期刊文献+
共找到1,453篇文章
< 1 2 73 >
每页显示 20 50 100
实践教学中被动参与型教师教学目的实现路径 预览
1
作者 《秘书之友》 2019年第2期33-35,共3页
在国家经济社会发展进入新阶段的大背景下,我们面临着创新驱动发展战略的实施、战略性新兴产业的发展、传统产业的转型升级和区域经济的发展等诸多问题,这些问题的更好解决,离不开科技和人才的支撑。
关键词 教学目的 实践教学 参与型 路径 教师 经济社会发展 创新驱动 新兴产业
在线阅读 下载PDF
高校卓越工程师培养实践性教学研究--以《建筑给水排水工程》为例 预览
2
作者 李伟英 +1 位作者 张杰 朱虹 《教育教学论坛》 2019年第8期179-181,共3页
以培养复合应用型技术人才为主要目标的高校卓越工程师教育培养计划2.0版是我国教育领域推行的重大改革项目。《建筑给水排水工程》为给水排水科学与工程专业的核心课程之一,具有多学科内容融合、实践性强、设计规范规程更新快等特点,因... 以培养复合应用型技术人才为主要目标的高校卓越工程师教育培养计划2.0版是我国教育领域推行的重大改革项目。《建筑给水排水工程》为给水排水科学与工程专业的核心课程之一,具有多学科内容融合、实践性强、设计规范规程更新快等特点,因此,需要对本课程的教学内容与教学方式进行相应的改革,以期培养适应当今经济社会发展需要的创新能力强的工程技术人才。本文遵循卓越工程师教育培养计划,总结近二十年的《建筑给水排水工程》课程教授内容与教学方法的改革成果,提出了实践性案例讲授与校企合作方式,激发同学们对课堂知识点的参与和互动,强化培养学生的工程实践能力。 展开更多
关键词 卓越工程师 建筑给水排水工程 课程改革 实践性教学
在线阅读 下载PDF
心可舒片联合瑞舒伐他汀治疗不稳定型心绞痛的临床疗效观察
3
作者 邰炜彦 王璟 +1 位作者 肖文良 《中西医结合心脑血管病杂志》 2019年第1期118-120,共3页
目的观察心可舒片联合瑞舒伐他汀治疗不稳定型心绞痛的临床疗效。方法 选取我院2016年1月-2016年10月收治的不稳定型心绞痛病人80例,将其随机分为观察组和对照组,每组40例。在常规治疗基础上,对照组采用瑞舒伐他汀治疗,观察组采用心可... 目的观察心可舒片联合瑞舒伐他汀治疗不稳定型心绞痛的临床疗效。方法 选取我院2016年1月-2016年10月收治的不稳定型心绞痛病人80例,将其随机分为观察组和对照组,每组40例。在常规治疗基础上,对照组采用瑞舒伐他汀治疗,观察组采用心可舒片联合瑞舒伐他汀治疗。比较两组临床疗效,观察两组治疗前后血清同型半胱氨酸(Hcy)、超敏C反应蛋白(hsCRP)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)变化。结果观察组临床疗效总有效率高于对照组(95.0%与87.5%,P<0.05);治疗后观察组TC、TG、LDLC及血清Hcy、hsCRP水平低于对照组,HDLC高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗后心绞痛发作频率低于对照组,心绞痛持续时间少于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论心可舒片联合瑞舒伐他汀治疗不稳定心绞痛,可有效改善病人心绞痛发作频率、发作时间,降低血脂水平。 展开更多
关键词 不稳定型心绞痛 心可舒片 血脂 同型半胱氨酸 超敏C反应蛋白
在线阅读 免费下载
儒家传统文化中关于现代社会治理研究 预览
4
作者 《戏剧之家》 2019年第5期206-207,共2页
