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高中英语书面表达作业布置存在的问题及对策 预览
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作者 桂霞 《西部素质教育》 2018年第21期231-232,共2页
文章首先分析了高中英语书面表达作业布置存在的问题,其次提出了高中英语书面表达作业布置的对策,包括以学生为中心,布置开放式作业;改变书面表达作业的单一性,增加层次性;注重书面表达作业的反馈和评价。
关键词 高中英语 书面表达作业 写作能力
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运用词块教学理论,提高高中学生的英语写作水平 预览
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作者 桂霞 《英语教师》 2015年第5期23-25,共3页
本文就如何提高高中生英语写作水平这一问题,从注重词块理论、运用词块策略等方面进行了探讨,旨在帮助高中学生有效地提高英语运用能力,尤其是书面表达能力。
关键词 词块 教学理论 学习方法 写作水平
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逆转录病毒介导Fcy::Fur融合基因联合5-FC治疗胶质瘤的体内试验研究 预览 被引量:2
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作者 封林森 马建华 +4 位作者 胡卫星 季海明 刘艺春 卢春 桂霞 《实用临床医药杂志》 CAS 2009年第1期 38-42,共5页
目的构建含融合自杀基因Fcy::Fur重组逆转录病毒,用自杀基因治疗系统Fcy::Fur/5-氟胞嘧啶(5-FC)对裸鼠胶质瘤进行体内抑瘤作用的实验研究。方法扩增Fey::Fur基因并构建bey::Fur基因重组逆转录病毒载体;载体转染包装细胞获... 目的构建含融合自杀基因Fcy::Fur重组逆转录病毒,用自杀基因治疗系统Fcy::Fur/5-氟胞嘧啶(5-FC)对裸鼠胶质瘤进行体内抑瘤作用的实验研究。方法扩增Fey::Fur基因并构建bey::Fur基因重组逆转录病毒载体;载体转染包装细胞获得高滴度病毒并转染鼠胶质瘤细胞C6。筛选并鉴定阳性转基因克隆;构建裸鼠荷胶质瘤动物模型,腹腔注射5-FC,观察裸鼠肿瘤重量变化及电镜、流式细胞仪(FCM)检测肿瘤的凋亡。结果PCR法扩增出全长Fcy::Fur基因,经测序证实序列正确;构建了PLXSN-Fcy::Fur逆转录病毒载体。载体转染包装细胞PT67,获得滴度为3.5×10^6CFU/mL的逆转录病毒;转染C6获转基因阳性克隆C6-Fcy::Fur,检测C6-Fcy::Fur有Fcy::Fur基因的mRNA表达;裸鼠前肢背部接种转基因细胞,成瘤后腹腔注射5-FC,转基因肿瘤的生长较对照组明显抑制。FCM法检测到凋亡峰,电镜观察到转基因肿瘤细胞有凋亡小体。结论AdE1CMVCD与5-FC联合在体内对胶质瘤有明显的抑制作用,为临床胶质瘤基因治疗提供了可靠的理论及应用依据。 展开更多
关键词 融合型自杀基因 Fcy::Fur 胶质瘤 体内实验
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卡波济肉瘤相关疱疹病毒包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体的鉴定 预览 被引量:1
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作者 姚水洪 卢春 +5 位作者 张玲 汤巧 曾怡 桂霞 秦娣 钱超 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2006年第7期 481-484,共4页
目的:对已制备并经初筛的卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体进行特异性鉴定.方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA),经3次克隆选择,筛选出能稳定分泌针对K8.1蛋白单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株共9株.采用West... 目的:对已制备并经初筛的卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体进行特异性鉴定.方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA),经3次克隆选择,筛选出能稳定分泌针对K8.1蛋白单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株共9株.