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蛋白芯片检测肿瘤标志物及其与其他方法的比较 认领 被引量：11
1
作者 娄加陶 顾军 +6 位作者 高春芳 范列英 赵虎 李智 沈霞 孔宪涛 仲人前 《检验医学》 CAS 北大核心 2009年第6期 466-469,共4页
目的研究多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统（C-12）检测肿瘤标志物的性能及其与国外检测系统的比较。方法分别选用湖州数康生物科技有限公司C-12、Roche Modular E170、Elecsys 2010和Abbott 120004种检测系统对甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原... 目的研究多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统（C-12）检测肿瘤标志物的性能及其与国外检测系统的比较。方法分别选用湖州数康生物科技有限公司C-12、Roche Modular E170、Elecsys 2010和Abbott 120004种检测系统对甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、前列腺特异性抗原（PSA）、游离PSA（f-PSA）、糖类抗原125（CA125）、糖类抗原153（CA153）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、糖类抗原242（CA242）、人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）和糖类抗原199（CA199）临床常见肿瘤标志物进行检测，所测得的数据进行统计学分析。结果C-12与Roche Modular E170、Elecsys 2010和Abbott I20004种检测系统在肿瘤标志物的检测中符合率呈显著正相关，而且敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值等均有很高的一致性。结论C-12与Roche Modular E170、Elecsys 2010和Abbott I2000在检测肿瘤标志物中具有较高的一致性，对肿瘤标志物的检测具有较高的实用价值。 展开更多
关键词 肿瘤标志物 蛋白芯片检测系统 方法学比较
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结直肠癌组织ECM1蛋白的表达及诊断价值 认领 被引量：1
2
作者 侯彦强 仲人前 +1 位作者 彭亮 孔宪涛 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第52期1-2,共2页
目的探讨细胞外基质蛋白1(ECM1)在结直肠癌组织中的表达及诊断意义。方法应用免疫组织化学检测结直肠癌手术切除的正常结直肠组织(n=20)、淋巴结未转移的结直肠癌(n=35)、淋巴结转移的结直肠癌(n=29)中ECM1蛋白的表达。Western blot检... 目的探讨细胞外基质蛋白1(ECM1)在结直肠癌组织中的表达及诊断意义。方法应用免疫组织化学检测结直肠癌手术切除的正常结直肠组织(n=20)、淋巴结未转移的结直肠癌(n=35)、淋巴结转移的结直肠癌(n=29)中ECM1蛋白的表达。Western blot检测ECM1亚型。受试者工作特征(ROC)曲线评估ECM1诊断价值。结果ECM1的表达在正常结直肠组织中阳性率为10%(2/20),在结直肠癌组织中阳性率为59.4%(38/64);其中结直肠癌淋巴结未转移者为37.1%(13/35),淋巴结转移者为86.2%(25/29)。ECM1在结直肠癌组织表达增高,在转移性结直肠癌中的表达高于非转移性结直肠癌(P【0.01)。结直肠癌细胞中高表达的ECM1蛋白主要是ECM1a亚型。结论ECM1蛋白在结直肠癌组织中过表达,与结直肠癌的淋巴转移相关。ECM1蛋白对结直肠癌尤其是转移性结直肠癌有较高的诊断价值。 展开更多
关键词 细胞外基质蛋白质类 结直肠肿瘤 淋巴转移
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Golph2蛋白质的原核表达及多克隆抗体制备 认领
3
作者 谭龙益 陈洁 +4 位作者 王皓 叶寒清 厉倩 顾继安 孔宪涛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期 443-445,449,共4页
