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GhWRKY48负调控棉花对大丽轮枝菌的抗性 预览
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作者 刘建芬 雷煜 +5 位作者 张振楠 胡广 唐叶 张宁 怀 吴家和 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2019年第5期99-105,共7页
为了防治棉花黄萎病对棉花生产的危害,利用抗病基因培育抗病品种是最经济有效的方法。从陆地棉中克隆了1个WRKY转录因子基因,命名为GhWRKY48;其编码序列全长为882 bp,编码293个氨基酸残基,预测分子质量和等电点分别为32.68 ku和6.10。q... 为了防治棉花黄萎病对棉花生产的危害,利用抗病基因培育抗病品种是最经济有效的方法。从陆地棉中克隆了1个WRKY转录因子基因,命名为GhWRKY48;其编码序列全长为882 bp,编码293个氨基酸残基,预测分子质量和等电点分别为32.68 ku和6.10。qPCR组织特异性表达分析结果表明,GhWRKY48在根、茎和叶中均表达,而在茎中为优势表达;同时GhWRKY48表达受到大丽轮枝菌、茉莉酸和水杨酸的诱导。通过病毒诱导基因沉默技术获得GhWRKY48基因沉默植株。对基因沉默植株接种大丽轮枝菌进行抗病性分析,结果显示,沉默植株的病株率和病指均低于对照植株,表明沉默GhWRKY48基因能够提高棉株抗病性。综上所述,GhWRKY48是一个负调控转录因子,抑制下游抗病基因的表达,从而参与棉花对大丽轮枝菌的抗性;因此,GhWRKY48基因可以作为一个理想的候选基因用于棉花的抗病育种。 展开更多
关键词 棉花 GhWRKY48基因 基因沉默 大丽轮枝菌 抗病性
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靶向马铃薯StProDH1基因的CRISPR/Cas9 sgRNA表达载体构建
2
作者 李世贵 杨江伟 +3 位作者 朱熙 王树林 张宁 怀 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期841-845,共5页
CRISPR/Cas9基因编辑系统已成为许多作物基因功能研究和品种改良的重要工具。脯氨酸(Pro)在植物响应干旱胁迫方面起着重要作用,脯氨酸脱氢酶ProDH是脯氨酸分解途径中的限速酶。为了研究StProDH1在马铃薯脯氨酸代谢中的作用,本研究以StPr... CRISPR/Cas9基因编辑系统已成为许多作物基因功能研究和品种改良的重要工具。脯氨酸(Pro)在植物响应干旱胁迫方面起着重要作用,脯氨酸脱氢酶ProDH是脯氨酸分解途径中的限速酶。为了研究StProDH1在马铃薯脯氨酸代谢中的作用,本研究以StProDH1为靶基因,构建了表达马铃薯脯氨酸脱氢酶g RNA的CRISPR/Cas9基因敲除系统,在StProDH1基因5’端第一个外显子上为靶标区域选择设计sgRNA,以p P1C.4为模板,克隆得到sgRNA克隆框,将得到的sgRNA克隆框通过同源重组技术连接到pP1C.4载体中,获得pP1C.4-Cas9-ProDH1-g RNA载体。通过设计引物特异性扩增以及测序进一步确定sgRNA准确地连入载体,这对马铃薯中脯氨酸累积及其培育抗旱马铃薯新品种具有重要意义。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9基因编辑系统 马铃薯 ProDH1 载体构建
马铃薯StmiR166b靶基因的鉴定及其表达分析
3
作者 武亮亮 张宁 +4 位作者 朱熙 马瑞 唐勋 杨江伟 怀 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1333-1343,共11页