采用Western blot法评价9株杂交瘤细胞培养上清识别原核表达重组K8.1蛋白和原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1中KSHV K8.1包膜糖蛋白的能力.结果:筛选了9株能够稳定分泌抗K8.1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;Western blot法显示,9株单抗均能特异性识别原核表达K8.1/GST融合蛋白和BCBL-1中KSHV K8.1包膜糖蛋白.结论:成功制备了KSHV包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体. 展开更多
关键词 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 包膜糖蛋白K8.1 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验 WESTERN BLOT
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转染人骨形成蛋白2共培养条件下NIH3T3细胞生物学性状的观察 预览 被引量:1
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作者 王娟 孙卫斌 +1 位作者 卢春 桂霞 《中华口腔医学杂志》 CAS 北大核心 2006年第2期 77-80,共4页
目的利用细胞共培养系统研究转基因诱导表达的分泌型人骨形成蛋白2(hBMP-2),对NIH3T3细胞超微结构和碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法用阳离子聚合物转染试剂将hBMP-2真核表达载体peDNA3.1-B2导入NIH3T3细胞,G418筛选获得阳性细... 目的利用细胞共培养系统研究转基因诱导表达的分泌型人骨形成蛋白2(hBMP-2),对NIH3T3细胞超微结构和碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法用阳离子聚合物转染试剂将hBMP-2真核表达载体peDNA3.1-B2导入NIH3T3细胞,G418筛选获得阳性细胞克隆。免疫组化和酶联免疫吸附试验检测BMP-2胞内和胞外的表达,并利用细胞共培养系统Transwell,将转基因细胞与NIH3T3细胞共培养。结果转染hBMP-2基因的NIH3T3细胞胞内和胞外都有BMP-2的表达。与转基因细胞共培养的NIH3T3细胞在共培养后超微结构的变化和ALP的高表达,都提示其向成骨样细胞分化的趋势。结论经转基因诱导表达的分泌型BMP-2具有诱导成纤维细胞向成骨样细胞分化的作用。 展开更多
关键词 骨形成蛋白2 成纤维细胞 基因转染 超微结构
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5-FC/CD ∷UPRT联合基因对大鼠脑胶质瘤的治疗作用 预览
6
作者 史德志 胡卫星 +3 位作者 封林森 卢春 桂霞 曾怡 《江苏医药》 CAS 北大核心 2006年第6期 549-551,共3页
目的 探讨5-氟胞嘧啶(5-FC)/CD ∷UPRT 联合基因系统对大鼠脑胶质瘤的治疗作用。方法 以逆转录病毒介导构建C6-CD ∷UPRT 细胞系,应用立体定向技术移植C6-CD ∷UPRT细胞至SD大鼠尾状核,设立C6-pLXSN和C6细胞为对照组,建立脑胶质... 目的 探讨5-氟胞嘧啶(5-FC)/CD ∷UPRT 联合基因系统对大鼠脑胶质瘤的治疗作用。方法 以逆转录病毒介导构建C6-CD ∷UPRT 细胞系,应用立体定向技术移植C6-CD ∷UPRT细胞至SD大鼠尾状核,设立C6-pLXSN和C6细胞为对照组,建立脑胶质瘤荷瘤鼠模型,应用5-FC腹腔注射治疗,观察肿瘤大小、大鼠存活期、电镜观察细胞形态和流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡指标的变化。结果 5-FC/CD ∷UPRT治疗组(A组)与各对照组相比,A组肿瘤直径平均为(4.2±0.7)mm,远小于对照组的(8.3±1.3)mm,(P〈0.01);对照组平均存活期(32±3)d,A组为(85±2)d(P〈0.01);A组电镜显示核染色质分裂明显,并见典型的凋亡小体;A组肿瘤细胞中凋亡细胞所占百分率为19.36%。结论 5-FC/CD ∷UPRT联合基因对大鼠脑胶质瘤有显著的治疗效果。 展开更多
关键词 CD ∷UPRT 联合基因 5-氟胞嘧啶 脑胶质瘤