目的：新近发现Golph2蛋白与肝癌关系密切,制备Golph2重组蛋白质和多克隆抗体,建立Western blot检测技术,为后续研究提供基础。方法：RT-PCR从人肝癌细胞株WBF44钓取Golph2基因序列,PCR回复突变制备全长完整基因（1206bp）,将其插入至... 目的：新近发现Golph2蛋白与肝癌关系密切,制备Golph2重组蛋白质和多克隆抗体,建立Western blot检测技术,为后续研究提供基础。方法：RT-PCR从人肝癌细胞株WBF44钓取Golph2基因序列,PCR回复突变制备全长完整基因（1206bp）,将其插入至原核表达载体pET-21、转化大肠杆菌DH5a,IPTG诱导表达,镍柱亲和层析纯化蛋白,SDS-PAGE鉴定。将纯化蛋白质免疫家兔,制备多克隆抗血清。建立Western blot鉴定重组蛋白和抗血清特异性,测定临床血清标本中Golph2蛋白水平。结果：从肝癌细胞中钓取的基因,出现2个碱基置换突变和1个碱基缺失突变,经回复突变,获得与NM177937完全一致序列。SDS-PAGE和Western blot证实,重组Golph2蛋白质与预期结果一致。抗血清能够特异地识别52kD重组蛋白质和73kD血清蛋白质。结论：Golph2蛋白质表达和抗血清制备完全成功,可以用于后续研究 展开更多
关键词 Golph2蛋白质 多克隆抗体 蛋白质表达
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免疫固定电泳在多发性骨髓瘤患者实验室诊断中的应用 认领
4
作者 耿红莲 王爱华 +2 位作者 赵文静 孔宪涛 仲人前 《现代检验医学杂志》 CAS 2009年第1期 76-78,共3页
目的对150例多发性骨髓瘤患者免疫球蛋白定量、血清蛋白电泳和免疫固定电泳结果进行分析，探讨免疫固定电泳在M蛋白血症诊断中的作用。方法免疫球蛋白定量利用免疫散射比浊法，测定免疫球蛋白IgG，IgA，IgM和kappa，lambda轻链的浓度；... 目的对150例多发性骨髓瘤患者免疫球蛋白定量、血清蛋白电泳和免疫固定电泳结果进行分析，探讨免疫固定电泳在M蛋白血症诊断中的作用。方法免疫球蛋白定量利用免疫散射比浊法，测定免疫球蛋白IgG，IgA，IgM和kappa，lambda轻链的浓度；血清蛋白电泳和免疫固定电泳采用Helena公司的Spire3000全自动电泳仪及扫描仪进行。结果150例多发性骨髓瘤患者有138例血清蛋白电泳有M带，免疫固定电泳150例全部检出M带；分型结果显示以IgGλ型最多（58例，占38．7％）；12例经血清蛋白电泳未检出M带而免疫固定电泳检出M带的患者中，有10例为轻链病患者。结论免疫固定电泳特异度和敏感度较血清蛋白电泳高，对于多发性骨髓瘤的实验室诊断特别是轻链病的诊断具有重要价值。 展开更多
关键词 免疫固定电泳 多发性骨髓瘤 M蛋白 免疫球蛋白
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细胞外基质蛋白1在乳腺癌组织和细胞株中的表达及其意义 认领 被引量：3
5
作者 侯彦强 仲人前 +2 位作者 耿红莲 倪健 孔宪涛 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2008年第4期 384-387,共4页
目的：探讨细胞外基质蛋白1（extracellular matrix protein1,ECM1）在乳腺癌组织和细胞株中的表达及其意义。方法：应用免疫组织化学和免疫细胞化学EnVision法检测乳腺癌手术切除标本中乳腺组织（正常组织和癌组织）和恶性程度不同的... 目的：探讨细胞外基质蛋白1（extracellular matrix protein1,ECM1）在乳腺癌组织和细胞株中的表达及其意义。方法：应用免疫组织化学和免疫细胞化学EnVision法检测乳腺癌手术切除标本中乳腺组织（正常组织和癌组织）和恶性程度不同的乳腺癌细胞株（MCF-7、Sk-Br-3和MDA-435）中ECM1的表达,并比较正常乳腺组织和乳腺癌组织、淋巴结转移和未转移乳腺癌之间的ECM1表达差异。Western blotting检测确定ECM1亚型蛋白。结果：ECM1的表达在正常乳腺组织中阳性率为8.7%（2/23）,在乳腺癌组织中阳性率为60.4%（29/48）;其中乳腺癌淋巴结未转移者为38.5%（10/26）,淋巴结转移者为86.4%（19/22）。统计分析表明,ECM1的表达在乳腺癌组织中高于正常组织（P〈0.01）,在转移性乳腺癌中高于非转移性乳腺癌（P〈0.01）。恶性程度低的乳腺癌细胞株MCF-7、Sk-Br-3中不表达ECM1,而恶性程度较高的MDA-435细胞株中高表达ECM1。乳腺癌细胞中高表达的ECM1蛋白主要是相对分子质量为68000的ECM1a亚型。结论：ECM1（主要为ECM1a亚型）在乳腺癌组织和恶性程度高的乳腺癌细胞中过表达,并且与乳腺癌的淋巴结转移相关。 展开更多
