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扬州市2014—2017年手足口病病原学监测结果 预览
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作者 刘文俊 吴倩 +5 位作者 周乐 黄瑶 张秀玲 朱道建 徐勤 《江苏预防医学》 CAS 2019年第1期82-83,共2页
目的分析2014—2017年扬州市肠道病毒的病原学特征。方法采集临床诊断为手足口病病例的咽拭子标本,用荧光定量RT-PCR方法检测通用型肠道病毒、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)。结果2014—2017年共采集临床手足口标本177... 目的分析2014—2017年扬州市肠道病毒的病原学特征。方法采集临床诊断为手足口病病例的咽拭子标本,用荧光定量RT-PCR方法检测通用型肠道病毒、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)。结果2014—2017年共采集临床手足口标本1775份,包括1706份普通病例标本和69份重症病例标本,检出通用型肠道病毒阳性964份,检出率54.31%。病原检出阳性病例4—7月占全年阳性检出总数的42.95%;EV71、CoxA16及其他肠道病毒(EV)阳性分别占24.69%、32.26%和43.05%。2014年以EV71和CoxA16为共同优势株,2015—2017年以其他EV阳性为主,重症病例以EV71感染为主。不同县区肠道病毒阳性率及病原型别构成差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论2014—2017年扬州市手足口病发病具有明显的时间、地区、人群差异,2015年后其他EV阳性比例大幅上升。应继续加强手足口病监测,尤应关注5岁以下儿童、4—7月发病高峰及其他EV的分型检测工作。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒 病原学 监测
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环介导等温扩增结合核酸级联侵入反应和纳米金探针显色技术快速检测脑膜炎奈瑟菌 预览
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作者 陈银 葛以跃 +3 位作者 赵康辰 史智扬 周明浩 《江苏预防医学》 CAS 2018年第6期607-610,共4页
目的 建立一种适合现场使用、灵敏、特异的脑膜炎奈瑟菌(N.men)检测方法。 方法 针对N.men的ctrA基因设计环介导等温扩增(LAMP)特异性引物和核酸侵入反应探针,对LAMP扩增产物进行核酸级联侵入反应和纳米金颗粒探针杂交检测。优... 目的 建立一种适合现场使用、灵敏、特异的脑膜炎奈瑟菌(N.men)检测方法。 方法 针对N.men的ctrA基因设计环介导等温扩增(LAMP)特异性引物和核酸侵入反应探针,对LAMP扩增产物进行核酸级联侵入反应和纳米金颗粒探针杂交检测。优化反应体系和反应条件后进行敏感性和特异性实验,并与Real-Time PCR检测方法进行比较。 结果 以核酸级联侵入反应和纳米金颗粒探针显色技术检测LAMP扩增产物和毛细管电泳法具有相同的敏感性和特异性;LAMP结合核酸级联侵入反应和纳米金探针显色技术的检测敏感性为10 copies DNA分子/反应,且与其他病原体之间无交叉反应。在临床样本检测方面,LAMP结合核酸级联侵入反应和纳米金探针显色技术与Real-Time PCR检测效果相当。 结论 结合LAMP、核酸级联侵入反应和纳米金探针显色技术建立的N.men检测方法灵敏、特异,无需特殊仪器,适用于基层检测和现场快速检测。 展开更多
关键词 脑膜炎奈瑟菌 环介导等温扩增 核酸级联侵入反应 纳米金颗粒探针
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17例病毒性肺炎老年患者的临床特点及甲型H1N1流感病毒分子特征
3
作者 葛以跃 谭焰 +6 位作者 陈晨 吴涛 朱小娟 赵康辰 王丽 谷伟 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2018年第6期576-581,共6页