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真菌源性CD::UPRT联合基因治疗脑胶质瘤的实验研究 预览
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作者 胡卫星 封林森 +5 位作者 卢春 桂霞 史德志 贾雪梅 李立新 魏栋 《中华神经外科杂志》 北大核心 2006年第6期 377-379,共3页
目的 研究5-FC/CD::UPRT联合基因治疗策略对胶质瘤细胞C6的杀伤效应。方法 扩增yCD::UPRT融合基因并构建含yCD::UPRT基因的重组表达载体;载体转染包装细胞PT67,所获重组病毒转染胶质瘤细胞C6,筛选并鉴定阳性转基因克隆;用MT... 目的 研究5-FC/CD::UPRT联合基因治疗策略对胶质瘤细胞C6的杀伤效应。方法 扩增yCD::UPRT融合基因并构建含yCD::UPRT基因的重组表达载体;载体转染包装细胞PT67,所获重组病毒转染胶质瘤细胞C6,筛选并鉴定阳性转基因克隆;用MTT法检测不同浓度5-FC对CD::UPRT转基因细胞的杀伤效应。结果 PCR法扩增出全长CD::UPRT基因,经测序证实序列正确,重组逆转录病毒表达载体pLXSN—yCD::UPRT经双酶切获目的条带,载体转染包装细胞获重组逆转录病毒(滴度达3.5×10^6CFU/m1)并转染C6,经筛选获得转基因阳性克隆C6-yCD::UPRT细胞株,检测显示该细胞株有效表达目的基因。当5-FC终浓度≥10p,mol/L时,实验组与对照组的细胞增殖力出现显著差异(P〈0.01),5-FC作用96h后电镜观察到凋亡小体。结论 5-FC/yCD::UPRT联合基因治疗策略对胶质瘤细胞C6有明显的杀伤作用。 展开更多
关键词 基因治疗自杀基因 CD::UPRT 逆转录病毒 胶质瘤细胞
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逆转录病毒介导Fcy::Fur/5-FC基因治疗对脑胶质瘤杀伤作用的研究 预览 被引量:1
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作者 封林森 胡卫星 +3 位作者 卢春 桂霞 史德志 贾雪梅 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2006年第1期 47-50,共4页
目的:研究融合型自杀基因Fcy::Fur联合5.FC对胶质瘤细胞株C6的杀伤效果。方法:扩增Fcy::Fur基因并构建Fcv::Fur基因重组逆转录病毒载体PLXSN-Fcv::Fur;载体转染包装细胞明167获得高滴度病毒再转染鼠胶质瘤细胞C6,筛选并鉴... 目的:研究融合型自杀基因Fcy::Fur联合5.FC对胶质瘤细胞株C6的杀伤效果。方法:扩增Fcy::Fur基因并构建Fcv::Fur基因重组逆转录病毒载体PLXSN-Fcv::Fur;载体转染包装细胞明167获得高滴度病毒再转染鼠胶质瘤细胞C6,筛选并鉴定阳性转基因克隆:以MTY法和FCM法检测5-FC对Fcy::Fur转基因细胞的杀伤效应。结果:PCR法扩增出全长Fcy::Fur基因,经测序证实序列正确;PLXSN-Fcy::Fur滴度为3×10^6CFU/ml;RT-PCR检测显示Fcy::Fur转基因阳性克隆的C6细胞有效表达目的基因的mRNA;应用5-FC后FCM法检测到显著的凋亡峰,MTY法检测细胞有明显的杀伤效应。结论:融合型自杀基因Fcv::Fur联合5-FC可对胶质瘤细胞C6产生明显的杀伤作用。 展开更多
关键词 融合型自杀基因 Fcy::Fur 逆转录病毒 胶质瘤细胞 C6
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表达人骨形成蛋白2的成纤维细胞系的建立与鉴定 预览 被引量:3
9
作者 王娟 孙卫斌 +1 位作者 卢春 桂霞 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2005年第6期 395-397,F002,共4页
目的:建立能稳定表达BMP2的成纤维细胞系.方法:运用阳离子聚合物转染试剂,将含有人BMP2基因的真核表达载体pcDNA3.1-B2导入NIH3T3细胞,通过G418筛选获得阳性细胞克隆,RT-PCR、免疫组化和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BMP2基因的稳定转染... 目的:建立能稳定表达BMP2的成纤维细胞系.方法:运用阳离子聚合物转染试剂,将含有人BMP2基因的真核表达载体pcDNA3.1-B2导入NIH3T3细胞,通过G418筛选获得阳性细胞克隆,RT-PCR、免疫组化和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BMP2基因的稳定转染和蛋白表达.结果:转染细胞内有BMP2mRNA的转录,胞内及胞外有BMP2蛋白的表达.结论:采用阳离子聚合物转染法可成功地将外源性hBMP2基因导入NIH3T3细胞,为进一步研究诱导牙周膜细胞骨化分化建立基础. 展开更多
