速表达重要的新病原活性蛋白,为进一步建立特异性诊断方法、疫苗动物试验、中和抗体诱导、基因工程疫苗的研制提供实验手段和依据.同时也为疫苗研究提供了新的战略思路. 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征 SARS 冠状病毒 刺突蛋白 基因片段 表达
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丙型肝炎核心蛋白与NS3蛋白在转基因小鼠中的表达 预览
9
作者 谭文杰 郎振为 +2 位作者 丛郁 詹美云 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期 302-306,共5页
为研究丙型肝炎病毒核心蛋白及NS3蛋白在转基因小鼠体内的基因表达及细胞内定位,以及病毒蛋白 直接致细胞病变效应,我们采用RT-PCR方法检测了靶基因mRNA在转基因小鼠各种组织中的表达,用免疫组化方法分析了核心蛋白与... 为研究丙型肝炎病毒核心蛋白及NS3蛋白在转基因小鼠体内的基因表达及细胞内定位,以及病毒蛋白 直接致细胞病变效应,我们采用RT-PCR方法检测了靶基因mRNA在转基因小鼠各种组织中的表达,用免疫组化方法分析了核心蛋白与NS3蛋白在转基因小鼠体内的表达及细胞内定位。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核心蛋白 NS3蛋白 转基因小鼠
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四种乙肝病毒表面抗原ELISA诊断试剂的评价 预览 被引量:5
10
作者 贾志远 余陶 +2 位作者 田瑞光 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期 384-386,共3页
目的 对四种国内乙肝病毒表面抗原诊断试剂进行评价。方法 用四种试剂分别对标准品和未知血清进行检测,用几种常用诊断试验评价方法对检测结果进行分析和比较。结果 四种试剂对标准血清的检测结果较好,A、B两种试剂的总符合率为100%... 目的 对四种国内乙肝病毒表面抗原诊断试剂进行评价。方法 用四种试剂分别对标准品和未知血清进行检测,用几种常用诊断试验评价方法对检测结果进行分析和比较。结果 四种试剂对标准血清的检测结果较好,A、B两种试剂的总符合率为100%,另两种的总符合率也在90%以上,其中B试剂有较好的精密性。δ值比较显示A和B两种试剂有较好的诊断特性。四种试剂在一定的抗原浓度范围内都有良好的线性关系。针对于未知样本的检测中,四种试剂与采用电发光法的罗氏诊断试剂有较好的一致性。结论 国内主要厂家的HBsAg ELISA诊断试剂具有较高的检测效能。在实际工作中,可以通过常用的诊断试剂筛选实验,经统计分析后筛选出较高效能诊断试剂用于检测。 展开更多
关键词 肝炎 乙型 肝炎表面抗原 乙型 评价 诊断试剂
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不同温度、时间、IPTG和菌种浓度对丁肝抗原蛋白表达量的影响 预览 被引量:4
11
作者 丁军颖 +4 位作者 卢学新 苏秋东 田瑞光 邱丰 毕胜利 《医学研究杂志》 2012年第5期31-34,共4页
目的确定以大肠杆菌表达丁肝抗原的最佳条件,为规模生产以求研发丁肝ELISA诊断试剂奠定基础。方法在不同温度、时间、IPTG和菌种浓度条件下,分别进行蛋白表达,取等体积样本进行SDS—PAGE电泳,经ImageLab软件分析,比较目的蛋白表达... 目的确定以大肠杆菌表达丁肝抗原的最佳条件,为规模生产以求研发丁肝ELISA诊断试剂奠定基础。方法在不同温度、时间、IPTG和菌种浓度条件下,分别进行蛋白表达,取等体积样本进行SDS—PAGE电泳,经ImageLab软件分析,比较目的蛋白表达量,确定最佳表达条件。结果在25℃、29°C、33°C和37%条件下,蛋白表达量无统计意义的差别;在添加IPTG后的1、2、3、4、5和6h,表达量无统计意义的差别;在以0.25、0.5、1、2和4mmol/LIPTG诱导时,表达量无统计意义的差别。