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MALAT1通过竞争miR-124上调SMYD3并促进乳腺癌细胞增殖与迁移 预览
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作者 徐曼丽 王畅 +3 位作者 王楠 何红 张同存 罗学刚 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期344-351,共8页
为了探究lncRNA MALAT1是否会通过与组蛋白甲基化酶SMYD3间的相互调控对乳腺癌细胞的增殖和迁移产生影响,采用siRNA敲低MCF-7、MDA-MB-231乳腺癌细胞中的内源性MALAT1后,然后应用划痕和MTT法检测细胞迁移和增殖情况;实时定量PCR(Realtim... 为了探究lncRNA MALAT1是否会通过与组蛋白甲基化酶SMYD3间的相互调控对乳腺癌细胞的增殖和迁移产生影响,采用siRNA敲低MCF-7、MDA-MB-231乳腺癌细胞中的内源性MALAT1后,然后应用划痕和MTT法检测细胞迁移和增殖情况;实时定量PCR(RealtimePCR)、免疫蛋白印迹(Westernblot)等方法检测si-MALAT1对miRNA-124、SMYD3及其下游基因mRNA及蛋白质水平的影响。结果显示:siRNA靶向敲低MALAT1后可降低乳腺癌细胞的迁移和增殖速度,同时抑制SMYD3及其下游靶基因N-cadherin、MYL9、MMP9、CYR61等的转录表达,并上调miR-124。miR-124的过表达可降低SMYD3在乳腺癌细胞中的表达,且MALAT1的敲低可以缓解miR-124抑制剂对SMYD3蛋白质水平表达的促进作用。此外,转染外源质粒使SMYD3过表达可激活MALAT1转录,反之siRNA干扰SMYD3后则会下调MALAT1。研究结果表明:lncRNAMALAT1可以作为miR-124的ceRNA调控SMYD3,同时SMYD3可反馈性激活MALAT1的转录,这一相互调控作用将影响到乳腺癌细胞的增殖与迁移能力。 展开更多
关键词 乳腺癌细胞 lncRNAMALAT1 SMYD3 miR-124
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HDAC抑制剂SAHA抑制人乳腺癌细胞MCF-7的迁移和增殖 预览
2
作者 姚海淋 霍丽红 +4 位作者 郝云 来永巍 段慧鑫 欧国芳 何红 《天津科技大学学报》 CAS 2019年第2期25-29,44共6页
用组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase complex,HDAC)抑制剂 SAHA对人乳腺癌细胞MCF-7进行处理,抑制组蛋白的去乙酰化,进而检测 SAHA对 MCF-7的影响.体外划痕实验与 Transwell实验表明 SAHA可以抑制MCF-7细胞的迁移;免疫印迹(Western... 用组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase complex,HDAC)抑制剂 SAHA对人乳腺癌细胞MCF-7进行处理,抑制组蛋白的去乙酰化,进而检测 SAHA对 MCF-7的影响.体外划痕实验与 Transwell实验表明 SAHA可以抑制MCF-7细胞的迁移;免疫印迹(Western blot)实验表明 SAHA可以抑制迁移相关基因 MYL9蛋白水平的表达.MTT实验和克隆形成实验表明 SAHA可以抑制 MCF-7细胞的增殖;Western blot实验与逆转录实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)实验表明SAHA能够抑制细胞周期蛋白标志基因CyclinD1、CDK4的表达,促进周期蛋白激酶抑制剂 p21的表达. 展开更多
关键词 乳腺癌 MCF-7 细胞 SAHA 细胞增殖 细胞迁移
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高危型人乳头瘤病毒HPV18 E6和E7基因的克隆与表达 预览
3
作者 来永巍 何红 +3 位作者 刘翔 范红艳 姚佳宏 王艳春 《中国研究型医院》 2018年第4期23-28,共6页