关键词 骨形成蛋白2 基因转染 成纤维细胞
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姜黄素对人卵巢癌细胞株HO-8910增殖和凋亡的影响 预览 被引量:3
10
作者 王清 王淑玉 +3 位作者 贾雪梅 黄丽 曾怡 桂霞 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2005年第4期 262-265,277,共5页
目的:探讨姜黄素(curcumin)对体外培养人卵巢癌细胞株HO-8910细胞增殖、细胞周期调控及细胞凋亡的影响.方法:选用人卵巢癌细胞株HO-8910进行体外培养,以1.25-20μg/ml姜黄素分别处理HO-8910细胞6-24 h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT... 目的:探讨姜黄素(curcumin)对体外培养人卵巢癌细胞株HO-8910细胞增殖、细胞周期调控及细胞凋亡的影响.方法:选用人卵巢癌细胞株HO-8910进行体外培养,以1.25-20μg/ml姜黄素分别处理HO-8910细胞6-24 h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测凋亡和细胞周期,SABC免疫组化检测细胞凋亡相关蛋白Fas、Fas-L、Bcl-2及Bax的表达.结果:姜黄素对HO-8910生长有抑制作用,并呈剂量时间依赖性.流式细胞仪分析证实姜黄素能使HO-8910细胞积聚在S和G2/M期,并出现亚二倍体凋亡峰.Fas、Fas-L、Bcl-2表达均上调,Bax加药前后均为阳性.结论:姜黄素对人卵巢癌细胞株HO-8910的增殖具有显著的抑制作用;Fas、Fas-L、Bcl-2的表达上调可能参与了诱导细胞凋亡. 展开更多
关键词 姜黄素 卵巢癌 凋亡
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卡波济肉瘤相关疱疹病毒K12基因诱导裸鼠体内肿瘤的形成 预览 被引量:5
11
作者 桂霞 卢春 曾怡 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS 北大核心 2005年第6期 507-513,共7页
目的证实卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)K12基因在体外可以转化小鼠成纤维细胞系NIH3T3细胞,体内可以诱导肿瘤的形成. 方法采用PCR法构建含KSHV K12基因的重组反转录病毒表达质粒,将该质粒转染NIH3T3细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞.采用... 目的证实卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)K12基因在体外可以转化小鼠成纤维细胞系NIH3T3细胞,体内可以诱导肿瘤的形成. 方法采用PCR法构建含KSHV K12基因的重组反转录病毒表达质粒,将该质粒转染NIH3T3细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞.采用软琼脂集落形成试验和裸鼠成瘤试验,分别证实K12基因体外转化细胞和体内致瘤特性.免疫组化(IHC)染色进一步评价转化细胞及其诱导的肿瘤组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、Fas和FasL的表达水平. 结果K12基因转化的NIH3T3细胞在软琼脂中可以形成集落、在裸鼠体内可以形成肿瘤;转化的细胞及其诱导的肿瘤组织中可观察到VEGF、Fas和FasL的表达,其中,Fas和FasL的表达较高. 结论 KSHV K12基因具有体外转化细胞、体内诱导肿瘤形成的能力. 展开更多
关键词 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 血管内皮细胞生长因子(VEGF) 裸鼠 基因诱导 K12基因 集落形成试验 转化细胞 FasL KSHV 肿瘤组织 反转录病毒 PCR法 表达质粒 嘌呤霉素 免疫组化 基因转化 肿瘤形成 体内诱导 软琼脂 细胞系 成纤维
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人类疱疹病毒8型包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体的制备与鉴定 预览 被引量:4
