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跳骨片调控Wnt/β-catenin信号通路延缓骨关节炎关节软骨退变的机制研究 预览
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作者 何晓娟 郑文伟 +9 位作者 贾良良 李慧 许丽梅 曾建伟 许惠凤 郑春松 锦霞 吴广文 李西海 蕻芝 《风湿病与关节炎》 2019年第2期5-9,共5页
目的:探讨跳骨片调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路保护骨关节炎关节软骨的机制。方法:将30只2月龄雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、跳骨片组,每组10只。采用改良Hulth法建立骨关节炎动物模型。造模成功后跳骨片组给... 目的:探讨跳骨片调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路保护骨关节炎关节软骨的机制。方法:将30只2月龄雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、跳骨片组,每组10只。采用改良Hulth法建立骨关节炎动物模型。造模成功后跳骨片组给予跳骨片0.32 g·kg-1·d-1灌胃,空白对照组和模型对照组给予等量生理盐水灌胃,干预12周后取大鼠关节软骨。Real-time PCR检测关节软骨β-catenin、Frizzled-2、GSK-3β、CKIεmRNA表达,Western blot法检测关节软骨CKIε、CollagenⅡ、PGS1蛋白表达,Massion染色法观察3组关节软骨胶原的表达及形态变化。结果:Real-time PCR结果显示,与空白对照组比较,模型对照组关节软骨β-catenin、Frizzled-2、CKIεmRNA表达明显上升(P <0.05,P> 0.05,P <0.05),而GSK-3βmRNA表达明显下降(P <0.05);与模型对照组比较,跳骨片组关节软骨β-catenin、Frizzled-2、CKIεmRNA表达明显下降(P <0.05,P> 0.05,P <0.05),而GSK-3βmRNA表达明显上升(P <0.05)。Western blot结果显示,与空白对照组比较,模型对照组关节软骨CKIε蛋白表达明显升高(P <0.05),而CollagenⅡ、PGS1蛋白表达明显降低(P <0.05,P <0.01);与模型对照组比较,跳骨片组关节软骨CKI-ε蛋白表达明显降低(P <0.05),CollagenⅡ、PGS1蛋白表达明显升高(P <0.01,P> 0.05)。Massion染色结果显示,空白对照组和跳骨片组关节软骨结构清晰,软骨层染色明显,软骨组织呈淡蓝色,胶原含量较高;模型对照组软骨层结构紊乱,染色较浅,胶原含量低。结论:跳骨片能调控Wnt/β-catenin信号通路抑制骨关节炎炎症反应,促进细胞外基质的合成,保护关节软骨。 展开更多
关键词 骨关节炎 关节软骨 跳骨片 WNT/Β-CATENIN信号通路 大鼠
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补肾壮筋汤调节miR-140抑制脂多糖介导软骨细胞IL-1β、TNF-α表达的研究 预览
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作者 贾良良 陈达 +6 位作者 许丽梅 李慧 曾建伟 锦霞 王丽丽 蕻芝 李西海 《福建中医药》 2019年第3期56-60,共5页
目的探讨补肾壮筋汤抑制脂多糖(LPS)介导软骨细胞表达基质紊乱的作用机制。方法体外培养大鼠软骨细胞,采用甲苯胺蓝染色法、Ⅱ型胶原酶免疫组化法鉴定。采用10 ng/m L LPS建立软骨细胞炎症模型,将软骨细胞分为正常组、模型组、抑制剂组... 目的探讨补肾壮筋汤抑制脂多糖(LPS)介导软骨细胞表达基质紊乱的作用机制。方法体外培养大鼠软骨细胞,采用甲苯胺蓝染色法、Ⅱ型胶原酶免疫组化法鉴定。采用10 ng/m L LPS建立软骨细胞炎症模型,将软骨细胞分为正常组、模型组、抑制剂组、氨基葡萄糖组和补肾壮筋汤组,分别进行相应干预后,酶联免疫法(ELISA)检测各组细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达,Western blot法及qRT-PCR法检测各组基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-13、解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS)4、ADAMTS5及RAF蛋白、mRNA的表达,并用qRT-PCR法检测miR-140基因的表达。结果①甲苯胺蓝染色胞浆内可见蓝紫色异染颗粒,Ⅱ型胶原酶免疫组化可见胞浆呈棕黄色阳性染色,鉴定为软骨细胞。②与正常组比较,模型组IL-1β、TNF-α明显升高(P<0.05),MMP-3、MMP-13、ADAMTS4、ADAMTS5、RAF蛋白及m RNA的表达明显升高(P<0.01,P<0.05),miR-140表达下降(P<0.01);与模型组比较,抑制剂组、氨基葡萄糖组和补肾壮筋汤组IL-1β、TNF-α明显降低(P<0.05),MMP-3、MMP-13、ADAMTS4、ADAMTS5、RAF蛋白及m RNA的表达明显降低(P<0.01,P<0.05),miR-140表达升高(P<0.01)。结论补肾壮筋汤通过抑制炎症相关的关键调控因子表达,从而抑制LPS介导软骨细胞表达基质紊乱,保护软骨细胞的功能。 展开更多
关键词 骨关节炎 补肾壮筋汤 软骨细胞 软骨基质 炎症因子
