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一种大肠杆菌快速连续CRISPR基因组编辑的新策略
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作者 刘姣 刘伟 +1 位作者 陶勇 马延和 《微生物学通报》 CSCD 北大核心 2018年第8期1621-1631,共11页
【背景】通过CRISPR结合λ-Red同源重组技术进行染色体编辑是大肠杆菌遗传改造的重要手段。虽然目前已经有多个以CRISPR为基础的大肠杆菌基因组编辑策略,但这些方法往往涉及单独质粒消除、多片段组装等过程,存在效率低、操作繁琐、耗时... 【背景】通过CRISPR结合λ-Red同源重组技术进行染色体编辑是大肠杆菌遗传改造的重要手段。虽然目前已经有多个以CRISPR为基础的大肠杆菌基因组编辑策略,但这些方法往往涉及单独质粒消除、多片段组装等过程,存在效率低、操作繁琐、耗时长等问题。【目的】建立一种基于不同温度敏感程度的多种质粒协同使用的大肠杆菌快速、连续、高效的CRISPR基因组编辑方法,提高CRISPR在大肠杆菌基因编辑过程中的效率。【方法】将传统CRISPR方法中使用的pTarget质粒改造为RK2ts型温敏型质粒,并采用pTW-A/S两种抗性标记质粒交替使用的方法消除假阳性,实现质粒消除与下一步基因组编辑同步进行。【结果】在相同温度下RK2ts型质粒先于pSC101ts型质粒发生丢失,从而能够选择性缺失RK2ts型质粒pTW-A/S。同时实现pTW-A/S质粒的消除和下一轮基因整合过程中质粒与打靶片段的转入。利用该方法基因敲除/整合效率高达100%。通过对菌株BP01基因Bspan D与asp A进行高效连续整合,构建得到菌株BP03,成功提升产物β-丙氨酸的产量。【结论】建立起一种新的高效、方便、灵活的CRISPR/Cas9介导的大肠杆菌基因组连续编辑策略。通过这种不同温度敏感程度的多种质粒协同使用方法,一方面解决了传统方法中质粒消除繁琐等问题,另一方面也避免了大质粒多片段连接等步骤,并极大地缩短了实验周期,为代谢工程菌株改造提供有力工具。 展开更多
关键词 CRISPR 大肠杆菌 基因组编辑 温度敏感型质粒
产类胡萝卜素菌株的筛选鉴定及功能基因分析 预览
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作者 彭龙云 谢能中 +1 位作者 蒙健宗 刘伟 《酿酒》 CAS 2018年第5期69-72,共4页
湖南酃酒是一类传统地方工艺酿造的米酒,酿造过程中独特的微生物类群对酃酒的风味及功能物质含量具有重要影响,对其中的微生物进行鉴定、分离,并筛选具有特定功能的菌株,有助于研究酃酒的酿造工艺、口味及功能,并获得有潜在应用价值的... 湖南酃酒是一类传统地方工艺酿造的米酒,酿造过程中独特的微生物类群对酃酒的风味及功能物质含量具有重要影响,对其中的微生物进行鉴定、分离,并筛选具有特定功能的菌株,有助于研究酃酒的酿造工艺、口味及功能,并获得有潜在应用价值的微生物。研究从湖南地方酃酒酒糟中分离一株产色素的微生物,对菌株进行常规形态和生化特征分析;利用16SrDNA序列分析对该菌株进行序列对比鉴定,将其鉴定为泛菌属Pantoea sp,命名为FL03。确认该菌能够产多种类胡萝卜素物质,其中包含有虾青素合成基因crtZ及crtW。将FL03的虾青素合成基因crtZ及crtW克隆到重组载体上,通过在已经含有虾青素前体基因簇的底盘大肠杆菌中进行表达,成功异源合成虾青素产物,产量可达3.72mg/g(DCW)。这一工作为研究酃酒的发酵工艺、分析相关微生物类群的功能及应用价值打下基础。 展开更多
关键词 枸杞 葡萄 发酵 勾兑
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通过番茄红素环化酶的优化构建β-胡萝卜素高产菌株
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作者 金应福 韩莉 +3 位作者 张莎莎 李世忠 刘伟 陶勇 《生物工程学报》 CSCD 北大核心 2017年第11期1814-1826,共13页