12
作者 张玲 卢春 +3 位作者 曾怡 钱超 桂霞 秦娣 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2005年第10期 685-688,F0002,共5页
目的:制备人类疱疹病毒8型(HHV-8)包膜糖蛋白K8.1的单克隆抗体,并对其特异性进行鉴定.方法:用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导含重组质粒pGEX-6p-1+K8.1的大肠杆菌BL21表达谷胱甘肽-S-转移酶GST/K8.1融合蛋白,将以包涵体形式存在的... 目的:制备人类疱疹病毒8型(HHV-8)包膜糖蛋白K8.1的单克隆抗体,并对其特异性进行鉴定.方法:用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导含重组质粒pGEX-6p-1+K8.1的大肠杆菌BL21表达谷胱甘肽-S-转移酶GST/K8.1融合蛋白,将以包涵体形式存在的融合蛋白进行变性、复性、复性后的Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化.以纯化的GST/K8.1融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术制备单克隆抗体.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选分泌K8.1单抗的杂交瘤细胞株.免疫组化染色(IHC)和Western blot法鉴定单抗的特异性.结果:建立了一株稳定分泌抗K8.1单抗的杂交瘤细胞株,命名为3G10;IHC和Western blot法显示,3G10株单抗能特异地识别HHV-8 K8.1蛋白.结论:成功制备出抗HHV-8包膜糖蛋白K8.1的单克隆抗体. 展开更多
关键词 人类疱疹病毒8型 包膜糖蛋门K8.1 包涵体 单克隆抗体
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卡波济肉瘤相关疱疹病毒包膜糖蛋白K8.1B全长cDNA的克隆及在真核细胞中的表达 预览 被引量:3
13
作者 秦娣 卢春 +3 位作者 钱超 曾怡 桂霞 张玲 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2005年第9期 616-619,共4页
目的:分离、克隆卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白K8.1B全长cDNA,并将其置于真核细胞中进行表达.方法:用K8.1B基因设计一对PCR引物,其5'端分别引入BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点.以佛波酯(TPA)刺激的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞... 目的:分离、克隆卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白K8.1B全长cDNA,并将其置于真核细胞中进行表达.方法:用K8.1B基因设计一对PCR引物,其5'端分别引入BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点.以佛波酯(TPA)刺激的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总RNA为模板,通过RT-PCR扩增KSHV K8.1B编码序列,经双酶切后克隆进pcDNA3.1(+)载体中,构建含K8.1B cDNA的重组真核表达质粒.重组质粒经酶切鉴定、核酸序列测定和分析后转染人胚肾293细胞,经G418筛选获细胞克隆.用间接免疫荧光染色(IFA)检测K8.1B cDNA编码蛋白在293细胞中的表达状况.结果:RT-PCR分离、克隆的K8.1B cDNA全长501 bp,核酸序列分析显示,该基因与Genbank中已登记的K8.1B编码基因呈现100%同源性.经IFA证实该重组蛋白为KSHV K8.1B特异性蛋白.结论:KSHV包膜糖蛋白K8.1B编码cDNA在293细胞中获得了正确表达. 展开更多
关键词 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 K8.1B RT-PCR 免疫荧光染色
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姜黄素对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响 预览 被引量:6
14