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基于Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2信号通路探究狗脊多糖延缓大鼠椎间盘软骨细胞退变
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作者 付长龙 梅阳阳 +3 位作者 李民 锦霞 郑春松 吴广文 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期3311-3314,共4页
目的:从Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2信号通路探讨狗脊多糖对白介素-1β(IL-1β)诱导大鼠椎间盘软骨细胞退变的影响。方法:①狗脊多糖的制备;②软骨细胞体外培养体系建立与鉴定;③RT-PCR、Western Blot法分别检测IL-1β诱导软骨细胞Ras、Raf、... 目的:从Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2信号通路探讨狗脊多糖对白介素-1β(IL-1β)诱导大鼠椎间盘软骨细胞退变的影响。方法:①狗脊多糖的制备;②软骨细胞体外培养体系建立与鉴定;③RT-PCR、Western Blot法分别检测IL-1β诱导软骨细胞Ras、Raf、MEK1/2、ERK1/2 mRNA与蛋白含量表达。④酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠椎间盘软骨细胞上清液超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)表达。结果:大鼠椎间盘软骨细胞经Ⅱ型胶原法染色后,阳性对照组胞浆区域浸染为棕黄色。RT-PCR、Western Blot结果显示,与模型组比较,狗脊多糖100、200、400μg/m L组Ras、Raf、MEK1/2、ERK1/2 mRNA与蛋白含量表达均呈降低趋势(P<0.01,P<0.05),其中以200μg/mL组表达量最低(P<0.01)。ELISA结果显示,狗脊多糖100、200、400μg/mL组NO表达含量表达均低于模型组,而SOD表达含量均显著高于模型组(P<0.05)。结论:狗脊多糖可通过下调退变关节软骨中Ras、Raf、MEK1/2、ERK1/2 mRNA与蛋白含量及降低NO水平,上调SOD水平,来延缓大鼠椎间盘软骨细胞退变。 展开更多
关键词 椎间盘软骨细胞 狗脊多糖 Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2信号通路 退变
智能治疗仪对兔膝骨关节炎软骨结构和关节液IL-lβ、IL-6、TNF-α、MMP-3、HA含量的影响 预览
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作者 林洁 许惠凤 +5 位作者 陈俊 锦霞 郑春松 王丽丽 张世茂 吴广文 《福建中医药》 2019年第1期42-45,共4页
目的观察智能治疗仪对兔膝骨关节炎(KOA)软骨组织形态及关节液中IL-lβ、IL-6、TNF-α、MMP-3、HA的影响。方法采用改良Hulth法建立KOA模型,将64只新西兰大白兔按随机数字表法分为空白组、模型组、对照组和治疗组。对照组采用低频电子... 目的观察智能治疗仪对兔膝骨关节炎(KOA)软骨组织形态及关节液中IL-lβ、IL-6、TNF-α、MMP-3、HA的影响。方法采用改良Hulth法建立KOA模型,将64只新西兰大白兔按随机数字表法分为空白组、模型组、对照组和治疗组。对照组采用低频电子脉冲治疗仪干预,治疗组采用智能治疗仪干预,空白组和模型组未进行干预,各组分别干预8周和16周后取材。采用光镜和电镜观察软骨组织显微和超微结构,改良番红O-固绿染色观察软骨组织蛋白多糖分布情况,ELISA法测定关节液中IL-1β、IL-6、TNF-α、MMP-3及HA含量。结果HE染色、改良番红O-固绿染色和Mankin’s评分结果显示:空白组软骨组织边缘平整光滑,4层结构清晰,蛋白多糖分布较均匀;模型组软骨组织边缘毛糙,软骨细胞成簇或减少,细胞排列紊乱,蛋白多糖含量明显减少且分布较不均匀,软骨组织Mankin’s评分与同疗程空白组相比增高(P<0.05,P<0.01);对照组和治疗组软骨组织边缘稍不规则,软骨细胞排列紊乱,蛋白多糖含量减少,总体表现介于空白组和模型组之间,软骨组织Mankin’s评分与同疗程模型组相比降低(P<0.05,P<0.01)。超微结构结果表明:与空白组相比,模型组软骨细胞形态不规则,细胞器减少或固缩,部分细胞变形、坏死,胶原原纤维减少。与模型组相比,对照组和治疗组软骨细胞形状较稍不规则,细胞器结构较好,胶原原纤维较多。ELISA结果显示:与空白组相比,模型组中IL-1β、IL-6、TNF-α、MMP-3含量均明显升高(P<0.01),HA明显降低(P<0.01);与模型组相比,对照组和治疗组IL-1β、IL-6、TNF-α、MMP-3含量均降低(P<0.01),HA明显升高(P<0.01);与对照组相比,治疗组IL-1β、IL-6、TNF-α、MMP-3和HA含量无明显差异。此外,与疗程8周相比,疗程16周的模型组、对照组和治疗组IL-1β、IL-6、TNF-α、MMP-3和HA含量变化存在统计学意义(P<0.01)。结论智能治疗仪能有效改善KOA软� 展开更多
关键词 膝骨关节炎 智能治疗仪 软骨组织 关节液
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独活寄生汤治疗膝骨关节炎的作用机制 预览 被引量:1
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作者 吴广文 刘淑如 +3 位作者 陈俊 林洁 赵忠胜 锦霞 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第19期2965-2971,共7页