关键词 细胞外基质蛋白1 乳腺癌 表达 淋巴结转移
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B淋巴细胞刺激因子及其受体与多发性骨髓瘤关联性的临床实验诊断研究 认领
6
作者 鞠少卿 王跃国 +7 位作者 王金湖 李小华 王旭东 徐建辉 姚敏 练小琪 孔宪涛 仲人前 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期 939-942,共4页
目的：探讨B细胞激活因子（BLyS）及其受体在多发性骨髓瘤（MM）发病中的作用机制。方法：用酶联免疫吸附测定法（ELISA）和实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ-PCR）,对19例MM患者和30名健康人血清BLyS含量、外周血单个核细胞（PBMCs）中B... 目的：探讨B细胞激活因子（BLyS）及其受体在多发性骨髓瘤（MM）发病中的作用机制。方法：用酶联免疫吸附测定法（ELISA）和实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ-PCR）,对19例MM患者和30名健康人血清BLyS含量、外周血单个核细胞（PBMCs）中BLyS及其受体mRNA含量进行检测;并比较MM患者血清BLyS含量与外周血BLyS及其受体基因表达水平和免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）浓度、乳酸脱氢酶（LDH）、轻链（kap、lam）的相关性。结果：MM患者血清BLyS含量[（7.95±4.93）g/L]明显高于健康对照组[（2.70±1.09）g/L,P〈0.01],并与LDH浓度呈正相关性（r=0.734,P〈0.001）;97.4%（18/19）,84.2%（16/19）的MM患者PBMCs中BLyS、BCMA mRNA表达水平较正常人明显增高,并且也与LDH的含量呈正相关;而47.32%（9/19）患者TACI mRNA表达水平降低。结论：MM患者的血清BLyS蛋白浓度和PBMCs中BLyS及其受体基因表达水平有异常改变,说明BLyS及其受体可能参与MM的发病;BLyS及其受体表达水平也许可作为预后的一个指标。 展开更多
关键词 B淋巴细胞刺激因子 多发性骨髓瘤 乳酸脱氢酶 轻链 免疫球蛋白
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细胞外基质蛋白1对乳腺癌MCF-7细胞和HUVEC生物学功能影响的研究 认领 被引量：1
7
作者 侯彦强 仲人前 +2 位作者 娄加陶 耿红莲 孔宪涛 《医学检验与临床》 2008年第4期,共4页
目的探讨细胞外基质蛋白1(extracellular matrix protein 1,ECM1)在肿瘤中的生物学功能。方法构建ECM1-pEGFP-N2真核表达载体,利用脂质体介导的转染技术转染MCF-7细胞,药物G418筛选稳定转染细胞株,荧光显微镜检测报告基因表达产物EGFP,... 目的探讨细胞外基质蛋白1(extracellular matrix protein 1,ECM1)在肿瘤中的生物学功能。方法构建ECM1-pEGFP-N2真核表达载体,利用脂质体介导的转染技术转染MCF-7细胞,药物G418筛选稳定转染细胞株,荧光显微镜检测报告基因表达产物EGFP,免疫组化检测ECM1蛋白表达。经细胞粘附实验、体外侵袭力实验比较转染前后细胞侵袭力的变化;用MTT比色法分析ECM1对MCF-7和人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖的影响。结果成功构建了ECM1-pEGFP-N2真核表达载体,并在MCF-7中稳定表达;转染ECM1后的MCF-7细胞的细胞形态、粘附性、侵袭力和增殖能力无明显变化;MTT比色法检测HUVEC增殖结果示培养液组、空载体转染上清组、ECM1转染上清组HU-VEC D570值分别为0.89±0.06,0.92±0.09和1.39±0.10,各组间差异具有显著统计学意义(p<0.01)。结论ECM1对乳腺癌细胞株MCF-7的生物学特性在体外未见明显影响,但能显著促进血管内皮细胞体外增殖。 展开更多
