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n-3多不饱和脂肪酸对糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞钙库操纵性钙通道的影响
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作者 汤徐 钱玲玲 +5 位作者 吴莹 刘晓宇 张桢烨 缪凌枫 王如兴 《中华心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期640-646,共7页
目的探讨n-3多不饱和脂肪酸(n-3 PUFA)对糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞(SMC)上钙库操纵性钙通道(SOCC)的功能和表达的影响。方法选用健康清洁级雄性SD大鼠共180只,按完全随机分组法分为正常组(N组)、未干预糖尿病组(D组)、低剂量n-3 PUF... 目的探讨n-3多不饱和脂肪酸(n-3 PUFA)对糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞(SMC)上钙库操纵性钙通道(SOCC)的功能和表达的影响。方法选用健康清洁级雄性SD大鼠共180只,按完全随机分组法分为正常组(N组)、未干预糖尿病组(D组)、低剂量n-3 PUFA干预糖尿病组(DL组)和高剂量n-3 PUFA干预糖尿病组(DH组),每组45只。采用链尿霉素连续2次腹腔注射建立1型糖尿病大鼠动物模型,成模后DL组和DH组大鼠分别按每日10 mg/kg和50 mg/kg n-3 PUFA灌胃,N组和D组每日相同剂量生理盐水灌胃,持续8周。采用三步酶消化法急性分离获取大鼠冠状动脉SMC;细胞内Ca2+荧光成像技术测定SOCC引起的冠状动脉SMC内Ca2+浓度变化(ΔF340/F380);血管张力测定技术测定SOCC引起的冠状动脉张力变化;Western blot测定冠状动脉SMC上基质交联分子1(STIM1)、钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)及瞬时受体电位C通道1(TRPC1)表达情况。结果N、D、DL和DH组冠状动脉SMC上SOCC引起的ΔF340/F380值分别为0.425±0.023、0.838±0.037、0.342±0.052和0.364±0.045,N、DL和DH组的ΔF340/F380明显低于D组(P<0.05),DL组和DH组间差异无统计学意义(P>0.05)。4组SOCC引起的冠状动脉张力变化分别为0.94±0.09、1.95±0.18、1.35±0.24和1.01±0.18,N组和DH组的冠状动脉张力低于D组(P<0.05),DL和D组间差异无统计学意义(P>0.05)。D组冠状动脉SMC上STIM1、Orai1和TRPC1蛋白表达高于N组(P均<0.05),DL组和DH组的STIM1蛋白表达低于D组(P<0.05),各组Orai1和TRPC1表达差异无明显意义(P>0.05)。结论糖尿病时大鼠冠状动脉SMC上SOCC表达增加,细胞内Ca2+浓度增加,冠状动脉张力增加,n-3 PUFA可以下调糖尿病大鼠冠状动脉SMC上SOCC的表达,降低细胞内Ca2+浓度和冠状动脉张力,对糖尿病冠状动脉起保护作用。 展开更多
关键词 糖尿病 脂肪酸类 不饱和 冠状血管 肌细胞 平滑肌 钙通道
右上肺静脉起源房性心动过速致心律失常性心肌病一例 预览
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作者 郑杰 李库林 +4 位作者 刘晓宇 张常莹 陈明龙 王如兴 《实用心电学杂志》 2019年第3期217-219,226共4页
局灶性房性心动过速的起源点主要位于心房内的一些特殊解剖部位。本文报道一例起源于右上肺静脉房性心动过速致心律失常性心肌病患者的临床表现、体表心电图、腔内电生理检查及导管消融治疗情况。
关键词 肺静脉起源 房性心动过速 心律失常心肌病 导管消融
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rs2200733多态性对心房颤动射频消融术后复发的预测价值 预览
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作者 承燕 李库林 +7 位作者 郑杰 刘晓宇 张常莹 李宗斌 赵晓溪 郁志明 王如兴 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2019年第7期734-739,共6页
目的经导管射频消融术治疗心房颤动(AF)的复发率相对偏高。文中探索rs2200733多态性对AF射频消融术后复发的预测价值。方法纳入2015年7月至2016年9月南京医科大学附属无锡人民医院行磁导航指导下AF射频消融术患者53例,收集患者基线资料... 目的经导管射频消融术治疗心房颤动(AF)的复发率相对偏高。文中探索rs2200733多态性对AF射频消融术后复发的预测价值。方法纳入2015年7月至2016年9月南京医科大学附属无锡人民医院行磁导航指导下AF射频消融术患者53例,收集患者基线资料,所有患者均进行rs2200733基因分型并随访症状、并发症、心电图及动态心电图。采用Cox生存分析法确定影响AF射频消融术后复发的独立预测因子,并分别计算其预测术后12和24个月复发的敏感性、特异性等。结果本组患者均为汉族,平均随访(21.6±9.5)个月。其中25例(47.2%)复发,平均复发时间为术后(6.6±5.3)个月。Kaplan-Meier生存分析显示在加性和隐性模型中,rs2200733基因型可影响AF复发(P<0.01)。多因素COX生存分析显示,rs2200733基因型(隐性模型)是AF射频消融术后复发的独立预测因子(OR=3.184,95%CI:1.378~7.357,P=0.007)。rs2200733TT预测术后12个月内AF复发的敏感性、特异性、阳性预测价值、阴性预测价值和准确性分别为64%、81%、70%、76%和74%;预测术后24个月内AF复发的敏感性、特异性、阳性预测价值、阴性预测价值和准确性分别为60%、82%、75%、70%和72%。结论rs2200733基因型是AF射频消融术后复发的一个独立预测因子。其高特异性提示rs2200733基因型可考虑作为汉族人群AF射频消融术适应症的一个筛选工具。 展开更多