背景:前期研究表明独活寄生汤可有效抑制膝骨关节炎炎症反应,但其具体机制尚不明确。目的:观察独活寄生汤对膝骨关节炎大鼠软骨、滑膜miR-146a/-155-NF-κB/p38MAPK信号通路相关因子的影响。方法:SD雄性大鼠36只,购于上海斯莱克实验动... 背景:前期研究表明独活寄生汤可有效抑制膝骨关节炎炎症反应,但其具体机制尚不明确。目的:观察独活寄生汤对膝骨关节炎大鼠软骨、滑膜miR-146a/-155-NF-κB/p38MAPK信号通路相关因子的影响。方法:SD雄性大鼠36只,购于上海斯莱克实验动物有限责任公司。实验方案经福建中医药大学动物实验伦理委员会批准,批准号为[2018]福中医伦理审字第(014)号。大鼠适应性喂养1周后,随机分为空白组(12只)和造模组(24只)。造模组采用改良Hulth法于大鼠右膝关节复制膝骨关节炎模型,造模后1周将造模大鼠随机分为模型组(12只)和实验组(12只)。空白组和模型组给予生理盐水10 mL/(kg·d)灌胃;实验组给予独活寄生汤9.3 g/(kg·d)灌胃。治疗3个月后,麻醉后切取大鼠右膝关节滑膜组织,ELISA法检测诱导型一氧化氮合酶、环氧合酶2、基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶13含量变化;取大鼠软骨组织,免疫组织化学法检测NF-κB p65和p38 MAPK蛋白表达;Real-time PCR法检测miR-146a、miR-155、NF-κB p65和p38 MAPK基因表达。结果与结论:①Real-time PCR结果表明独活寄生汤能抑制miR-155、NF-κB p65和p38 MAPK基因表达,促进miR-146a基因表达(P <0.01);②免疫组织化学结果与Real-time PCR结果趋势一致,即独活寄生汤能抑制NF-κB p65和p38 MAPK蛋白表达(P <0.01);③ELISA结果显示独活寄生汤可有效抑制诱导型一氧化氮合酶、环氧合酶2、基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶13表达;④结果提示,独活寄生汤可通过调控miR-146a/-155-NF-κB/p38 MAPK信号通路,抑制膝骨关节炎炎症反应,从而起到治疗膝骨关节炎作用。 展开更多
关键词 独活寄生汤 膝骨关节炎 NF-κB信号通路 p38 MAPK信号通路 一氧化氮合酶 环氧合酶2 基质金属蛋白酶3 基质金属蛋白酶13
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荣筋拈痛方对骨关节炎作用靶点的分析及验证
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作者 林洁 赵忠胜 +4 位作者 黄艳峰 付长龙 锦霞 陈俊 吴广文 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期3743-3746,共4页
目的:BATMAN-TCM分析工具及R语言分析荣筋拈痛方对骨关节炎(OA)的作用及靶点并进行动物实验验证。方法:BATMAN-TCM分析工具预测荣筋拈痛方潜在作用靶点、发挥作用的方式途径及可能作用的疾病。R语言分析出OA模型大鼠与正常大鼠膝关节软... 目的:BATMAN-TCM分析工具及R语言分析荣筋拈痛方对骨关节炎(OA)的作用及靶点并进行动物实验验证。方法:BATMAN-TCM分析工具预测荣筋拈痛方潜在作用靶点、发挥作用的方式途径及可能作用的疾病。R语言分析出OA模型大鼠与正常大鼠膝关节软骨组织的差异基因。韦恩图分析荣筋拈痛方潜在作用靶点与软骨组织差异基因的交集,选择靶点分子进行动物实验验证。将2月龄大鼠随机分为空白组、模型组、荣筋拈痛方组,空白组和模型组予0.9%氯化钠溶液灌胃,荣筋拈痛方组予荣筋拈痛方水提溶液灌胃。各组干预12周后,对关节软骨组织进行HE染色观察及Western Blot检测。结果:荣筋拈痛方具有632个化学成分,其中440个化学成分预测到1 787个潜在作用靶点,其通过多途径发挥作用,能治疗疼痛性疾病、心血管疾病、肾脏疾病、免疫性疾病、关节炎性疾病等多种疾病。OA大鼠软骨组织中差异表达的基因共226条。荣筋拈痛方潜在作用靶点与软骨组织差异基因相同的指标有34个,其中选择CXCR4进行验证。动物实验中HE染色及Western Blot检测显示,模型组软骨组织损伤且CXCR4蛋白表达升高(P<0.05),荣筋拈痛方组软骨组织损伤减轻且CXCR4蛋白表达降低(P<0.01)。结论:荣筋拈痛方能延缓OA软骨组织退变,作用机制与调节CXCR4表达有关。 展开更多
关键词 荣筋拈痛方 生物信息学 BATMAN-TCM R语言 骨关节炎
狗脊多糖对硝普钠诱导退变大鼠软骨细胞氧自由基影响的研究 预览 被引量:3
7
作者 付长龙 梅阳阳 +5 位作者 李民 黄志强 黄艳峰 林晴 郑春松 锦霞 《风湿病与关节炎》 2018年第6期5-9,14共6页