目的对17例老年甲型H1N1流感病毒性肺炎患者的临床和病原学检测结果进行分析,了解老年甲型H1N1流感病毒性肺炎的临床特点及病毒分子特征。方法收集2018年1~3月期间在南京市第一医院呼吸科住院的老年肺炎患者作为研究对象,通过呼吸道病... 目的对17例老年甲型H1N1流感病毒性肺炎患者的临床和病原学检测结果进行分析,了解老年甲型H1N1流感病毒性肺炎的临床特点及病毒分子特征。方法收集2018年1~3月期间在南京市第一医院呼吸科住院的老年肺炎患者作为研究对象,通过呼吸道病毒核酸检查进行病例确诊。采集并分析病例的临床资料。扩增流感病毒全基因组后进行高通量测序,对测序结果进行生物信息学分析,研究病毒的抗原性、致病性和耐药性等生物学特征。结果入选的17例患者平均年龄为(73.8±10.8)岁,所有患者至少合并1种基础性疾病,7例存在合并感染。呼吸系统症状和发热是最为突出的临床表现,94.1%的患者伴有乳酸脱氢酶的增高,76.5%的患者影像学检查存在双肺病变,危重症患者双肺病变的比例高于重症患者。二代测序结果表明,病毒与疫苗株高度同源,HA基因同属于6B.1亚组,有3个抗原位点发生了变异(H138Y、S74R和S164T),1株病毒发生了NA的H275Y耐药变异。结论老年甲型H1N1流感病毒性肺炎患者多合并基础疾病,容易产生合并感染;应密切关注病毒的分子特征及关键氨基酸位点变异,为疫情防控和临床抗病毒治疗提供依据。 展开更多
关键词 老年 甲型H1N1流感 肺炎 临床特点 分子特征
1例人感染H7N4禽流感病毒分子溯源研究
4
作者 邓斐 彭杰夫 +6 位作者 祁贤 王慎骄 余慧燕 许可 霍翔 鲍倡俊 《中华微生物学和免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第9期665-672,共8页
目的 对1例人感染H7 N4禽流感病毒进行分子诊断和溯源.方法 通过荧光定量PCR法对标本进行流感病毒分型检测.在下一代测序平台上对原始标本和病毒分离物进行全基因组测序,利用BLASTs、ClustalX和MEGA 6.1等软件进行序列比对和系统进化分... 目的 对1例人感染H7 N4禽流感病毒进行分子诊断和溯源.方法 通过荧光定量PCR法对标本进行流感病毒分型检测.在下一代测序平台上对原始标本和病毒分离物进行全基因组测序,利用BLASTs、ClustalX和MEGA 6.1等软件进行序列比对和系统进化分析.结果 2018年1月检测到1例人感染H7 N4亚型禽流感病毒病例.从患者家养的鸡鸭中分离到7株高度同源的病毒.病毒是一种新的基因重配H7 N4亚型禽流感病毒,其8基因节段来源于欧亚大陆的野生水禽.病毒HA蛋白的裂解位点含有1个碱性氨基酸精氨酸(R),属于低致病性禽流感病毒.HA蛋白的受体结合位点226-228位氨基酸是谷氨酰胺-丝氨酸-甘氨酸(Q-S-G氨基酸排序按照H3亚型HA序列),保留了对禽类受体 α2-3半乳糖苷唾液酸(SAα2-3Gal)的结合活性.与禽分离病毒PB2蛋白627E不同,人病毒的PB2蛋白627位氨基酸为赖氨酸(K),增强了该病毒对人的适应力.结论 报道了一起人感染H7 N4禽流感病毒病例,揭示中国南方庭院式养殖模式为禽流感病毒的跨种传播提供了便利. 展开更多
关键词 禽流感病毒 H7N4亚型 跨种传播
2012—2017年扬州市流感病原学监测结果分析
5
作者 刘文俊 吴倩 +6 位作者 周乐 黄瑶 张秀玲 黄九如 朱道建 徐勤 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2018年第5期496-500,共5页
目的分析扬州市2012-2017年的流感监测结果,阐明近年来流感流行特征和变化趋势,为预测和防控流感流行提供科学依据。方法对江苏省苏北人民医院、扬州市第一人民医院和高邮市人民医院就诊患者进行监测采样,对流感样病例(Influenza—l... 目的分析扬州市2012-2017年的流感监测结果,阐明近年来流感流行特征和变化趋势,为预测和防控流感流行提供科学依据。方法对江苏省苏北人民医院、扬州市第一人民医院和高邮市人民医院就诊患者进行监测采样,对流感样病例(Influenza—like illness,ILI)标本,采用实时荧光定量RT—PCR方法进行病毒核酸检测,并对结果信息进行统计分析。结果2012-2017年扬州市共采集ILI咽拭子标本18083份,其中流感核酸阳性标本1983份,阳性率为10.97%,相邻年份阳性率差异有统计学意义(x^2=167.93,P〈0.001)。全年均有流感活动,主要流行季节为冬春季和夏季,共占阳性总数的83.61%,甲型流感全年流行,而乙型流感主要在冬春季流行,各个亚型呈现交替流行。各个年龄组均有阳性病例检出,阳性率最高的是10~19岁年龄组,阳性率为16.33%,最低的是20~29岁年龄组,阳性率为8.52%。结论扬州地区2012—2017年流感流行具有明显的季节性,不同亚型毒株交替流行,高发人群以婴幼儿及青少年为主。 展开更多
