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环境因素促进单增李斯特菌生物被膜的形成 认领
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作者 陈倩 郭爱玲 +3 位作者 顾丽红 武康 张新帅 阮瑶 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2020年第2期144-151,共8页
本实验研究了在营养正常和贫瘠状态下,环境因素包括p H值、氯化钠、常见碳水化合物及危险罗尔斯通氏菌对单增李斯特菌生物被膜形成的影响,并使用激光扫描共聚焦显微镜(Confocal laser scanning microscope,CLSM)观察单增李斯特菌和危险... 本实验研究了在营养正常和贫瘠状态下,环境因素包括p H值、氯化钠、常见碳水化合物及危险罗尔斯通氏菌对单增李斯特菌生物被膜形成的影响,并使用激光扫描共聚焦显微镜(Confocal laser scanning microscope,CLSM)观察单增李斯特菌和危险罗尔斯通氏菌单、双菌种生物被膜。结果表明:弱酸、碱性条件、低浓度的氯化钠以及危险罗尔斯通式菌能显著促进单增李斯特菌形成生物被膜,但与营养正常状态相比,营养贫瘠状态下的生物被膜形成量降低。几种常见碳水化合物(葡萄糖、蔗糖、木糖醇、半乳糖及魔芋精粉)也有一定的促进作用,特别是木糖醇和魔芋精粉,引起的增长率分别高达75.00%和96.67%。CLSM结果表明,单增李斯特菌和危险罗尔斯通氏菌生物被膜的空间结构不同,但活菌数都比较多。致病菌生物被膜的形成会对食品安全构成巨大威胁,而很多环境因素又有增强生物被膜形成的作用,应引起食品生产等行业的关注。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 生物被膜 激光扫描共聚焦显微镜 环境因素 危险罗尔斯通氏菌
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文章速递致病菌抵抗溶菌酶机制的研究进展 认领
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作者 张新帅 阮瑶 +3 位作者 武康 陈倩 顾丽红 郭爱玲 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第17期298-306,共9页
溶菌酶广泛存在于生物体中,在天然免疫系统中起到重要作用,其作为一种阳离子抗菌蛋白以及能够有效水解细菌细胞壁N-乙酰胞壁酸和N-乙酰葡糖胺之间的β-1,4糖苷键从而发挥杀菌作用。致病菌为了能长期定植于宿主体内、引起宿主感染,已经... 溶菌酶广泛存在于生物体中,在天然免疫系统中起到重要作用,其作为一种阳离子抗菌蛋白以及能够有效水解细菌细胞壁N-乙酰胞壁酸和N-乙酰葡糖胺之间的β-1,4糖苷键从而发挥杀菌作用。致病菌为了能长期定植于宿主体内、引起宿主感染,已经进化出多种机制来逃避溶菌酶的杀灭。然而,相比溶菌酶其他方面的研究,国内对致病菌抵抗溶菌酶的研究关注较少。本文总结了近年来国内外相关文献中的报道,对肽聚糖修饰、溶菌酶抑制剂提高溶菌酶抗性的机制以及溶菌酶抗性基因的转录调节进行了详细阐述,并对溶菌酶未来的研究方向和潜在应用进行了评述。 展开更多
关键词 致病菌 溶菌酶 肽聚糖修饰 溶菌酶抑制剂 转录调节
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prfA基因缺失影响单增李斯特菌诱导细胞凋亡的能力 认领
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作者 郭亮 陈国薇 +4 位作者 谢曼曼 丁承超 武康 董庆利 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2018年第1期90-95,共6页
单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,Lm)入侵宿主细胞并带来危害,包含3个关键性环节,即宿主细胞的黏附和侵袭、细胞内增殖和运动、细胞间传播。每个环节的实现均需要不同毒力因子的调控,不同血清型Lm毒力的强弱取决于其... 单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,Lm)入侵宿主细胞并带来危害,包含3个关键性环节,即宿主细胞的黏附和侵袭、细胞内增殖和运动、细胞间传播。每个环节的实现均需要不同毒力因子的调控,不同血清型Lm毒力的强弱取决于其毒力因子的活性,prfA基因作为Lm毒力的调控基因起到至关重要的作用。本研究使用单增李斯特菌野生株EGDe及其prfA基因缺失株EGDe-ΔprfA,以人结肠癌腺细胞Caco-2和人肝癌上皮细胞HepG2为研究对象,通过细胞侵袭实验和诱导凋亡能力探究prfA基因缺失对EGDe毒力的影响。