关键词 细胞外基质蛋白1 肿瘤 真核表达载体 MCF-7 人脐静脉内皮细胞
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细胞内La蛋白对乙型肝炎病毒蛋白质表达的影响 认领
8
作者 孙静慧 张慧 +3 位作者 耿红莲 刘皋林 孔宪涛 谭龙益 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期345-349,共5页
目的探讨细胞内La蛋白对HBV蛋白质表达的影响。方法针对人La蛋白序列设计特异性的小分子干扰RNA（siRNA），通过体外转录的方法合成双链siRNA，并转染进入稳定表达HBV的HepG2．2．15细胞，实时荧光定量基因扩增技术测定HepG2．2．15细... 目的探讨细胞内La蛋白对HBV蛋白质表达的影响。方法针对人La蛋白序列设计特异性的小分子干扰RNA（siRNA），通过体外转录的方法合成双链siRNA，并转染进入稳定表达HBV的HepG2．2．15细胞，实时荧光定量基因扩增技术测定HepG2．2．15细胞中的La蛋白mRNA变化水平；电化学发光分析技术检测HepG2．2．15细胞分泌的HBsAg和HBeAg变化情况。所得数据进行配对假设检验的统计学分析。结果特异性siRNA干扰La蛋白mRNA的表达，使La蛋白在HepG2．2．15细胞中的表达降低；HepG2．2．15细胞分泌在培养上清液中的HBsAg和HBeAg表达显著下降，相关性分析显示，HBsAg、HBeAg变化水平与La蛋白mRNA变化水平呈正相关，相关系数分别为0．938和0．899。结论特异性siRNA能够抑制细胞内La蛋白mRNA的表达，La蛋白可通过某种方式影响HBV蛋白质的表达。 展开更多
关键词 LA蛋白 RNA 小分子干扰 肝炎病毒 乙型 基因表达
甲状腺自身抗体与甲状腺相关性眼病的关系 认领 被引量：7
9
作者 孙贞 朱烨 +2 位作者 何铭珺 杨洁 孔宪涛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期 371-373,共3页
目的：探讨甲状腺自身抗体与甲状腺相关性眼病（Thyroid-associated ophthalmopathy,TAO）、甲状腺机能亢进症突眼（甲亢突眼）及甲状腺机能亢进（甲亢）的关系。方法：甲状腺相关性眼病35例,甲亢突眼37例,甲亢83例,正常对照90例,分别... 目的：探讨甲状腺自身抗体与甲状腺相关性眼病（Thyroid-associated ophthalmopathy,TAO）、甲状腺机能亢进症突眼（甲亢突眼）及甲状腺机能亢进（甲亢）的关系。方法：甲状腺相关性眼病35例,甲亢突眼37例,甲亢83例,正常对照90例,分别检测其甲状腺球蛋白抗体（TGA）、甲状腺微粒体抗体（TMA）、促甲状腺受体抗体（TRAb）。结果：四组的TGA阳性数（率）分别为3（8.6%）、6（16.2%）、16（19.3%）、6（6.7%）,TMA阳性数（率）分别为6（17.2%）、7（18.9%）、32（38.6%）、12（13.3%）,TGA、TMA双阳性数（率）分别为1（2.6%）、4（10.8%）、11（13.8%）、0（0.0%）,TRAb阳性数（率）分别为22（62.9%）、31（83.8%）、70（84.3%）、6（6.7%）。结论：TGA、TMA与TAO的相关性不大,诊断意义很小,TRAb与TAO有较好的相关性,对其早期诊断、治疗和随访有很大价值。 展开更多
关键词 甲状腺相关性眼病 甲亢突眼 甲状腺机能亢进 甲状腺自身抗体
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22例轻链型多发性骨髓瘤实验室检查特征及轻链多聚体的鉴定 认领 被引量：1
10
作者 李畅 赵文静 +2 位作者 耿红莲 仲人前 孔宪涛 《现代检验医学杂志》 CAS 2008年第5期 57-59,共3页
目的分析22例轻链型多发性骨髓瘤的实验室检查特征，增强对轻链型多发性骨髓瘤的了解，并进一步鉴定轻链多聚体的形成情况。方法应用散射速率比浊法进行血尿轻链定量，应用血清蛋白电泳和免疫固定电泳进行M蛋白的鉴定，用SDS—PAGE电泳... 目的分析22例轻链型多发性骨髓瘤的实验室检查特征，增强对轻链型多发性骨髓瘤的了解，并进一步鉴定轻链多聚体的形成情况。方法应用散射速率比浊法进行血尿轻链定量，应用血清蛋白电泳和免疫固定电泳进行M蛋白的鉴定，用SDS—PAGE电泳分析轻链多聚体的形成情况，并与IgG型多发性骨髓瘤进行比较。结果轻链型多发性骨谴瘸完整免疫球蛋白分子呈明显降低并低于IgG型多发性骨髓瘤，尿液中排出大量的免疫球蛋白游离轻链，β2-微球蛋白和肌酐值高于IgG型多发性骨髓瘤，尿液中可以鉴定出明显的多聚体。结论轻链型多发性骨髓瘤的肾损害更为严重，尿液中游离轻链的表现比血中M蛋白的表现更明显，且尿液中轻链多聚体的形成对轻链的定量结果有一定的影响。 展开更多