关键词 流感 病原学 监测
2013—2017年扬州市26起流行性感冒暴发疫情流行特征分析
6
作者 刘文俊 周乐 +5 位作者 黄瑶 张秀玲 朱道建 徐勤 吴倩 《国际病毒学杂志》 2018年第5期303-306,共4页
目的分析2013-2017年扬州市流感暴发疫情的流行特征。方法收集2013年1月至2017年12月“中国流感监测信息系统”和“突发公共卫生事件管理系统”中扬州市报告的26起流感暴发疫情资料,包括疫情调查报告、病原学检测结果、病毒分离结果等... 目的分析2013-2017年扬州市流感暴发疫情的流行特征。方法收集2013年1月至2017年12月“中国流感监测信息系统”和“突发公共卫生事件管理系统”中扬州市报告的26起流感暴发疫情资料,包括疫情调查报告、病原学检测结果、病毒分离结果等,累计报告病例771例。流感病毒核酸检测及分型检测采用实时荧光定量PCR方法。对引起流感暴发疫情的病毒亚型及暴发的时间、地区、人群分布等进行描述性分析。结果26起疫情中甲型H1N1流感病毒引起的占11.5%(3/26)、甲型H3N2流感病毒引起的占19.2%(5/26)、乙型Victoria系流感病毒引起的占30.8%(8/26)、乙型Yamagata系流感病毒引起的占30.8%(8/26),甲型H1N1混合乙型Yamagata系、乙型Yamagata系混合甲型H1N1流感病毒引起的各占3.8%(1/26)。26起疫情中23起发生于小学(88.5%),中学、幼儿园分别为2起(7.7%)和1起(3.8%)。疫情主要发生在冬春季节,其中2月至3月占38.5%(10/26),10月至12月占61.5%(16/26)。结论扬州市2013-2017年流感暴发疫情中流感病毒优势流行株交替,疫情多发于冬春季节,中小学是疫情暴发的主要场所。 展开更多
关键词 流感 疾病暴发流行 流行病学研究
11株鼠伤寒沙门菌血清凝集及PFGE的分析
7
作者 李玲 +2 位作者 周品众 张宏宾 高海英 《医学动物防制》 2018年第1期46-48,共3页
目的了解江阴市2016年饮食和服务行业从业人员肠道检测中检出的11株鼠伤寒沙门菌的H抗原凝集情况及其同源情况。方法采用培养基生长特征培养、生化反应、荧光PCR检测、血清学凝集试验及脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresi... 目的了解江阴市2016年饮食和服务行业从业人员肠道检测中检出的11株鼠伤寒沙门菌的H抗原凝集情况及其同源情况。方法采用培养基生长特征培养、生化反应、荧光PCR检测、血清学凝集试验及脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)。结果 11株菌通过培养基生长培养、生化反应、荧光PCR检测阳性符合沙门菌,血清型均为O4,5,12∶Hi∶H2,确定为鼠伤寒沙门菌。PFGE检测样本号JY008和JY009同源,其他均不同源。结论 11株鼠伤寒沙门菌血清型相同,且均凝集出H抗原2相。2016年饮食和服务行业从业人员中鼠伤寒沙门菌基因组多样化,同源性低。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 血清凝集 脉冲场凝胶电泳(PFGE) 同源性
腺病毒55型感染肺炎患者的病原学鉴定及全基因序列分析 被引量:1
8
作者 朱小娟 郭喜玲 +8 位作者 赵康辰 葛以跃 吴涛 戚宇华 陈银 史智扬 朱凤才 周明浩 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第3期209-213,共5页