改革开放四十周年,社会生活变化显著,一方面经济持续中高速发展,人民的生活水平不断上升;另一方面,随着经济的发展,贫富差距问题凸显,道德沦丧、社会不公正等问题正侵蚀日常生活。面对此,溯洄从之,反思和重塑中国儒家传统文化,走出他国... 改革开放四十周年,社会生活变化显著,一方面经济持续中高速发展,人民的生活水平不断上升;另一方面,随着经济的发展,贫富差距问题凸显,道德沦丧、社会不公正等问题正侵蚀日常生活。面对此,溯洄从之,反思和重塑中国儒家传统文化,走出他国社会治理死角,发挥儒家社会治理功能来探寻解决治理困境的全新出路,探索一条适应当代中国当前具体国情和社会发展理念的新社会治理方式是当代中国社会治理的主要着力点。 展开更多
关键词 儒家文化 社会治理
在线阅读 下载PDF
耐药结核分枝杆菌与耐药基因突变的相关性分析 预览
5
作者 孔伟伟 邢应如 +5 位作者 胡万发 胡东 于莉 汪旻旻 黄升海 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第2期329-332,共4页
探讨结核患者结核分枝杆菌(MTB)耐药性与基因突变情况。68例临床分离菌株采用罗氏药敏实验检测MTB对利福平(RFP)、异烟肼(INH)、链霉素(SM)、吡嗪酰胺(PZA)和乙胺丁醇(EMB)的耐药情况,采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)检... 探讨结核患者结核分枝杆菌(MTB)耐药性与基因突变情况。68例临床分离菌株采用罗氏药敏实验检测MTB对利福平(RFP)、异烟肼(INH)、链霉素(SM)、吡嗪酰胺(PZA)和乙胺丁醇(EMB)的耐药情况,采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)检测MTB临床分离株耐利福平(rpo B)、异烟肼(kat G)、链霉素(rps L)、吡嗪酰胺(pnc A)、乙胺丁醇(emb B)基因突变率,5种耐药基因突变率依次为78. 2%、69. 8%、72. 2%、43. 8%、31. 4%,其中高耐株基因突变率分别为92. 1%、80. 0%、87. 5%、72. 0%、45. 5%。低耐株分别为47. 1%、25. 0%、28. 5%、13. 0%、7. 7%。MTB耐药基因突变与耐药水平密切相关,PCR-SSCP法检测结核分枝杆菌rpo B、kat G、rps L、pnc A和emb B基因突变快速、敏感、特异。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 药敏实验 聚合酶链反应-单链构像多态性
在线阅读 下载PDF
卵巢癌合并2型糖尿病发生的危险因素分析 预览
6
作者 林斯婕 +1 位作者 覃桓 余立萍 《医学信息》 2019年第5期124-125,共2页
目的研究卵巢癌合并2型糖尿病的危险因素。方法选择2010年1月~2017年12月我院住院病历中出院诊断为卵巢癌合并2型糖尿病,经病理确诊的21例患者设病例组,另选择未合并糖尿病的卵巢癌患者47例设为对照组,收集患者临床资料,包括一般情况、... 目的研究卵巢癌合并2型糖尿病的危险因素。方法选择2010年1月~2017年12月我院住院病历中出院诊断为卵巢癌合并2型糖尿病,经病理确诊的21例患者设病例组,另选择未合并糖尿病的卵巢癌患者47例设为对照组,收集患者临床资料,包括一般情况、生育史、月经史、避孕史、家族史和既往史等,并采用非条件Logistic回归分析。结果单因素分析显示,高血压、盆腔囊肿和高脂血症等是卵巢癌合并2型糖尿病的危险因素。多因素分析显示与卵巢癌合并2型糖尿病发生显著关联的是盆腔囊肿和高脂血症,OR值分别为8.536(95%CI1.386~52.556)、5.346(95%CI,1.069~26.738)。结论卵巢癌合并2型糖尿病的发生发展受多种因素相互作用的影响。积极治疗盆腔囊肿和高脂血症,可预防和控制卵巢癌合并2型糖尿病的发生发展。 展开更多