关键词 心房颤动 射频消融 基因
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起源于冠状静脉窦憩室旁道导管消融一例
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作者 赵晓溪 李库林 +6 位作者 郑杰 刘晓宇 郁志明 承燕 施海峰 王如兴 《中国心脏起搏与心电生理杂志》 2018年第6期607-609,共3页
患者女性,55岁,诊断为预激综合征合并阵发性室上性心动过速。第一次在二维标测下消融未成功,但初步标测到靶点在后间隔附近。2周后采用三维标测下盐水灌注导管消融,在冠状窦内近口部标测满意靶点,消融成功。撤出消融导管,经Swartz鞘采用... 患者女性,55岁,诊断为预激综合征合并阵发性室上性心动过速。第一次在二维标测下消融未成功,但初步标测到靶点在后间隔附近。2周后采用三维标测下盐水灌注导管消融,在冠状窦内近口部标测满意靶点,消融成功。撤出消融导管,经Swartz鞘采用JR4.0在冠状静脉窦消融靶点附近造影,提示旁道起源于冠状静脉窦憩室。 展开更多
关键词 心血管病学 冠状静脉窦憩室 旁道 预激综合征 阵发性室上性心动过速
磁导航指导下持续性心房颤动导管消融术后复发因素的分析 预览 被引量:1
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作者 赵晓溪 李库林 +6 位作者 郑杰 刘晓宇 张常莹 承燕 郁志明 王如兴 《实用心电学杂志》 2018年第4期245-250,共6页
目的探讨磁导航指导下持续性心房颤动(房颤)导管消融患者术后复发的危险因素。方法在磁导航指导下,对49例持续性房颤患者行双侧肺静脉前庭电隔离+左心房顶部和二尖瓣峡部线性消融术。术后随访一年,分为房颤复发组(n=21)和房颤未复... 目的探讨磁导航指导下持续性心房颤动(房颤)导管消融患者术后复发的危险因素。方法在磁导航指导下,对49例持续性房颤患者行双侧肺静脉前庭电隔离+左心房顶部和二尖瓣峡部线性消融术。术后随访一年,分为房颤复发组(n=21)和房颤未复发组(n=28),比较两组患者手术操作时间、建模时间、肺静脉隔离时间、X线暴露时间、肺静脉前庭隔离急性成功率、手术相关并发症发生率及49例患者术后1个月、3个月、6个月和12个月的房颤复发率。结果 49例患者均成功实施左心房建模、标测和消融;复发组和未复发组手术操作时间、建模时间、肺静脉隔离时间、消融时间、X线暴露时间和肺静脉前庭隔离急性成功率差异均无统计学意义(P〉0.05)。两组患者均未发生肺静脉狭窄、心脏穿孔、心包填塞和猝死等严重并发症。随访一年,持续性房颤消融成功率为57.1%;Cox回归分析提示术前房颤发作时间及合并冠心病与术后房颤复发有关。结论磁导航指导下持续性房颤导管消融具有较高的有效性和较好的安全性。术前房颤持续时间及合并冠心病是术后持续性房颤复发的独立危险因素。 展开更多
关键词 磁导航系统 持续性心房颤动 导管消融 复发 危险因素
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13,14-环氧化二十二碳六烯酸舒张冠状动脉作用机制 预览
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作者 钱玲玲 陈恒建 +7 位作者 张桢烨 刘晓宇 吴莹 赵晓溪 李库林 郁志明 王如兴 《医学研究生学报》 北大核心 2018年第8期790-794,共5页
目的 二十二碳六烯酸对心血管系统的保护机制尚未完全阐明,文中探讨其代谢产物13,14环氧化二十二碳六烯酸(13,14-EpDPE)对正常大鼠冠状动脉的舒张作用机制。 方法 酶消化法分离冠状动脉平滑肌细胞,采用单通道膜片钳技术研究不同浓度(分... 目的 二十二碳六烯酸对心血管系统的保护机制尚未完全阐明,文中探讨其代谢产物13,14环氧化二十二碳六烯酸(13,14-EpDPE)对正常大鼠冠状动脉的舒张作用机制。 方法 酶消化法分离冠状动脉平滑肌细胞,采用单通道膜片钳技术研究不同浓度(分别为0、1、10、100 pmol/L)13,14-EpDPE对冠状动脉平滑肌细胞BK通道开放概率的影响,采用全细胞膜片钳技术研究13,14-EpDPE对冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流密度的影响。采用血管张力测定检测BK通道特异性阻滞剂蝎毒素预孵育与未孵育时(即预孵育和未孵育组),不同浓度13,14-EpDPE对正常大鼠冠状动脉的舒张作用。 结果在电极外液钙离子浓度为1μmol/L,刺激电位60 mV条件下,在0、1、10和100 pmol/L 13,14-EpDPE灌流后,正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道NP o分别为0.25±0.03、0.34±0.03、0.44±0.06和0.85±0.16,其中100 pmol/L 13,14-EpDPE灌流时较0、1、10 pmol/L差异有统计学差异(P<0.05)。BK通道被13,14-EpDPE浓度依赖性激活,其半效浓度EC 50为(15.94±1.21)pmol/L。在维持电位-60 mV和测试电位+100 mV下,10 pmol/L 13,14-EpDPE灌流前、灌流后的BK通道电流密度分别为(58.27±16.35)pA/pF和(95.94±23.00)pA/pF,差异有统计学意义(P<0.05)。使用内皮素收缩血管后,10^-12、10^-11、10^-10、10^-9、10^-8和10^-7 mol/L的13,14-EpDPE对IBTX未孵育组及预孵育组大鼠冠状动脉的舒张百分率均依次增加,且相同浓度13,14-EpDPE作用下,IBTX预孵育组较未孵育组大鼠冠状动脉舒张百分率均降低(P<0.01)。 结论 13,14-EpDPE可通过激活正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道,从而舒张冠状动脉,这可能是13,14-EpDPE对心血管系统具有保护作用的机制之一。 展开更多