溶血实验结果表明prfA基因的缺失并不会明显改变EGDe的溶血能力;侵袭实验表明突变株与EGDe野生株相比对Caco-2细胞和HepG2细胞侵袭能力分别下降了40%和30%;EGDe-ΔprfA处理组与EGDe处理组相比较,Caco-2细胞和HepG2细胞平均凋亡比例分别下降了35.8%和43.7%,说明prfA基因敲除后会降低细胞凋亡。本研究初步证实了prfA基因对EGDe毒力的调控作用,prfA基因缺失降低EGDe侵袭过程中的细胞凋亡,这对于了解EGDe的致病机理及进行相关研究有重要作用。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特氏菌 prfA 毒力 侵袭 凋亡
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基因dat对单核细胞增生李斯特氏菌的生物学特性影响 认领
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作者 曾海娟 谢曼曼 +3 位作者 丁承超 武康 董庆利 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2018年第3期9-15,共7页
单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种重要的食源性致病菌,其基因dat编码D-丙氨酸氨基转移酶,可将D-谷氨酸转变为D-丙氨酸,后者是细菌细胞壁肽聚糖的组成成分。在Lm野生株EGDe actA及inlB双基因缺失株(EGDeΔact... 单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种重要的食源性致病菌,其基因dat编码D-丙氨酸氨基转移酶,可将D-谷氨酸转变为D-丙氨酸,后者是细菌细胞壁肽聚糖的组成成分。在Lm野生株EGDe actA及inlB双基因缺失株(EGDeΔactAΔinlB)的基础上,利用同源重组的方法进一步构建了缺失基因dat的菌株(EGDeΔactAΔinlBΔdat),并对该缺失菌株生长状态、毒力基因表达水平、细胞侵袭及生物被膜的形成量等基本生物学特性进行研究,运用Real Time-PCR(RT-PCR)测定Lm毒力基因的相对表达量。结果表明,基因的缺失对突变菌株的生长能力以及生物被膜形成有重要的调控作用,并导致毒力基因srt A、plc A表达量下调,VIP、inlA表达量上调,对Coca-2细胞的侵袭无影响。此缺失株的构建为进一步研究基因dat的功能提供了材料。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特氏菌 基因敲除 生长能力 RT-PCR 细胞侵袭 生物被膜
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沙门氏菌检测技术研究进展 认领 被引量:19
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作者 李杰 丁承超 +7 位作者 翟续昭 王广彬 武康 曾海娟 王淑娟 孙静娟 董庆利 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2017年第4期126-132,共7页
沙门氏菌(Salmonella)是一种常见的人畜共患病原菌,不仅能引起动物伤寒、霍乱,还会导致人类胃肠炎、败血症等疾病,严重威胁人、畜的生命健康,由其引起的食品安全事件高居所有食源性致病菌之首。食品中沙门氏菌的快速、准确检测是... 沙门氏菌(Salmonella)是一种常见的人畜共患病原菌,不仅能引起动物伤寒、霍乱,还会导致人类胃肠炎、败血症等疾病,严重威胁人、畜的生命健康,由其引起的食品安全事件高居所有食源性致病菌之首。食品中沙门氏菌的快速、准确检测是预防与控制沙门氏菌传播蔓延的重要手段。随着生物学、化学、物理等学科的快速发展,沙门氏菌的检测技术已从传统的分离培养和生化鉴定,发展到免疫学、分子生物学、电化学、传感器、生物芯片等快速、高通量检测,尤其是近年来与纳米技术、光谱学、质谱学以及代谢组学等的结合使用,为沙门氏菌快速、准确、灵敏的检测方法提供了新的发展方向。本文在参阅国内外最新研究报道的基础上,对各种方法进行总结阐述,并对沙门氏菌未来检测技术的发展动向予以分析。 展开更多
关键词 沙门氏菌 人畜致病菌 食品安全 检测技术 研究进展
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毒力因子InlA和InlB缺失影响单增李斯特菌侵袭宿主细胞和诱导凋亡的能力 认领