为阐明马铃薯(Solanum tuberosum L.)StmiR166b的生物学功能,以栽培品种‘甘农薯2号’试管苗为试验材料,采用定量PCR技术检测StmiR166b及其靶基因StHB14、StHB15在不同组织中的差异表达;利用pRS300质粒为模板,通过over-lapping PCR技术... 为阐明马铃薯(Solanum tuberosum L.)StmiR166b的生物学功能,以栽培品种‘甘农薯2号’试管苗为试验材料,采用定量PCR技术检测StmiR166b及其靶基因StHB14、StHB15在不同组织中的差异表达;利用pRS300质粒为模板,通过over-lapping PCR技术克隆了包含StmiR166b-StmiR166b^*成熟体序列的前体结构,构建了其人工表达载体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法转化马铃薯获得了转基因植株。结果表明,StmiR166b及其靶基因StHB14和StHB15在马铃薯根、茎和叶中均有表达,在转基因株系L1、L3中靶基因不同程度地下调表达;与非转基因对照相比,转基因株系的株高和根长变短,生长受到抑制。 展开更多
关键词 马铃薯 StmiR166b StHB14 StHB15 表达载体
马铃薯海藻糖酶基因人工miRNA载体的构建
4
作者 王周霞 罗红玉 +7 位作者 张欢欢 朱熙 刘雪 李世贵 王树林 杨江伟 张宁 怀 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第15期5010-5015,共6页
Microcosmic (miRNAs)是一类具有调控功能的内源性单链非编码小分子RNA,通过在转录后水平与靶基因互补结合来调控靶基因的表达。海藻糖是一种广泛存在于植物体内的渗透调节性物质,其在植物响应干旱胁迫中发挥着非常重要的作用。本研究... Microcosmic (miRNAs)是一类具有调控功能的内源性单链非编码小分子RNA,通过在转录后水平与靶基因互补结合来调控靶基因的表达。海藻糖是一种广泛存在于植物体内的渗透调节性物质,其在植物响应干旱胁迫中发挥着非常重要的作用。本研究利用人工miRNA技术(artificial microRNA, amiRNA)设计特异性沉默马铃薯海藻糖基因(StTRE)的人工miRNA (amiR-StTRE),并利用巢式PCR技术克隆得到包含amiRTRE前体序列的701 bp目的片段。然后将获得的DNA片段(701 bp)与表达载体pCPB121通过双酶切和质粒重组法构建StTRE基因amiRNA表达载体(pCPB121-amiR-StTRE),并经过双酶切图谱分析和测序检测,成功构建了表达载体pCPB121-amiR-StTRE。以期有目的地利用amiRNA进行马铃薯的抗旱性遗传改良提供分子理论依据。 展开更多
关键词 马铃薯(Solanum TUBEROSUM L.) 海藻糖酶基因 人工microRNA技术 干旱胁迫
酵母双杂交系统筛选马铃薯StLURP1基因的互作蛋白
5
作者 房宸曦 车妍 +3 位作者 廖钰秋 王一凡 张宁 怀 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期972-981,共10页
寄生霜霉菌响应迟发上调基因1(late up-regulated in response to Hyaloperonospora parasitica 1, LURP1)在植物抵御致病菌寄生霜霉菌(Hyaloperonospora parasitica, Hp)的反应和抗逆中起到关键作用。为了阐明马铃薯(Solanum tuberosum... 寄生霜霉菌响应迟发上调基因1(late up-regulated in response to Hyaloperonospora parasitica 1, LURP1)在植物抵御致病菌寄生霜霉菌(Hyaloperonospora parasitica, Hp)的反应和抗逆中起到关键作用。为了阐明马铃薯(Solanum tuberosum)LURP1基因的生物学功能并明确其在蛋白互作网络中的作用,本研究利用同源重组的定向克隆方式构建了其诱饵载体pGBKT7-StLURP1,并通过酵母(Saccharomyces cerevisiae)双杂交系统筛选马铃薯cDNA文库。结果表明,双杂筛选的阳性率约为70%,最终获得88个阳性克隆,经测序鉴定出12种含完整开放阅读框的StLURP1互作蛋白,互作的真实性通过回转实验进行验证。对互作蛋白进行Blast比对和基因本体注释(Gene Ontology, GO)分析,结果显示,StLURP1与甘油磷酸二酯酶、富脯氨酸蛋白、多酚氧化酶、肌动蛋白解聚因子、重金属离子转运蛋白及DnaJ家族蛋白等多种蛋白相互作用,可能参与植物脂类代谢、生物与非生物胁迫响应、肌动蛋白解聚、重金属离子解毒及蛋白质折叠等生物过程。本研究为进一步研究StLURP1基因的生物学功能与作用提供了理论依据。 展开更多