关键词 冠状动脉 大电导钙激活钾离子通道 13 14-EpDPE 膜片钳
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瞬时受体电位C1通道在糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞上的表达及对细胞内钙离子浓度的影响 被引量:1
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作者 孙曼青 汤徐 +8 位作者 钱玲玲 吴莹 杨承健 肖春晖 刘晓宇 夏大云 柴强 王如兴 《中华糖尿病杂志》 CAS CSCD 2017年第5期298-303,共6页
目的 探讨瞬时受体电位C1通道(TRPC1)在糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞中的表达变化及对糖尿病冠状动脉功能影响的可能机制.方法 选用8~12周龄、体重(200±20)g的健康雄性SD大鼠160只,采用随机数字表法随机分为正常对照组(80只... 目的 探讨瞬时受体电位C1通道(TRPC1)在糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞中的表达变化及对糖尿病冠状动脉功能影响的可能机制.方法 选用8~12周龄、体重(200±20)g的健康雄性SD大鼠160只,采用随机数字表法随机分为正常对照组(80只)和糖尿病组(80只).采用腹腔链脲佐菌素注射建立1型糖尿病大鼠动物模型;采用酶消化法急性分离正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞;采用Western blotting和实时荧光定量PCR分别测定正常组和糖尿病组冠状动脉TRPC1通道蛋白和基因的表达;采用细胞内钙离子荧光成像技术测定正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞内钙离子浓度及加入TRPC1通道阻滞剂SKF96365后细胞内钙离子浓度的变化;采用血管张力测定技术测定TRPC1通道阻滞剂SKF96365对糖尿病冠状动脉功能的影响.2组间比较采用t检验.结果 糖尿病组冠状动脉平滑肌细胞上TRPC1通道蛋白表达量是正常组的(1.456±0.081)倍(t=-2.210,P〈0.05);糖尿病组TRPC1通道基因表达量为正常组的(2.198±0.251)倍(t=-3.864,P〈0.05);糖尿病组较正常组钙离子浓度变化增加(1.217±0.044比0.869±0.029,t=-6.644,P〈0.05),正常组加入SKF96365后较加入前钙离子浓度减低(0.067±0.039比0.842±0.020,t=15.726,P〈0.05),糖尿病组加入SKF96365后较加入前钙离子浓度减低(0.195±0.028比1.217±0.043,t=-19.807,P〈0.05);正常组和糖尿病组冠状动脉在ET-1收缩血管后,加入10μmol/L TRPC1通道抑制剂SKF96365,糖尿病组较正常组冠状动脉舒张的百分比明显升高[(91.6±2.6)%比(69.2±6.0)%,t=-3.529,P〈0.05].结论 糖尿病时冠状动脉平滑肌细胞上TRPC1通道表达增加,细胞内钙离子浓度增加,导致血管收缩和功能紊乱,这可能是糖尿病患者易发生冠状动脉病变的机制之一. 展开更多
关键词 瞬时受体电位C1通道 糖尿病 冠状动脉 平滑肌细胞 细胞内钙离子
不同浓度二十二碳六烯酸对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道的激活作用及其机制
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作者 夏大云 钱玲玲 +9 位作者 郁志明 孙曼青 汤徐 吴莹 季圆 王湘芸 柴强 陆彤 王如兴 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期169-173,共5页
目的:探讨不同浓度二十二碳六烯酸(DHA)对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾离子通道(BK通道)的激活作用及其机制。方法:酶消化法分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞。采用全细胞膜片钳实验技术记录在未孵育与孵育细胞色素P... 目的:探讨不同浓度二十二碳六烯酸(DHA)对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾离子通道(BK通道)的激活作用及其机制。方法:酶消化法分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞。采用全细胞膜片钳实验技术记录在未孵育与孵育细胞色素P450环氧化酶抑制剂SKF525A并灌流不同浓度DHA条件下BK通道电流密度变化;采用单通道膜片钳实验技术记录灌流不同浓度DHA时BK单通道开放概率的变化。结果:0.01-1.00μmol/L(定义为低浓度)DHA激活BK通道的半效浓度(EC50)为(0.24±0.05)μmol/L,但经SKF525A孵育后激活作用消失;3.00-10.00μmol/L(定义为高浓度)DHA激活BK通道的EC50为(2.38±0.22)μmol/L,经SKF525A孵育后,激活作用仍存在,且EC50无明显变化。