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作者 武康 陈国薇 +4 位作者 谢曼曼 郭亮 王淑娟 董庆利 《食品科学》 CSCD 北大核心 2017年第19期49-54,共6页
单核细胞增生性李斯特菌(Listeriamonocytogenes,LM)是一种毒力较强、人畜共患的食源性致病菌,其具有穿透宿主屏障、胞内寄生的特点,因而致死率较高,被其污染的食品容易引发严重的食品安全问题。本研究使用前期构建的LM重要的毒... 单核细胞增生性李斯特菌(Listeriamonocytogenes,LM)是一种毒力较强、人畜共患的食源性致病菌,其具有穿透宿主屏障、胞内寄生的特点,因而致死率较高,被其污染的食品容易引发严重的食品安全问题。本研究使用前期构建的LM重要的毒力因子内化素A(internalinA,InlA)和InlB基因缺失菌株,以人结肠癌腺细胞Caco-2和人肝癌上皮细胞HepG2为研究对象,探究InlA和InlB缺失对LM侵袭宿主细胞和诱导细胞凋亡的影响。实验结果表明,InlA和InlB的缺失使LM侵袭宿主细胞的能力明显降低(P<0.05),与野生株相比侵袭量下降超过50%,同时也降低了其诱导宿主细胞凋亡的能力(P<0.05),与野生株相比凋亡细胞的比例下降幅度达到30%~50%。本实验确定了InlA和InlB在LM侵袭宿主细胞和诱导细胞凋亡的过程中具有重要的作用,有助于对LM的致病机理以及引起宿主相关免疫反应、诱导细胞凋亡相关分子机制的深入研究。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 毒力因子 内化素蛋白 细胞侵袭 细胞凋亡
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单核增生性李斯特菌hly缺失菌株的构建及生物特性的初步鉴定 认领 被引量:1
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作者 谢曼曼 武康 +5 位作者 丁承超 董庆利 陈国薇 曾海娟 郭亮 《食品科学》 CSCD 北大核心 2017年第16期17-22,共6页
为研究单核增生性李斯特菌(Listeriamonocytogenes,Lm)hly基因对毒力的影响,利用同源重组原理,使用穿梭载体,构建单核细胞增生性李斯特菌野生菌株EGD-e的hly基因缺失菌株EGD-eΔhly。细菌活性实验证明缺失菌株生长状态与亲本无差... 为研究单核增生性李斯特菌(Listeriamonocytogenes,Lm)hly基因对毒力的影响,利用同源重组原理,使用穿梭载体,构建单核细胞增生性李斯特菌野生菌株EGD-e的hly基因缺失菌株EGD-eΔhly。细菌活性实验证明缺失菌株生长状态与亲本无差异,但EGD-eΔhly丧失溶血活性,细胞侵袭能力降低约90%,在107cells/mL腹腔注射条件下不表现动物毒性。在转录水平上EGD-eΔhly的毒力基因inlC、prfA的表达量分别下降了81%和76%,actA、plcB的表达量分别提高了2.7倍和1.8倍。hly缺失菌株的成功构建及生物特性的初步研究结果为研究Lm致病机理提供依据。 展开更多
关键词 单核增生性李斯特菌 hly基因 同源重组 生物特性
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副溶血性弧菌单克隆抗体的制备及特性鉴定 认领 被引量:6
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作者 谢曼曼 李建武 +5 位作者 王广彬 曾海娟 翟绪昭 丁承超 武康 《食品科学》 EI CSCD 北大核心 2017年第8期63-68,共6页
为制备特异性强的副溶血性弧菌的单克隆抗体,解决单克隆抗体对免疫学检测产品研发的制约,以副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus)ATCC17802标准菌株免疫Balb/c小鼠,经细胞融合、间接酶联免疫吸附测定法筛选,获得稳定分泌抗副溶... 为制备特异性强的副溶血性弧菌的单克隆抗体,解决单克隆抗体对免疫学检测产品研发的制约,以副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus)ATCC17802标准菌株免疫Balb/c小鼠,经细胞融合、间接酶联免疫吸附测定法筛选,获得稳定分泌抗副溶血性弧菌(ATCC17802)菌株的单克隆杂交瘤细胞株3F7D7E8C4,通过体内诱生腹水大量制备抗体,用亚类试剂盒测定抗体亚类为IgG1;采用辛酸硫酸铵沉淀法以及亲和层析柱对腹水进行纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳实验鉴定单克隆抗体的纯度。制备得到腹水抗体效价为1∶16000,纯化后抗体效价为1∶8000,抗体敏感性IC50达到106CFU/mL。纯化后的抗体与12株副溶血性弧菌均能特异性结合,与其他9种非副溶血性弧菌的食源性致病菌均无交叉反应。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 单克隆抗体 酶联免疫吸附测定