目标产物的合成途径往往需要对关键酶的来源、表达水平等因素进行系统性优化才能实现代谢通量的最大化。β-胡萝卜素是一类具有重要应用价值的萜类化合物,其中番茄红素环化酶(Lycopenecyclase,CrtY)是β-胡萝卜素合成途径中的关键... 目标产物的合成途径往往需要对关键酶的来源、表达水平等因素进行系统性优化才能实现代谢通量的最大化。β-胡萝卜素是一类具有重要应用价值的萜类化合物,其中番茄红素环化酶(Lycopenecyclase,CrtY)是β-胡萝卜素合成途径中的关键酶,能够催化FAD依赖的环化反应将番茄红素转化合成β-胡萝卜素。本研究通过对CrtY的系统优化提高B.胡萝卜素的合成水平,并确定CrtY的表达对代谢通路的影响。在大肠杆菌中以番茄红素合成模块为基础,通过引入番茄红素环化酶基因crtY构建了β-胡萝卜素合成模块。并进一步利用寡聚接头介导的DNA组装方法(Oligo-linker mediated assembly method,OLMA)引入一系列不同强度的人工设计的核糖体结合位点fRibosome-binding site,RBS),对CrtY的表达强度、基因来源等因素进行高通量的优化。通过OLMA文库构建和平板筛选,获得了5株高产岱一胡萝卜素的工程菌株。在摇瓶中,5株工程菌株的仁一胡萝卜素产量可达15.79-18.90mg/gDCW(Drycellweight),比优化前提高了65%。进一步选取了其中的CPl2菌株,在5L发酵罐上,利用高密度培养技术验证工程菌株合成β-胡萝卜素的能力。最终p.胡萝卜素产量可达1.9g/L。RBS强度分析及代谢中间体分析表明,适当地降低CrtY表达强度能够有利于β-胡萝卜素模块相关基因之间协同发挥作用。以上结果为B.胡萝】、素合成途径的优化规律提供了理论指导。 展开更多
关键词 番茄红素环化酶(CrtY) 大肠杆菌 β-胡萝卜紊 寡聚接头介导的DNA组装(OLMA) 代谢工程
重组产番茄红素大肠杆菌工程菌株中异戊烯异构酶(IDI)基因的筛选 被引量:1
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作者 韩莉 张莎莎 +4 位作者 王博军 刘京国 刘伟 王艳萍 陶勇 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第13期137-142,共6页
番茄红素是一类在食品、医药等领域具有广泛应用价值的萜类化合物。异戊烯基焦磷酸异构酶(isopentenyl diphosphate isomerase,IDI)是番茄红素合成途径中的关键酶,也是代谢工程改造的主要靶点。本研究为了系统比较不同来源IDI对重组... 番茄红素是一类在食品、医药等领域具有广泛应用价值的萜类化合物。异戊烯基焦磷酸异构酶(isopentenyl diphosphate isomerase,IDI)是番茄红素合成途径中的关键酶,也是代谢工程改造的主要靶点。本研究为了系统比较不同来源IDI对重组大肠杆菌番茄红素(Lycopene)产量的影响,分别克隆了原核微生物、真核微生物、植物、古菌等多种来源的I型及II型异戊烯基焦磷酸异构酶(IDI)基因,在大肠杆菌E.coli中异源表达,在加强自身2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸(MEP)代谢途径的背景下,通过优化多靶点组合及转化时间提高番茄红素的合成水平。结果表明酿酒酵母来源的I型IDI(Sc IDI)及枯草芽孢杆菌来源的II型IDI(Bs IDI)在经优化的背景下可以获得最高的番茄红素产量,产量分别达到9.96 mg/g DCW,8.78 mg/g DCW,番茄红素积累在转化8 h达到最高,最高能达到10.29 mg/g DCW。本研究最终确定了不同类型IDI发挥功能的条件,为后续番茄红素以及萜类化合物的代谢途径的改造提供依据。 展开更多
关键词 异戊烯基焦磷酸异构酶(IDI) 大肠杆菌 番茄红素 代谢工程 MEP途径