目的:观察狗脊多糖对硝普钠(SNP)诱导退变大鼠软骨细胞氧自由基的影响,为其在骨关节炎的临床应用提供理论依据。方法:采用水提醇沉法、Sevag法除蛋白提取纯化获得狗脊多糖,苯酚-硫酸比色法测定其多糖含量;酶联免疫吸附测定法分别检... 目的:观察狗脊多糖对硝普钠(SNP)诱导退变大鼠软骨细胞氧自由基的影响,为其在骨关节炎的临床应用提供理论依据。方法:采用水提醇沉法、Sevag法除蛋白提取纯化获得狗脊多糖,苯酚-硫酸比色法测定其多糖含量;酶联免疫吸附测定法分别检测体外培养大鼠软骨细胞空白对照组、模型对照组、各剂量狗脊多糖组(100,200,400,800μg·mL-1)的超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)的含量。结果:狗脊多糖含量为76.91%,精密度试验RSD=1.86%,表明仪器精密度良好,且稳定性试验RSD=1.98%,平均回收率试验为95.4%,RSD=1.83%;酶联免疫吸附法检测经SNP造模后软骨细胞氧自由基表达结果显示,与空白对照组比较,模型对照组SOD、NO、MDA含量表达差异均有统计学意义(P〈0.01),提示软骨细胞退变模型建立;与模型对照组比较,各剂量狗脊多糖组(100,200,400,800μg·mL-1)干预48 h后,可上调SOD含量,下调NO、MDA含量,其中以200μg·mL-1组表达最显著(P〈0.01)。结论:苯酚-硫酸比色法可作为狗脊多糖的含量测定方法;狗脊多糖可降低经SNP造模后软骨细胞中异常氧自由基含量表达,上调抗氧化因子水平,发挥抗氧化作用。 展开更多
关键词 骨关节炎 狗脊多糖 软骨细胞 氧自由基 大鼠
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独活寄生汤水提物对退变大鼠椎间盘软骨细胞功能的影响 预览 被引量:1
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作者 刘伯龄 陈齐勇 +4 位作者 刘少强 小伟 梁珪清 锦霞 李西海 《福建中医药》 2018年第1期17-20,共4页
目的探究独活寄生汤水提物对经IL-1β诱导退变的大鼠椎间盘软骨细胞中Wnt4、GSK-3β、β-catenin、DKK-1的影响。方法采用机械-酶消化法分离大鼠椎间盘软骨组织,进行软骨细胞体外培养、镜下观察与鉴定,分为正常组、模型组(经10 ng/m L... 目的探究独活寄生汤水提物对经IL-1β诱导退变的大鼠椎间盘软骨细胞中Wnt4、GSK-3β、β-catenin、DKK-1的影响。方法采用机械-酶消化法分离大鼠椎间盘软骨组织,进行软骨细胞体外培养、镜下观察与鉴定,分为正常组、模型组(经10 ng/m L浓度IL-1β造模)、实验1组(独活寄生汤水提物组200μg/m L干预24 h)、实验2组(独活寄生汤水提物组200μg/m L干预48 h)。观察4组大鼠椎间盘软骨细胞中Wnt4、GSK-3β、β-catenin、DKK-1 m RNA与蛋白的表达及上清液中Sox 9表达。结果 (1)第2代大鼠椎间盘软骨细胞增殖速度快,呈现多边形,胞核清晰,且含有1~2个核仁,融合后出现"铺路石"状,经Ⅱ型胶原法染色后,阳性对照组胞浆区域浸染为棕黄色;(2)与正常组比较,模型组中软骨细胞Wnt 4、GSK-3β、β-catenin m RNA与蛋白表达及上清液Sox 9含量明显提高(P〈0.05),DKK-1 m RNA与蛋白表达明显降低(P〈0.05);与模型组比较,实验1组、实验2组中软骨细胞Wnt 4、GSK-3β、β-catenin m RNA与蛋白表达及上清液Sox 9含量明显降低(P〈0.05),DKK-1m RNA与蛋白表达明显提高(P〈0.05),以实验2组变化最为显著(P〈0.05)。结论独活寄生汤水提物组可调控退变椎间盘软骨细胞的功能,下调Wnt 4、GSK-3β、β-catenin和上调DKK-1 m RNA与蛋白表达,进而延缓大鼠椎间盘软骨细胞的退变。 展开更多
关键词 椎间盘软骨细胞 独活寄生汤 水提物 软骨退变
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计算机模拟预测川芎与当归的药代动力学和肝毒性特征 预览 被引量:1
9
作者 郑春松 付长龙 +2 位作者 锦霞 蕻芝 刘献祥 《福建中医药》 2018年第1期23-25,共3页
目的采用计算机模拟预测川芎和当归的药代动力学和肝毒性特征。方法从北京大学天然产物库中检索川芎和当归的化学成分,构建川芎和当归分子数据集;依托Discovery StudioTM模拟平台ADMET模块,分析两个分子集化合物的药代动力学和肝毒性特... 目的采用计算机模拟预测川芎和当归的药代动力学和肝毒性特征。方法从北京大学天然产物库中检索川芎和当归的化学成分,构建川芎和当归分子数据集;依托Discovery StudioTM模拟平台ADMET模块,分析两个分子集化合物的药代动力学和肝毒性特征。结果川芎和当归分子数据集中化合物在肠内吸收性、25℃的水溶性、血脑屏障穿透性、人细胞色素P450 2D6酶结合、血浆蛋白结合和肝毒性上比较均无显著性差异(P〉0.05)。结论从化学结构的角度预测川芎和当归中化合物在药代动力学和肝毒性特征方面的相似性,为两者配伍及其相关研究提供了新依据和方向。 展开更多
关键词 川芎 当归 药代动力学 化学结构 计算机模拟
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从化学空间探讨荣筋拈痛方补肝肾强筋骨和祛风湿止痹痛的作用 预览 被引量:1
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作者 郑春松 范展彪 +4 位作者 蕻芝 锦霞 付长龙 吴广文 刘献祥 《风湿病与关节炎》 2018年第2期33-36,42共5页
目的:从化学空间探讨荣筋拈痛方补肝肾强筋骨和祛风湿止痹痛的作用。方法:将荣筋拈痛方分为补肝肾强筋骨药组和祛风湿止痹痛药组,建立其化合物的分子数据集;搜索Drug Bank数据库中骨关节炎治疗相关的刺激关节软骨中蛋白多糖合成以及... 目的:从化学空间探讨荣筋拈痛方补肝肾强筋骨和祛风湿止痹痛的作用。方法:将荣筋拈痛方分为补肝肾强筋骨药组和祛风湿止痹痛药组,建立其化合物的分子数据集;搜索Drug Bank数据库中骨关节炎治疗相关的刺激关节软骨中蛋白多糖合成以及抗炎镇痛药物,建立其各自的药物分子集。依托定量构效关系平台,分析补肝肾强筋骨药组和刺激关节软骨中蛋白多糖合成药物分子数据集、祛风湿止痹痛药组和抗炎镇痛药物分子数据集的化学空间。结果:荣筋拈痛方分子具有分散的化学空间,且补肝肾强筋骨药物部分化合物与刺激关节软骨中蛋白多糖合成的药物具有相同或相近的化学空间,祛风湿止痹痛药物部分化合物与抗炎镇痛的药物具有相同或相近的化学空间。结论:荣筋拈痛方治疗骨关节炎具有广谱的作用特点,其中,补肝肾强筋骨药物可能具有刺激关节软骨中蛋白多糖合成的作用,而祛风湿止痹痛药物可能具有抗炎镇痛的作用。 展开更多
