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毒胡萝卜素通过ATF6途径促进柯萨奇病毒B3复制的初步研究
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作者 芹芹 罗小暖 +8 位作者 夏冬 史冰田 刘宓 夏志强 王文军 曹天宇 程恒顺 韩俊 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2019年第3期244-247,共4页
目的 探讨内质网应激诱导剂毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)对柯萨奇病毒B3(coxsachievirus B3,CV-B3)病毒复制的影响.方法 将10个MOI的病毒感染HeLa细胞后,在病毒的吸附和补液过程中加入0.25μmol/L的TG,分别在药物刺激的3 h、6 h和9 h收... 目的 探讨内质网应激诱导剂毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)对柯萨奇病毒B3(coxsachievirus B3,CV-B3)病毒复制的影响.方法 将10个MOI的病毒感染HeLa细胞后,在病毒的吸附和补液过程中加入0.25μmol/L的TG,分别在药物刺激的3 h、6 h和9 h收集病毒感染的样品.通过荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CV-B3病毒复制效率;分别使用0.25μmol/L、0.08μmol/L和0.025μmol/L的TG刺激CV-B3病毒感染细胞,通过噬斑形成试验进一步验证TG对病毒复制的影响;通过内质网应激3条通路的抑制剂分别作用于TG刺激的病毒感染细胞,通过qRT-PCR检测病毒量的变化.结果 qRT-PCR结果显示,TG刺激后,相对于对照,病毒量在3 h没有发生明显的变化;在病毒感染的6 h和9 h,病毒量分别增加了2.5倍和158.6倍.噬斑形成试验显示,TG作用后,病毒的噬斑明显增大.通过加入内质网应激的3条通路PERK、ATF6和IRE1的抑制剂GSK2656157、AEBSF和STF-083010发现,加入ATF6的抑制剂AEBSF 6 h后,病毒增加量下降了90%;AEBSF作用9 h后,病毒增加量下降了55%.结论 TG能够通过ATF6途径诱导内质网应激并有效的促进CV-B3病毒的复制. 展开更多
关键词 Coxsacievirus B3 毒胡萝卜素 内质网应激 噬斑 ATF6通路
16型鼻病毒感染引起Hl-HeLa细胞的内源性siRNA变化
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作者 刘宓 +7 位作者 程恒顺 史冰田 王文军 夏志强 芹芹 曹天宇 夏冬 韩俊 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2019年第3期248-252,共5页
目的观察鼻病毒16型感染Hl-HeLa细胞后的细胞内源性siRNA变化。方法将鼻病毒16型感染Hl?HeLa敏感细胞12 h、24 h、36 h后,利用高通量测序(二代测序)筛选出差异siRNA,再通过qRT-PCR方法进行验证。结果高通量测序分析鼻病毒感染的不同时... 目的观察鼻病毒16型感染Hl-HeLa细胞后的细胞内源性siRNA变化。方法将鼻病毒16型感染Hl?HeLa敏感细胞12 h、24 h、36 h后,利用高通量测序(二代测序)筛选出差异siRNA,再通过qRT-PCR方法进行验证。结果高通量测序分析鼻病毒感染的不同时间点均有差异性siRNA产生,其中novel_sir907和novel_sirl950在三个时间点均降低;进一步通过qRT-PCR验证发现,与细胞对照相比novel_sir907在病毒感染12h、24h、36h下降,novel_sirl950在12 h升高后在24h 、36h降低。结论 HRV16感染细胞诱导了内源性siRNA的含量发生变化。 展开更多
关键词 SIRNA 16型鼻病毒 高通量测序
细胞自噬促进柯萨奇病毒B3复制的研究
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作者 罗小暖 +7 位作者 芹芹 夏冬 史冰田 刘宓 夏志强 王晓乐 秘春景 韩俊 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期1-5,共5页
本研究探索柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)感染引起的自噬与病毒复制之间的关系。CVB3感染HeLa细胞,并在病毒感染后6h、8h和10h时检测LC3-Ⅰ蛋白、LC3-Ⅱ蛋白和p62蛋白的表达水平。结果显示CVB3病毒感染促使LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升... 本研究探索柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)感染引起的自噬与病毒复制之间的关系。CVB3感染HeLa细胞,并在病毒感染后6h、8h和10h时检测LC3-Ⅰ蛋白、LC3-Ⅱ蛋白和p62蛋白的表达水平。结果显示CVB3病毒感染促使LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,同时降低p62蛋白的表达。分别将自噬诱导剂雷帕霉素(Rapamy-cin)、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3MA)或溶酶体抑制剂阿洛司他丁(Aloxistatin,E46D)预处理HeLa细胞2h,CVB3感染药物处理细胞并在病毒感染6h后收集细胞、检测CVB3病毒VP1蛋白的表达。结果显示雷帕霉素和E64D促使CVB3病毒VP1蛋白表达增加,而3MA降低CVB3病毒VP1蛋白的表达。本研究得出结论CVB3病毒感染诱导自噬进而促进病毒复制。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒B3(CVB3) 自噬 病毒复制
鼻病毒非结构蛋白2B引起细胞自噬产生的研究
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作者 邹小辉 +7 位作者 罗小暖 芹芹 史冰田 夏冬 刘宓 夏志强 鲁茁壮 韩俊 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2019年第1期21-24,共4页
目的利用miniSOG标签观察鼻病毒非结构蛋白2B蛋白在细胞中定位及自噬体产生。方法将非结构蛋白2B和miniSOG进行融合表达构建pcDNA3.1-2B-miniSOG-flag质粒,将质粒转染HEK293细胞,在荧光显微镜下,2B-miniSOG