关键词 卵巢癌 糖尿病 高血压 血脂
在线阅读 下载PDF
20CrMnTi真空脉冲感应渗碳及耐磨性研究
7
作者 李振鹏 颜志斌 +2 位作者 刘静 马亚芹 《贵州师范大学学报:自然科学版》 CAS 2019年第1期20-25,共6页
利用真空脉冲渗碳技术和真空感应渗碳技术对20CrMnTi钢进行表面强化,通过X射线衍射、扫描电镜、显微硬度测试等技术手段,探究不同压力下,2种工艺对表面渗层微观组织结构、硬度梯度以及耐磨性的影响规律。结果表明:相同渗碳压力下,真空... 利用真空脉冲渗碳技术和真空感应渗碳技术对20CrMnTi钢进行表面强化,通过X射线衍射、扫描电镜、显微硬度测试等技术手段,探究不同压力下,2种工艺对表面渗层微观组织结构、硬度梯度以及耐磨性的影响规律。结果表明:相同渗碳压力下,真空感应渗碳表面硬度高于对应的真空脉冲渗碳工艺的表面硬度值,渗层厚度、耐磨性能也都优于对应的真空脉冲渗碳工艺,当渗碳压力为-70kPa时,真空脉冲渗碳工艺的磨损速率达到8.34×10^-7cm^3/min·N,真空感应渗碳的磨损速率为6.27×10^-7cm^3/min·N,摩擦性能最好。 展开更多
关键词 20CrMnTi 真空 感应渗碳 耐磨性
在线阅读 免费下载
河北钢铁产能过剩转移研究 预览
8
作者 平雄 +3 位作者 鲁玉艳 魏艳荣 曹慧敏 张立华 《合作经济与科技》 2019年第1期4-6,共3页
随着经济的不断进步和发展,河北省钢铁工业产能过剩的形势也日益严峻,因此必须对其过剩产能进行转移。“一带一路”倡议的提出,不但为沿线各国对钢铁的大量需求带来机遇,也为我国进行过剩产能转移提供了珍贵的契机。河北省作为国内钢铁... 随着经济的不断进步和发展,河北省钢铁工业产能过剩的形势也日益严峻,因此必须对其过剩产能进行转移。“一带一路”倡议的提出,不但为沿线各国对钢铁的大量需求带来机遇,也为我国进行过剩产能转移提供了珍贵的契机。河北省作为国内钢铁大省,所以我们选择河北省的钢铁工业过剩产能转移作为切入点。经研究发现:我国过剩的钢铁产能转移至“一带一路”沿线国家是可行的,沿线国家对钢铁的需求量十分庞大而且发展势头猛。本项目将研究重点放在“一带一路”倡议的区域分析上,以转移河北省钢铁过剩产能,丰富了对河北钢铁发展问题的研究,提出合理化方案,为推进河北钢铁产业转型升级,推动钢铁走出去做出贡献。 展开更多
关键词 “一带一路” 河北钢铁 产能过剩 转移途径
在线阅读 下载PDF
护理专业实践模型在护理管理中的应用进展
9
作者 张宝弟 袁秀梅 +1 位作者 《中华护理杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期1255-1258,共4页
从领导能力、护士的独立性及合作性、环境、护士的发展与认同、科研及创新、患者预后6方面阐述专业实践模型的框架,并对护理专业实践模型在医疗机构中的应用进行综述,以期为中国构建护理专业实践模型提供参考。
关键词 护理专业实践模型 护士 护理管理
缩唇腹式呼吸锻炼对住院膀胱癌手术患者睡眠质量的影响 预览
10
作者 张宝弟 王磊 +3 位作者 任朋娟 高秀秀 《中国医药科学》 2018年第10期193-195,239共4页