提高大肠杆菌通过MVA途径合成异戊二烯 被引量:3
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作者 冯凡 许杨 +2 位作者 陶勇 刘伟 林白雪 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1073-1081,共9页
异戊二烯是橡胶合成的重要前体物质。为了提高菌株的异戊二烯产量,本实验室在研究中构建了一株异戊二烯产气的菌株BW-01,基于蛋白质预算理论的指导,理性设计通过改变质粒拷贝数、增加稀有密码子等合成生物学手段调控关键限速酶编码基因... 异戊二烯是橡胶合成的重要前体物质。为了提高菌株的异戊二烯产量,本实验室在研究中构建了一株异戊二烯产气的菌株BW-01,基于蛋白质预算理论的指导,理性设计通过改变质粒拷贝数、增加稀有密码子等合成生物学手段调控关键限速酶编码基因表达,从而提高大肠杆菌外源MVA代谢途径的异戊二烯产量。摇瓶发酵实验中我们构建的新产气菌株BW-07比原有的产气菌株BW-01的产量提高了73%,达到了761.1 mg/L。为后续菌株改造及进行发酵罐实验奠定了基础。 展开更多
关键词 蛋白质预算 MVA途径 异戊二烯 大肠杆菌
在大肠杆菌中利用SCLM系统进行高效率λ-Red基因敲除/整合的新策略 被引量:1
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作者 王瑶 许杨 +3 位作者 陈楠 徐欣怡 刘伟 陶勇 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期699-711,共13页
【目的】传统采用的λ-Red体系在大肠杆菌染色体上进行基因敲除/整合操作时存在操作繁琐、假阳性率高、多基因连续敲除/整合不稳定等问题。本研究基于上述问题建立一种便于基因构建、高筛选效率(100%)、具有统一技术步骤的λ-Red敲除... 【目的】传统采用的λ-Red体系在大肠杆菌染色体上进行基因敲除/整合操作时存在操作繁琐、假阳性率高、多基因连续敲除/整合不稳定等问题。本研究基于上述问题建立一种便于基因构建、高筛选效率(100%)、具有统一技术步骤的λ-Red敲除/整合系统,为提高基因功能研究和代谢工程改造工作效率奠定基础。【方法】采用新的p SC101衍生复制起始位点消除假阳性;利用高拷贝数质粒和多克隆位点实现快速遗传构建操作;采用Cre/Lox P抗性消除位点便于多基因连续整合。选择一系列初级代谢重要基因靶点进行敲除/整合。【结果】构建了一套新型λ-Red质粒系统(SC101-Cre-Lox P-MCS,SCLM系统)。打靶片段经电转化受体细胞后在双抗性平板上筛选阳性克隆,基因敲除/整合的效率均可以达到100%。【结论】新建立的基因敲除与整合方法提高了基因重组效率,大幅度减少了相关操作的步骤,缩短了研究周期。该方法的建立为基因功能研究和构建新遗传特性的工程菌株提供了有力的工具。 展开更多
关键词 λ-Red重组技术 大肠杆菌 基因敲除与整合 模板质粒 筛选效率
吊罗山青皮林土壤硝化-反硝化作用及其影响因素 预览 被引量:2
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作者 高文栋 钟圣赟 +3 位作者 刘伟 金哲昊 王艺霖 郝清玉 《林业资源管理》 北大核心 2014年第5期69-73,共5页
采用5点取样法对海南岛吊罗山自然保护区内单优青皮林森林土壤进行取样,分析海拔高度、土层深度、季节及土壤理化性质对土壤的硝化-反硝化作用影响因素。结果表明:海拔高度及土层深度对硝化-反硝化作用影响不同;季节对其有显著影响(p... 采用5点取样法对海南岛吊罗山自然保护区内单优青皮林森林土壤进行取样,分析海拔高度、土层深度、季节及土壤理化性质对土壤的硝化-反硝化作用影响因素。结果表明:海拔高度及土层深度对硝化-反硝化作用影响不同;季节对其有显著影响(p〈0.05),雨季土壤的硝化-反硝化作用强度是旱季的几十至上百倍;土壤理化性质对土壤硝化作用没有影响(p〉0.05),但全磷、全钾、有效磷、速效钾和含水率均与反硝化作用强度呈显著负相关(p〈0.05)。以上结果说明,在研究区青皮林土壤氮素转化过程中,季节是重要影响因素,土壤部分理化性质是反硝化作用的重要影响因素。 展开更多