关键词 骨关节炎 荣筋拈痛方 补肝肾 强筋骨 止痹痛 化学空间
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独活寄生汤调控对大鼠椎间盘软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响 预览 被引量:2
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作者 刘伯龄 陈齐勇 +5 位作者 付长龙 刘少强 小伟 梁清 锦霞 李西海 《风湿病与关节炎》 2018年第1期5-9,22共6页
目的:从Wnt/β-catenin信号通路探讨独活寄生汤水提物对大鼠椎间盘退变软骨细胞功能的影响。方法:(1)用水提加热回流法制备独活寄生汤水提物成分;(2)选取4周龄健康雄性SD大鼠30只,采用机械-酶消化法分离大鼠椎间盘软骨组织,建立... 目的:从Wnt/β-catenin信号通路探讨独活寄生汤水提物对大鼠椎间盘退变软骨细胞功能的影响。方法:(1)用水提加热回流法制备独活寄生汤水提物成分;(2)选取4周龄健康雄性SD大鼠30只,采用机械-酶消化法分离大鼠椎间盘软骨组织,建立软骨细胞体外培养体系并进行鉴定;(3)RT-PCR、We stern blot法分别检测经DKK-1抑制剂干预及(或)经白细胞介素-1β诱导的椎间盘软骨细胞Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA与蛋白含量的表达。结果:(1)椎间盘软骨细胞经Ⅱ型胶原法染色后,阳性对照组胞浆区域浸染为棕黄色;(2)RT-PCR、Western blot检测结果示,与正常组比较,模型组Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA与蛋白含量表达显著升高(P〈0.01);与模型组比较,独活寄生汤水提物组(100,200,400μg·mL^-1)的Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA与蛋白含量表达显著降低(P〈0.01或P〈0.05),其中以200μg·mL^-1组的表达量最低(P〈0.01)。结论:独活寄生汤水提物组可通过调控Wnt/β-catenin信号通路,下调大鼠椎间盘退变关节软骨中Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA与蛋白含量表达,从而延缓椎间盘软骨细胞退变。 展开更多
关键词 椎间盘退变性疾病 椎间盘软骨细胞 独活寄生汤 WNT/Β-CATENIN信号通路 大鼠
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颈椎病治疗仪对颈椎病模型大鼠颈椎骨组织中Ca、P及血清中IL-lβ、IL-6、TNF-α含量的影响 预览
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作者 陈俊 张世茂 +3 位作者 许惠凤 锦霞 陈振沅 吴广文 《福建中医药》 2018年第4期44-46,共3页
目的研究颈椎病治疗仪对颈椎病模型大鼠颈椎骨组织中Ca、P及血清中IL-lβ、IL-6、TNF-α含量的影响,探讨颈椎病治疗仪防治颈椎病的作用机制。方法 2月龄SD大鼠48只,适应性喂养1周,随机分为空白组12只和造模组36只。造模组予以切除C2-C7... 目的研究颈椎病治疗仪对颈椎病模型大鼠颈椎骨组织中Ca、P及血清中IL-lβ、IL-6、TNF-α含量的影响,探讨颈椎病治疗仪防治颈椎病的作用机制。方法 2月龄SD大鼠48只,适应性喂养1周,随机分为空白组12只和造模组36只。造模组予以切除C2-C7棘上韧带、棘间韧带和分离椎旁两侧肌肉,建立颈椎退变动物模型;造模3个月后,抽签法随机分为3组,即模型组、治疗组和对照组各12只。空白组和模型组不予任何治疗;治疗组和对照组分别给予颈椎病治疗仪和低频电子脉冲治疗仪治疗,每次30 min,每日1次。治疗4周后,处死动物,获取各组大鼠的C5、C6骨组织和血清,用半自动生化分析仪测定各组C5、C6骨组织中Ca、P含量和放射免疫法测定血清中IL-lβ、IL-6、TNF-a含量。结果与空白组比较,模型组中Ca、P的含量下降,IL-1β、IL-6、TNF-α含量增加(P均〈0.01);治疗组和对照组治疗后,Ca、P含量均升高,IL-1β、IL-6、TNF-α含量均降低,与模型组比较,差异均有统计学意义(P〈0.05);但治疗组与对照组比较,差异无统计学意义(P〉0.05)。结论颈椎病治疗仪可通过提高颈椎骨组织中Ca、P含量,下调血清中IL-1β、IL-6和TNF-α炎性细胞因子含量,抑制颈椎退变。 展开更多
关键词 颈椎病 炎症因子 颈椎病治疗仪
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透骨消痛胶囊对膝骨关节炎大鼠关节软骨Gαs、Gα(i)、Gα(pan)的影响 预览
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作者 黄艳峰 李丹帆 +3 位作者 陈俊 林秋英 锦霞 吴广文 《风湿病与关节炎》 2018年第2期5-8,共4页