关键词 马铃薯 寄生霜霉菌响应迟发上调基因1(LURP1) 酵母双杂交 诱饵载体 互作蛋白
生物技术专业综合改革与探索 预览
6
作者 杨德龙 张宁 +3 位作者 栗孟飞 魏小红 李葆春 怀 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期115-117,共3页
生物技术专业在全国高等院校开设范围广,办学规模较大,人才培养质量与社会需求矛盾突出。在此背景下,如何做好以社会需求为导向,提升人才培养质量,成为生物技术专业高等教育亟待解决的问题。本校生物技术专业在20多年的办学过程中,不断... 生物技术专业在全国高等院校开设范围广,办学规模较大,人才培养质量与社会需求矛盾突出。在此背景下,如何做好以社会需求为导向,提升人才培养质量,成为生物技术专业高等教育亟待解决的问题。本校生物技术专业在20多年的办学过程中,不断进行探索和创新,结合生物技术专业本科教学质量国家标准和办学实际,逐渐形成了以区域农业生物技术为特色的本科人才培养体系,实施“大类招生、模块化培养”的人才培养新模式,优化人才培养方案,强化教学综合改革,以满足人才的个性化和创新型培养,更好地适应社会多元化需求。 展开更多
关键词 生物技术 本科教学 人才培养方案 专业综合改革
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生物技术专业基因工程课程教学改革与实践 预览
7
作者 杨江伟 张宁 +4 位作者 唐勋 王丽 罗攀 周香艳 怀 《陇东学院学报》 2019年第5期113-117,共5页
基因工程是一门对生物技术和生物工程专业学生非常重要的课程,主要包括基因工程操作原理和基因工程实践两部分内容。它不仅为生命科学理论创新提供技术基础,也为基因工程相关领域产业的发展提供了理论指导。就生物技术专业大学生培养而... 基因工程是一门对生物技术和生物工程专业学生非常重要的课程,主要包括基因工程操作原理和基因工程实践两部分内容。它不仅为生命科学理论创新提供技术基础,也为基因工程相关领域产业的发展提供了理论指导。就生物技术专业大学生培养而言,基因工程课程的教学改革势在必行。结合甘肃农业大学基因工程教学实践,就本课程的教学内容、教学方法、实践教学以及科研促教学方面进行了改革探索。实践证明:通过改革可以活跃课堂气氛,激发学生求知的欲望和学习的兴趣,能够达到提高教学质量的目的。培养既能考研继续深造学习,又能迅速对接社会实践生产的生物技术专业人才。 展开更多
关键词 基因工程 教学改革 生物技术专业 人才培养
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马铃薯脱落酸受体StPYR1基因生物信息学分析及过表达载体构建
8
作者 赵仕荣 杨江伟 +4 位作者 唐勋 张宁 文义凯 周香艳 怀 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2018年第22期7309-7314,共6页
以马铃薯基因数据库中基因ID为PGSC0003DMT400005378 (落酸受体PYR1基因)的核苷酸序列作为原始序列,用在线比对软件NCBI进行Blast比对其在拟南芥、番茄、烟草等物种中同源序列,以同源性为100%的核苷酸序列(GenBank accession No. XM... 以马铃薯基因数据库中基因ID为PGSC0003DMT400005378 (落酸受体PYR1基因)的核苷酸序列作为原始序列,用在线比对软件NCBI进行Blast比对其在拟南芥、番茄、烟草等物种中同源序列,以同源性为100%的核苷酸序列(GenBank accession No. XM_006361126.2)进行生物信息学分析,并作为模板序列设计引物,以马铃薯栽培品种‘陇薯3号’无菌试管薯为实验材料,用RT-PCR的方法获得StPYR1基因的cDNA序列,构建了其过表达载体pCPB-StPYR1,取得的结果可为研究StPYR1基因在马铃薯块茎休眠调控中的作用提供基础。 展开更多
关键词 脱落酸 PYR1基因 马铃薯 休眠 表达载体
amiRNA技术沉默C-3氧化酶编码基因StCPD对马铃薯抗旱性的影响 预览
9
作者 周香艳 杨江伟 +3 位作者 唐勋 文义凯 张宁 怀 《作物学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期512-521,共10页