在电极外液钙离子浓度为1μmol/L和刺激电位60 m V条件下,DHA浓度为0、0.01、0.03、0.10、0.30、1.00μmol/L时,BK通道开放概率分别为(0.095 2±0.009 5)、(0.093 9±0.012 6)、(0.098 6±0.016 9)、(0.099 5±0.014 7)、(0.097 5±0.010 4)和(0.102 3±0.020 6)(P〉0.05,n=5),提示低浓度DHA不能激活BK单通道;继续增加DHA浓度,当浓度为3、10μmol/L时,BK单通道开放概率分别为(0.700 3±0.013 2)和(0.892 7±0.052 3)(P〈0.05,n=5),提示高浓度DHA呈浓度依赖性激活BK单通道,EC50为(3.37±0.10)μmol/L。结论:不同浓度DHA激活BK通道的机制不同,低浓度DHA通过细胞色素P450环氧化酶途径激活BK通道,高浓度DHA可能通过与BK通道结合后直接激活。 展开更多
关键词 二十二碳六烯酸 冠状动脉平滑肌细胞 大电导钙激活钾离子通道 膜片钳 细胞色素P450环氧化酶
糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道特性及开放动力学的变化 被引量:1
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作者 钱玲玲 刘晓宇 +7 位作者 孙曼青 夏大云 汤徐 季圆 吴莹 柴强 王如兴 《中国心脏起搏与心电生理杂志》 2017年第4期343-347,共5页
目的 研究糖尿病时冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)的电压依赖性、钙敏感性及其开放动力学变化,探讨糖尿病时冠状动脉损伤的细胞电生理机制.方法 采用链脲霉素腹腔内注射建立糖尿病大鼠模型(糖尿病组,n=30),对照组相... 目的 研究糖尿病时冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)的电压依赖性、钙敏感性及其开放动力学变化,探讨糖尿病时冠状动脉损伤的细胞电生理机制.方法 采用链脲霉素腹腔内注射建立糖尿病大鼠模型(糖尿病组,n=30),对照组相应注射生理盐水(n=30);采用酶消化法急性分离大鼠冠状动脉平滑肌细胞;采用膜内向外型单通道膜片钳实验技术记录BK单通道电流;采用Clampfit10.4软件分析单通道数据.结果 在电极外液钙离子浓度为1mmol/L,刺激电位分别为0,20,40,60,80,100,120和140m V时,随着刺激电位增加,正常组BK通道的NPo逐渐增加,其半数有效激活电压(V1/2)为(88.45±1.72)m V;糖尿病组BK通道NPo亦逐渐增加,V1/2为(104.29±1.09)m V,其电压GNPo曲线较正常组向左下移动.在刺激电位60 m V,电极外液钙离子浓度分别为0,0.01,0.1,0.5,1,5,10和50mmol/L时,随着电极外液钙离子浓度增加,正常组BK通道NPo逐渐增加,其半数有效激活浓度(EC50)为(2.26±0.27)mmol/L;糖尿病组BK通道NPo亦逐渐增加,EC50为(3.15±0.20)mmol/L,其浓度GNPo曲线较正常组向左下移动.在电极外液钙离子浓度为1mmol/L,刺激电位60 m V时,与正常组比较,糖尿病组BK通道NPo明显减少,电流幅度与平均开放时间无明显变化,而平均关闭时间显著延长[(451.35±113.71)msvs(107.58±15.99)ms,P〈0.05].结论 糖尿病时冠状动脉平滑肌细胞BK通道电压依赖性与钙敏感性均受损,开放概率减少,通道平均关闭时间延长,这可能是糖尿病冠状动脉功能损伤的重要原因之一. 展开更多
关键词 心血管病学 糖尿病 大电导钙激活钾通道 电压依赖性 钙敏感性 开放动力学
二十碳五烯酸对糖尿病大鼠冠状动脉的舒张作用及其机制 被引量:1
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作者 陈恒建 夏大云 +7 位作者 钱玲玲 孙曼青 汤徐 吴莹 季圆 王湘芸 王如兴 《中国心脏起搏与心电生理杂志》 2017年第5期443-447,共5页
[摘要]目的探讨不同浓度二十碳五烯酸(EPA)对糖尿病大鼠冠状动脉的舒张作用及其机制。方法40只SD大鼠随机分为正常组和糖尿病组,分离冠状动脉。采用微血管张力测定技术评估不同浓度(0.1、1、3、10、30、100μmol/L)EPA对正常和... [摘要]目的探讨不同浓度二十碳五烯酸(EPA)对糖尿病大鼠冠状动脉的舒张作用及其机制。方法40只SD大鼠随机分为正常组和糖尿病组,分离冠状动脉。采用微血管张力测定技术评估不同浓度(0.1、1、3、10、30、100μmol/L)EPA对正常和糖尿病大鼠冠状动脉的舒张作用并观察孵育(100nmol/L)大电导钙激活钾通道(BK通道)特异性阻滞剂伊比蝎毒素(IBTX)后血管张力的变化;酶消化法分离正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞并采用单通道膜片钳技术记录灌流不同浓度(0、10、30、100、300、1000pmol/L)EPA时BK通道开放概率的变化;采用蛋白印迹技术测定正常和糖尿病大鼠冠状动脉BK通道亚单位蛋白表达。结果EPA对正常组和糖尿病组大鼠冠状动脉舒张的比例随浓度升高而增加,孵育IBTX后舒张作用明显减弱;EPA对正常组和糖尿病组大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道的激活随浓度升高而增强,且与正常组比较,EPA对糖尿病组大鼠冠状动脉的舒张作用及BK通道的激活作用较弱。两组大鼠冠状动脉BK通道蛋白a亚单位表达无差异,但糖尿病大鼠冠状动脉BK通道蛋白8l亚单位表达明显低于正常组(O.4247±0.0362VS0.8923±0.0535,n=6,P〈0.05)。结论EPA对糖尿病冠状动脉具有舒张作用,其机制与激活BK通道有关,糖尿病时BK通道G1亚单位表达减少,EPA对BK通道的激活作用减弱。 展开更多