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阪崎克罗诺杆菌单克隆抗体的制备及其间接竞争-ELISA检测方法 认领 被引量:2
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作者 翟绪昭 曾海娟 +7 位作者 王广彬 董庆利 谢曼曼 丁承超 武康 王淑娟 李杰 《食品科学》 CSCD 北大核心 2017年第20期268-272,共5页
以阪崎克罗诺杆菌标准菌株ATCC29004免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,经过两次细胞融合共制备出7株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1E9、2A7、2D10、3E5、5B10、6E3、12A2)。其中2A7、2D10、3E5、12A2的效价达到了1∶256000,6E3... 以阪崎克罗诺杆菌标准菌株ATCC29004免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,经过两次细胞融合共制备出7株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1E9、2A7、2D10、3E5、5B10、6E3、12A2)。其中2A7、2D10、3E5、12A2的效价达到了1∶256000,6E3的效价为1∶128000,5B10的效价为1∶64000,1E9的效价为1∶32000。亚型鉴定结果显示1E9的亚型为IgG1,6E3的亚型为IgG2b,其余抗体2A7、2D10、3E5、5B10、12A2的亚型均为IgG2a。对7株抗体进行特异性检测结果显示,2A7能与3株阪崎克罗诺杆菌(ATCC29004、ATCC29544、ATCC12868)都结合,1E9能与其中两株(ATCC29004、ATCC12868)结合,且与其他11株类似菌和常见致病菌交叉反应结果显示7个抗体均有良好的特异性。用2A7建立的间接竞争酶联免疫吸附测定法对阪崎克罗诺杆菌的检测灵敏度可达到106CFU/mL。 展开更多
关键词 阪崎克罗诺杆菌 单克隆抗体 间接竞争ELISA
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单增李斯特菌nox基因的克隆、表达以及功能 认领 被引量:1
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作者 吴嫚 李森 +5 位作者 陈国薇 罗勤 武康 丁承超 董庆利 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第2期46-51,共6页
以GenBank中报道的单增李斯特菌(Listeriamonocytogenes,Lm)野生型菌株EGDe的nox基因(GenBankID:986631)为研究对象,探讨在高等动植物中普遍存在的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶在Lm中是否也可以介导产生活性氧(reactiveoxyge... 以GenBank中报道的单增李斯特菌(Listeriamonocytogenes,Lm)野生型菌株EGDe的nox基因(GenBankID:986631)为研究对象,探讨在高等动植物中普遍存在的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶在Lm中是否也可以介导产生活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)。首先通过诱导nox基因在BL21中表达产生Nox蛋白,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Westernblot鉴定该蛋白质分子质量;然后构建过表达菌株EGDe-nox,测定ROS产生情况,并使用实时荧光定量-聚合酶链式反应检测nox基因的过表达对Lm毒力基因表达的影响。结果表明,经鉴定Nox蛋白分子质量约为33kD,过表达菌株EGDe-nox与对照组EGDe的ROS产生量相比并无多大变化,nox基因的过表达会导致与侵袭相关的基因actA、inlA和inlB以及毒力基因prfA的表达上调。由此推测,该Nox蛋白不能独立主导ROS的产量,但其过表达却可以增强毒力基因表达上调。本研究为继续探讨细菌中Nox的作用提供一定的参考依据。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶 nox基因 活性氧