CPD(constitutive photomorphogenesis and dwarf)基因编码C-3氧化酶,为油菜素内酯(brassinosteroid,BR)生物合成途径中的限速酶,在植物响应逆境胁迫过程中具重要调控作用。本研究利用人工microRNA(artificial microRNA,amiRNA)技术,构... CPD(constitutive photomorphogenesis and dwarf)基因编码C-3氧化酶,为油菜素内酯(brassinosteroid,BR)生物合成途径中的限速酶,在植物响应逆境胁迫过程中具重要调控作用。本研究利用人工microRNA(artificial microRNA,amiRNA)技术,构建马铃薯CPD基因(StCPD)的干扰表达载体pCPB121-amiRcpd,通过根癌农杆菌介导法将其转入马铃薯栽培品种“紫花白”,获得转基因植株(Ci1~Ci5),其中Ci1和Ci3的StCPD基因干扰程度分别为78%和90%。基因组织表达特异性分析表明,StCPD在马铃薯试管苗叶片中表达量最高,是茎和根中表达量的3.05倍和1.65倍。转基因植株株高、茎粗、根长、鲜重及薯的大小和鲜重等指标均较非转基因(NT)植株显著下降,表明StCPD基因干扰表达后,植株的长势明显受到抑制。模拟干旱胁迫处理下,转基因植株叶片中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量显著高于NT植株,而脯氨酸含量显著低于NT植株。转基因和NT马铃薯中,StCPD基因的表达量、MDA和脯氨酸含量均显著高于对照;且随着胁迫处理时间延长,基因表达量呈持续增强趋势,MDA和脯氨酸含量随之增加。结果表明,StCPD基因干扰表达能明显降低马铃薯对干旱胁迫的抵抗能力,为进一步研究BR对马铃薯生长发育和对干旱胁迫的响应奠定了基础 展开更多
关键词 马铃薯 油菜素内酯 StCPD基因 RNA干扰 干旱胁迫
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马铃薯StERF5转录因子酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定
10
作者 徐萍萍 房宸曦 +3 位作者 梁丽娜 王亚鹏 张宁 怀 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2018年第19期6308-6313,共6页
为了筛选与马铃薯StERF5转录因子相互作用的宿主蛋白,构建其诱饵载体,本研究利用PCR方法扩增得到马铃薯StERF5基因的编码序列,克隆至载体pMD18-T,验证正确后插入到酵母双杂交系统诱饵表达载体pGBKT7,经双酶切、PCR反应及测序验证其正确... 为了筛选与马铃薯StERF5转录因子相互作用的宿主蛋白,构建其诱饵载体,本研究利用PCR方法扩增得到马铃薯StERF5基因的编码序列,克隆至载体pMD18-T,验证正确后插入到酵母双杂交系统诱饵表达载体pGBKT7,经双酶切、PCR反应及测序验证其正确后,利用PEG/LiAc法将构建好的重组诱饵载体pGBKT7-StERF5及空载体pGBKT7分别转化到酵母Y2HGlod感受态细胞中,检测其对酵母菌株是否有毒性作用和自激活活性。结果表明:扩增得到StERF5基因,成功构建了诱饵表达载体pGBKT7-StERF5,此诱饵载体对酵母宿主细胞无毒性且不具自主激活报告基因的功能。研究结果可为进一步利用酵母双杂交技术筛选与ERF5基因互作的宿主蛋白及功能研究提供科学依据。 展开更多
关键词 马铃薯 ERF5基因 诱饵载体 酵母双杂交
马铃薯StRFP2基因克隆及其生物信息学分析
11
作者 唐勋 怀 张宁 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2018年第9期2761-2767,共7页
RING型泛素连接酶(RING finger protein,RFP)在植物响应非生物胁迫中有着重要作用。本研究在马铃薯干旱胁迫相关转录组测序的基础上,利用RT-PCR技术从马铃薯栽培品种"大西洋"和"青薯9号"中克隆得到StRFP2基因,并对该基因进行生物... RING型泛素连接酶(RING finger protein,RFP)在植物响应非生物胁迫中有着重要作用。本研究在马铃薯干旱胁迫相关转录组测序的基础上,利用RT-PCR技术从马铃薯栽培品种"大西洋"和"青薯9号"中克隆得到StRFP2基因,并对该基因进行生物信息学分析。结果表明,该基因CDS为1 113 bp,且为连续基因,编码一个370个氨基酸的蛋白质。StRFP2蛋白不含信号肽序列,主要分布在线粒体;StRFP2蛋白含有典型的RING-H2保守结构域,并且"大西洋"和"青薯9号"的RING-H2保守结构域均未发生突变。栽培品种"大西洋"和"青薯9号"StRFP2 CDS序列高度同源,同源性达到98.20%;氨基酸序列进化分析表明StRFP2与野生番茄和番茄的亲缘关系最近。空间三维结构分析发现"大西洋"和"青薯9号"StRFP2均具有两个Zn^2+,但其折叠方式存在一定差异。 展开更多