关键词 硝化-反硝化作用 影响因素 青皮林 吊罗山
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两种UDP-葡萄糖脱氢酶对透明质酸生物转化的影响
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作者 郭东会 韩剑 +3 位作者 刘伟 傅震洲 朱启忠 陶勇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1691-1700,共10页
分别从大肠杆菌和化脓链球菌中扩增出编码UDP-葡萄糖脱氢酶基因ecohas B和spyhas B,并将其插入T7表达载体p RX2构建重组质粒p RXEB和p RXSB。在大肠杆菌BL21(DE3)中重组表达,并对经镍柱纯化后的UDP-葡萄糖脱氢酶的酶学性质进行分析。... 分别从大肠杆菌和化脓链球菌中扩增出编码UDP-葡萄糖脱氢酶基因ecohas B和spyhas B,并将其插入T7表达载体p RX2构建重组质粒p RXEB和p RXSB。在大肠杆菌BL21(DE3)中重组表达,并对经镍柱纯化后的UDP-葡萄糖脱氢酶的酶学性质进行分析。酶学性质研究表明:spy Has B的最适反应温度是30℃,最适p H 10,最适条件下的比活力是12.2 U/mg;eco Has B的最适反应温度是30℃,最适p H 9,最适条件下的比活力是5.55 U/mg。从多杀巴氏杆菌扩增出的透明质酸合成酶基因pmuhas A分别与ecohas B和spyhas B构建共表达载体p BPAEB和p BPASB。将其转化到大肠杆菌BW25113中,经生物转化生产透明质酸(HA),并对转化条件进行了优化。结果表明:重组菌株进行透明质酸转化时,UDP-葡萄糖脱氢酶酶活力越高,稳定性越好,HA产量越高;转化条件优化后,p BPAEB/BW25113和p BPASB/BW25113在摇瓶中的产量分别是1.52和1.70 g/L,比之前报道的提高了2-3倍。 展开更多
关键词 UDP-葡萄糖脱氢酶 酶学性质 透明质酸 生物转化
应用基因敲除快速构建大肠杆菌突变体改造脂肪酸代谢途径 被引量:7
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作者 曲璟秋 刘翠花 +2 位作者 刘伟 陶勇 朱坤 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期608-614,共7页
【目的】基因敲除技术是研究基因功能的重要手段。我们试图建立一种快速、高效的大肠杆菌基因敲除方法。【方法】利用大肠杆菌(Escherichia coli)BW25113单基因缺失体Keio文库,将经典的Red同源重组技术与P1噬菌体转导技术相结合,对E.c... 【目的】基因敲除技术是研究基因功能的重要手段。我们试图建立一种快速、高效的大肠杆菌基因敲除方法。【方法】利用大肠杆菌(Escherichia coli)BW25113单基因缺失体Keio文库,将经典的Red同源重组技术与P1噬菌体转导技术相结合,对E.coli MG1655脂肪酸代谢基因进行快速敲除。【结果】获得了大肠杆菌β-氧化途径的缺失菌株△fadD、△fadE和△fadD-△fadE;脂肪酸合成途径缺失菌株△fabH、△fabF和△fabH-△fabF。敲除fadD和fadE对生长情况没有影响;敲除fabH后,生长速度明显减慢;敲除fabF对生长几乎没有影响。FadD、FadE及双敲缺失体的脂肪酸含量18.2 mg/L、20.0mg/L和19.2 mg/L,略高于野生型17.5 mg/L;FabH、FabF及双敲缺失体的含量分别为12.6 mg/L、15.2 mg/L和11.2 mg/L,明显低于野生型。【结论】在单基因突变体文库基础上,利用P1噬菌体转导、Red同源重组和抗性基因消除进行基因敲除,简化了构建大肠杆菌单基因和多重突变体的方法。 展开更多