作者 王清 贾雪梅 +3 位作者 王淑玉 桂霞 黄丽 曾怡 《江苏医药》 CAS 北大核心 2005年第3期 217-218,i001,共3页
目的探讨姜黄素对人卵巢癌细胞株HO-8910裸鼠皮下移植瘤生长的影响.方法1×107个HO-8910细胞接种于裸鼠皮下,待瘤长成约为10 mm×10 mm×10mm时,随机分成对照组和治疗组,对照组给予RPMI1640 4ml/kg、治疗组分别给予50、100 ... 目的探讨姜黄素对人卵巢癌细胞株HO-8910裸鼠皮下移植瘤生长的影响.方法1×107个HO-8910细胞接种于裸鼠皮下,待瘤长成约为10 mm×10 mm×10mm时,随机分成对照组和治疗组,对照组给予RPMI1640 4ml/kg、治疗组分别给予50、100 mg/kg姜黄素腹腔注射治疗5d后,计算移植瘤的体积、瘤重、抑瘤率;瘤组织标本分别进行HE染色病理检查,电镜和流式细胞仪检测.结果姜黄素对移植瘤的生长有明显抑制作用,低剂量组和高剂量组的抑瘤率分别达53.08%和70.47%,病理、电镜和流式细胞仪检测瘤组织标本均提示经姜黄素治疗后的肿瘤细胞发生了凋亡.结论姜黄素对人卵巢癌移植瘤的生长具有抑制作用. 展开更多
关键词 姜黄素 卵巢癌 裸鼠 移植瘤
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HIV-1相关炎性细胞因子诱导人血管内皮细胞中潜伏感染KSHV的溶解性周期复制 预览 被引量:3
15
作者 卢春 桂霞 +2 位作者 曾怡 钱超 秦娣 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS 北大核心 2005年第11期 880-884,共5页
目的研究HIV-1感染相关炎症细胞因子是否能够激活人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)中潜伏感染的卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV);探讨该激活作用是否由KSHV Rta基因所介导.方法采用体外模拟系统,研究了与HIV-1感染T细胞诱生的细胞因子相似的... 目的研究HIV-1感染相关炎症细胞因子是否能够激活人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)中潜伏感染的卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV);探讨该激活作用是否由KSHV Rta基因所介导.方法采用体外模拟系统,研究了与HIV-1感染T细胞诱生的细胞因子相似的重组人细胞因子对HUVEC中潜伏感染的KSHV复制的影响.通过Northern blot和定量PCR检测ORF26(该基因编码的病毒次要衣壳蛋白仅在KSHV被激活时表达) mRNA表达来分析KSHV的激活.运用KSHV Rta基因启动子(KSHV复制时最先被激活的启动子)驱动的虫荧光素酶报告基因进一步证实并扩展研究结果.结果包括干扰素-γ(IFN-γ)、肝细胞生长因子/扩散因子(HGF/SF)及制瘤蛋白M(oncostatin M, OSM)在内的重组细胞因子不仅可诱导HUVEC中潜伏感染的KSHV发生溶解性周期复制,而且能增强Rta启动子活性.结论 HIV-1感染相关的炎性细胞因子是诱导HUVEC中KSHV溶解性周期复制的因素,而且该过程至少有部分由KSHV的Rta启动子介导. 展开更多
关键词 细胞因子 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 复制和转录激活蛋白
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CD/5-FC对KSHV肿瘤转化基因K12诱导NIH3T3转化细胞的杀伤作用 预览
16
作者 桂霞 卢春 《病毒学报》 CAS 北大核心 2005年第3期 188-197,共10页
采用分子克隆技术构建含卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)转化基因K12和含胞嘧啶脱氨酶(CD)基因重组逆转录病毒表达质粒,分别命名为LZRS-K12和pLXSN-Fcy::Fur.将LZRS-K12质粒转染NIH3T3细胞系... 采用分子克隆技术构建含卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)转化基因K12和含胞嘧啶脱氨酶(CD)基因重组逆转录病毒表达质粒,分别命名为LZRS-K12和pLXSN-Fcy::Fur.将LZRS-K12质粒转染NIH3T3细胞系,诱导细胞转化获得具有肿瘤细胞生物学特性的N/K12细胞,进一步将pLXSN-Fcy::Fur质粒转染N/K12细胞,获得含CD基因的N/K12/FF细胞.