关键词 马铃薯 StRFP2 基因克隆 生物信息学分析
干旱胁迫对马铃薯叶片生理生化指标的影响 被引量:4
12
作者 梁丽娜 刘雪 +3 位作者 唐勋 文义凯 怀 张宁 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第3期1343-1348,共6页
为了验证干旱是限制植物生长发育的最主要因素之一。本研究通过控制土壤含水量的方法,对马铃薯栽培品种“紫花白”进行4d、8d、12d和16d的干旱胁迫,测定了马铃薯叶片在不同胁迫处理下总蛋白质、脯氨酸(Pro)、丙二醛(MDA)以及3种... 为了验证干旱是限制植物生长发育的最主要因素之一。本研究通过控制土壤含水量的方法,对马铃薯栽培品种“紫花白”进行4d、8d、12d和16d的干旱胁迫,测定了马铃薯叶片在不同胁迫处理下总蛋白质、脯氨酸(Pro)、丙二醛(MDA)以及3种抗氧化保护酶:过氧化物酶(POD)、总超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)共6个生理生化指标的变化。结果表明,随着干旱胁迫时间的延长,Pro、MDA的含量显著增加,与对照相比增加幅度分别达到378.99%、630.51%;SOD和CAT的活性呈明显的上升趋势,上升幅度分别为121.24%和212.17%;POD活性在胁迫8d之后开始上升;而总蛋白的含量减少。研究结果说明马铃薯通过一系列的生理生化的变化抵御干旱胁迫,可为马铃薯抗旱研究提供参考。 展开更多
关键词 马铃薯 叶片 干旱胁迫 生理生化指标
酶工程课程教学改革与实践 预览 被引量:1
13
作者 周香艳 张宁 +3 位作者 王翠玲 王旺田 吴兵 怀 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期119-121,共3页
酶工程是一门理论性和应用性很强的学科。为适应酶制剂产业快速发展的需要,培养出高素质的创新型专业人才,酶工程课程教学改革势在必行。以教学方法与手段的改革为核心,以提高酶工程课程教学质量与效果,提升学生的综合素质和创新能... 酶工程是一门理论性和应用性很强的学科。为适应酶制剂产业快速发展的需要,培养出高素质的创新型专业人才,酶工程课程教学改革势在必行。以教学方法与手段的改革为核心,以提高酶工程课程教学质量与效果,提升学生的综合素质和创新能力为目标,对酶工程课程教学方法进行了探索和总结,以期为酶工程教学体系建设提供借鉴和参考。 展开更多
关键词 酶工程 教学改革 创新能力
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棉花WRKY22基因分离及其对黄萎病的抗性分析 预览
14
作者 雷煜 张振楠 +5 位作者 胡广 刘建芬 唐叶 张宁 怀 吴家和 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期160-168,共9页
为了克隆棉花抗黄萎病相关基因,利用生物信息学、病毒诱导基因沉默技术(VIGS)、实时定量PCR(qPCR)和接菌分析来研究棉花WRKY基因对大丽轮枝菌的诱导响应和抗性。结果从棉花中筛选出8个与拟南芥直系同源的棉花抗病相关WRKY基因,这些直系... 为了克隆棉花抗黄萎病相关基因,利用生物信息学、病毒诱导基因沉默技术(VIGS)、实时定量PCR(qPCR)和接菌分析来研究棉花WRKY基因对大丽轮枝菌的诱导响应和抗性。结果从棉花中筛选出8个与拟南芥直系同源的棉花抗病相关WRKY基因,这些直系同源WRKY基因表达受到大丽轮枝菌浸染诱导响应。其中有6个GhWRKY基因的表达均受到大丽轮枝菌诱导上调,而GhWRKY70和GhWRKY48的表达量随着不同的时间点呈现上调或下调。GhWRKY22等5个基因表达量在24,72h分别表现为上调,呈现出双峰曲线。对GhWRKY22表达特征进一步分析,结果显示,GhWRKY22基因在茎里优势表达,同时表达受到大丽轮枝菌、水杨酸和茉莉酸激素的诱导。GhWRKY22基因沉默植株对大丽轮枝菌的敏感性增加,抗病标志基因(PR1、PR3、PR4、PR5、PAL和PDF1.2)表达量也显著降低,揭示GhWRKY22是通过SA和JA信号途径参与棉花对大丽轮枝菌的响应过程。总之,棉花中8个WRKY基因参与棉花对黄萎病抗性调控,其中GhWRKY22基因正调控棉花的抗性,可作为棉花抗病育种的候选基因。 展开更多