目的:HPV18 E6和E7是两个病毒癌基因,存在于宫颈癌He La细胞中。采用双酶切和同源重组两种不同的策略克隆HPV18 E6、HPV18 E7和HPV18 E6-E7串联表达质粒,研究两者在细胞癌变中的作用。方法:首先,从He La细胞中提取RNA,RT-PCR获取E6和E... 目的:HPV18 E6和E7是两个病毒癌基因,存在于宫颈癌He La细胞中。采用双酶切和同源重组两种不同的策略克隆HPV18 E6、HPV18 E7和HPV18 E6-E7串联表达质粒,研究两者在细胞癌变中的作用。方法:首先,从He La细胞中提取RNA,RT-PCR获取E6和E7编码序列,分别用双酶切连接法或同源重组的方法连入不同载体质粒。然后,从He La细胞中提取DNA,PCR法扩增E6-E7编码序列,酶切连接法构建重组表达质粒。结果:经测序正确的质粒转染He La细胞,使用RT-PCR法或者Western-blot法检测目的基因转录与表达均显著升高。结论:HPV18 E6、E7和E6-E7三个表达质粒构建成功,均可在He La细胞中正确表达。 展开更多
关键词 HPV18 E6、E7 基因克隆 质粒构建 基因表达
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组蛋白乙酰转移酶p300对人乳腺癌细胞迁移的影响 预览
4
作者 王丹丹 何红 张同存 《天津科技大学学报》 CAS 北大核心 2015年第6期1-6,共6页
在人乳腺癌细胞MDA-MB-231中转染p300表达质粒过表达p300,及利用si RNA干扰技术下调p300的表达,以此研究组蛋白乙酰转移酶p300对肿瘤细胞迁移的影响.体外细胞划痕实验表明,过表达p300可以促进MDAMB-231细胞的迁移.RT-PCR和免疫印迹实验... 在人乳腺癌细胞MDA-MB-231中转染p300表达质粒过表达p300,及利用si RNA干扰技术下调p300的表达,以此研究组蛋白乙酰转移酶p300对肿瘤细胞迁移的影响.体外细胞划痕实验表明,过表达p300可以促进MDAMB-231细胞的迁移.RT-PCR和免疫印迹实验(Western blot)结果表明,过表达p300导致肿瘤迁移相关基因MYL9、CYR61和MYH9的m RNA和蛋白表达水平的上升.与过表达p300相反,干扰p300的表达引起肿瘤迁移相关基因MYL9、CYR61和MYH9的m RNA和蛋白表达水平的下调. 展开更多
关键词 乳腺癌 MDA-MB-231细胞 P300 细胞迁移
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一个新型检测人甲状腺过氧化物酶抗体ELISA技术的临床应用 预览 被引量:4
5
作者 张艳丽 方佩华 +1 位作者 何红 李宁 《天津医药》 CAS 北大核心 2008年第5期 337-339,共3页
目的:以重组人甲状腺过氧化物酶(hTPO)为抗原检测人甲状腺过氧化物酶抗体(hTPOAh)的ELISA用于甲状腺疾病临床检测。方法:用该法测定552例正常人,各类甲状腺疾病患者592人次,包括Grayes病(GD)364人次(初诊64例及复诊300人次... 目的:以重组人甲状腺过氧化物酶(hTPO)为抗原检测人甲状腺过氧化物酶抗体(hTPOAh)的ELISA用于甲状腺疾病临床检测。方法:用该法测定552例正常人,各类甲状腺疾病患者592人次,包括Grayes病(GD)364人次(初诊64例及复诊300人次),桥本氏病(HT)142例,单纯甲状腺肿34例,亚急性甲状腺炎23例,结节性甲状腺肿19例,腺瘤10例。结果:确立本法阳性切限为A405值如为0.74,测定各类甲状腺疾病患者hTPOAbA405值结果以中位数(M)表示,HT为1.19,阳性率87.32%;Graves’病治疗前是0.51,阳性率26.56%,治疗后为0.62,阳性率30.67%:亚急性甲状腺炎为0.48,阳性率为17.39%;单纯甲状腺肿为0.58,阳性率为0;结节性甲状腺肿为0.69,阳性率21.05%;腺瘤为0.68,阳性率20%。HT患者血清hTPOAb阳性率明显高于其他各组(P〈0.01)。结论:以重组hTPO为抗原建立的ELISA法特异、稳定、简便,可以常规应用于临床,并可作为HT的特异性诊断手段。 展开更多
关键词 碘化物过氧化物酶 酶联免疫吸附测定 自身抗体 甲状腺炎 自身免疫性 格雷夫斯病
