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果梅NAC基因家族的鉴定及组织表达分析 预览
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作者 姚丹 晓鹏 +3 位作者 侍婷 渠慎春 高志红 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期226-239,共14页
为挖掘果梅中NAC基因成员,探讨其组织表达特异性,本研究采用生物信息学方法鉴定了果梅NAC基因家族,并对其理化性质、染色体分布、亚细胞定位、保守基序、蛋白结构和亚族分类进行预测分析。结果表明,果梅NAC基因家族包含106个NAC基因成员... 为挖掘果梅中NAC基因成员,探讨其组织表达特异性,本研究采用生物信息学方法鉴定了果梅NAC基因家族,并对其理化性质、染色体分布、亚细胞定位、保守基序、蛋白结构和亚族分类进行预测分析。结果表明,果梅NAC基因家族包含106个NAC基因成员,根据系统发育特征将其分为12个亚族。PmNAC基因在果梅的8条染色体上呈现不均匀分布,多编码酸性氨基酸;大部分NAC蛋白为亲水蛋白,其二级结构多以无规则卷曲为主要构成元件,且三级结构相似;亚细胞定位预测显示,果梅NAC蛋白为典型的核蛋白。选取12个NAC基因家族成员,利用实时荧光定量PCR技术进行组织表达分析,结果表明,12个果梅NAC基因在不同组织中均有表达,但表达差异明显。其中3个基因(PmNAC54、PmNAC32、PmNAC68)在果皮中表达最高,4个基因(PmNAC60、PmNAC95、PmNAC51、PmNAC2)在果肉中表达最高,3个基因(PmNAC31、PmNAC62、PmNAC48)在嫩茎中表达最高,其余2个基因(PmNAC61和PmNAC71)分别在果胚和花芽中具有最高的表达,表达特征的差异表明它们可能具有不同的生物学功能。本研究结果为果梅NAC蛋白的进一步功能分析奠定了一定的理论基础。 展开更多
关键词 果梅 NAC基因家族 生物信息学 组织表达
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梅PmmiR319a与靶基因PmTCP2的验证与表达分析 预览
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作者 王万许 侍婷 +2 位作者 高志红 蔡斌华 《核农学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期1908-1916,共9页
为验证PmmiR319a与PmTCP2基因的靶标关系,并研究PmmiR319a在梅花芽发育过程中的作用,本研究以梅品种‘大嵌蒂’为试验材料,克隆梅PmmiR319a前体序列及其靶基因PmTCP2,采用5'RACE技术对两者之间的靶标关系进行验证,并进一步分析在花芽... 为验证PmmiR319a与PmTCP2基因的靶标关系,并研究PmmiR319a在梅花芽发育过程中的作用,本研究以梅品种‘大嵌蒂’为试验材料,克隆梅PmmiR319a前体序列及其靶基因PmTCP2,采用5'RACE技术对两者之间的靶标关系进行验证,并进一步分析在花芽发育过程中的表达模式。结果表明,梅PmmiR319a前体序列含有茎环结构,通过序列比对和系统发育分析发现,不同物种的miR319a前体序列的茎环发卡结构和成熟体区域表现出较高的保守性。梅PmTCP2基因全长1 500 bp,编码499个氨基酸。荧光定量PCR分析结果表明,PmmiR319a在梅花发育的前期表达量高,而PmTCP2在梅花发育的中期和后期表达量较高,PmmiR319a与预测靶基因PmTCP2的表达模式呈负相关,表明二者存在负调控的关系,与预测的靶标关系一致。RLM-5'RACE技术验证结果表明,PmmiR319a对其靶基因PmTCP2的mRNA进行了切割,切割位点位于第10和第11个碱基之间。由此可知,PmmiR319a通过调控靶基因PmTCP2影响花的发育。本研究结果为阐明梅花中miR319a的功能提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 miR319a TCP2 荧光定量PCR RLM-5'RACE
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梅和杏果实有机酸代谢差异研究 预览