当添加诱导剂前,菌种的OD600。值分别为1.236、0.772、0.542和0.384,目的蛋白表达量有显著意义的差别。以OD600值为1.236和0.772时,表达量最高,两者之间无统计意义的差别;OD600值为0.542时,表达量次之;OD600值为0.384时,表达量最低。结论温度、表达时间和IPTG浓度在一定范围内对丁肝抗原蛋白表达量无影响;菌种的浓度是影响蛋白表达量的决定性因素;当菌种浓度在OD600值约为0.7~1.2时,以0.25mmol/LIPTG在37℃,诱导表达1h为最佳表达条件。该条件下,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的41.5%。 展开更多
关键词 丁肝 基因工程 抗原 表达
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国产甲型肝炎病毒总抗体检测试剂的评价 被引量:5
12
作者 周文亭 王锋 +5 位作者 尹文娇 赵守军 曹经瑗 张勇 毕胜利 《中国疫苗和免疫》 CAS 2013年第3期240-245,共6页
目的比较国内常用抗甲型肝炎(甲肝)病毒总抗体(Total Antibody to Hepatitis A Virus,Anti-HAV)酶免疫测定(Enzyme Immunoassay,EIA)试剂的性能,为甲肝血清流行病学调查试剂的选择提供参考。方法以雅培(Abbott)HAVAb2.0试剂的... 目的比较国内常用抗甲型肝炎(甲肝)病毒总抗体(Total Antibody to Hepatitis A Virus,Anti-HAV)酶免疫测定(Enzyme Immunoassay,EIA)试剂的性能,为甲肝血清流行病学调查试剂的选择提供参考。方法以雅培(Abbott)HAVAb2.0试剂的检测结果作为金标准,确定参比系统的总Anti-HAV含量。用A、B两种国产总Anti-HAVEIA试剂,平行检测参比系统8遍,记录CO/S值并作ln(CO/S+0.1)转换,通过广义线性化估计方程(Generalized Estimating Equation,GEE)模型估计各次测试样本的阳性概率,计算比较两种试剂的可靠性指标和真实性指标:组内相关系数(Intraclass Correlation Coefficient,ICC)、变异系数(Coefficient of Variability,CV)和全部受试者工作特征(Receive Operation Characteristic,ROC)曲线下面积和部分ROC曲线下面积,以及固定特异度下的灵敏度[Sensitivityata Particular False-Positive-Rate(1-Specificity),Se(FPR=e)],对比阐明两者之优劣。结果 A试剂的ICC和CV分别为0.9971和5.7840%,B试剂的为0.9952和6.2931%(Bootstrap法,P〈0.05);A试剂的ROC曲线下面积(Areaunder Curve,AUC)和部分(Partial)ROC曲线(特异度为0.9~1)下面积(pAUC)分别为0.9557和0.0717,B试制的为0.9404和0.0663(Bootstrap法,P〈0.05);在特异度为0.920~0.970时,间隔0.005计算的Se(FPR=e),在特异度为0.945、0.950、0.955、0.960几个观察点时,A试剂的灵敏度〉B试剂(Bootstrap法,P〈0.05);而在特异度为其他观察点时,对应灵敏度的差异尚无统计学意义(Bootstrap法,P〉0.05)。结论 A、B两种试剂均表现出良好的诊断能力,虽然某些指标的差异有统计学意义,但差异有无实际意义,值得进一步探讨。在实际应用时,可根据具体情况进行选择。 展开更多
关键词 抗甲型肝炎病毒抗体 诊断试剂 真实性 可靠性 受试者工作特征曲线
我国常见乙型肝炎病毒基因型与基本核心启动子及前C区突变关系的初步研究 预览 被引量:1
13
作者 郭瑜 刘晓燕 +3 位作者 陈斯勇 陈向伟 毕胜利 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期 436-439,共4页