关键词 大肠杆菌 RED同源重组 P1噬菌体 基因敲除 脂肪酸含量
蛋白质预算:合成生物学的成本标尺 被引量:2
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作者 刘伟 陶勇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1123-1132,共10页
合成生物学以创建人工生命体系为目的。实践中人们希望人工生命体系具有更强的生产能力、转化能力、环境适应与监测能力,从而获得更优质的生产方式。生命体系的优化涉及到多层次的调控网络,而根本上还是对细胞中蛋白质的含量、定位、活... 合成生物学以创建人工生命体系为目的。实践中人们希望人工生命体系具有更强的生产能力、转化能力、环境适应与监测能力,从而获得更优质的生产方式。生命体系的优化涉及到多层次的调控网络,而根本上还是对细胞中蛋白质的含量、定位、活性的控制。在蛋白质表达水平上进行控制是合成生物学元件设计、模块组装以及适配性研究最核心的手段。类似于工厂中的成本计算,合成生物学创建的人工生命体系(人工细胞工厂)以蛋白质预算为依据。优化蛋白质预算的研究策略已经成功应用于合成生物学研究实践中。 展开更多
关键词 合成生物学 蛋白质预算 蛋白质重组表达
基于纳米颗粒的铜锌锡硫硒薄膜制备 被引量:1
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作者 魏铭孔 杜清扬 +2 位作者 刘伟 江国顺 朱长飞 《微纳电子技术》 CAS 北大核心 2012年第4期 228-232,共5页
采用热注入法制备了Cu2ZnSnS4(CZTS)纳米颗粒,并形成高分散、稳定的"墨水",采用滴注方法形成CZTS前驱体薄膜。利用X射线衍射(XRD)、拉曼光谱(Raman)、透射电子显微镜(TEM)和紫外-可见光谱(UV-VIS)对CZTS纳米颗粒的晶体结构... 采用热注入法制备了Cu2ZnSnS4(CZTS)纳米颗粒,并形成高分散、稳定的"墨水",采用滴注方法形成CZTS前驱体薄膜。利用X射线衍射(XRD)、拉曼光谱(Raman)、透射电子显微镜(TEM)和紫外-可见光谱(UV-VIS)对CZTS纳米颗粒的晶体结构、表面形貌和带隙进行了表征。Raman数据显示合成的纳米颗粒为纯的CZTS,不存在ZnS和Cu2SnS3等杂相。傅里叶红外光谱(FTIR)和UV-VIS表明合成的CZTS纳米颗粒表面被油胺(OLA)包覆,并且其带隙为1.52 eV。对CZTS前驱体薄膜在硫化氢气氛和固态硒气氛中退火处理,得到铜锌锡硫硒(CZTSSe)薄膜。结果表明,经硫化氢处理后薄膜表面平整但CZTS晶粒并没长大,而经过固态硒处理后得到了结晶质量较好的CZTSSe薄膜。 展开更多
关键词 Cu2ZnSnS4(CZTS) 纳米颗粒 薄膜太阳电池 热注入 油胺(OLA) 墨水
热处理对CuIn(S,Se)2薄膜断面成分均匀性的影响 预览
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作者 谢海兵 刘伟 +3 位作者 江国顺 李欣益 严飞 朱长飞 《化学物理学报》 SCIE CAS CSCD 2012年第4期481-486,I0004共7页
用同时硒硫化共溅射Cu-In预制层的方法制备TCuIn(S,Se)2薄膜.为了了解热处理对CuIn(S,Se)2薄膜断面成分均匀性的影响,对经“一段式”热处理(500℃)和“二段式”热处理(250℃保温然后500℃)的样品进行了研究.XRD测试结果表... 用同时硒硫化共溅射Cu-In预制层的方法制备TCuIn(S,Se)2薄膜.为了了解热处理对CuIn(S,Se)2薄膜断面成分均匀性的影响,对经“一段式”热处理(500℃)和“二段式”热处理(250℃保温然后500℃)的样品进行了研究.XRD测试结果表明,经过“一段式”热处理后的样品XRD(112)峰出现劈裂现象,而经过“二段式”热处理的样品XRD(112)峰比较匀称.GIXRD和EDS测试证明样品经过“二段式”热处理后断面成分均匀性较好.通过XRD和Raman测试对两种热处理下的反应机理进行了研究,阐述了两种热处理对CuIn(S,Se)2薄膜断面成分均匀性的影响的内在原因. 展开更多