目的探究缩唇腹式呼吸锻炼对住院膀胱癌手术患者睡眠质量的影响。方法选取2015年3月~2017年3月于我院接受治疗的199例膀胱癌患者,按照随机数字表法将两组患者分成两组,实验组100例,对照组99例。两组患者均给予常规膀胱癌住院治疗,对照... 目的探究缩唇腹式呼吸锻炼对住院膀胱癌手术患者睡眠质量的影响。方法选取2015年3月~2017年3月于我院接受治疗的199例膀胱癌患者,按照随机数字表法将两组患者分成两组,实验组100例,对照组99例。两组患者均给予常规膀胱癌住院治疗,对照组给予常规护理,对照组患者睡眠时采取普通腹式呼吸通气方式,实验组患者在常规对症护理的基础上,在专业人员指导下进行缩唇腹式呼吸训练,睡眠时采取普通腹式呼吸方式结合缩唇腹式呼吸方式。四周后,比较两组患者Borg呼吸困难评分,分值越高,呼吸越困难;主要依据匹兹堡睡眠质量评定表(PSQI)来对两组膀胱癌患者的睡眠质量进行评估,分值越低则睡眠质量越好;同时,自主制作睡眠质量评估表,评估患者对睡眠质量自我评价情况。结果四周后,在Borg呼吸困难评分方面,对照组Borg呼吸困难评分为(5.25±0.41)分,实验组评分为(3.45±0.45)分;在匹兹堡睡眠质量评定方面,对照组睡眠质量PSQI评分为(12.35±2.31)分,实验组睡眠质量PSQI评分为(7.51±2.10)分;在患者睡眠质量自我评价方面,对照组,一级共25例,二级共54例,三级共20例,睡眠质量自我评价好的患者仅占比25.25%;实验组,一级共45例,二级共40例,三级共15例,对自我睡眠质量评价良好的占比高达45.00%。结论缩唇腹式呼吸将缩唇呼吸与腹式呼吸方式结合在一起,通过缩唇腹式呼吸训练,可以增加气道外口段阻力,能够使气道内的气压得到有效提高,有利于患者吸入更多新鲜空气,改善气体交换功能,从而可以有效改善膀胱癌患者术后呼吸困难状况,改善肺功能,进一步提高了膀胱癌患者的睡眠质量。 展开更多
关键词 缩唇腹式 呼吸训练 膀胱癌 睡眠质量
在线阅读 下载PDF
HPV E6/E7 mRNA联合P16/ki67免疫细胞化学双染色检测在不典型鳞状细胞(ASCUS)分流诊断中的作用
11
作者 詹晓芬 王少洪 +4 位作者 邱晓阳 李帆 曾芸珠 陈志强 《细胞与分子免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期937-941,共5页
目的探讨人乳头瘤病毒(HPV) E6/E7 mRNA联合P16/KI-67抗原(ki67)免疫细胞化学双染色检测对意义不明确的不典型鳞状细胞(ASCUS)分流诊断的价值。方法选取272例患者,回顾性分析剩余的细胞学标本中HPV E6/E7 mRNA及P16/ki67免疫细胞化学双... 目的探讨人乳头瘤病毒(HPV) E6/E7 mRNA联合P16/KI-67抗原(ki67)免疫细胞化学双染色检测对意义不明确的不典型鳞状细胞(ASCUS)分流诊断的价值。方法选取272例患者,回顾性分析剩余的细胞学标本中HPV E6/E7 mRNA及P16/ki67免疫细胞化学双染色检测结果。HPV E6/E7 mRNA检测采用HPV E6/E7 mRNA检测试剂盒利用Panther分子诊断仪进行检测、P16/ki67采用免疫细胞化学染色利用Ventana Benchmark Ultra免疫组织化学染色仪进行。分析两种检测法在同级别宫颈上皮病变中阳性率的差异,探讨两种检测法及二者联合检测在诊断高级别鳞状上皮内病变(HSIL)的效能的差异,综合评估不同检测方法分流诊断ASCUS中的作用。结果宫颈细胞学ASCUS对应的组织病理学结果包括慢性宫颈炎、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)、HSIL到宫颈癌等。单纯分子诊断或免疫细胞化学染色检测阳性率随宫颈病变严重程度的加重而增加。在宫颈炎和LSIL病变组中,两种检测法阳性率之间的差异明显,在HSIL和宫颈癌病变组中,两种检测法阳性率之间无显著差异。联合检测法诊断HSIL以上病变的综合性能最佳,其灵敏度、特异度、约登指数、符合率、阳性预测值、阴性预测值分别为95. 65%、85. 40%、0. 81、87. 13%、57. 14%、98. 97%。结论 HPV E6/E7 mRNA和P16/ki67免疫细胞化学染色检测均在ASCUS分流诊断中有一定的意义,联合检测HPV E6/E7 mRNA和P16/ki67明显提高分流诊断的灵敏度,保持了较好的特异度。 展开更多