关键词 心血管病学 二十碳五烯酸 糖尿病 冠状动脉 大电导钙激活钾通道 血管张力 膜片钳 蛋白印迹法
n-3多不饱和脂肪酸对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的激活作用及其机制
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作者 汤徐 季圆 +8 位作者 钱玲玲 孙曼青 王湘芸 吴莹 夏大云 王文 柴强 王如兴 《中华心律失常学杂志》 2016年第2期154-159,共6页
目的探讨n-3多不饱和脂肪酸(n-3PUFA)对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)激活作用及其机制。方法酶消化法分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞,采用膜内向外型单通道膜片钳实验技术分别记录不同浓度二十碳五烯酸... 目的探讨n-3多不饱和脂肪酸(n-3PUFA)对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)激活作用及其机制。方法酶消化法分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞,采用膜内向外型单通道膜片钳实验技术分别记录不同浓度二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)灌流后BK通道开放概率(NP0)。采用Western Blot和qRT-PCR分别测定未灌胃组和低、高剂量n-3 PUFA灌胃组大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道α亚单位和β1亚单位基因及蛋白表达。结果在电极外液钙离子浓度为1μmoVL和刺激电压60mV条件下,EPA浓度为0、10、30、100、300和1000pmo/L时,BK通道NP0分别为0.0616±0.0938、0.1090±0.0957.0.1303±0.0964、0.2250±0.1804、0.3803±0.2472和0.4080±0.2705,呈浓度依赖性增加(P〈0.05,n=4);而DHA浓度为0、0.01、0.1和1μmol/L时,BK通道NP0分别为0.1200±0.0086、0.1190±0.0734、0.1250±0.0921和0.2890±0.0616,NP。无明显增加(P〉0.05);继续增加DHA的浓度,当DHA浓度为3、5、7.5和10μmol/L时,BK通道NP。分别为0.6326±0.0478、1.0980±0.0643、1.1587±0.0676和1.1640±0.0926呈浓度依赖性增加(P〈0.05,n=4)。BK通道仪亚单位蛋白表达分别为0.7929±0.1794、0.7760±0.0599和0.7905±0.0596(P〉0.05,n=24),β1亚单位蛋白表达分别为0.8971±0.2976、1.1407±0.1516和1.2392±0.2337(P〉0.05,n=24)。未灌胃组和低、高剂量n-3PUFA灌胃组大鼠冠状动脉平滑肌细胞上BK通道α亚单位基因表达分别为0.6403±0.2470、0.6301±0.2290和0.9217±0.0907(P〉0.05,n=24),B1亚单位基因表达分别为0.8531±0.3687、0.9919±0.2250和1.0865±0.3632(P〉0.05,n=24)。结论n-3PUFA并非通过影响BK通道亚单位表达增加BK通道激活,而是通过与BK通道作用后直接激活,从而扩张冠状动脉。 展开更多
关键词 N-3多不饱和脂肪酸 冠状动脉 大电导钙激活钾通道 单通道 膜片钳
正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞钾离子通道的组成及二十二碳六烯酸的激活作用 被引量:4
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作者 钱玲玲 王如兴 +8 位作者 孙曼青 夏大云 汤徐 季圆 吴莹 刘晓宇 柴强 陆彤 《中华心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期600-604,共5页
目的探讨正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞钾离子通道的组成及二十二碳六烯酸(DHA)的激活作用。方法采用酶消化法急性分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞,以全细胞膜片钳技术记录灌流不同钾离子通道阻滞剂后钾离子通道电流的变化,以及DHA灌... 目的探讨正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞钾离子通道的组成及二十二碳六烯酸(DHA)的激活作用。方法采用酶消化法急性分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞,以全细胞膜片钳技术记录灌流不同钾离子通道阻滞剂后钾离子通道电流的变化,以及DHA灌流后钾离子通道电流变化。结果未加阻滞剂时,5μmol/LDHA灌流后钾离子通道电流明显增加,在刺激电压为100mV时,DHA灌流前后的电流密度分别为(52.80±6.68)和(110.09±13.39)pA/pF(P〈0.05)。在非特异性钾离子通道阻滞剂四乙胺10mmol/L作用下,DHA灌流不能激活钾离子通道。与未灌流时基础状态比较,在大电导钙激活钾离子通道特异性阻滞剂ibritoxin100nmol/L、中电导钙激活钾离子通道阻滞剂TRAM-34200nmol/L、小电导钙激活钾离子通道阻滞剂apamin1μmol/L、电压依赖性钾离子通道阻滞剂4-aminopyridine5mmol/L和ATP依赖性钾离子通道阻滞剂glyburide10μmlol/L作用下,钾离子通道电流密度分别减少47.6%、12.4%、13.6%、41.5%和0.1%,再同时灌流DHA后钾离子通道电流密度分别增加32.4%、124.2%、108.5%、149.5%和144.7%。结论大电导钙激活钾离子通道与电压依赖性钾离子通道为正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞上分布的主要的钾离子通道。DHA可激活冠状动脉平滑肌细胞钾离子通道,其中主要为大电导钙激活钾离子通道,这可能是DHA扩张冠状动脉、保护心血管系统的机制之一。 展开更多