关键词 轻链 骨髓瘤 轻链多聚体
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结直肠癌组织中ECM1基因水平的测定及临床意义 认领 被引量：6
11
作者 侯彦强 娄加陶 +4 位作者 彭亮 周琳 倪健 孔宪涛 仲人前 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第17期1960-1964,共5页
目的：探讨细胞外基质蛋白1基因在结直肠癌中的表达及其意义.方法：基于TaqMan-MGB荧光探针技术,建立实时荧光定量RT-PCR方法,检测正常结直肠黏膜组织（n=46）,结直肠腺瘤（n=18）,结直肠癌（淋巴结未转移）（n=25）和结直肠癌（淋巴结... 目的：探讨细胞外基质蛋白1基因在结直肠癌中的表达及其意义.方法：基于TaqMan-MGB荧光探针技术,建立实时荧光定量RT-PCR方法,检测正常结直肠黏膜组织（n=46）,结直肠腺瘤（n=18）,结直肠癌（淋巴结未转移）（n=25）和结直肠癌（淋巴结转移）（n=21）中ECM1基因的表达.结果：正常黏膜,腺瘤组织,结直肠癌（淋巴结未转移）组织和结直肠癌（淋巴结转移）组织中ECM1基因的表达均值分别为（9.81±3.16）×10^8拷贝/g RNA,（10.1±3.65）×10^8拷贝/gRNA,（6.89±2.96）×10^9拷贝/g RNA,（5.01±2.22）×10^10拷贝/g RNA.正常黏膜和腺瘤组织组间无明显差异（P＞0.05）;结直肠癌（淋巴结未转移）组明显高于正常黏膜和腺瘤组织组（P＜0.01）;结直肠癌（淋巴结转移）组明显高于其他三组（P＜0.01）.结论：ECM1基因在结直肠癌中表达升高,并且与结直肠癌的转移相关. 展开更多
关键词 细胞外基质蛋白1 结直肠癌 实时定量聚合酶链反应
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血清BLyS和APRIL水平与非霍奇金氏病关联性的初步研究 认领 被引量：1
12
作者 鞠少卿 倪红兵 +6 位作者 王跃国 张芹 黄一红 周锦红 刘才旺 孔宪涛 仲人前 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期 563-566,共4页
目的：研究非霍奇金氏病（NHL）患者血清B淋巴细胞刺激因子（BLyS）和增殖诱导配体（APRIL）蛋白水平，并探讨其与血清乳酸脱氢酶（LDH）的关系。方法：应用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测LDH升高患者组（10例）和LDH正常NHL患者组（1... 目的：研究非霍奇金氏病（NHL）患者血清B淋巴细胞刺激因子（BLyS）和增殖诱导配体（APRIL）蛋白水平，并探讨其与血清乳酸脱氢酶（LDH）的关系。方法：应用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测LDH升高患者组（10例）和LDH正常NHL患者组（12例）NHL患者血清BLyS和APRIL水平，以健康志愿者（23例）作为对照；同时将血清BLyS和APRIL水平与患者血清乳酸脱氢酶（LDH）进行相关性分析。结果：NHL患者组血清BLyS水平显著低于健康对照组（P〈0.05）；NHL患者血清APRIL水平与健康对照组无显著性差异（P〉0.05），但LDH升高患者组血清APRIL水平明显高于LDH正常患者组（P〈0.05）；NHL患者组和LDH升高患者组血清APRIL水平与LDH正相关（r=0.923、0.799，P〈0.05）。结论：NHL患者血清BLyS、APRIL水平与健康对照组差异，提示BLyS和APRIL可能与NHL的预后及恶性程度有关。 展开更多
关键词 非霍奇金氏病 B淋巴细胞刺激因子 增殖诱导配体 乳酸脱氢酶
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聚肌苷酸胞苷酸诱导C57小鼠产生抗核抗体和抗线粒体抗体 认领
13