目的 对1例不明原因肺炎患者进行病原学诊断,分析其病原学特征及重组特点,为其防治提供参考。方法采集患者的咽拭子标本,提取DNA,采用Real-time荧光定量PCR法检测病原体特异性片段;采用Hep-2细胞培养分离病毒;通过Sanger测序hexon基因... 目的 对1例不明原因肺炎患者进行病原学诊断,分析其病原学特征及重组特点,为其防治提供参考。方法采集患者的咽拭子标本,提取DNA,采用Real-time荧光定量PCR法检测病原体特异性片段;采用Hep-2细胞培养分离病毒;通过Sanger测序hexon基因进行型别鉴定,通过高通量测序技术对病毒进行全基因组测序,采用MEGA6.0软件进行序列比对,通过邻近归并法(Neighbor-Joining)构建种系发生进化树分析基因特征,运用Simplot软件进行序列重组分析。结果 从患者咽拭子标本中检测并分离到腺病毒,hexon基因测序后进行比对分析,其与腺病毒B组55型及11型同源性较高;全基因测序显示该病毒与HAdV-55QS-DLL及Shanxi/QZ01/2011株同源性较高,在E1B、DNA-Polymerase、100Ka Hexon和Fiber编码区存在氨基酸变异;种系发生进化树显示该毒株与腺病毒14型同属一支,与腺病毒11型进化分支较近;相似性曲线及BootScan分析显示该病毒株于hexon编码区存在HAdV-11与HAdV-14型间重组。结论 本例患者不明原因肺炎由腺病毒B组55型感染引起,该病毒由HAdV-11与HAdV-14重组产生,其生物学特性有待进一步研究。 展开更多
关键词 不明原因肺炎 腺病毒B组55型 分子特征 重组
多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色技术检测病毒性脑炎脑膜炎病原体 预览 被引量:1
9
作者 樊欢 戚宇华 +5 位作者 朱政 葛以跃 赵康程 吴涛 史智扬 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2017年第11期991-995,1001共6页
目的 建立一种病毒性脑炎脑膜炎病原体多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色的检测方法。方法 针对几种重要的脑炎脑膜炎病毒(东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、流行性乙型脑炎病毒、西尼罗病毒和尼帕病毒)保守区基因设计引物,进行多... 目的 建立一种病毒性脑炎脑膜炎病原体多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色的检测方法。方法 针对几种重要的脑炎脑膜炎病毒(东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、流行性乙型脑炎病毒、西尼罗病毒和尼帕病毒)保守区基因设计引物,进行多重PCR反应、核酸侵入反应及纳米金显色反应,对多种脑炎脑膜炎病毒同时进行检测,以森林脑炎病毒、圣路易脑炎病毒、基孔肯雅病毒和登革病毒4种病原核酸评价其检测特异性,以体外转录的病毒RNA或扩增的PCR片段评价其检测敏感性,并对流行性乙型脑炎患者临床标本进行检测。结果 成功建立了一种脑炎脑膜炎病毒多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色的检测技术。建立的检测方法可特异的检测目的病原体,且与森林脑炎病毒、圣路易脑炎病毒、基孔肯雅病毒和登革病毒无交叉反应。该方法对不同靶标的检测灵敏度均为103拷贝/μL,临床标本检测结果均为阳性。结论 建立的脑炎脑膜炎病毒多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色技术的检测方法,具有较高的检测特异性及灵敏度,检测通量高,肉眼即可观察结果,在传染病病原体检测方面具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 病毒性脑炎脑膜炎 多重PCR 核酸侵入反应 纳米金显色
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1株H6N6亚型禽流感病毒分子遗传特性分析 预览 被引量:1
10
作者 祁思敏 宋勇春 +2 位作者 焦永军 祁贤 《微生物与感染》 2017年第5期287-293,共7页