目的:探讨透骨消痛胶囊对膝骨关节炎大鼠关节软骨G蛋白偶联信号传导系统的影响。方法:2月龄清洁级雄性SD大鼠36只,喂养1周后,随机分为空白组12只和造模组24只。造模组在第1,4,7天双膝关节腔注射0.2 mL质量分数为4%的木瓜蛋白酶。造模... 目的:探讨透骨消痛胶囊对膝骨关节炎大鼠关节软骨G蛋白偶联信号传导系统的影响。方法:2月龄清洁级雄性SD大鼠36只,喂养1周后,随机分为空白组12只和造模组24只。造模组在第1,4,7天双膝关节腔注射0.2 mL质量分数为4%的木瓜蛋白酶。造模成功后,抽签法随机分为模型组和透骨消痛胶囊组,每组12只。透骨消痛胶囊组按照3.6 g·kg~(-1)·d~(-1)的剂量灌服透骨消痛胶囊,空白组、模型组给予等量生理盐水。12周后取关节软骨,采用Western blot技术检测关节软骨中Gαs、Gα(i)、Gα(pan)蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组Gαs、Gα(pan)表达量下降,Gα(i)表达量上升,差异有统计学意义(P〈0.01);与模型组比较,透骨消痛胶囊组Gαs、Gα(pan)表达量上升,Gα(i)表达量下降,差异有统计学意义(P〈0.01或P〈0.05)。结论:透骨消痛胶囊可能通过激活G蛋白偶联信号传导系统,延缓关节软骨的退变。 展开更多
关键词 骨关节炎 透骨消痛胶囊 G蛋白偶联信号传导系统 软骨退变
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细胞焦亡与关节炎的研究进展 预览
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作者 林晴 林炜 +4 位作者 付长龙 王文义 吴广文 郑春松 锦霞 《中医正骨》 2018年第11期43-47,共5页
细胞焦亡是一种新近发现并已证实的伴随炎症反应的程序性细胞死亡方式,其经典炎症小体途径由半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)介导,而caspase-1存在于大部分关节炎的滑膜组织中。越来越多的研究发现,细胞焦亡相关信号通路在关... 细胞焦亡是一种新近发现并已证实的伴随炎症反应的程序性细胞死亡方式,其经典炎症小体途径由半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)介导,而caspase-1存在于大部分关节炎的滑膜组织中。越来越多的研究发现,细胞焦亡相关信号通路在关节炎的发展过程中扮演着重要的角色,因而细胞焦亡可能会为治疗关节炎提供全新的药物靶点。苓文就细胞焦亡的特征和分子机制及与细胞焦亡相关的关节炎(骨关节炎、类风湿关节炎、强直性脊柱炎、痛风性关节炎)的研究进展进行了综述,以期为关节炎的治疗提供理论参考。 展开更多
关键词 骨关节炎 关节炎 类风湿 脊柱炎 强直性 关节炎 痛风性 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1 细胞焦亡 综述
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独活寄生汤含药血清对退变软骨细胞PERK/Bip通路关键调控蛋白的影响 预览
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作者 陈俊 许惠凤 +6 位作者 郑春松 锦霞 陈振沅 邱建清 刘淑如 刘献祥 吴广文 《福建中医药》 2018年第5期28-31,共4页
目的观察独活寄生汤含药血清对大鼠退变软骨细胞PERK/Bip信号通路关键调控蛋白的影响。方法采用IL-1β诱导建立体外退变软骨细胞模型,分别采用空白血清和独活寄生汤含药血清干预24 h、48 h、72h后,收集软骨细胞,采用Western Blot法检测... 目的观察独活寄生汤含药血清对大鼠退变软骨细胞PERK/Bip信号通路关键调控蛋白的影响。方法采用IL-1β诱导建立体外退变软骨细胞模型,分别采用空白血清和独活寄生汤含药血清干预24 h、48 h、72h后,收集软骨细胞,采用Western Blot法检测退变软骨细胞中PERK、Bip、eIF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达变化。结果随着干预时间的延长,空白血清组和含药血清组PERK、Bip、eIF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达均逐渐降低,含药血清组降低更明显,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论独活寄生汤可能是通过调控PERK/Bip信号通路,抑制软骨细胞凋亡,从而起到治疗膝骨关节炎的作用。 展开更多
关键词 骨关节炎 退变软骨细胞 PERK/Bip信号通路 独活寄生汤 含药血清 大鼠
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透骨消痛胶囊对毒胡萝卜素诱导的内质网应激(PEKR信号通路)介导的大鼠体外培养关节软骨细胞凋亡的影响 预览 被引量:3
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作者 锦霞 付长龙 +4 位作者 林洁 吴广文 郑春松 陈俊 蕻芝 《中医正骨》 2017年第6期1-7,共7页