关键词 热处理 断面成分均匀性 CuIn(S Se)2薄膜
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嗜热脱氮土壤芽孢杆菌β-葡萄糖苷酶的克隆与重组表达及其酶学性质研究 被引量:1
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作者 胡开蕾 韩剑 +2 位作者 刘伟 王艳萍 陶勇 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期891-900,共10页
【目的】克隆嗜热脱氮土壤芽孢杆菌中的β-葡萄糖苷酶基因bglB,在E.coli中异源表达,纯化并研究其酶学性质。【方法】利用PCR技术从嗜热脱氮土壤芽孢杆菌的基因组DNA中克隆得到bglB基因,将该基因克隆到表达载体pGEX-2TL上并在大肠杆菌BL2... 【目的】克隆嗜热脱氮土壤芽孢杆菌中的β-葡萄糖苷酶基因bglB,在E.coli中异源表达,纯化并研究其酶学性质。【方法】利用PCR技术从嗜热脱氮土壤芽孢杆菌的基因组DNA中克隆得到bglB基因,将该基因克隆到表达载体pGEX-2TL上并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,对纯化后的β-葡萄糖苷酶的酶学性质及寡聚状态进行分析。【结果】重组表达的β-葡萄糖苷酶最适温度为65°C,最适pH为7.0,能在pH 5-10、60°C下稳定存在4 h,并能在较高的离子强度(880 mmol/L K+)下发挥其功能。Al3+离子对其有强烈的激活作用,Co2+有一定的抑制作用。最适反应条件下该酶比活力为0.043 IU/mg。该酶具有多种寡聚体形式,这些寡聚体均有β-葡萄糖苷酶活性。【结论】获得一个耐热耐盐的中性β-葡萄糖苷酶,为进一步研究β-葡萄糖苷酶的催化作用机理,提高其热稳定性提供一定的帮助。 展开更多
关键词 Β-葡萄糖苷酶 嗜热脱氮土壤芽孢杆菌 重组表达 耐热 耐盐
基于硝酸盐为前驱体的溶胶凝胶法制备CuInSe_2薄膜 预览 被引量:2
14
作者 陈祥洲 陈桂林 +1 位作者 刘伟 朱长飞 《中国科学技术大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期 408-413,共6页
采用低成本的无机盐为前驱体,通过溶胶凝胶法制备了高质量的黄铜矿结构CuInSe2太阳能电池光吸收层薄膜.先将制备得到的溶胶通过旋涂甩胶的方法成膜,再先后置于氢气中还原和在硒蒸气中进行硒化处理,即可得到所需薄膜.通过XRD,XRF,SEM和Ra... 采用低成本的无机盐为前驱体,通过溶胶凝胶法制备了高质量的黄铜矿结构CuInSe2太阳能电池光吸收层薄膜.先将制备得到的溶胶通过旋涂甩胶的方法成膜,再先后置于氢气中还原和在硒蒸气中进行硒化处理,即可得到所需薄膜.通过XRD,XRF,SEM和Raman散射等对材料的结构和形貌进行表征.结果表明:采用这种简单的方法所制备的薄膜除了具备平整度好、结晶度高和致密性好等优点外,Raman散射还表明薄膜表面不存在Cu2-xSe等杂相,上述优点非常有利于后续高质量的薄膜太阳能电池的制作.最后,讨论了CuInSe2薄膜中分层现象的产生以及形成机理。 展开更多
关键词 溶胶凝胶 硝酸盐 铜铟硒 硒化
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化学浴沉积法制备CdS多晶薄膜 预览
15
作者 何星伟 刘伟 +1 位作者 朱长飞 江国顺 《化学物理学报》 SCIE CAS CSCD 2011年第4期471-476,I0004共7页