关键词 棉花 GhWRKY22 抗病 大丽轮枝菌 基因沉默
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基于科研项目驱动的生物技术专业科研训练实践教学探索 预览
15
作者 王丽 怀 +2 位作者 杨江伟 文义凯 罗攀 《陇东学院学报》 2018年第5期103-106,共4页
针对农业高校生物技术专业本科生专业素质较低的问题,以甘肃农业大学生物技术专业为例,提出基于大学生科研项目驱动的生物技术专业实践教学模式,即结合本科生导师制,以学生为主体,基于教师科研项目驱动进行实践教学,建立大学生“... 针对农业高校生物技术专业本科生专业素质较低的问题,以甘肃农业大学生物技术专业为例,提出基于大学生科研项目驱动的生物技术专业实践教学模式,即结合本科生导师制,以学生为主体,基于教师科研项目驱动进行实践教学,建立大学生“项目申请→项目实施→项目中期检查→项目结题报告撰写及答辩”的大学生科研训练综合评价机制。教学实践证明,该模式对提高农业院校学生专业素质具有良好效果。 展开更多
关键词 生物技术专业 大学生科研训练 实践教学
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生物技术本科专业人才培养模式综合改革——以甘肃农业大学为例 预览 被引量:2
16
作者 怀 杨德龙 +2 位作者 张宁 李葆春 曹友桂 《高校生物学教学研究(电子版)》 2017年第3期39-42,共4页
本文介绍了甘肃农业大学生命科学技术学院自2015年起,根据生物技术产业发展现状和经济社会发展对生物技术人才的需求,以提升生物技术专业人才的实践创新能力和就业为重点,进行了生物技术本科专业人才培养模式的综合改革措施将生物技术(... 本文介绍了甘肃农业大学生命科学技术学院自2015年起,根据生物技术产业发展现状和经济社会发展对生物技术人才的需求,以提升生物技术专业人才的实践创新能力和就业为重点,进行了生物技术本科专业人才培养模式的综合改革措施将生物技术(植物)、生物技术(动物)、生物技术(生物制品)生物技术(生物质能)四个专业方向的四套人才培养方案整合为一套人才培养方案。通过实践与探索,发现实施“大类招生,模块化培养”的人才培养模式,更加适合培养具有扎实基础理论知识、较强实践创新能力的复合型人才。 展开更多
关键词 生物技术 人才培养 模块化 改革
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马铃薯StNCED1基因过表达载体的构建及其遗传转化 被引量:3
17
作者 马瑞 张宁 +4 位作者 杨江伟 朱熙 姚磊 武亮亮 怀 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期174-179,共6页
马铃薯块茎的休眠和发芽对于块茎生产和加工极为重要,延长块茎休眠期有助于降低块茎水分和养分的消耗,从而提高其应用价值。本研究用PCR方法从马铃薯中克隆了9-顺式-环氧类胡萝卜素双氧合酶(NCED)编码基因St NCED1,并构建了马铃薯块... 马铃薯块茎的休眠和发芽对于块茎生产和加工极为重要,延长块茎休眠期有助于降低块茎水分和养分的消耗,从而提高其应用价值。本研究用PCR方法从马铃薯中克隆了9-顺式-环氧类胡萝卜素双氧合酶(NCED)编码基因St NCED1,并构建了马铃薯块茎特异表达启动子CIPP驱动的St NCED1基因的植物过表达载体p BIC-St NCED1,然后通过根癌农杆菌介导法转化马铃薯栽培品种"陇薯3号"获得转化植株,经卡那霉素抗性筛选得到5株抗性苗,PCR检测证明St NCED1基因已整合到马铃薯的基因组中。qRT-PCR检测表明St NCED1基因在转基因植株试管薯中的表达量分别比未转基因的对照增加2.10~8.09倍。该研究有助于培育块茎休眠期延长的马铃薯新种质。 展开更多
关键词 NCED基因 植物表达载体 马铃薯 块茎 休眠期
马铃薯块茎休眠解除过程中CAT酶活性变化及其编码基因的生物信息学分析
18