收集81份HBVDNA阳性血清标本,经PCR扩增和序列测定确定其中有50份属于基因型C,31份属于基因型B;C基因型的基本核心启动子BCPT1762/A1764的突变率(38%)明显高于B基因型(12.9%,P〈0.05);前c区A1896的突变在B、C两基因型间... 收集81份HBVDNA阳性血清标本,经PCR扩增和序列测定确定其中有50份属于基因型C,31份属于基因型B;C基因型的基本核心启动子BCPT1762/A1764的突变率(38%)明显高于B基因型(12.9%,P〈0.05);前c区A1896的突变在B、C两基因型间无显著性差异,B基因型为9.7%,C基因型为12%,P〉0.05;HBeAg的表达与否与BCP双突变或前C区A1896突变均无明显相关性。经定量PCR检测证明,HBeAg阳性组中的HBVDNA含量明显高于抗-HBe阳性组,P〈0.05。组内BCP双突变株和野生株及前C1896突变株和野生株的HBVDNA含量无显著性差异。 展开更多
关键词 嗜肝DNA病毒科 乙型肝炎病毒 基因型 BCP T1762/A1764 前C区基因 突变 HBeAg
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严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒N蛋白基因的表达及其初步应用 预览 被引量:3
14
作者 张明程 段淑敏 +5 位作者 周永东 高阳 杨焕明 董小平 毕胜利 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期 269-270,共2页
严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)的病原是SARS冠状病毒[1],该病毒引起以呼吸道肺上皮细胞损害为主的全身性疾病,引发免疫抑制而造成全身感染.同时,SARS病毒感染导致全身血管病变,是一种传染性很强的新病原... 严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)的病原是SARS冠状病毒[1],该病毒引起以呼吸道肺上皮细胞损害为主的全身性疾病,引发免疫抑制而造成全身感染.同时,SARS病毒感染导致全身血管病变,是一种传染性很强的新病原.目前,在我国SARS感染后的免疫学诊断尚无完善的方法,细胞培养的抗原面临纯化困难和操作的危险性.我们利用基因重组的方法,在大肠杆菌中表达了SARS冠状病毒N蛋白全长基因,为进一步建立特异性诊断方法、基因工程疫苗的研制提供了备选实验材料. 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征 SARS 冠状病毒 N蛋白 基因表达
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模拟表位型EB病毒感染诊断抗原的制备
15
作者 苏秋东 郭敏卓 +7 位作者 邱丰 贾志远 范雪亭 孟庆玲 田瑞光 毕胜利 杨俊梅 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2018年第5期538-542,共5页
目的利用大肠埃希菌表达系统获取模拟表位型诊断抗原用于EB病毒(epstein—Barr virus,EBV)感染的早期诊断,并初步评价其抗原性。方法将EB病毒模拟表位GP125、F1、A2、A3C2多肽序列用特定连接臂串联,密码子优化后全基因合成;将目... 目的利用大肠埃希菌表达系统获取模拟表位型诊断抗原用于EB病毒(epstein—Barr virus,EBV)感染的早期诊断,并初步评价其抗原性。方法将EB病毒模拟表位GP125、F1、A2、A3C2多肽序列用特定连接臂串联,密码子优化后全基因合成;将目的片段插入带有Trx标签的表达质粒中,在大肠埃希菌中进行表达,并利用亲和层析和离子交换层析纯化目的蛋白;利用Western blot技术对目的蛋白抗原性进行鉴定,并建立EBV—IgM抗体检测捕获法ELISA技术,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力。