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单核细胞性李斯特菌基因dal的敲除及其生物学特性初步分析 认领
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作者 曾海娟 武康 +3 位作者 谢曼曼 丁承超 董庆利 《食品科学》 CSCD 北大核心 2017年第22期48-53,共6页
在单核细胞性李斯特菌(Listeria monocytogenes)野生株EGDe act A及inl B双基因缺失株(EGDeΔact AΔinl B)的基础上,利用同源重组的方法进一步构建了缺失营养基因dal的菌株(EGDe Δact AΔinl BΔdal),并对该缺失菌株生长状态、... 在单核细胞性李斯特菌(Listeria monocytogenes)野生株EGDe act A及inl B双基因缺失株(EGDeΔact AΔinl B)的基础上,利用同源重组的方法进一步构建了缺失营养基因dal的菌株(EGDe Δact AΔinl BΔdal),并对该缺失菌株生长状态、毒力基因表达水平、生物被膜的形成量及细胞侵袭等方面作进一步分析。结果显示,37℃摇床培养6 h后,缺失株的菌浓度显著低于EGDe Δact AΔinl B(P〈0.001),培养基中补充D-丙氨酸的缺失株生长速率与亲本株相比无显著差异;实时荧光定量聚合酶链式反应结果显示,缺失株的sig B基因表达水平变化最明显(P〈0.01),约下调90%;缺失株生物被膜形成量显著增加(P〈0.05),培养基补充D-丙氨酸后缺失株生物被膜的生成量与亲本株相比无差异;对Coca-2细胞的侵袭无影响,表明该基因对细菌生长能力及生物被膜形成具有重要的调控作用,并不影响菌株对细胞的侵袭力。此缺失株的构建为进一步研究基因dal的功能提供了理论支持。 展开更多
关键词 单核细胞性李斯特菌 基因敲除 生长能力 细胞侵袭 生物被膜
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单增李斯特菌prfA基因缺失菌株的构建及其生物学特性鉴定 认领 被引量:3
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作者 郭亮 陈国薇 +5 位作者 谢曼曼 武康 丁承超 王淑娟 罗勤 《食品科学》 EI CSCD 北大核心 2017年第10期12-17,共6页
单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种风险较高的食源性致病菌,其绝大多数毒力基因的表达均受到由prfA基因编码的PrfA(positive regulatory factorA)蛋白全部或部分调控。使用同源重组的方法敲除Lm野生菌株EGDe... 单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种风险较高的食源性致病菌,其绝大多数毒力基因的表达均受到由prfA基因编码的PrfA(positive regulatory factorA)蛋白全部或部分调控。使用同源重组的方法敲除Lm野生菌株EGDe的prfA基因,并通过测定生长曲线、毒力基因表达和侵袭Caco-2细胞能力等探讨单缺失菌株EGDe-ΔprfA生物学特性。通过测定生长曲线显示prfA敲除株和野生型EGDe二者生长状态无差异;运用实时定量荧光聚合酶链式反应检测EGDe-ΔprfA的主要毒力基因表达,结果显示plcA、plcB毒力基因的表达量分别上升至原来的2.5倍和2倍,inlA、inlB、inlC、actA、vip等均呈下降趋势,prfA基因表达量趋向于零;侵袭Caco-2细胞结果显示EGDe-ΔprfA侵袭数为野生株的1/5。该基因缺失菌株的构建及生物学特性研究对食源性致病菌EGDe致病机理研究具有重要意义并且提供了重要材料。 展开更多
关键词 单核细胞增生性李斯特菌 prfA 基因敲除 生物学特性
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单增李斯特菌(EGDe)sigB基因缺失株的构建及其生物特性的初步鉴定 认领 被引量:2
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作者 陈国薇 武康 +4 位作者 丁承超 谢曼曼 郭亮 董庆利 《现代食品科技》 北大核心 2017年第9期102-108,共7页