加入5-氟胞嘧啶(5-FC)后,采用MTT法、流式细胞仪和免疫组化(IHC)等方法,分别检测细胞存活率、凋亡率及凋亡相关蛋白的表达.结果显示,N/K12/FF细胞在使用5-FC后存活率明显下降.流式细胞仪检测结果显示,5-FC作用后的N/K12/FF细胞的凋亡率与作用前相比增加了4.6%.与此同时,经5-FC作用后的N/K12和N/K12/FF细胞的生长周期发生了明显变化,均表现为G0-G1期细胞比率降低,S和G2-M期细胞比率增高.5-FC使得N/K12细胞的增殖主要阻滞在G2-M期,而N/K12/FF细胞的增殖主要阻滞在S期.IHC检测结果表明,N/K12细胞在5-FC使用前后Fas和Fas-L表达改变均不明显;而N/K12/FF细胞在5-FC使用后的Fas和Fas-L表达水平均明显高于5-FC使用前的水平.提示,CD/5-FC对KSHV肿瘤转化基因K12诱导NIH3T3转化细胞具有杀伤作用;凋亡有可能介导了部分杀伤过程;Fas和Fas-L有可能部分参与凋亡的诱导. 展开更多
关键词 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 肿瘤转化基因K12 CD/5-FC系统 细胞凋亡 卡波济肉瘤 杀伤作用 基因治疗
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乌鲁木齐市儿童医院2004年医院感染情况调查 预览
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作者 史玉霞 桂霞 《世界感染杂志》 2005年第4期 347-348,350,共3页
目的了解2004年本院住院患儿发生医院感染的情况,提出预防控制措施。方法应用回顾性调查方法对2004年1—12月发生医院感染的所有住院病历进行调查分析。结果同期发生医院感染的几个科室中,神经康复科所占的比例最高。医院感染的部位... 目的了解2004年本院住院患儿发生医院感染的情况,提出预防控制措施。方法应用回顾性调查方法对2004年1—12月发生医院感染的所有住院病历进行调查分析。结果同期发生医院感染的几个科室中,神经康复科所占的比例最高。医院感染的部位分布以上呼吸道、下呼吸道和胃肠道感染多见。感染的年龄以5岁以下儿童为多。发生医院感染的月份以冬春季为主。其中占前三位的是1月、12月、11月。分别占11.2%、11.2%、10.7%。结论医院感染的发生与科别、年龄、住院时间及月份有关,临床医护人员应加强医院感染的控制和预防,降低医院感染的发生率。 展开更多
关键词 儿童医院 医院感染 调查分析
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HIV-1感染相关细胞因子IFN-γ通过Rta基因启动子激活人类疱疹病毒8型 预览 被引量:8
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作者 卢春 曾怡 +2 位作者 黄丽 钱超 桂霞 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS 北大核心 2004年第1期 76-80,共5页
目的研究HIV-1感染中相关细胞因子IFN-γ对人类疱疹病毒8型(HHV-8)Rta基因启动子活性影响;评价Rta基因启动子在多种细胞中的启动活性.方法将已构建的HHV-8 Rta启动子+虫荧光素酶报告基因重组质粒和含HIV-1 Tat基因重组表达质粒转染多种... 目的研究HIV-1感染中相关细胞因子IFN-γ对人类疱疹病毒8型(HHV-8)Rta基因启动子活性影响;评价Rta基因启动子在多种细胞中的启动活性.方法将已构建的HHV-8 Rta启动子+虫荧光素酶报告基因重组质粒和含HIV-1 Tat基因重组表达质粒转染多种细胞,转染后24 h加入IFN-γ和/或重组HIV-1 gp120刺激,刺激后24 h收集细胞,进行虫荧光素酶活性检测.试验同时以佛波酯类化合物TPA刺激为阳性对照,进行最佳刺激时间点的选择和不同转染方法转染效率的比较. 结果① HHV-8 Rta启动子启动活性在TPA刺激后的24 h达到最高峰;② HHV-8 Rta启动子启动活性的发挥不依赖于HHV-8和/或EBV基因组的存在,且在血管内皮细胞(HUVECs)中启动活性最佳;③ IFN-γ可以诱导Rta启动子活性;但HIV-1 Tat和gp120蛋白与IFN-γ协同上调Rta启动子活性的能力较弱. 结论 HIV-1感染中相关细胞因子IFN-γ至少部分通过Rta基因启动子激活HHV-8的复制. 展开更多
关键词 HIV-1 细胞因子 IFN-Γ Rta基因 基因启动子 人类疱疹病毒8型 基因重组质粒
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开放读码框架50基因介导HIV-1感染相关的肝细胞生长因子诱导人类疱疹病毒8型复制 预览 被引量:1