利用化学浴沉积法制备适合于铜铟镓硒薄膜太阳能电池缓冲层材料的CdS多晶薄膜,研究了在不同温度和不同时间下沉积薄膜的性质.薄膜生长开始由ion.by—ion机制控制,随着时间的进行,cluster.by-cluster机制占据主导.薄膜的生长速度... 利用化学浴沉积法制备适合于铜铟镓硒薄膜太阳能电池缓冲层材料的CdS多晶薄膜,研究了在不同温度和不同时间下沉积薄膜的性质.薄膜生长开始由ion.by—ion机制控制,随着时间的进行,cluster.by-cluster机制占据主导.薄膜的生长速度随着沉积温度的升高而快速增加,直到达到饱和厚度.并且饱和厚度随温度升高而相应降低.SEM表明随沉积时间增加以及温度升高,薄膜表面形貌从多孔到粗糙的不均匀转变.XRD结果显示,薄膜由立方和六方两相结构组成,控制沉积时间对薄膜的主要晶相结构很关键.所有温度下沉积的CdS薄膜厚度接近100nm,透光率都达到65%以上,温度升高,吸收边存在“红移”现象.结合薄膜的两种生长机制对带隙的变化也作了简要的分析. 展开更多
关键词 化学浴沉积 CdS多晶薄膜 铜铟镓硒太阳能电池 半导体材料直接带隙
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碳纳米管阵列辐射的实验研究 预览
16
作者 朱旗 况泽灵 +2 位作者 刘伟 芦伟 姜开利 《电波科学学报》 EI CSCD 北大核心 2010年第2期216-220,共5页
为了对碳纳米管阵列的辐射特性进行实验研究,通过采用在微带天线上加载碳纳米管阵列的方法对碳纳米管阵列进行馈电,并比较了两种微带天线加载碳纳米管阵列辐射方向图的变化,结果发现加载前后天线的S11以及辐射方向图均有明显变化,说明... 为了对碳纳米管阵列的辐射特性进行实验研究,通过采用在微带天线上加载碳纳米管阵列的方法对碳纳米管阵列进行馈电,并比较了两种微带天线加载碳纳米管阵列辐射方向图的变化,结果发现加载前后天线的S11以及辐射方向图均有明显变化,说明碳纳米管阵列能够显著改变天线的辐射特性,与理论预测相符。最后针对实验现象做了一些定性的解释。 展开更多
关键词 碳纳米管 阵列天线
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耐碱性木聚糖酶基因在巨大芽孢杆菌中的表达及其酶学性质 被引量:4
17
作者 包怡红 刘伟 +1 位作者 何永志 董志杨 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1353-1359,共7页
【目的】从耐碱性木聚糖酶高产短小芽孢杆菌中克隆得到带有自身启动子的木聚糖酶基因,将其在巨大芽孢杆菌中进行表达,并对表达产物进行性质分析。【方法】将克隆得到的木聚糖酶基因xynA以及带有自身启动子序列的结构基因,构建在芽孢杆... 【目的】从耐碱性木聚糖酶高产短小芽孢杆菌中克隆得到带有自身启动子的木聚糖酶基因,将其在巨大芽孢杆菌中进行表达,并对表达产物进行性质分析。【方法】将克隆得到的木聚糖酶基因xynA以及带有自身启动子序列的结构基因,构建在芽孢杆菌表达载体pWH1520和改造后的载体pWG03中,得到重组质粒pWTEJX和pWGXYN,分别转化到巨大芽孢杆菌BM70中,获得重组巨大芽孢杆菌BMJXH9和BMGpp12;经过诱导产酶培养,均得到分泌表达。【结论】重组巨大芽孢杆菌BMGpp12比BMJXH9产酶活力提高了3倍,重组表达的木聚糖酶的酶学性质研究表明其仍具有很好的耐碱性,这为木聚糖酶的进一步应用研究提供了重要的理论依据。 展开更多
关键词 木聚糖酶 巨大芽孢杆菌 芽孢杆菌表达系统
耐碱性木聚糖酶在短小芽孢杆菌中高效分泌表达的研究 被引量:5
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作者 包怡红 刘伟 董志扬 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 2008年第5期37-43,共7页