目的:观察透骨消痛胶囊对毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)诱导的内质网应激(PEKR信号通路)介导的大鼠体外培养关节软骨细胞凋亡的影响。方法:采用4周龄SD大鼠膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,将培养的第3代软骨细胞分为空白组、... 目的:观察透骨消痛胶囊对毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)诱导的内质网应激(PEKR信号通路)介导的大鼠体外培养关节软骨细胞凋亡的影响。方法:采用4周龄SD大鼠膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,将培养的第3代软骨细胞分为空白组、模型组及透骨消痛胶囊高、中、低剂量组。空白组不进行干预;模型组及透骨消痛胶囊高、中、低剂量组先以2μmol·L^-1TG干预4 h,然后模型组更换为正常培养基,透骨消痛胶囊高、中、低剂量组分别更换为浓度为100μg·mL^-1、50μg·mL^-1、25μg·mL^-1的含透骨消痛胶囊培养基干预24 h。干预后以MTT法检测各组软骨细胞活性、以AnnexinⅤ-FITC/PI双染法流式细胞术检测各组软骨细胞凋亡率、以Western Blot法检测各组软骨细胞中激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)、结合免疫球蛋白(binding immunoglobulin protein,BIP)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶12(cysteine aspartate specific protease 12,Caspase12)和Caspase3的表达量。结果:(1)软骨细胞活性。5组软骨细胞吸光度比较,差异有统计学意义(0.428±0.009,0.226±0.028,0.345±0.025,0.301±0.035,0.269±0.033,F=39.462,P=0.000)。模型组吸光度低于空白组(P=0.000);透骨消痛胶囊高、中、低剂量组吸光度均高于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.022);透骨消痛胶囊中、低剂量组的吸光度均低于高剂量组(P=0.019,P=0.000);透骨消痛胶囊低剂量组与中剂量组比较,差异无统计学意义(P=0.085)。(2)软骨细胞凋亡率。5组软骨细胞凋亡率比较,差异有统计学意义[(3.270±0.231)%,(30.003±4.128)%,(12.383±0.933)%,(15.387±2.961)%,(20.143±3.472)%,F=37.560,P=0.000]。模型组软骨细胞凋亡率高于空白组(P=0.000);透骨消痛胶囊高、中、低剂量组软骨细胞凋亡率均低于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.001);透骨消痛胶囊低剂量组软骨细胞凋亡� 展开更多
关键词 骨关节炎 透骨消痛胶囊 软骨细胞 软骨 关节 凋亡 内质网应激 毒胡萝卜素 大鼠 动物实验
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巴戟天-牛膝醇提物对SD大鼠软骨细胞G_(1/S)周期蛋白与基因表达影响的实验研究 预览 被引量:1
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作者 吴子健 吴桂玲 +4 位作者 陈达婷 苏澜 陈春蓉 锦霞 洪振强 《风湿病与关节炎》 2017年第2期5-9,32共6页
目的:探究巴戟天-牛膝醇提物(M-AAE)对体外培养的SD大鼠软骨细胞G_(1/S)周期蛋白与m RNA含量表达的影响,为其防治骨关节炎的临床应用提供依据。方法:1用乙醇加热回流法获得其醇提物成分;采用机械-酶消化法分离SD大鼠膝关节处的关... 目的:探究巴戟天-牛膝醇提物(M-AAE)对体外培养的SD大鼠软骨细胞G_(1/S)周期蛋白与m RNA含量表达的影响,为其防治骨关节炎的临床应用提供依据。方法:1用乙醇加热回流法获得其醇提物成分;采用机械-酶消化法分离SD大鼠膝关节处的关节软骨,建立体外培养细胞模型并进行鉴定;2 MTT法检测M-AAE对软骨细胞增殖特性的影响,使用倒置相差显微镜镜下观察软骨细胞状态;3 PCR、Western blot法分别检测体外培养大鼠软骨细胞经M-AAE的0,75,150,300μg·m L~(-1) DMEM溶液干预48 h后的m RNA、蛋白含量的表达。结果:1软骨细胞经Ⅱ型胶原法染色后,阳性对照组胞浆区域浸染为棕黄色;2经MTT检测M-AAE对软骨细胞增殖具有一定的时效-量效关系,其最佳干预时间和浓度分别为48 h和150μg·m L~(-1);3 M-AAE干预软骨细胞后,各加药组细胞周期蛋白依赖性激酶-4(CDK4)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的m RNA与蛋白含量的表达量均明显高于0μg·m L~(-1)组,其中以150μg·m L~(-1)组的表达量最高(P〈0.01),75μg·m L~(-1)组和300μg·m L~(-1)组在CDK4及CyclinD1 m RNA上比较,其表达量差异无统计学意义(P〉0.05)。结论:M-AEE可上调CDK4、Cyclin D1m RNA及蛋白表达,对SD大鼠软骨细胞具有一定的促增殖作用。 展开更多
关键词 骨关节炎 巴戟天 牛膝 醇提物 软骨细胞 增殖 大鼠
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独活寄生汤对骨关节炎软骨退变的影响及其作用机制 预览 被引量:8
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作者 郑文伟 翁霞萍 +7 位作者 黄绥心 郑春松 锦霞 吴追乐 许惠凤 吴明霞 李西海 刘献祥 《中医正骨》 2017年第7期5-11,共7页