关键词 冠状血管 肌细胞 平滑肌 钾通道 二十二碳六烯酸类 膜片钳术
二十二碳六烯酸通过磷脂酶C-三磷酸肌醇-钙离子途径激活正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道 被引量:2
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作者 孙曼青 钱玲玲 +9 位作者 吴莹 汤徐 季圆 王湘芸 夏大云 王文 柴强 陆彤 王如兴 《中华心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期530-535,共6页
目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)激活正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)的机制。方法采用酶消化法急性分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞;全细胞膜片钳实验技术记录正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流;膜内向... 目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)激活正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)的机制。方法采用酶消化法急性分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞;全细胞膜片钳实验技术记录正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流;膜内向外型单通道膜片钳实验技术记录不同钙离子浓度条件下BK通道电流,并计算开放概率(NP1);钙离子成像技术测定不同浓度DHA作用后及分别采用磷脂酶(CPLC)受体抑制剂和三磷酸肌醇(IR)受体抑制剂预孵育冠状动脉平滑肌细胞后细胞内钙离子浓度变化。结果1μmol/LDHA可激活BK通道;在刺激电位60mV,电极外液钙离子浓度为0、0.01、0.1、1、3、10、50和100μmol/L条件下,BK通道NP。分别为0.0027±0.0004、0.0060±0.0014、0.0972±0.0106、0.1379±0.0329、0.4687±0.1637、2.0971±0.3104和3.1204±0.2427(P〈0.05,n=4)。未加DHA时,细胞内钙离子浓度荧光信号比值(R值)为0.51±0.01;加入0.001和0.01μmol/LDHA后,R值分别为0.53±0.02和0.55±0.01,与未加DHA相比差异无统计学意义(P〉0.05,n/〉5);当加入的DHA浓度为0.1、0.3、1、3、5和10μmol/L时,其R值分别为0.64±0.01、0.65±0.01、0.70±0.01、0.69±0.01、0.68±0.01和0.67±0.02,ECEn为(0.04±0.02)μmol/L,与未加DHA比较,差异有统计学意义(P〈0.05,nI〉4)。分别采用PLC受体抑制剂U73122和IR受体抑制剂2-APB预孵育冠状动脉平滑肌细胞,测定加入0.1μmol/LDHA后R值分别为0.52±0.01和0.49±0.02,低于未加抑制剂的R值(0.64±0.01,P〈0.05,n≥4)。结论DHA可通过PLC—IP,Ca^2+途径增加正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞内钙离子浓度激活BK通道,从而扩张血管,对心血管系统有一定的保护作用。 展开更多
关键词 冠状血管 肌细胞 平滑肌 二十二碳六烯酸类 大电导钙激活钾通道
二十二碳六烯酸对糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道开放概率的影响 被引量:1
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作者 季圆 王如兴 +8 位作者 钱玲玲 吴莹 王萌 徐凤 王湘芸 汤徐 孙曼青 李肖蓉 《中华糖尿病杂志》 CAS CSCD 2015年第8期513-517,共5页
目的:探讨二十二碳六烯酸(DHA)对糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)开放概率(NP0)的影响。方法选取体重(200±20)g,年龄6-8周的雄性SD大鼠20只为研究对象,采用随机数字表法分为糖尿病组(10只)... 目的:探讨二十二碳六烯酸(DHA)对糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)开放概率(NP0)的影响。方法选取体重(200±20)g,年龄6-8周的雄性SD大鼠20只为研究对象,采用随机数字表法分为糖尿病组(10只)和正常对照组(10只)。糖尿病组采用链脲霉素腹腔内注射,2周后测定大鼠血糖浓度,如血糖浓度低于300 mg/dl,则用等剂量链脲霉素再次腹腔内注射,当血糖浓度持续8周高于300 mg/dl视为造模成功。正常对照组大鼠腹腔内注射生理盐水。