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人ICAM-1膜外Ⅰ-Ⅲ功能区基因在原核系统中表达,人血清sICAM-1 RIA建立和临床应用 预览
6
作者 方佩华 吕枚 +7 位作者 李宁 张志友 孟召伟 高硕 许静 何红 冯洁 杨立昌 《医学研究杂志》 2006年第8期 46-47,共2页
人细胞间粘附分子-1(intracellular adhesion molecule—1,ICAM—1)是一种细胞表面单链跨膜糖蛋白,参与抗原识别、补体结合、细胞粘附功能。其膜外区脱落人血称为可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM—1),在甲状腺滤泡上皮细胞的异常... 人细胞间粘附分子-1(intracellular adhesion molecule—1,ICAM—1)是一种细胞表面单链跨膜糖蛋白,参与抗原识别、补体结合、细胞粘附功能。其膜外区脱落人血称为可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM—1),在甲状腺滤泡上皮细胞的异常表达与Graves’disease(GD)的发病相关,其血清水平对判断GD的疗效、停药和复发具有重要意义,目前国内尚无重组sICAM—l和sICAM-1 RIA建立的报道,国外仅有sICAM—1酶免试剂盒,但价格较高.不易推广。 展开更多
关键词 血清SICAM-1 RIA 膜外区 可溶性细胞间粘附分子 原核系统 临床应用 功能区 甲状腺滤泡上皮细胞 molecule 基因
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以肌动蛋白为标准化参数在甲状腺乳头状癌中c—fos表达的研究 预览 被引量:5
7
作者 吕枚 方佩华 +4 位作者 何红 郑荣秀 张志友 杨立平 肖茜 《天津医科大学学报》 2002年第1期 7-10,共4页
目的:引入细胞管家基因(β-actin)作为多重扩增的内参照物以达到资料比较的标准化,用于研究c-fos在甲状腺乳头状癌中的表达.方法:14例甲状腺乳头状癌组织标本;21例正常对照包括3例乳头状癌病变旁正常甲状腺组织和18例腺瘤病变旁正常甲... 目的:引入细胞管家基因(β-actin)作为多重扩增的内参照物以达到资料比较的标准化,用于研究c-fos在甲状腺乳头状癌中的表达.方法:14例甲状腺乳头状癌组织标本;21例正常对照包括3例乳头状癌病变旁正常甲状腺组织和18例腺瘤病变旁正常甲状腺组织.采用Trizol法提取总RNA,逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)获取eDNA,多重聚合酶链反应(Multiple PCR)法同时扩增371 bp的c-fos和227 bp的β-actin.扩增产物行1.5%琼脂糖凝胶电泳,用UVP凝胶成像分析系统的GelBase/GelBiot-Pro分析软件获取各标本c-fos和β-actin的密度值,计算两者的比值.结果:正常对照和乳头状癌组c-fos/β-actin比值分别为(x±s):0.6845±0.0753和0.5938±0.0969,两组存在着显著差异(t=2.954,P<0.01);经自身配对t检验,3例患者的癌变组织明显低于与此癌病变旁的正常组织(t=9.205,P<0.05).结论:c-fos在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显低于正常对照. 展开更多
关键词 甲状腺乳头状癌 原癌基因C-FOS Β-肌动蛋白
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人促甲状腺素受体膜外区蛋白在原核系统表达及其生物活性鉴定 预览 被引量:1
8
作者 吕枚 方佩华 何红 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期 308-312,共5页