作者 朱烨 蒋廷旺 +3 位作者 屠小卿 叶伟民 仲人前 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期 912-913,共2页
目的：探讨聚肌苷酸胞苷酸（polyinosinic　polycytidylic　acid，polyI：C）注射c57小鼠对其自身抗体产生的影响。方法：50只6～8周龄雌性C57小鼠随机分为药物组和阴性对照组（n=25），药物组按5mg／kg剂量腹腔注射polyI：C，每周注射... 目的：探讨聚肌苷酸胞苷酸（polyinosinic　polycytidylic　acid，polyI：C）注射c57小鼠对其自身抗体产生的影响。方法：50只6～8周龄雌性C57小鼠随机分为药物组和阴性对照组（n=25），药物组按5mg／kg剂量腹腔注射polyI：C，每周注射2次，阴性对照组注射等量PBS，每4周每组取5只小鼠眼眶采血，间接免疫荧光法测定血清抗核抗体（ANA）和抗线粒体抗体（AMA）水平。结果：随着药物注射次数的增多，药物组在第8周ANA阳性率达到100％，最高滴度达到1：10000，阴性对照组随着饲养时间的延长也出现ANA阳性，并且在12周达到100％，但是始终没有出现滴度为1：10000的高滴度自身抗体；随着药物注射次数的增多，药物组血清AMA阳性率逐渐增高，16周达到80％，最高滴度达到1：10000，对照组未出现AMA阳性。结论：polyI：C注射C57小鼠可以刺激机体产生自身抗体ANA和AMA，并且其对AMA的诱导具有特异性。 展开更多
关键词 聚肌胞苷酸 抗体 抗核 线粒体 模型 动物
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流式细胞仪检测人白细胞抗原-B（27）的影响因素 认领 被引量：8
14
作者 曹鲁宁 张玲珍 +1 位作者 仲人前 孔宪涛 《检验医学》 CAS 北大核心 2007年第3期 233-234,共2页
目的获得外周血淋巴细胞人白细胞抗原（HLA）-B27检测准确可靠的结果。方法用双抗体双色免疫荧光标记,流式细胞仪分析,对标本放置不同时间、溶血后洗涤前后的结果进行比较。结果标本放置不同时间可影响检测结果,洗涤可显著增加HLA-B27... 目的获得外周血淋巴细胞人白细胞抗原（HLA）-B27检测准确可靠的结果。方法用双抗体双色免疫荧光标记,流式细胞仪分析,对标本放置不同时间、溶血后洗涤前后的结果进行比较。结果标本放置不同时间可影响检测结果,洗涤可显著增加HLA-B27阳性细胞百分比和细胞表面平均荧光强度。结论制备好的标本应在6 h内检测,溶血后标本宜洗涤后测定,以提高检测的准确性。 展开更多
关键词 人白细胞抗原-B27 流式细胞仪 影响因素
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抗Granulysin多克隆抗体的制备及鉴定 认领
15
作者 钱王争 陈孙孝 +5 位作者 周晔 谷明莉 陈燕 孔宪涛 邓安梅 仲人前 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期 1320-1323,共4页
目的构建人颗粒溶素（granulysin,GNLY）质粒并在大肠杆菌中表达,纯化得到9kD目的蛋白片段,免疫新西兰大白兔制备兔抗颗粒溶素多克隆抗体。方法采用RT-PCR的方法获得编码人颗粒溶素的cDNA序列,将测序正确的片段克隆入pET-28a（＋）,构建... 目的构建人颗粒溶素（granulysin,GNLY）质粒并在大肠杆菌中表达,纯化得到9kD目的蛋白片段,免疫新西兰大白兔制备兔抗颗粒溶素多克隆抗体。方法采用RT-PCR的方法获得编码人颗粒溶素的cDNA序列,将测序正确的片段克隆入pET-28a（＋）,构建pET28a（＋）-GNLY表达载体。在大肠杆菌BL21（DE3）plysS中IPTG诱导下表达6×His-融合蛋白,纯化后免疫新西兰兔,制备兔抗人颗粒溶素血清,以Western Blotting和ELISA方法分析其特异性和效价。结果6×His融合蛋白免疫新西兰兔成功获得多克隆抗体,Western Blotting结果显示制备的抗体具有较高的特异性,ELISA显示效价为1∶6000。结论获得了纯化的颗粒溶素9kD蛋白和anti-GNLY多抗血清,为今后对疾病中CTL和NK细胞活性的研究打下了基础。 展开更多
关键词 颗粒溶素 融合表达 抗体制备
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抗线粒体抗体M2抗原诱导小鼠原发性胆汁性肝硬化模型的建立 认领 被引量：9