结果所获取EBV模拟表位诊断抗原浓度为2.8mg/ml,纯度为99.01%;Western blot实验发现,以anti-Trx单克隆抗体或EBV—IgM阳性血清作为第一抗体,在NC膜约26×10^3处都可以发现特异条带(与预期一致);对50份EBV急性感染阳性血清和50份阴性血清进行检测得出,阳性血清样本OD值1.352(95%CI:1.233~1.489)与阴性血清样本OD值0.135(95%CI:0.113~0.159)分布区组明显(P〈0.05),其中灵敏度为98.0%,特异性为96.0%,一致性检验kappa值为0.940,一致性优异。结论原核表达与亲和及离子交换层析纯化可以获取抗原性良好的EBV感染诊断抗原,偶联HRP后可以作为检测抗原应用于EBV-IgM捕获法ELISA血清学检测中。 展开更多
关键词 模拟表位 EB病毒 原核表达 层析纯化
EV71中和表位嵌合病毒样颗粒的表达纯化
16
作者 梁璞 +1 位作者 苏秋东 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2018年第2期199-202,共4页
目的通过原核系统表达纯化嵌合肠道病毒71型(EV71)中和表位SP70的病毒样颗粒(VLPs),作为备选的EV71基因重组亚单位疫苗。方法将SP70插入乙肝病毒核心抗原(HBeAg)截短序列的主要免疫显性区域,合成融合蛋白基因后连接表达质粒转... 目的通过原核系统表达纯化嵌合肠道病毒71型(EV71)中和表位SP70的病毒样颗粒(VLPs),作为备选的EV71基因重组亚单位疫苗。方法将SP70插入乙肝病毒核心抗原(HBeAg)截短序列的主要免疫显性区域,合成融合蛋白基因后连接表达质粒转化人大肠埃希菌诱导表达,经DEAE离子交换层析、CsC1垫层离心以及密度梯度离心后得到纯化的重组VLPs,并通过WesternBlot和ELISA实验鉴定其抗原性。结果成功构建重组质粒pHBc-SP70,在大肠埃希菌中经IPTG低温诱导后高效表达,可溶性目的蛋白经离子交换层析、CsCl垫层离心和密度梯度离心三步纯化后纯度可达90%以上;纯化的融合蛋白可自发折叠组装为病毒样空心颗粒,与抗SP70单克隆抗体和抗HBe单克隆抗体均可特异性结合。结论在原核系统中成功高效表达和纯化了表面展示EV71中和表位的嵌合HBe-SP70VLPs,并证实其具有良好的抗原性,为该EV71基因重组疫苗的免疫效果评价奠定了基础。 展开更多
关键词 肠道病毒71型 病毒样颗粒 乙肝病毒核心抗原 SP70 蛋白纯化
丁型肝炎病毒内蒙古株的原核表达及抗原性分析 预览 被引量:4
17
作者 杨英超 +3 位作者 赵洪兰 张文英 陈斯勇 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期 53-55,共3页
目的 获得表达量高、抗原性强的基因工程重组抗原。检测不同地区的丁肝患者血清,初步验证其抗原性及在检测不同地区丁肝血清方面的差异。方法 从内蒙古某丁肝患者血清中提取丁肝病毒,经RT-PCR与PCR,使用PET43a表达质粒及HDVL-Ag 5′... 目的 获得表达量高、抗原性强的基因工程重组抗原。检测不同地区的丁肝患者血清,初步验证其抗原性及在检测不同地区丁肝血清方面的差异。方法 从内蒙古某丁肝患者血清中提取丁肝病毒,经RT-PCR与PCR,使用PET43a表达质粒及HDVL-Ag 5′和3′端引入His标签获得丁型肝炎病毒L-Ag重组表达质粒,转化BL21(Rosetta)宿主菌,IPTG诱导表达。表达产物经饱和硫酸胺沉淀与亲和层析柱纯化后。采用EIA竞争法分析其抗原性。结果 经与ABBOTT Murex anti-Delta(total)试剂盒同步检测15份阳性和10份阴性血清,一致率100%。结论 EIA检测,证明具有良好的抗原性,基因工程表达的抗原蛋白在检测不同地区丁肝血清方面未见差异,故可用于丁肝的诊断及相关研究。 展开更多
关键词 δ肝炎病毒 抗原 病毒 基因
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小同功型人硒蛋白P的诱导凋亡活性 预览 被引量:1
18