目的:探讨独活寄生汤对骨关节炎软骨退变的影响及其作用机制。方法:将45只8周龄雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、独活寄生汤组,每组15只。模型组、独活寄生汤组采用改良Hulth法建立膝骨关节炎大鼠模型,空白组不做任何处理。独活寄... 目的:探讨独活寄生汤对骨关节炎软骨退变的影响及其作用机制。方法:将45只8周龄雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、独活寄生汤组,每组15只。模型组、独活寄生汤组采用改良Hulth法建立膝骨关节炎大鼠模型,空白组不做任何处理。独活寄生汤组给予9.3 g·kg^-1的独活寄生汤水煎浓缩液进行灌胃,模型组和空白组给予等剂量生理盐水灌胃;每天灌胃1次,连续灌胃12周。末次灌胃后分别取各组大鼠双侧股骨髁,采用HE染色观察关节软骨组织形态,并采用Mankin's关节软骨组织学评分法评价软骨退变程度;采用Western blot法检测软骨中G蛋白偶联信号传导系统的关键调控因子的蛋白表达情况。分别从模型组和独活寄生汤组各取50 mg关节软骨组织,采用基因芯片检测软骨基质降解基因表达情况。结果:①软骨组织形态。空白组关节软骨结构层次清晰,潮线完整,软骨表面较为平滑;模型组关节软骨结构层次较为紊乱,未见潮线,表层软骨膜破损,膜样结构消失并呈丝绒样;独活寄生汤组关节软骨结构层次较为清晰,软骨破坏程度比模型组轻。②软骨退变程度。3组大鼠关节软骨的Mankin's组织学评分比较,差异有统计学意义[(3.46±2.04)分,(12.58±2.55)分,(7.75±1.91)分,F=13.114,P=0.006];空白组和独活寄生汤组低于模型组(t=-5.114,P=0.002;t=2.709,P=0.035);空白组与独活寄生汤组比较,差异无统计学意义(t=-2.406,P=0.053)。③药物干预后G蛋白偶联信号传导系统关键调控因子的蛋白表达。3组大鼠G蛋白偶联信号传导系统关键调控因子Gαs、Gαq、Gαo、Gαi蛋白表达量比较,组间差异均有统计学意义[(1.59±0.09)kDa,(1.01±0.04)kDa,(1.45±0.14)kDa,F=29.760,P=0.001;(1.03±0.06)kDa,(0.53±0.04)kDa,(0.75±0.09)kDa,F=14.969,P=0.027;(0.36±0.02)kDa,(0.11±0.01)kDa,(0.17±0.02)kDa,F=204.105,P=0.000;(0.20±0.02)kDa,� 展开更多
关键词 骨关节炎 独活寄生汤 软骨退变 G蛋白偶联信号通路 动物实验
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膝关节炎治疗仪对SNP诱导体外大鼠软骨细胞凋亡的影响 预览
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作者 林洁 付长龙 +2 位作者 锦霞 陈俊 吴广文 《风湿病与关节炎》 2017年第6期11-14,共4页
目的:观察膝关节炎治疗仪对硝普钠(SNP)诱导体外大鼠软骨细胞凋亡的影响。方法:采用膝关节炎治疗仪不同刺激强度干预1 m M SNP诱导第2代大鼠软骨细胞的凋亡模型,镜下观察软骨细胞形态,用噻唑蓝(MTT)法检测软骨细胞的活力,倒置荧... 目的:观察膝关节炎治疗仪对硝普钠(SNP)诱导体外大鼠软骨细胞凋亡的影响。方法:采用膝关节炎治疗仪不同刺激强度干预1 m M SNP诱导第2代大鼠软骨细胞的凋亡模型,镜下观察软骨细胞形态,用噻唑蓝(MTT)法检测软骨细胞的活力,倒置荧光显微镜观察细胞核形态及密度变化。结果:倒置相差显微镜下观察膝关节炎治疗仪能减少细胞凋亡,MTT发现4级干预强度抑制细胞凋亡效果最佳,4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察其能有效减轻软骨细胞核固缩。结论:膝关节炎治疗仪可能通过抑制软骨细胞凋亡从而达到防治骨关节炎的作用,但其具体抗凋亡途径有待进一步揭示。 展开更多
关键词 骨关节炎 膝关节炎治疗仪 软骨细胞 凋亡 大鼠
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乌头汤治疗寒湿痹阻型膝骨关节炎:与双氯芬酸钠的比较 预览 被引量:8
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作者 付长龙 梅阳阳 +6 位作者 锦霞 林洁 陈俊 李民 李西海 吴广文 郑春松 《风湿病与关节炎》 2017年第4期12-16,共5页
目的:观察乌头汤治疗寒湿痹阻型膝骨关节炎患者的功能康复疗效。方法:将60例寒湿痹阻型膝骨关节炎患者随机分为乌头汤组和扶他林组,每组30例。2组均给予健康教育。乌头汤组另给予乌头汤内服外洗。扶他林组另给予双氯芬酸钠肠溶片内服... 目的:观察乌头汤治疗寒湿痹阻型膝骨关节炎患者的功能康复疗效。方法:将60例寒湿痹阻型膝骨关节炎患者随机分为乌头汤组和扶他林组,每组30例。2组均给予健康教育。乌头汤组另给予乌头汤内服外洗。扶他林组另给予双氯芬酸钠肠溶片内服,双氯芬酸二乙胺乳胶剂外敷。经10 d、20 d治疗后,评价2组视觉模拟评分法(VAS)评分、关节活动度、Lysholm膝关节功能评分。结果:治疗后,2组VAS评分较治疗前均降低,关节活动度、Lysholm膝关节功能评分均升高,差异有统计学意义(P〈0.01);治疗10 d后,扶他林组VAS评分改善程度显著优于乌头汤组(P〈0.01);治疗20 d后,乌头汤组在改善关节活动度及Lysholm膝关节功能评分方面均优于扶他林组(P〈0.05或P〈0.01)。结论:乌头汤、扶他林均可缓解膝骨关节炎患者疼痛,改善膝关节功能障碍程度,提高关节活动度,促进患者功能恢复,其中乌头汤改善膝关节功能疗效较佳,对临床具有一定的参考价值。 展开更多
关键词 骨关节炎 乌头汤 扶他林 疼痛 关节活动度 Lysholm膝关节功能评分
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