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作者 翁金洋 薛松 +3 位作者 阎依超 沈志军 高志红 《南京农业大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期1009-1017,共9页
[目的]本文旨在通过测定梅和杏果实不同发育时期有机酸含量、相关酶活性以及有机酸代谢酶基因表达量,分析2类果实有机酸生物合成与代谢的关键基因,进一步解析梅和杏果实有机酸含量差异形成机制。[方法]以梅品种‘养老’和‘丰后’以及... [目的]本文旨在通过测定梅和杏果实不同发育时期有机酸含量、相关酶活性以及有机酸代谢酶基因表达量,分析2类果实有机酸生物合成与代谢的关键基因,进一步解析梅和杏果实有机酸含量差异形成机制。[方法]以梅品种‘养老’和‘丰后’以及杏品种‘金太阳’的果实为材料,首先利用高效液相色谱法(HPLC)测定不同生长期果实中有机酸组分和含量,然后用紫外分光光度计测定有机酸代谢相关酶的活性,最后用实时荧光定量PCR测定有机酸代谢酶关键基因在果实各个发育阶段的表达水平。[结果]梅和杏果实中积累的主要有机酸均为柠檬酸和苹果酸,且相关代谢关键酶活性存在显著差异。相关性分析表明:在梅和杏果实发育过程中,柠檬酸合成酶(CS)活性与柠檬酸含量极显著正相关;磷酸丙醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)和NADP-苹果酸酶(NADP-ME)活性与苹果酸含量均具有显著相关性。荧光定量PCR分析结果表明:在梅果实中发现CS基因表达量与柠檬酸含量有显著的相关性;在梅和杏果实中同时发现ME基因表达量与苹果酸含量有显著相关性。[结论]梅和杏果实中有机酸含量差异主要是由CS、PEPC和ME活性不同引起的,在梅果实中发现CS和ME基因是有机酸合成与代谢的关键基因,在杏果实中发现ME基因是有机酸代谢的关键基因。 展开更多
关键词 有机酸 代谢 关键基因
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两个果梅栽培品种果实香气物质的种类和动态变化
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作者 李甄 刘康 +5 位作者 晓鹏 潘振朋 曹跃刚 吴本宏 高志红 《北京林业大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第S1期46-56,共11页
采用顶空固相微萃取-气质联用技术分析了青梅‘青佳二号’、红梅‘软条红梅’两个不同梅品种的果实香气成分。结果表明:两个不同品种果实香气物质组成成分及含量存在显著差异,‘青佳二号’和‘软条红梅’分别检测出74和90种香气成分,二... 采用顶空固相微萃取-气质联用技术分析了青梅‘青佳二号’、红梅‘软条红梅’两个不同梅品种的果实香气成分。结果表明:两个不同品种果实香气物质组成成分及含量存在显著差异,‘青佳二号’和‘软条红梅’分别检测出74和90种香气成分,二者的共同成分有62种;‘青佳二号’比‘软条红梅’成熟期晚大概一周;在整个果实发育时期,‘青佳二号’的单果鲜质量都显著高于‘软条红梅’,成熟时单果鲜质量是‘软条红梅’的2倍;‘青佳二号’主要香气物质由含量较高的醇、醛类转变成醇、酯、烯萜类,‘软条红梅’主要香气物质由含量较高的醇、醛类转变成醛、萜类;不同品种果实特有香气物质对果实气味有较大的影响,‘青佳二号’特征性香气可能为2,6-二甲基-5,7-辛二烯-2-醇、乙酸丁酯、柠檬烯、辛醛、3,7-二甲基-1,5,7-辛三烯-3-醇,‘软条红梅’特征性香气可能为顺-α,α-5-三甲基-5-乙烯基四氢化呋喃-2-甲醇、水杨酸甲酯。 展开更多
关键词 果梅 香气物质 顶空固相微萃取 气质联用
基于液相色谱-串联质谱法分析茉莉酸与果梅休眠的关系 预览
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作者 韩驰 仲文 +4 位作者 高志红 霍希美 李百健 庄维兵 《江苏农业科学》 北大核心 2015年第5期167-170,共4页