从木聚糖酶高产菌株BP51中克隆得到木聚糖酶基因xynA及其启动子调控序列,将其构建在芽孢杆菌表达载体pWG03中得到重组质粒pWGXYN。采用同源高效表达策略,以原生质体转化方法将pWGXYN转入短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)BP4756中,... 从木聚糖酶高产菌株BP51中克隆得到木聚糖酶基因xynA及其启动子调控序列,将其构建在芽孢杆菌表达载体pWG03中得到重组质粒pWGXYN。采用同源高效表达策略,以原生质体转化方法将pWGXYN转入短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)BP4756中,获得重纽菌株BPSDBY。通过诱导重组菌株中的xynA基因高效分泌表达,使木聚糖酶产酶活力比原菌株BP4756提高了20倍。此外,对重组表达的木聚糖酶的酶学性质进行了初步研究。 展开更多
关键词 木聚糖酶 短小芽孢杆菌 芽孢杆菌表达系统
耐碱性木聚糖酶高产菌株的筛选、产酶条件优化及其在麦草浆生物漂白中的应用 预览 被引量:14
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作者 包怡红 刘伟 +1 位作者 毛爱军 董志扬 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 2005年第2期 235-240,共6页
采用刚果红法从碱性土壤中筛选到木聚糖酶高产菌株BP51,通过培养特性及16S rDNA序列分析,初步鉴定为短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus);经产酶发酵条件的优化,即4%麸皮,1%麸皮半纤维素,0.5%(NH4)2SO4,pH 8.0,37℃培养72 h,产酶活力达到553.... 采用刚果红法从碱性土壤中筛选到木聚糖酶高产菌株BP51,通过培养特性及16S rDNA序列分析,初步鉴定为短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus);经产酶发酵条件的优化,即4%麸皮,1%麸皮半纤维素,0.5%(NH4)2SO4,pH 8.0,37℃培养72 h,产酶活力达到553.4IU/mL;该酶作用最适温度为55℃,最适pH 6.5,在pH 9.0的条件下仍具有60%的酶活力,pH 11.0的保温30min仍具有40%的酶活力;将粗酶液用于麦草浆的漂白中,结果表明氯的用量明显降低,白度却提高了20%以上. 展开更多
关键词 高产菌株 耐碱性木聚糖酶 麦草浆 生物漂白 条件优化 筛选 (NH4)2SO4 DNA序列分析 应用 短小芽孢杆菌 碱性土壤 刚果红法 培养特性 初步鉴定 发酵条件 半纤维素 产酶活力 最适温度 16S 酶作用 粗酶液 麸皮 白度
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Sb有序单晶纳米线阵列的制备 预览 被引量:2
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作者 贾冲 晋传贵 +3 位作者 刘伟 蔡维理 姚连增 李晓光 《物理化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第3期 240-243,共4页
采用直流电沉积的方法在氧化铝模板(AAM)中成功地制备了Sb单晶纳米线阵列.X射线衍射(XRD)证明所制得的纳米线阵列为(110)取向的六方相Sb.透射电镜(TEM)显示Sb纳米线平滑而均匀,直径40~50nm,长径比大于1000.选区电子衍射(SAED)结果表明... 采用直流电沉积的方法在氧化铝模板(AAM)中成功地制备了Sb单晶纳米线阵列.X射线衍射(XRD)证明所制得的纳米线阵列为(110)取向的六方相Sb.透射电镜(TEM)显示Sb纳米线平滑而均匀,直径40~50nm,长径比大于1000.选区电子衍射(SAED)结果表明,所制得的纳米丝为Sb单晶丝.场发射扫描电镜(FE-SEM)显示Sb纳米线阵列规则,填充率接近100%. 展开更多
关键词 锑有序单晶纳米线阵列 制备 直流电沉积 氧化铝模板 热电材料
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