关键词 人乳头状瘤病毒E6/E7 MRNA P16/ki67 免疫细胞化学 意义不明确的不典型鳞状细胞(ASCUS) 宫颈癌
龙门石窟音乐图像中的弦鸣乐器研究 预览
12
作者 《艺术评鉴》 2018年第3期37-38,共2页
龙门石窟音乐图像中现存的可辨识乐器,共计18种,其中弦鸣乐器有:箜篌、琵琶、阮、筝。这些弦鸣乐器是当时乐器形制和演奏方式的真实雕刻,体现了中原音乐文化与西域音乐文化的交流和融合,反映了这一时期音乐艺术的兴盛,为我们研究隋唐... 龙门石窟音乐图像中现存的可辨识乐器,共计18种,其中弦鸣乐器有:箜篌、琵琶、阮、筝。这些弦鸣乐器是当时乐器形制和演奏方式的真实雕刻,体现了中原音乐文化与西域音乐文化的交流和融合,反映了这一时期音乐艺术的兴盛,为我们研究隋唐弦鸣乐器提供了十分珍贵的音乐史料。 展开更多
关键词 龙门石窟 音乐图像 弦鸣乐器
在线阅读 下载PDF
龙门石窟音乐图像中的气鸣乐器研究 预览
13
作者 《黄河之声》 2018年第1期12-13,共2页
龙门石窟音乐图像中现存的可辨识乐器,有笙、排箫、笛、箫、筚篥等18种,其中气鸣乐器有笙、横笛、箫、排箫、筚篥。这些音乐图像忠实的刻录了当时乐器的形制和结构,反映了丝绸之路上中西音乐文化的交流,具有十分重要的作用和价值。
关键词 龙门石窟 音乐图像 弦鸣乐器
在线阅读 下载PDF
基于IMB模型的延伸服务在白内障手术患者中的效果研究 预览
14
作者 郭巍 张宝弟 +1 位作者 王磊 《中国医药科学》 2018年第5期102-104,共3页
目的探讨基于IMB模型的延伸服务对白内障手术患者护理效果的影响。方法选取2015年6月~2016年6月于我院接受手术治疗的86例白内障患者,按照随机数字表法分为观察组和对照组各43例,对照组患者接受常规护理方法,根据患者的需求调整护... 目的探讨基于IMB模型的延伸服务对白内障手术患者护理效果的影响。方法选取2015年6月~2016年6月于我院接受手术治疗的86例白内障患者,按照随机数字表法分为观察组和对照组各43例,对照组患者接受常规护理方法,根据患者的需求调整护理措施。观察组患者在对照组患者的基础上制定基于IMB模型的延伸服务。在患者出院后3个月复诊时,比较两组患者的护理满意度、术后3个月并发症情况和抑郁焦虑评分。结果观察组患者的总体护理满意度为95.3%,对照组患者的总体护理满意度为81.4%,两组差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者的并发症发病率为7.0%,对照组患者的并发症发病率为20.9%,观察组患者并发症发病率明显低于对照组患者(P<0.05);观察组患者焦虑评分为(12.53±1.98)分,低于对照组患者的(19.36±2.04)分(P<0.05),观察组抑郁评分为(15.68±2.01)分,低于对照组患者的(21.84±1.86)分(P<0.05)。结论IMB模型的延伸服务能够良好改善患者护理满意度,提高患者护理质量,降低并发症率,缓解患者的负面情绪。 展开更多
关键词 IMB模型 延伸服务 白内障 效果研究
在线阅读 下载PDF
重庆市普通高校公共体育课考核方法的改革与探索
15
作者 刘尚礼 《西南师范大学学报:自然科学版》 北大核心 2018年第4期172-175,共4页
当前研究对重庆市普通高校公共体育课考核方法进行了探讨,并运用文献资料、访谈、问卷调查、数据统计等方法对重庆市普通高校公共体育课成绩考核中存在的问题进行深入剖析,提出可行性改革思路,为重庆市持续推进的高校体育教学改革提供参考.