建立了不同果梅(Prunus mume Sieb.et Zucc)品种4个休眠时期花芽的茉莉酸(jasmonic acid)含量的液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem triple quadrupole mass spectrometric,LC-MS/MS)测定方法。样品经过甲醇提取,Age... 建立了不同果梅(Prunus mume Sieb.et Zucc)品种4个休眠时期花芽的茉莉酸(jasmonic acid)含量的液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem triple quadrupole mass spectrometric,LC-MS/MS)测定方法。样品经过甲醇提取,Agela Cleanert SPE-NH2固相萃取小柱净化。色谱分离采用C18反相柱,以乙腈-水(水相含0.05%乙酸)为流动相梯度洗脱,质谱分析采用ESI离子源、二级串联质谱、负离子模式下进行检测。测定结果,方法标准曲线线性良好,茉莉酸r=0.999 2,平均回收率范围为78.18%~97.49%,相对标准偏差(RSD,n=3)为1.25%~8.27%。该方法操作简便,灵敏度高,选择性好,回收率高,适合果梅花芽中茉莉酸的测定。结果表明,被测2个品种的果梅花芽中,休眠解除和生态休眠时期的茉莉酸含量高于内休眠和抑制性休眠时期,推测内源激素茉莉酸可能有抑制果梅休眠和促进花芽正常生长的作用。本试验对进一步探讨果梅休眠与内源激素茉莉酸的关系打下了一定的基础。 展开更多
关键词 液相色谱-串联质谱 果梅 休眠 茉莉酸
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杨梅地方品种“浪荡子”组培快繁体系建立 预览 被引量:2
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作者 廖雪竹 +2 位作者 顾林平 黄蕾芳 高志红 《中国南方果树》 北大核心 2015年第5期59-62,共4页
以茎尖、茎段为材料,对“浪荡子”杨梅进行了组培快繁技术的研究。结果表明,外植体以春季3—5月取样最佳;外植体用75%乙醇浸泡50~60s,再用0.1%升汞处理7 min效果最好;WPM+6-BA 0.15mg/L+NAA 0.03mg/L+PVP 1.0g/L培养基上芽萌动和茎... 以茎尖、茎段为材料,对“浪荡子”杨梅进行了组培快繁技术的研究。结果表明,外植体以春季3—5月取样最佳;外植体用75%乙醇浸泡50~60s,再用0.1%升汞处理7 min效果最好;WPM+6-BA 0.15mg/L+NAA 0.03mg/L+PVP 1.0g/L培养基上芽萌动和茎伸长效果最好;WPM+6-BA 1.2mg/L+NAA 0.1mg/L+GA30.5mg/L+PVP 1.0g/L培养基上新芽增殖的效果最好。 展开更多
关键词 杨梅 浪荡子 组培快繁
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杨梅组织培养研究进展 预览 被引量:4
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作者 廖雪竹 高志红 《中国南方果树》 北大核心 2015年第2期140-145,共6页
综述了近年来杨梅组织培养的研究进展,包括外植体的选取、植物生长调节剂的筛选以及培养基与培养条件选择等方面,分析讨论了组织培养过程中常见污染、褐化和玻璃化问题及其解决方法,并对杨梅组培的应用前景进行了讨论。
关键词 杨梅 组织培养 污染 褐化 玻璃化
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果梅PmKNAT2基因全长cDNA克隆及表达分析 预览 被引量:3
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作者 孙海龙 宋娟 +2 位作者 高志红 章镇 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第17期3444-3452,共9页
【目的】从‘大嵌蒂’果梅中克隆PmKNAT2,并对其结构特征及表达模式进行分析,为研究果梅雌蕊败育的分子机理和分子育种奠定基础。【方法】在NCBI中查找与果梅相似性很高的桃KNOPE2(KNAT2的同源基因)序列(EF093491),根据桃的KNOPE2... 【目的】从‘大嵌蒂’果梅中克隆PmKNAT2,并对其结构特征及表达模式进行分析,为研究果梅雌蕊败育的分子机理和分子育种奠定基础。