单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种人畜共患的食源性致病菌,在感染过程中可以穿越人体肠道屏障、胎盘屏障及血脑屏障,进而引发肠胃炎、脑膜炎及孕妇流产等疾病。Sigma B(sigB)基因编码产生的sigma B因子是... 单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种人畜共患的食源性致病菌,在感染过程中可以穿越人体肠道屏障、胎盘屏障及血脑屏障,进而引发肠胃炎、脑膜炎及孕妇流产等疾病。Sigma B(sigB)基因编码产生的sigma B因子是许多革兰氏阳性菌对环境胁迫产生应答反应的主要调控因子,并且直接或间接的调控Lm中相关重要毒力基因如prfA、inlA等的表达。本文通过同源重组技术将Lm野生菌株EGDe的sigB基因敲除,并且对缺失菌株的生长曲线,inlA、inlB、prfA等13种Lm的毒力基因表达水平及对肠道上皮细胞Caco-2的侵袭进行了研究。实验表明,EGDe-ΔsigB基因缺失菌株生长速度与EGDe基本一致;sigB基因的缺失造成inlA和inlB基因表达水平的大幅度下调,但actA和plcA等毒力基因却上调4-5倍,说明sigB基因对于单核增生性李斯特菌的一些毒力基因表达影响比较大;Caco-2细胞的侵袭实验显示EGDe-ΔsigB基因的缺失对Caco-2细胞侵袭能力的下降。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特氏菌 SIGB 生物特性 细胞侵袭
弧菌外膜蛋白OmpK单克隆抗体的制备及其特性 认领 被引量:1
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作者 李杰 丁承超 +8 位作者 翟续昭 王广彬 武康 谢曼曼 曾海娟 王淑娟 孙静娟 董庆利 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第6期111-116,共6页
制备弧菌外膜蛋白K(outermembraneproteinK,OmpK)单克隆抗体并对其特性进行研究。以原核表达系统表达野生株VibrioparahaemolyticusB的OmpK免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与肿瘤细胞SP2/0进行细胞融合,采用有限稀释法和间接酶联... 制备弧菌外膜蛋白K(outermembraneproteinK,OmpK)单克隆抗体并对其特性进行研究。以原核表达系统表达野生株VibrioparahaemolyticusB的OmpK免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与肿瘤细胞SP2/0进行细胞融合,采用有限稀释法和间接酶联免疫吸附测定法筛选出能够稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,小鼠体内诱导制备腹水,用饱和硫酸铵沉淀法和亲和层析柱纯化抗体。最终获得能稳定分泌抗OmpK的两株单克隆抗体杂交瘤细胞株OmpK-Mab-4B7、OmpK-Mab-3C5,2株杂交瘤细胞系所分泌的Mab亚类均为IgG1,效价达1∶128000,抗体3C5、4B7的敏感度IC50分别为2.5、5.0μg/mL。Westernblotting结果显示单克隆抗体可以与本实验室12株副溶血性弧菌(V.parahaemolyticusA、B、C、D、E、F、G、H、I、J、ATCC17802、ATCC33847)的外膜蛋白有不同程度的结合反应,与4株溶藻弧菌中的3株(V.alginolyticusA、B、C)外膜蛋白能够较好的结合,与1株鳗弧菌(V.anguillarumMVM)外膜蛋白也有轻微的结合反应,实验制备的单克隆抗体可用于弧菌OmpK的基础研究和快速检测。 展开更多
关键词 弧菌 弧菌外膜蛋白K 单克隆抗体
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单核细胞增生性李斯特菌inlA和inlB基因缺失菌株的构建 认领 被引量:1
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作者 武康 李森 +5 位作者 陈国薇 罗勤 吴嫚 丁承超 谢曼曼 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2017年第1期64-69,共6页