关键词 普通高校 公共体育课 考核方法 改革
在线阅读 免费下载
社会责任的信号作用——基于中国市场的研究
16
作者 王建玲 李玥婷 《中国管理科学》 CSSCI CSCD 北大核心 2018年第8期31-41,共11页
承担社会责任能否提升未来公司绩效一直是国内外学者关注的焦点,大部分研究认为履行社会责任有助于提升公司未来绩效,将社会责任视为一种价值投资。在控制了当期绩效因素对企业承担社会责任的影响后,本文发现:(1)承担社会责任不能提... 承担社会责任能否提升未来公司绩效一直是国内外学者关注的焦点,大部分研究认为履行社会责任有助于提升公司未来绩效,将社会责任视为一种价值投资。在控制了当期绩效因素对企业承担社会责任的影响后,本文发现:(1)承担社会责任不能提升公司未来财务绩效,仅能对企业未来股票回报产生正向影响;(2)当期经济绩效较好的企业,社会责任会对未来财务绩效产生正向影响,而当期经济绩效较差的企业,社会责任会对未来财务绩效产生负向影响。文章结果表明:当期绩效较差公司承担社会责任存在更大成本,当期绩效较好公司可以通过履行社会责任向市场传达信号使其与当期绩效较差公司区分,但此信号行为本身不对公司绩效存在影响。早期研究发现社会责任与未来公司财务绩效的正向关系很可能是因未考虑当期公司绩效同时正向影响当期公司社会责任履行程度和未来财务绩效而产生的伪相关关系。本文实证结果一定程度上对现有社会责任促进公司绩效的理论分析框架构成了挑战。 展开更多
关键词 企业社会责任 信号 公司财务绩效 公司市场回报
近代津保内河航运与白洋淀的水上运输业 预览
17
作者 马景文 李立臣 《河北广播电视大学学报》 2018年第6期7-10,共4页
借助于大清河水系发达的水网结构和白洋淀的丰沛水量,近代以来津保内河航运一直处于繁忙的状态,直到20世纪80年代初为止。与津保内河航运的兴衰相一致,白洋淀的水上运输业也经历了一个由兴起、发展到衰落的过程。伴随着白洋淀水面的恢... 借助于大清河水系发达的水网结构和白洋淀的丰沛水量,近代以来津保内河航运一直处于繁忙的状态,直到20世纪80年代初为止。与津保内河航运的兴衰相一致,白洋淀的水上运输业也经历了一个由兴起、发展到衰落的过程。伴随着白洋淀水面的恢复、雄安新区的设立,津保内河航运将迎来一个恢复的良机。 展开更多
关键词 近代 津保内河航运 白洋淀 水上运输
在线阅读 下载PDF
独立学院艺术设计专业校企合作模式探讨
18
作者 《明日风尚》 2018年第15期46-46,49共2页
一、校企合作模式的定义“校企合作”是学校与企业之间建立的一种合作模式。“校企合作”模式最早起源于德国,当地的职业学校与企业联合培养学生的“双元制”职业教育模式。在当前我国社会发展形式之下,各大高校及职业技术学校都积极开... 一、校企合作模式的定义“校企合作”是学校与企业之间建立的一种合作模式。“校企合作”模式最早起源于德国,当地的职业学校与企业联合培养学生的“双元制”职业教育模式。在当前我国社会发展形式之下,各大高校及职业技术学校都积极开拓这样一种办学思路,寻求与优质企业合作,根据企业的需要,有针对性的为企业培养人才。校企合作实际上要求学生是在校学习的基础理论知识,与此同时到企业里去亲身实践,正是这样一种“双赢”的模式,做 展开更多
基于微信平台的音乐广播节目用户关系构建
19