【方法】在NCBI中查找与果梅相似性很高的桃KNOPE2(KNAT2的同源基因)序列(EF093491),根据桃的KNOPE2序列设计特异引物;采用改良CTAB法提取‘大嵌蒂’果梅花芽总RNA;通过RT-PCR和RACE技术获得基因cDNA序列全长;使用DNAMAN软件进行序列拼接;利用NCBI数据库中的BLASTn和BLASTp程序进行相似性分析;通过生物信息学方法分析结构特征;用DNAMAN软件分析基因的ORF和氨基酸序列;MEGA4.0软件进行系统进化树的构建;利用Bioxm2.6推测分析蛋白分子量和等电点;根据NCBI中ConservedDomains程序进行蛋白质保守域结构预测;用ExPaSy提供的在线SOPMA程序进行蛋白质二级结构预测;构建PJIT166-PmKNAT2-GFP的融合亚细胞定位表达载体,采用基因枪法转化洋葱表皮细胞,经暗培养后在激光共聚焦显微镜下观察;利用实时荧光定量RT-PCR研究其表达模式,分析其在‘大嵌蒂’花芽发育不同时期、不同器官中的表达特性。【结果】在‘大嵌蒂’果梅中获得一个KNAT2的同源基因,命名为PmKNAT2,其cDNA全长为1 402 bp,5'UTR47 bp,3'UTR 293 bp,编码区全长为1 062 bp,编码353个氨基酸,预测蛋白质分子量为40.41 kD,理论等电点为4.85。蛋白结构分析表明该基因编码的氨基酸具有2个结构域,MEINOX结构域(KNOXⅠ和KNOXⅡ2个亚结构域)和HD(homomeodomain)结构域,属于KNOX蛋白;相似性分析发现该基因与GenBank中其它来源的KNOX蛋白序列的相似性为50%—100%;系统进化树分析显示果梅PmKNAT2与桃KNOX聚为一类,表明与其亲缘关系最近。二级结构预测结果表明PmKNAT2所编码蛋白由47.14%的α-螺旋(Alpha helix)、3.43%的β-转角(Beta turn)、3.14的β-折叠(Extended strand)和46.29%的随机卷曲(Random coil)组成。亚细胞定位结果显示该 展开更多
关键词 果梅 雌蕊败育 PmKNAT2 基因克隆 特征分析 表达模式
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青种枇杷组织培养技术初探 预览 被引量:1
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作者 廖雪竹 +4 位作者 陆文芝 顾林平 黄蕾芳 古咸彬 高志红 《江苏林业科技》 2013年第3期46-47,57共3页
以芽为研究材料,对青种枇杷的组织培养技术进行了初探。结果表明:以春季3~4月采样为最佳时期;春芽用75%乙醇浸泡20~30 s后,再用0.1%升汞处理10 min效果最好;春芽在MS+1.2 mg/L 6-BA+0.6 mg/L NAA+0.5 mg/L GA3培养基上萌动效果最好。
关键词 青种枇杷 组织培养
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吲熟酯和钼酸铵处理对青种枇杷果实糖积累及相关酶活性的影响 预览 被引量:1
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作者 艾海提·阿米娜 +4 位作者 章镇 顾林平 黄蕾芳 高志红 余旭凤 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期33-37,共5页
以青种枇杷为试材,在果实成熟前50d左右分别喷施100、200、300mg·L^-1吲熟酯及0.1%钼酸铵和200mg·L^-1吲熟酯+0.1%钼酸铵,研究吲熟酯和钼酸铵对果实生长发育过程中糖积累以及蔗糖与山梨醇代谢相关酶活性变化的影响。结果表明... 以青种枇杷为试材,在果实成熟前50d左右分别喷施100、200、300mg·L^-1吲熟酯及0.1%钼酸铵和200mg·L^-1吲熟酯+0.1%钼酸铵,研究吲熟酯和钼酸铵对果实生长发育过程中糖积累以及蔗糖与山梨醇代谢相关酶活性变化的影响。结果表明:200mg·L^-1吲熟酯处理对增加果实的果糖和葡萄糖积累最为明显。所有处理的果实山梨醇含量均随果实发育呈先下降后上升的趋势。100mg·L^-1吲熟酯处理的蔗糖合成酶(SS)和蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性在5月21日后呈明显的下降趋势,其他处理的蔗糖代谢相关酶活性均呈上升趋势;山梨醇代谢相关酶活性总体上呈下降趋势。综上所述,200mg·L^-1吲熟酯处理对青种枇杷果实糖积累有较显著的促进作用。 展开更多
关键词 吲熟酯 钼酸铵 青种枇杷 糖积累 蔗糖 山梨醇 代谢
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木本植物季节性休眠的分子机制 预览 被引量:3