作者 房青 +6 位作者 郑艳华 陈佺 宁力 查园园 毕胜利 杨建国 林晨 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期 652-656,共5页
目的研究小同功型人硒蛋白P(HSelP)的作用.方法克隆HSelP小同功型基因,将位于N端40位的硒半胱氨酸(SeCys)突变为半胱氨酸,测序确定后,在感受态大肠杆菌BL21中大量表达,表达产物HSelP280m用阴离子交换层析纯化,Western blot方法鉴定.提... 目的研究小同功型人硒蛋白P(HSelP)的作用.方法克隆HSelP小同功型基因,将位于N端40位的硒半胱氨酸(SeCys)突变为半胱氨酸,测序确定后,在感受态大肠杆菌BL21中大量表达,表达产物HSelP280m用阴离子交换层析纯化,Western blot方法鉴定.提取小鼠肝细胞线粒体,通过荧光光谱仪检测线粒体悬液90°光散射强度和罗丹明123荧光光度变化,确定不同浓度HSelP280m引起的线粒体膜透过性转运孔(PTP)开放程度和线粒体跨膜电位的变化.结果成功地将HSelP小同功型中SeCys点突变为半胱氨酸,在原核表达系统中获得大量表达.表达产物纯化后纯度达90%以上.HSelP280m可促进线粒体PTP开放,跨膜电位下降,且有剂量依赖关系,可被PTP的特异抑制剂所抑制.此作用在去除N端40个氨基酸后丧失.结论 HSelP280m有促进线粒体PTP开放的作用,为进一步研究HSelP的结构和功能提供了线索. 展开更多
关键词 人硒蛋白P 诱导 凋亡 活性 氨基酸
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河北省某献血村村民丙型肝炎病毒流行状况调查及危险因素分析 被引量:3
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作者 邱丰 黄昌红 +9 位作者 郭敏卓 沈立萍 王锋 贾志远 马景臣 赵玉良 张爽 张勇 毕胜利 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期203-204,共2页
丙型肝炎病毒(HCV)主要经血液传播。在我国《献血法》颁布之前的20世纪80—90年代初,农村地区非法卖血现象十分普遍,多地献血人群因此引起严重的血源性HCV感染。多项研究显示:献血人群HCV感染率为9.6%~72.8%。本研究通过横断... 丙型肝炎病毒(HCV)主要经血液传播。在我国《献血法》颁布之前的20世纪80—90年代初,农村地区非法卖血现象十分普遍,多地献血人群因此引起严重的血源性HCV感染。多项研究显示:献血人群HCV感染率为9.6%~72.8%。本研究通过横断面调查揭示河北省某献血村村民的HCV感染状况,并分析HCV感染相关危险因素。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 患病率 危险因素
止眩宁治疗椎-基底动脉供血不足眩晕临床观察 被引量:2
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作者 李文金 梁楠 +5 位作者 阳浩 冷玲 何楠 于树巍 韩丹 《辽宁中医杂志》 CAS 北大核心 2010年第12期2385-2386,共2页
目的:观察止眩宁治疗椎基底动脉供血不足眩晕患者的临床疗效。方法:将40例椎-基底动脉供血不足眩晕患者随机分为治疗组(止眩宁治疗组)22例、对照组(西比灵治疗组)18例。结果:治疗组、对照组总有效率分别为86.36%、72.22%。... 目的:观察止眩宁治疗椎基底动脉供血不足眩晕患者的临床疗效。方法:将40例椎-基底动脉供血不足眩晕患者随机分为治疗组(止眩宁治疗组)22例、对照组(西比灵治疗组)18例。结果:治疗组、对照组总有效率分别为86.36%、72.22%。结论:两组比较,治疗组有效率高于对照组(P〈0.05),由此证明止眩宁治疗此病的疗效优于西比灵的治疗。 展开更多
关键词 眩晕 椎-基底动脉供血不足 止眩宁 西比灵 临床观察
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