作者 《新闻战线》 2018年第4X期143-144,共2页
新媒体的发展改变了音乐广播节目的传播环境,也为音乐广播节目用户关系构建工作的开展提供了平台。在此背景下,音乐广播节目需要重新审视自身与用户之间的关系,并进行一定的优化。本文对新媒体环境中音乐广播节目'受众'向'... 新媒体的发展改变了音乐广播节目的传播环境,也为音乐广播节目用户关系构建工作的开展提供了平台。在此背景下,音乐广播节目需要重新审视自身与用户之间的关系,并进行一定的优化。本文对新媒体环境中音乐广播节目'受众'向'用户'的转变做出分析与论述,并对音乐广播节目依托微信平台开展用户关系构建工作的策略进行研究与探讨。 展开更多
关键词 音乐广播节目 微信平台 用户关系 构建策略
CRISPR/Cas9基因编辑系统应用于非人灵长类细胞及胚胎Rb1基因编辑的研究
20
作者 怀思远 褚楚 +4 位作者 曹静 赵志飞 冀天楠 李建雄 《解放军医学院学报》 CAS 2018年第8期707-712,共6页
目的探索聚簇规则间隔短回文重复序列/CRISPR相关核酸酶9(CRISPR/Cas9)基因编辑系统对于食蟹猴细胞及胚胎基因组视网膜母细胞瘤抑癌基因(Rb1)的编辑效率,旨在进一步建立视网膜母细胞瘤模型。方法查阅RB1突变数据库(http://rb1-lsd... 目的探索聚簇规则间隔短回文重复序列/CRISPR相关核酸酶9(CRISPR/Cas9)基因编辑系统对于食蟹猴细胞及胚胎基因组视网膜母细胞瘤抑癌基因(Rb1)的编辑效率,旨在进一步建立视网膜母细胞瘤模型。方法查阅RB1突变数据库(http://rb1-lsdb.d-lohmann.de),确定视母细胞瘤发生发展相关Rb1基因外显子区主要有8号外显子;利用DNAman检测人类与食蟹猴基因组中Rb1基因中与是否存在单核苷酸多态性(SNP);通过http://crispr.cos.uni-heidelberg.de/index.html设计并合成sgRNA;采用CRISPR/Cas9基因编辑系统转染食蟹猴成纤维细胞,并提取转染后细胞基因组以检测合成的sgRNA敲除效率;酶切实验检测转染的细胞是否发生突变,并利用单克隆分析测定具体敲除效率。进一步利用显微操作技术注射sgRNA和Cas9 nuclease混合物(RNP)入单细胞胚胎,检测胚胎水平Rb1基因编辑效率。结果 RNP转染后的食蟹猴成纤维细胞提取基因组检测,发现其中有75%的细胞发生基因突变,且基因编辑类型多样,以碱基缺失突变为主;在胚胎水平上获取4-细胞期胚胎,检测单个卵裂球基因组序列发现,存在突变的胚胎占所有胚胎的36.4%,其中纯合突变比例为18.2%,嵌合突变比例同为18.2%。利用软件预测脱靶位点12个,进行序列测定,结果未发现脱靶。结论在非人灵长类细胞及胚胎水平上,CRISPR/Cas9基因编辑系统对于食蟹猴Rb1基因编辑有效,并且敲除效率较高,进一步利用基因编辑方法建立视网膜母细胞瘤模型研究中,可以作为有效的基因编辑手段。本研究得到的食蟹猴胚胎Rb1基因的编辑效率及胚胎囊胚率为建立视网膜母细胞瘤模型提供了参考。 展开更多
关键词 视网膜母细胞瘤 聚簇规则间隔短回文重复序列/相关核酸酶9 基因敲除 打靶效率 脱靶效率
在线阅读 免费下载
上一页 1 2 73 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