单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是人畜共患的食源性致病菌,其对恶劣环境有较强的抵抗力,广泛存在于各种食品加工环境,容易引起严重的食品安全问题。LM是一种胞内寄生菌,其毒力因子内化素A(internalin A,InlA)... 单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是人畜共患的食源性致病菌,其对恶劣环境有较强的抵抗力,广泛存在于各种食品加工环境,容易引起严重的食品安全问题。LM是一种胞内寄生菌,其毒力因子内化素A(internalin A,InlA)和内化素B(internalin B,InlB)被认为在LM穿透宿主屏障、入侵宿主细胞以及胞间传播等过程中起到重要作用。本文利用同源重组法将LM野生菌株EGDe的inlA和inlB基因的敲除,对inlA和inlB基因缺失菌株的基本生物学特性进行研究,并运用RealTime-PCR监测LM的毒力基因表达。实验结果表明,基因的缺失对突变菌株的生长以及对环境中的氯化钠(NaCl)和乙醇(EtOH)的耐受能力没有影响,但多个毒力基因的表达量明显下降。该缺失菌株的构建为进一步研究InlA和InlB在LM入侵宿主细胞过程中的具体功能提供了重要材料。 展开更多
关键词 单核细胞增生性李斯特菌 内化素A 内化素B 基因敲除 RealTime-PCR
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肠道菌群功能与影响因素研究进展 认领 被引量:7
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作者 郭亮 陈国薇 +4 位作者 谢曼曼 丁承超 武康 董庆利 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2017年第4期108-114,共7页
人体肠道作为一种营养丰富的天然环境有多达100兆个微生物,其中绝大多数存于结肠内,密度接近10^11-10^12/mL。人类肠道内的微生物多样性是微生物菌落和宿主共同进化的结果,自然选择和进化使肠道菌群与宿主处于一种动态平衡且稳定的... 人体肠道作为一种营养丰富的天然环境有多达100兆个微生物,其中绝大多数存于结肠内,密度接近10^11-10^12/mL。人类肠道内的微生物多样性是微生物菌落和宿主共同进化的结果,自然选择和进化使肠道菌群与宿主处于一种动态平衡且稳定的关系。文章综述了肠道菌群对宿主可能产生的影响以及引起肠道菌群发生改变的某些因素,肠道微生物影响宿主的代谢、营养吸收、免疫功能以及神经功能调节,而饮食及其他条件又能引起肠道菌群的改变。深入分析肠道菌群的具体结构、探索不同微生物在宿主体内究竟发挥着怎样的作用以及如何充分利用微生物的不同特性改善人类健康应成为今后研究的重点方向。 展开更多
关键词 肠道 微生物 宿主 因素
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单增李斯特菌vip基因缺失菌株的构建与筛选 认领
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作者 李森 牟俊洁 武康 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2017年第4期16-22,共7页
单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)是广泛存在于自然界及食物中的食源性致病菌,作为胞内寄生菌,它可以引起强烈的细胞免疫,是潜在的优良疫苗载体。”咖是单增李斯特菌的毒力基因,与其侵袭能力密切相关。因此构建vip基因敲除... 单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)是广泛存在于自然界及食物中的食源性致病菌,作为胞内寄生菌,它可以引起强烈的细胞免疫,是潜在的优良疫苗载体。”咖是单增李斯特菌的毒力基因,与其侵袭能力密切相关。因此构建vip基因敲除株可为单增李斯特菌疫苗载体的研发打下重要基础。从单增李斯特菌EGDe基因组中扩增出口咖基因上、下游序列,连接到穿梭载体pKSV7中得到敲除载体pKSV7一△口咖,将其以电穿孔的方式转入单增李斯特菌后,通过同源重组利用氯霉素和温度双重压力筛选得到vip基因的敲除突变株,并对敲除菌株的生长曲线进行分析发现∥咖敲除对细菌的生长没有显著影响,为进一步研究vip基因功能、单增李斯特的致病机制和疫苗载体的研发提供参考。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 rip基因敲除 突变株 同源重组
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细菌产生的活性氧及其功能 认领 被引量:5
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作者 武康 吴淑燕 +4 位作者 陈国薇 张超 吴嫚 李森 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第1期89-95,共7页