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作者 姜小华 仲人前 +4 位作者 方晓云 安峰 胡寅 汪修平 孔宪涛 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期 202-204,共3页
目的用抗线粒体抗体M2抗原免疫C57BL／6小鼠，建立原发性胆汁性肝硬化实验动物模型。方法将纯化的抗线粒体抗体M2抗原与完全弗氏佐剂，每只小鼠腹腔1次注射200μl。对照组免疫原用牛血清白蛋白与完全弗氏佐剂。免疫后第66周，检测小鼠血... 目的用抗线粒体抗体M2抗原免疫C57BL／6小鼠，建立原发性胆汁性肝硬化实验动物模型。方法将纯化的抗线粒体抗体M2抗原与完全弗氏佐剂，每只小鼠腹腔1次注射200μl。对照组免疫原用牛血清白蛋白与完全弗氏佐剂。免疫后第66周，检测小鼠血清M2抗体、碱性磷酸酶、丙氨酸氨基转移酶和总胆红素，并对小鼠肝脏、肾脏、胃和肌肉组织进行病理学检查。结果M2抗原免疫小鼠诱导出M2抗体。模型组小鼠碱性磷酸酶显著升高，而丙氨酸氨基转移酶与总胆红素无显著变化。模型组小鼠汇管区有明显单个核细胞浸润，小叶间胆管损伤或增生。在其他组织器官如肾脏、胃和肌肉中未见明显病理变化。结论M2抗原诱导C57BL／6小鼠，建立原发性胆汁性肝硬化模型，其生化和病理特征与人类原发性胆汁性肝硬化早期相似。 展开更多
关键词 肝硬化 胆汁性 小鼠 自身免疫疾病
B淋巴细胞激活因子及其受体mRNA与系统性红斑狼疮关联性研究 认领 被引量：3
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作者 鞠少卿 张冬雷 +3 位作者 倪红兵 陈晓栋 孔宪涛 仲人前 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期 348-350,共3页
目的：研究建立实时荧光定量（RFQ）-PCR法测定B淋巴细胞激活因子（BLyS）及其受体mRNA含量的方法，探讨其在系统性红斑狼疮（SEE）患者外周血单一核细胞（PBMC）中表达的检测价值。方法：在BLys及其受体基因保守区设计特异性的引物和... 目的：研究建立实时荧光定量（RFQ）-PCR法测定B淋巴细胞激活因子（BLyS）及其受体mRNA含量的方法，探讨其在系统性红斑狼疮（SEE）患者外周血单一核细胞（PBMC）中表达的检测价值。方法：在BLys及其受体基因保守区设计特异性的引物和荧光探针，用反转录（RT）-PCR扩增目的片段实时检测产物的荧光强度．用所建立的RFQ-PCR方法检测23例SLE患者、23名正常人外周血BLyS及其受体mRNA表达。结果：SLE患者B淋巴细胞成熟抗原（BCMA）、穿膜蛋白活化物（TACI）和B淋巴细胞活化因子受体（BAFF）-R mRNA的表达明显高于正常人（P〈0．01），活动期患者的表达高于缓解期（P〈0．01），抗ds-DNA抗体阳性和尿蛋白阳性的SLE患者BCMA、TACI和BAFF-RmRNA的表达高于阴性患者（P〈0.01）。结论：RFQ-PCR检测BLys及其受体mRNA含量的方法具有较好的灵敏度和重复性；SLE患者BLyS、TACI和BAFF—RmRNA表达含量升高，提示BLyS、TACI和BAFF-R可能与SLE的发病有关。 展开更多
关键词 红斑狼疮 系统性 B细胞激活因子 受体 基因表达 实时荧光定量PCR
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B细胞激活因子与系统性红斑狼疮的相关性研究 认领 被引量：2
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作者 周琳 屠小卿 +2 位作者 王皓 孔宪涛 仲人前 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期 42-45,共4页