为研究重组人促甲状腺素受体(hTSHR)膜外区表达产物及其生物活性与免疫活性,将hT-SHR膜外区编码基因(编码第3~420位氨基酸)重组到表达型质粒pGEX-4T-3上,测序结果表明序列正确,未改变读码框架.然后转入E.coli Ad494进行诱导表达.纯化... 为研究重组人促甲状腺素受体(hTSHR)膜外区表达产物及其生物活性与免疫活性,将hT-SHR膜外区编码基因(编码第3~420位氨基酸)重组到表达型质粒pGEX-4T-3上,测序结果表明序列正确,未改变读码框架.然后转入E.coli Ad494进行诱导表达.纯化后的表达产物经SDS-PAGE、Western印迹及放射受体法分别检测其分子量、免疫活性和生物活性.重组TSHR3~420膜外区蛋白(简称TSHR3-420)产率为159~202μg/L培养基,分子量为48.9 kD;融合蛋白(简称GST-TSHR3~420)分子量为75.4 kD.两种表达产物都可与TSHR Ab反应;TSHR3~420可与125I-TSH结合. 展开更多
关键词 人促甲状腺素受体 膜外区蛋白 原核系统 表达 生物活性 鉴定
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人甲状腺过氧化物酶抗原决定簇基因在大肠杆菌的表达及临床测定应用 被引量:1
9
作者 方佩华 何红 吕枚 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期 217-220,共4页
目的表达有抗原活性的人甲状腺过氧化物酶(hTPO)片段,并将表达产物用于临床测试.方法将hTPO抗原决定簇基因连入pGEX-4T-3,然后转入E. coli BL21,异丙基β-D-硫代半乳糖苷诱导表达.表达产物谷胱甘肽巯基转移酶(GST)-hTPO经亲和层析纯化,... 目的表达有抗原活性的人甲状腺过氧化物酶(hTPO)片段,并将表达产物用于临床测试.方法将hTPO抗原决定簇基因连入pGEX-4T-3,然后转入E. coli BL21,异丙基β-D-硫代半乳糖苷诱导表达.表达产物谷胱甘肽巯基转移酶(GST)-hTPO经亲和层析纯化,并鉴定免疫学活性.以GST-hTPO为抗原建立检测血清TPO抗体(Ab)的ELISA方法.用此方法检测一批自身免疫性甲状腺疾病(AITD)患者血清TPOAb,用病理学方法观察同批患者甲状腺组织中HLA-DR抗原、树突状细胞及淋巴细胞浸润程度.结果成功地表达了hTPO抗原决定簇基因,纯化产物GST-hTPO纯度高,有良好的免疫学活性,以此抗原建立的ELISA方法有良好的重复性,CV在5.93%~7.59%之间.ELISA方法与RIA方法比较,检测结果显著相关(n=37,r=0.613,P<0.001).血清TPOAb水平及HLA-DR抗原、树突状细胞分布随甲状腺组织淋巴细胞浸润程度加重呈逐渐增多趋势.结论原核表达产物GST-hTPO可用于建立TPOAb常规检测方法;AITD患者血清TPOAb水平与甲状腺组织损伤有密切关系. 展开更多
关键词 基因表达 碘化物过氧化物酶 自身免疫疾病 甲状腺过氧化物酶抗体 甲状腺 AITD
人甲状腺过氧化物酶抗原决定簇基因在E.coli细胞中的表达 预览
10
作者 何红 方佩华 +1 位作者 吕枚 姬永丽 《天津医药》 CAS 北大核心 2001年第12期 732-735,共4页
目的:探索在E.coli BL21中表达hTPO抗原决定簇片段(AA568~AA874).方法:将hTPO抗原决定簇基因(1 702~2 622,编号相对于起始密码子)连接到表达型载体pGEX-4T-3,构建重组表达质粒.然后转化E.coli Bl21,IPTG诱导表达.表达产物采用亲和层... 目的:探索在E.coli BL21中表达hTPO抗原决定簇片段(AA568~AA874).方法:将hTPO抗原决定簇基因(1 702~2 622,编号相对于起始密码子)连接到表达型载体pGEX-4T-3,构建重组表达质粒.然后转化E.coli Bl21,IPTG诱导表达.表达产物采用亲和层析方法纯化,SDS-PAGE法测定其分子质量,ELISA法鉴定免疫学活性,考马斯亮蓝染色法定量.结果:成功地表达了hTPO抗原决定簇基因.纯化的GST-hTPO融合蛋白分子质量为61.4 ku,hTPO片段分子质量为37.6 ku.以此作为抗原按ELISA法分别与TPOAb阳性血清或阴性血清反应,结果表明GST-hTPO及hTPO片段均与TPOAb特异性结合.纯化的GST-hTPO产量为10 mg/L培养基;hTPO片段产量为1.2 mg/L培养基.结论:利用基因工程技术可获得高纯度的GST-hTPO融合蛋白及hTPO片段,产物具有良好的免疫学活性. 展开更多
关键词 碘化物过氧化物酶 甲状腺过氧化物酶抗原 基因表达 E.coli细胞 甲状腺疾病