酶消化法急性分离正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞,单通道膜片钳实验技术记录正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流并比较不同浓度DHA作用下正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道NP0。两两比较采用t检验,组间比较采用单因素方差分析。结果当刺激电压为0、20、40、60、80、100、120 mV时,随着刺激电压增加,正常对照组和糖尿病组BK通道NP0均增加(F=15.28、9.72,均P〈0.05)。与正常对照组相比,当刺激电压〉60 mV后,糖尿病组BK通道NP0明显降低(分别为0.56±0.05比0.22±0.02,1.11±0.09比0.33±0.09,2.85±0.10比0.86±0.12,3.05±0.15比1.01±0.13, t=3.62、4.27、6.32、8.14,均P〈0.05)。在刺激电压60 mV和钙离子浓度1mmol/L条件下,当电极外液DHA浓度为0、0.01、0.10、0.30、1.00mmol/L时,正常对照组和糖尿病组BK通道NP0均无明显增加(F=3.01、2.61,均P〉0.05);继续增加DHA的浓度,当DHA浓度为3、5、10mmol/L时,对照组BK通道NP0呈浓度依赖性增加,糖尿病组NP0呈浓度依赖性增加(F=10.21、7.32,均P〈0.05)。在DHA浓度相同情况下,糖尿病组BK通道NP0均低于对照组(t=2.71-8.54,均P〈0.05)。结论糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道功能受损,但DHA仍可激活BK通道,增加NP0,从而扩张冠状动脉而� 展开更多
关键词 二十二碳六烯酸 糖尿病 冠状动脉 大电导钙离子激活钾通道 膜片钳
腺苷三磷酸对冠状动脉平滑肌细胞BK通道的激活作用及其机制 被引量:2
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作者 王湘芸 吴莹 +7 位作者 钱玲玲 季圆 徐凤 王萌 汤徐 姚勇 王如兴 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第13期1024-1028,共5页
目的探讨腺苷三磷酸(ATP)对冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)的激活作用及其机制。方法采用酶消化法急性分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞;膜片钳实验技术记录全细胞状态下BK通道电流;钙离子成像技术记录ATP对细胞内... 目的探讨腺苷三磷酸(ATP)对冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)的激活作用及其机制。方法采用酶消化法急性分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞;膜片钳实验技术记录全细胞状态下BK通道电流;钙离子成像技术记录ATP对细胞内钙离子浓度影响。结果膜片钳实验结果显示,加入1mmol/LATP前后,BK通道电流密度分别为(137±13)pA/pF和(179±15)pA/pF(P〈0.05);钙离子成像结果显示,加入0.5mmol/LATP前后,细胞内钙离子浓度荧光信号强度比值分别为2.46±0.08和4.04±0.21(P〈0.05)。分别采用嘌呤(P2Y1)受体阻滞剂MRS2179、磷脂酶C(PLC)受体阻滞剂1373122和三磷酸肌醇(IP3)受体阻滞剂2-APB孵育冠状动脉平滑肌细胞,再测定加入0.5mmol/LATP后3组细胞内钙离子浓度荧光信号强度比值,分别是2.70±0.06、2.65±0.12和2.69±0.13,与未加入3种阻滞剂相比,钙离子浓度荧光信号强度比值均明显降低(P〈0.05)。结论ATP可以通过P2Y1.PLC—IP3通路升高细胞内钙离子浓度,从而激活BK通道。 展开更多
关键词 腺苷三磷酸 大电导钙激活钾通道 钙离子 冠状动脉 平滑肌细胞
MiR-200b对1型糖尿病大鼠胸主动脉炎症基因表达的影响
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作者 徐凤 钱玲玲 +6 位作者 汤徐 王萌 吴莹 孙曼青 柴强 王如兴 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期977-981,共5页
目的 探讨1型糖尿病大鼠胸主动脉miR-200b的变化及对炎症基因表达的影响.方法 研究分为正常对照组和糖尿病组.通过对SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素构建1型糖尿病大鼠动物模型,采用qRT-PCR和Western印迹方法测定1型糖尿病大鼠胸主动脉miR-200... 目的 探讨1型糖尿病大鼠胸主动脉miR-200b的变化及对炎症基因表达的影响.方法 研究分为正常对照组和糖尿病组.通过对SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素构建1型糖尿病大鼠动物模型,采用qRT-PCR和Western印迹方法测定1型糖尿病大鼠胸主动脉miR-200b、炎症基因环氧化酶-2(COX-2)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)及miR-200b靶基因转录抑制因子Zeb1的表达.结果 qRT-PCR显示糖尿病组大鼠胸主动脉miR-200b的表达较正常对照组明显上调(4.587±1.261对1.728±0.372,P<0.05);炎症介质COX-2、MCP-1、TNF-α和IL-6的表达量显著升高(3.808±1.294对0.864±0.093, P<0.05;3.203 ±0.402对1.485 ±0.433, P<0.01;2.288 ±0.480对0.784±0.089,P<0.01;6.334±2.683对0.981 ±0.176,P<0.05);Western印迹显示正常对照组和糖尿病组Zeb1表达水平分别为0.496±0.031和0.264±0.012 (P<0.01),糖尿病组较正常对照组下降46.7%.结论 1型糖尿病时大鼠胸主动脉中miR-200b上调,并抑制靶标Zeb1表达,进而增加调控通路下游相关炎症基因的表达,这可能是糖尿病血管并发症发生发展的重要机制之一. 展开更多