目的从核酸（mRNA）和血清蛋白水平初步探讨B细胞激活因子（BlyS）在系统性红斑狼疮（SLE）发病中的作用机制。方法用自行建立的酶联免疫吸附测定法（ELISA）和荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ—RT—PCR），对59例相对稳定期SLE患者和4... 目的从核酸（mRNA）和血清蛋白水平初步探讨B细胞激活因子（BlyS）在系统性红斑狼疮（SLE）发病中的作用机制。方法用自行建立的酶联免疫吸附测定法（ELISA）和荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ—RT—PCR），对59例相对稳定期SLE患者和40名健康人血清BlyS含量、外周血单个核细胞（PBMC）中BlySmRNA含量进行检测；并比较SLE患者血清BlyS含量与外周血BlyS基因表达水平、免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）浓度和抗双链DNA（ds—DNA）抗体滴度的相关性。结果59例相对稳定期SLE患者血清BlyS含量[（8．42±1．55）μg／L]明显高于健康对照组[（3．19±0．88）μg／L，P〈0．001]，并与IgG浓度、抗ds-DNA抗体的滴度呈正相关性（分别r=0．442，r=0．850，均P〈0．001）。与健康对照组相比，59例SLE患者中39例（66％）外周血BlyS基因水平明显升高（P〈0．001），与血清BlyS含量呈明显正相关（r=0．652，P〈0．001）。结论主要由BlyS基因异常表达所引发的高浓度BlyS血清蛋白是一明显的SLE免疫病理特征；BlyS作为SLE发病的重要调控因子，可能在自身反应性B细胞的活化和促进特异性自身抗体的产生中均发挥着重要作用。 展开更多
关键词 红斑狼疮 系统性 淋巴细胞激活因子 酶联免疫吸附测定 逆转录聚合酶链 反应 B细胞激活因子 系统性红斑狼疮 荧光定量逆转录聚合酶链反应 酶联免疫吸附测定法
原发性胆汁肝硬化患者血清中抗线粒体抗体及其亚型和抗核抗体的联合检测的临床价值 认领 被引量：1
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作者 朱烨 屠小卿 +2 位作者 周琳 仲人前 孔宪涛 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期 136-138,共3页
为了分析原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis，PBC）患者的抗线粒体抗体（anti-mitochondria antibody，AMA）及其M2、M4、M9亚型、抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）的阳性率。应用间接免疫荧光法检测ANA、AMA，免疫... 为了分析原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis，PBC）患者的抗线粒体抗体（anti-mitochondria antibody，AMA）及其M2、M4、M9亚型、抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）的阳性率。应用间接免疫荧光法检测ANA、AMA，免疫斑点法检测AMAM2、M4、M9。结果显示91例PBC患者中AMA有89例为阳性。其中96．7％（88／91）的患者M2型阳性，45．1％（41／91）M4型阳性，2．2％（2／91）M9型阳性。39／91例患者ANA阳性，其中21例为核膜型。ANA、AMA及其M2、M4、M9亚型联合检测对于PBC患者的诊断有重要价值。 展开更多
关键词 原发性胆汁性肝硬化 抗线粒体抗体 抗核抗体
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只有提高自己的素质 才能更好地与临床对话 认领 被引量：9
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作者 孔宪涛 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期 1059-1060,共2页
长期以来，检验科与临床医师之间存在着专业脱节、互相沟通少的现象，造成检验结果无法有效地利用，造成资源的浪费，有时还造成误解，临床医师埋怨检验科结果不准，而检验人员认为临床医师不会解释检验结果，导致互相不信任、不协调。... 长期以来，检验科与临床医师之间存在着专业脱节、互相沟通少的现象，造成检验结果无法有效地利用，造成资源的浪费，有时还造成误解，临床医师埋怨检验科结果不准，而检验人员认为临床医师不会解释检验结果，导致互相不信任、不协调。直接后果是患者得不到有效的诊断和治疗，间接的后果是导致重复检验或检验资料搁置而浪费资源，造成经济损耗。 展开更多
关键词 临床医师 素质 检验结果 检验人员 检验资料 重复检验 检验科 不信任
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