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作者 卢春 曾怡 +1 位作者 钱超 桂霞 《中华传染病杂志》 CAS 北大核心 2004年第3期 184-188,共5页
目的研究人类疱疹病毒8型(HHV-8)开放读码框架(ORF)50基因启动子在HIV-1感染相关细胞因子肝细胞生长因子/驱散因子(HGF/SF)诱导原发性渗出性淋巴瘤(PEL)BC-3中潜伏感染的HHV-8复制过程中的作用.方法将HGF/SF连续加入到体外培养的BC-3中... 目的研究人类疱疹病毒8型(HHV-8)开放读码框架(ORF)50基因启动子在HIV-1感染相关细胞因子肝细胞生长因子/驱散因子(HGF/SF)诱导原发性渗出性淋巴瘤(PEL)BC-3中潜伏感染的HHV-8复制过程中的作用.方法将HGF/SF连续加入到体外培养的BC-3中,分别于培养第3天和第7天收集刺激细胞,电子显微镜观察成熟HHV-8病毒的形成;提取细胞总RNA,North-ern blot和定量聚合酶链反应(PCR)法检查HHV-8次要衣壳蛋白ORF26 mRNA转录.同时,将已构建的HHV-8 ORF50启动子+虫荧光素酶报告基因重组质粒和含HIV-1 Tat基因重组表达质粒分别共转染BC-3和人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),转染后24 h加入HGF/SF和/或重组HIV-1gp120刺激,刺激后24 h收集细胞,进行虫荧光素酶活性检测.试验同时以佛波酯(TPA)刺激为阳性对照.结果 HGF/SF可以上调HHV-8 ORF26 mRNA表达,且于刺激的第7天,ORF26 mRNA表达上升了4.1倍,BC-3细胞中同时可观察到成熟的HHV-8病毒粒子;HGF/SF能够诱导ORF50启动子活性,但HIV-1 Tat和gp120蛋白与HGF/SF协同上调ORF50启动子活性的能力较弱.结论 HIV-1感染相关细胞因子HGF/SF诱导HHV-8复制的过程至少有部分由ORF50启动子介导. 展开更多
关键词 疱疹病毒 读码框架 肝细胞生长因子 启动区 病毒复制
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含HIV-1Tat基因重组反转录病毒表达载体构建与表达Tat蛋白功能检测 被引量:1
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作者 卢春 钱超 +2 位作者 桂霞 黄丽 曾怡 《南京医科大学学报:英文版》 2003年第6期 261-269,共9页
目的:构建含HIV-1 Tat基因重组反转录病毒表达载体及评价表达Tat蛋白的功能.方法:使用HindⅢ将HIV-1 Tat1101蛋白编码基因从pEV质粒中切出,插入到表达质粒LZRSpBMN-Z中,构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS-Tat101.采用磷酸钙转染法将重... 目的:构建含HIV-1 Tat基因重组反转录病毒表达载体及评价表达Tat蛋白的功能.方法:使用HindⅢ将HIV-1 Tat1101蛋白编码基因从pEV质粒中切出,插入到表达质粒LZRSpBMN-Z中,构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS-Tat101.采用磷酸钙转染法将重组质粒LZRS-Tat101转染进含反转录病毒env、gal和pol编码基因的包装细胞phoenix(ФNX)中,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞系.免疫组化(IHC)染色检查Tat在临时转染和稳定转染ФNX细胞中的表达水平.收集临时转染和稳定转染包装细胞分泌的病毒上清,并分别感染293细胞,Westernblot检测Tat在293中表达.与此同时,收集感染293细胞培养上清,加入到HL3T1细胞(HE-La-HIV-1-LTR/CAT报告基因)中,共培养72 h后收集细胞,提取蛋白作CAT活性检测.结果:①含Tat101基因重组反转录病毒表达质粒转染包装细胞后,Tat在临时转染ФNX中表达水平显著高于在稳定转染中的水平;②临时转染病感染293细胞,Tat在感染细胞中得到了表达,且分泌至上清中的Tat蛋白能够激活靶细胞HL3T1中HIV-1的LTR启动子,使得其下游的CAT基因得到表达.结论:重组LZRS-Tat101反转录病毒能够在其感染靶细胞中表达Tat蛋白,且表达蛋白具有转录激活功能. 展开更多
关键词 HIV-1 TAT基因 基因重组 反转录病毒表达载体 磷酸钙转染法 免疫组织化学
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