关键词 MiR-200b 糖尿病 1型 胸主动脉 炎症基因
聚乙烯亚胺修饰的白蛋白微泡转染CHO细胞实验研究 被引量:1
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作者 王如兴 +4 位作者 张学光 张燕 王明元 郭冬萍 李肖蓉 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期626-631,共6页
目的:制作非病毒基因转移载体,提高白蛋白微泡转基因效率。方法:采用人体白蛋白、聚乙烯亚胺(PEI)和葡萄糖按一定的质量比混合后用超声振动仪声振20s制得PEI修饰的白蛋白微泡(PAMB),通过流式细胞仪检测绿色荧光蛋白(GFP)阳性细... 目的:制作非病毒基因转移载体,提高白蛋白微泡转基因效率。方法:采用人体白蛋白、聚乙烯亚胺(PEI)和葡萄糖按一定的质量比混合后用超声振动仪声振20s制得PEI修饰的白蛋白微泡(PAMB),通过流式细胞仪检测绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞比率以比较PEI、PEI+白蛋白、PAMB和Lipofectamine2000的基因转移效率。结果:单纯PEI组、白蛋白+PEI组、PAMB组和Lipofectamine2000组的平均转基因效率分别为(13.75±4.88)%、(5.20±1.15)%、(49.17±6.75)%和(53.72±5.69)%。PAMB组明显高于单纯PEI组,而与商品化Lipofectamine2000组没有统计学差异。结论:经PEI修饰后的白蛋白微泡转基因效率明显提高,是一种有效的体外基因转移载体,本研究也可能为在体基因转移提供新的方法。 展开更多
关键词 PEI 白蛋白微泡 基因转移
超声介导不同种类微泡破裂对基因转移的影响
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作者 王如兴 李肖蓉 《中华超声影像学杂志》 CSCD 北大核心 2009年第9期817-819,共3页
基因治疗目前在治疗基因缺陷疾病、肿瘤、炎症以及其他临床疾病方面显示出巨大潜力,但作为一种有效的方法,其成功与否很大程度上取决于它所使用的载体是否能以最小的毒性、有效地、选择性地将靶基因转移到靶细胞或靶组织。虽然病毒载... 基因治疗目前在治疗基因缺陷疾病、肿瘤、炎症以及其他临床疾病方面显示出巨大潜力,但作为一种有效的方法,其成功与否很大程度上取决于它所使用的载体是否能以最小的毒性、有效地、选择性地将靶基因转移到靶细胞或靶组织。虽然病毒载体具有转染率高、能稳定持久地表达所携带的外源目的基因等优点,但病毒的免疫原性和潜在致突变性限制了其安全使用。 展开更多
关键词 基因转移 超声介导 破裂 微泡 同种 基因缺陷疾病 病毒载体 基因治疗
血红素加氧酶1分子克隆及表达载体的构建 预览
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作者 张燕 王如兴 +5 位作者 李肖蓉 陈永井 杨丽华 王明元 张学光 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期 1255-1258,共4页
背景:近年来许多研究发现血红素加氧酶1具有抗炎、抗氧化及抗凋亡等作用,并且在心肌缺血一再灌注损伤等应激反应中有重要的保护作用,从而成为研究热点。目的:克隆大鼠血红素加氧酶1全长基因,并将其于真核表达载体PIRES2一EGFP相连... 背景:近年来许多研究发现血红素加氧酶1具有抗炎、抗氧化及抗凋亡等作用,并且在心肌缺血一再灌注损伤等应激反应中有重要的保护作用,从而成为研究热点。目的:克隆大鼠血红素加氧酶1全长基因,并将其于真核表达载体PIRES2一EGFP相连接,构建血红素加氧酶1的真核表达载体。设计、时间及地点:实验于2008—03/06在苏州大学生物技术研究所完成。材料:成年雄性SD大鼠,由苏州大学动物实验中心提供,用于脾脏细胞总RNA的提取;克隆载体PMD18-T购自Takara公司;表达载体PIRES2-EGFP由苏州大学生物技术研究所保存。方法:分离大鼠脾脏获取脾脏细胞,Trizol法提取脾脏细胞的总RNA,经反转录聚合酶链反应扩增获得血红素加氧酶1基因,将扩增出来的产物与克隆载体PMD18-T连接,转化TOP10感受态细菌,挑取阳性克隆经PCR及酶切鉴定后测序确证。测序正确后抽提质粒作为模板进行PCR,Sal—I和BamH—I同时双酶切PCR产物和载体PIRES2-EGFP,再在T4DNA连接酶的作用下进行连接,构建其真核表达载体。主要观察指标:血红素加氧酶1基因的克隆和DNA测序结果证实序列是否正确;PIRES2-EGFP/血红素加氧酶1真核表达载体的构建以及测序证实目的基因成功插入载体。结果:①实验完成了大鼠血红素加氧酶1基因的克隆,所获得的序列与GeneBank中收录的大鼠血红素加氧酶1序列完全一致。②构建真核表达载体PIRES2-EGFP/血红素加氧酶1,测序正确说明血红素加氧酶1基因成功插入表达载体PIRES2-EGFP中。结论:实验成功克隆了大鼠血红素加氧酶1基因全长,并构建了其真核表达载体。 展开更多
关键词 血红素加氧酶1 克隆 表达载体 构建
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