活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)是需氧生物有氧代谢和专一酶类产生的含氧的、化学活性极强的一类小分子物质。按照其产生机理可分为两大产生途径,其一是呼吸作用中发生的单电子转移产生的ROS,通常认为此途径产生过量的ROS对生... 活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)是需氧生物有氧代谢和专一酶类产生的含氧的、化学活性极强的一类小分子物质。按照其产生机理可分为两大产生途径,其一是呼吸作用中发生的单电子转移产生的ROS,通常认为此途径产生过量的ROS对生物大分子具有极强的氧化损伤,与多种疾病密切相关;其二是由专一酶类产生的少量ROS,一般认为此途径产生的ROS具有杀灭入侵的外来微生物的作用,但近年来大量研究表明,此途径产生的ROS可行使信号分子和基因开关等多种生理功能。同时,生物体自身的抗氧化系统也可直接调控ROS的水平。本文综合分析近年来对细菌中的ROS的研究成果,并对目前存在的问题和未来的发展进行评述。 展开更多
关键词 细菌 活性氧 抗氧化系统 功能
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inlA和inlB基因缺失对单核细胞增生性李斯特菌侵袭HT29结肠癌细胞的影响 认领 被引量:6
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作者 武康 陈国薇 +3 位作者 吴嫚 丁承超 谢曼曼 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第23期166-172,共7页
单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是人畜共患的食源性致病菌,其可以穿透多个宿主屏障,而内化素蛋白家族被认为是LM穿透宿主屏障过程中起重要作用的毒力因子。本研究利用同源重组的方法构建了LM野生菌株EGDe的inl A... 单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是人畜共患的食源性致病菌,其可以穿透多个宿主屏障,而内化素蛋白家族被认为是LM穿透宿主屏障过程中起重要作用的毒力因子。本研究利用同源重组的方法构建了LM野生菌株EGDe的inl A和inl B基因双缺失菌株,利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测其主要毒力基因表达的变化,并以HT29结肠癌细胞为对象,研究inl A和inl B基因缺失对LM侵袭宿主细胞能力的影响。结果表明基因的缺失对其生长能力没有影响,但多个毒力基因的表达发生了不同程度的变化,同时发现inl A和inl B基因的缺失使LM侵袭HT29结肠癌细胞的能力显著下降(P〈0.05)。本研究成功构建LM的inl A和inl B基因双缺失菌株,并初步研究了基因缺失对LM侵袭宿主细胞能力的影响,为深入研究内化素Inl A和Inl B在LM入侵宿主细胞过程中的具体作用提供了支持。 展开更多
关键词 单核细胞增生性李斯特菌 内化素 基因敲除 Realtime-PCR 侵袭细胞
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减毒单增李斯特菌疫苗递呈研究进展 认领 被引量:1
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作者 丁承超 陈国薇 +2 位作者 吴嫚 武康 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期892-895,共4页
单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种革兰氏阳性兼性厌氧胞内寄生条件致病菌。该菌可穿越肠道屏障、血脑屏障和胎盘屏障,引起人和动物的胃肠炎、脑膜炎、败血症([1])。且具有独有的胞内逃逸存活和胞间传送等特... 单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种革兰氏阳性兼性厌氧胞内寄生条件致病菌。该菌可穿越肠道屏障、血脑屏障和胎盘屏障,引起人和动物的胃肠炎、脑膜炎、败血症([1])。且具有独有的胞内逃逸存活和胞间传送等特性,因此是研究胞内寄生的模式细菌。目前研究发现Lm的毒力主要由六个毒力因子编码基因(prfA-plcAhly-mpl-actA-plcB)组成。plcA和plcB分别编码磷脂酰肌醇特异性磷脂酶(PI-PLC)和卵磷脂酶(PCPLC),有助于Lm逃离吞噬小体; 展开更多
关键词 单增李斯特菌 递呈 减毒 疫苗免疫效果 卵磷脂酶 毒力因子 编码基因 肠道屏障 LISTERIA 条件致病菌
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