作者 姬祥卓 闫好禄 +5 位作者 唐勋 刘雪 梁丽娜 杨江伟 张宁 怀 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2017年第12期4825-4829,共5页
以马铃薯栽培品种"克新4号"为试验材料,测定了在马铃薯块茎休眠解除过程中H2O2含量、CAT活性和CAT基因的相对表达量,并对CAT基因及其编码的蛋白质进行生物信息学分析。结果表明:马铃薯块茎中的H2O2含量和CAT活性变化与CAT1基因表达... 以马铃薯栽培品种"克新4号"为试验材料,测定了在马铃薯块茎休眠解除过程中H2O2含量、CAT活性和CAT基因的相对表达量,并对CAT基因及其编码的蛋白质进行生物信息学分析。结果表明:马铃薯块茎中的H2O2含量和CAT活性变化与CAT1基因表达量变化的趋势相同,均在收获后第40 d达到最大值。马铃薯CAT1的CDS区长1 479 bp,编码492个氨基酸,是一种亲水性蛋白,有12个磷酸化位点,其与番茄CAT同源性高达99%。研究结果为阐明CAT在马铃薯块茎休眠解除过程中的作用提供了基础。 展开更多
关键词 马铃薯 块茎 CAT 休眠 生物信息学分析
马铃薯块茎休眠解除过程中NOX酶活性变化及其蛋白质结构分析
19
作者 闫好禄 姬祥卓 +4 位作者 文义凯 唐勋 张彩霞 怀 张宁 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2017年第12期4830-4834,共5页
本研究测定了马铃薯块茎休眠解除过程中NADPH氧化酶(NADPH oxidase,NOX)的酶活性,用q RT-PCR方法检测了马铃薯St NOXs基因在块茎休眠解除过程中的相对表达量,并利用生物信息学方法分析了St NOX3基因编码蛋白质的可能结构和功能。情况... 本研究测定了马铃薯块茎休眠解除过程中NADPH氧化酶(NADPH oxidase,NOX)的酶活性,用q RT-PCR方法检测了马铃薯St NOXs基因在块茎休眠解除过程中的相对表达量,并利用生物信息学方法分析了St NOX3基因编码蛋白质的可能结构和功能。情况表明:马铃薯块茎休眠解除过程中NOX酶活性呈升-降-升-降的动态变化过程;q RT-PCR情况显示St NOX3基因的相对表达量与NOX酶活性呈相同的变化趋势;生物信息学分析表明该基因编码940个氨基酸,蛋白质相对分子量为106 004.79,等电点为8.76。研究情况为进一步阐明St NOX基因家族在马铃薯块茎休眠解除过程中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 马铃薯 块茎休眠 NOX基因 蛋白质结构
棉花冠菌素不敏感因子GhCOI1基因分离和对大丽轮枝菌的抗性分析 预览 被引量:1
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作者 范强 王乐 +3 位作者 谢彩玲 张宁 怀 吴家和 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第1期29-35,共7页
为了解决黄萎病对棉花的危害,利用基因工程技术培育抗病棉花品种是当前育种的主要目标。从棉花中克隆了一个黄萎病抗性基因GhCOI1,其编码冠菌素不敏感因子。GhCOI1基因序列全长2 213 bp,编码一个600氨基酸的多肽,分子量为68 k Da,等电点... 为了解决黄萎病对棉花的危害,利用基因工程技术培育抗病棉花品种是当前育种的主要目标。从棉花中克隆了一个黄萎病抗性基因GhCOI1,其编码冠菌素不敏感因子。GhCOI1基因序列全长2 213 bp,编码一个600氨基酸的多肽,分子量为68 k Da,等电点p I是7.06。GhCOI1含有典型的F-box和LRR结构域。组织表达分析表明,该基因在根器官优势表达,并且其表达受到大丽轮枝菌浸染诱导。利用病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)技术,抑制了GhCOI1基因在棉花植株中的表达;通过大丽轮枝菌接菌分析表明,GhCOI1基因沉默能够引起植株的抗性下降,发病加重。研究结果表明GhCOI1参与棉花对大丽轮枝菌抗性调控,因此,其可以作为棉花抗病育种的候选基因。 展开更多
关键词 棉花 GhCOI1基因 大丽轮枝菌 抗病性 基因沉默
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