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Graves‘病和Hashimot病患者可溶性细胞间粘附分子—1的研究 预览 被引量:1
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作者 吕枚 方佩华 +4 位作者 张志友 侯秉璋 郑荣秀 何红 肖茜 《天津医科大学学报》 2001年第4期 485-487,491,共4页
目的:研究单纯甲状腺肿、Graves'病和Hashimot病患者血清sICAM-1的含量.方法:用本室研制的sICAM-1RIA,检测本市400例正常人以及1020例患有单纯性甲肿、Graves'病或者Hashimoto病患者血清sICAM-1含量,进行比较分析.结果:正常人... 目的:研究单纯甲状腺肿、Graves'病和Hashimot病患者血清sICAM-1的含量.方法:用本室研制的sICAM-1RIA,检测本市400例正常人以及1020例患有单纯性甲肿、Graves'病或者Hashimoto病患者血清sICAM-1含量,进行比较分析.结果:正常人检测结果(x±s)为:168.43±36.23μg/L.单纯性甲肿组与正常组无显著性差别(P>0.05),两种自身免疫性甲状腺疾病(Graves'病和Hashimoto)均明显高于正常组和单纯性甲肿组(P<0.05).3种治疗均可降低Graves'病患者sICAM-1含量(P<0.05).Graves'病停药复发组sICAM-1含量明显高于药物治疗后甲状腺功能恢复正常的Graves'病组(P<0.05).结论:sICAM-1 RIA可用于临床检测自身免疫性甲状腺疾病;血清sICAM-1含量可作为自身免疫性甲状腺疾病诊断的一个参考指标,并在临床评价Graves'病的疗效、停药和复发等方面具有重要意义. 展开更多
关键词 可溶性细胞间粘附分子-1 放免法 Graves'病 Hashimoto病
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可溶性细胞间粘附分子-1放免法在三种甲状腺疾病中初步临床应用(英文)
12
作者 吕枚 方佩华 +6 位作者 张志友 何红 高硕 侯秉璋 郑荣秀 肖茜 杨立平 《中华医学杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2002年第10期112-115,154-155
目的 目前 ,国内外尚未见有关可溶性细胞间粘附分子 1 (sICAM 1 )放免法 (RIA)的报道 ,为此用本室研制的12 5Ⅰ sICAM 1RIA ,检测正常人和三种甲状腺疾病 (单纯性甲肿 ,Graves’病或Hashimoto’病 )患者血清sICAM 1水平。方法 用12 5... 目的 目前 ,国内外尚未见有关可溶性细胞间粘附分子 1 (sICAM 1 )放免法 (RIA)的报道 ,为此用本室研制的12 5Ⅰ sICAM 1RIA ,检测正常人和三种甲状腺疾病 (单纯性甲肿 ,Graves’病或Hashimoto’病 )患者血清sICAM 1水平。方法 用12 5 Ⅰ sICAM 1RIA ,检测 40 0例正常人以及 1 0 2 0例患有单纯性甲状腺肿、Graves’病或者Hashimoto’病患者血清sICAM 1水平。结果 正常组sICAM 1水平 ( x±s)为 :1 68 43± 3 6 2 3 μg/L。正常组与单纯性甲肿组间无显著性差别 (P 】0 0 5) ,而自身免疫性甲状腺疾病 (Graves’病和Hashimoto’病 )均分别明显高于正常组或单纯性甲肿组 (P 【0 0 5)。三种治疗均可降低Graves’病患者血清sICAM 1水平 (P 【0 0 5)。药物治疗后甲状腺功能恢复正常的Graves’病组sICAM 1水平明显低于Graves’病停药复发组 (P 【0 0 5)。结论 12 5 Ⅰ sICAM 1RIA可用于检测自身免疫性甲状腺疾病 ;血清sICAM 1水平可作为自身免疫性甲状腺疾病诊断的一个指标 ,及在评价Graves’病的疗效、停药或者复发等方面的一个指标。 展开更多
关键词 可溶性细胞间粘附分子1 放免法 单纯性甲肿(简称SG) 格雷夫氏病(Graves’病 简称GD) 桥本氏病(Hashimoto’病 简称HT)
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