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作者 庄维兵 高志红 +3 位作者 章镇 侍婷 王翡 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期 1919-1928,共10页
季节性休眠是多年生木本植物在生态和进化上的一种"权衡"机制,也是植物界多样性生存策略的组成部分。木本植物的休眠反应首先是Ca2+作为信号物质诱导CO/FT基因的表达,进而引起与休眠相关的DAM基因的表达;而低温可以诱导休眠的发生,... 季节性休眠是多年生木本植物在生态和进化上的一种"权衡"机制,也是植物界多样性生存策略的组成部分。木本植物的休眠反应首先是Ca2+作为信号物质诱导CO/FT基因的表达,进而引起与休眠相关的DAM基因的表达;而低温可以诱导休眠的发生,冷诱导表达的基因CBF和COR在休眠期间也有表达;而与逆境相关的蛋白如脱水蛋白、抗冻蛋白、热激蛋白和热稳定蛋白等也与休眠反应有密切的关系。本文就与木本植物季节性休眠相关的分子机制进行了综述。 展开更多
关键词 木本植物 休眠 冷诱导基因 DAMS基因 CA2+ 分子机制 低温诱导蛋白
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枇杷果实蔗糖磷酸合酶基因cDNA片段的克隆及表达分析 预览 被引量:1
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作者 高志红 +3 位作者 顾林平 章镇 黄蕾芳 王秀云 《江西农业学报》 2010年第9期,共4页
根据GenBank中已登录的多种植物的蔗糖磷酸合成酶基因的保守序列设计引物,采用RT-PCR方法,从枇杷果实中扩增出该基因的cDNA片段并测序,分别为386 bp和383 bp.序列分析表明,枇杷果实蔗糖磷酸合成酶基因与桃果实蔗糖磷酸合成酶基因相似性... 根据GenBank中已登录的多种植物的蔗糖磷酸合成酶基因的保守序列设计引物,采用RT-PCR方法,从枇杷果实中扩增出该基因的cDNA片段并测序,分别为386 bp和383 bp.序列分析表明,枇杷果实蔗糖磷酸合成酶基因与桃果实蔗糖磷酸合成酶基因相似性达91%.半定量RT-PCR分析表明,该基因在枇杷果实生长发育过程中的表达量逐渐增加.所得基因片段已在GenBank中注册,386 bp和383 bp登记号分别为HM122759和HM146926. 展开更多
关键词 枇杷果实 蔗糖 磷酸合成酶基因 合酶基因 cDNA片段 克隆 表达分析 GENBANK 生长发育过程 分析表 RT-PCR分析 RT-PCR方法 保守序列 设计引物 基因片段 多种植物 相似性 桃果实 表达量 半定量
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枇杷果实发育过程中糖积累及相关酶活性变化研究 预览 被引量:14
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作者 沈丹婷 +3 位作者 顾林平 章镇 黄蕾芳 高志红 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期 487-493,共7页
以‘青种’、‘霸红’和‘鸡蛋白’3个枇杷品种为材料,测定不同果实发育时期果实中蔗糖、葡萄糖和果糖含量以及蔗糖代谢相关酶即酸性转化酶(AI)、中性转化酶(NI)、蔗糖合成酶(SS)和蔗糖磷酸合成酶(SPS)的活性,并对果实中糖积累... 以‘青种’、‘霸红’和‘鸡蛋白’3个枇杷品种为材料,测定不同果实发育时期果实中蔗糖、葡萄糖和果糖含量以及蔗糖代谢相关酶即酸性转化酶(AI)、中性转化酶(NI)、蔗糖合成酶(SS)和蔗糖磷酸合成酶(SPS)的活性,并对果实中糖积累与酶活性的关系进行了分析.结果表明:在果实膨大期(5月3日)之前,3种枇杷果实的蔗糖、葡萄糖和果糖积累缓慢,之后则迅速积累,存在着明显的转折点;果实成熟(5月23日)之后糖分积累速度趋于平稳.3种枇杷果实在发育过程中转化酶、蔗糖合成酶和蔗糖磷酸合成酶的活性变化与3种糖积累的动态变化趋势相一致.NI和AI活性在果实膨大期之前都较低且没有明显的变化,之后均快速上升;SS和SPS的活性在果实膨大期之前都很低且几乎无变化,随后‘鸡蛋白’的活性迅速上升至果实成熟之后便缓慢上升,而‘青种’和‘霸红’随果实成熟度的增加而升高,但均低于鸡蛋白.可见,枇杷果实膨大期是糖分积累代谢活跃期,其糖积累受蔗糖代谢相关酶综合调控. 展开更多
关键词 枇杷 糖积累 果实发育 转化酶 蔗糖合成酶 蔗糖磷酸合成酶
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