本研究采用无特定病原体(specific pathogen free,SPF)鸡胚,从某活禽市场环境中分离出1株H6N6亚型禽流感病毒(A/environment/Zhenjiang/zj18/2013,en/zj18)。通过二代测序技术进行全基因组测序,通过BLASTn进行同源性检索,并采用MEGA... 本研究采用无特定病原体(specific pathogen free,SPF)鸡胚,从某活禽市场环境中分离出1株H6N6亚型禽流感病毒(A/environment/Zhenjiang/zj18/2013,en/zj18)。通过二代测序技术进行全基因组测序,通过BLASTn进行同源性检索,并采用MEGA5.0软件构建系统发生树。基因进化树分析表明,分离株en/zj18的所有8个基因节段(PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS)均与近年来中国华东地区流行的H6N6亚型禽流感病毒的相应基因位于同一进化分支,与参考株的核苷酸同源性达96.7%~99.6%。分离株en/zj18的HA蛋白裂解位点为PQIETR↓GL,是低致病性禽流感病毒的分子特征。HA蛋白上关键受体结合位点190和228位(按H3亚型的HA蛋白序列排序)氨基酸分别是E和G,理论上更易与α2,3-半乳糖苷唾液酸受体结合。结果提示,需加强活禽市场禽流感病毒的持续监测,从而为有效应对禽流感病毒对公共卫生的持续威胁提供科学依据。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H6N6亚型 病毒分离 基因组测序
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肠道病毒71型感染人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的miRNA表达谱
11
作者 戚宇华 吴涛 +6 位作者 朱小娟 郭喜玲 陈银 赵康辰 葛以跃 周明浩 《国际病毒学杂志》 2017年第5期289-295,共7页
目的 研究肠道病毒71型(EV71)感染神经细胞的miRNA表达谱,探讨miRNA在病毒感染神经细胞中的可能作用.方法 建立EV71感染人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)模型,收集感染后48 h细胞.以Taqman低密度芯片检测miRNA表达谱,使用实时RT-PCR对... 目的 研究肠道病毒71型(EV71)感染神经细胞的miRNA表达谱,探讨miRNA在病毒感染神经细胞中的可能作用.方法 建立EV71感染人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)模型,收集感染后48 h细胞.以Taqman低密度芯片检测miRNA表达谱,使用实时RT-PCR对芯片结果进行验证并在TargetScan和miRanda网站预测靶基因,采用GO和KEGG分析靶基因功能.结果 成功建立EV71感染SH-SY5Y细胞模型,通过低密度芯片筛选出215种显著升高的miRNA和25种显著下调的miRNA.经过RT-PCR验证,3种miRNA(MiR-10a*、miR-15b*和miR-195)显著下调,7种miRNA(miR-10a、miR-342-5p、miR-483-5p、Let-7b、miR-99a、miR-140-5p和miR-21)显著上调,与芯片结果相符.GO分析显示发展进程和信号调节条目最富集靶基因.KEGG路径分析显示靶基因在肿瘤路径、蛋白水解、Wnt信号传导、黑素形成、粘附连接、MAPK信号通道最富集.结论 EV71感染神经细胞48 h后miRNA表达谱发生改变,10种变化的miRNA靶基因预测在发展进程、信号传导及凋亡中起着重要的作用,可为后期机制研究提供参考. 展开更多
关键词 肠道病毒71型 miRNA表达谱 人神经母细胞瘤细胞 神经细胞
重组酶聚合酶扩增结合横向流体试纸条快速检测人腺病毒
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作者 赵康辰 葛以跃 +4 位作者 陈银 史智扬 朱凤才 周明浩 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2017年第4期357-361,共5页
目的 建立一种快速、敏感的人腺病毒等温核酸扩增检测方法.方法 针对人腺病毒hexon基因保守区序列设计特异性重组酶聚合酶扩增(RPA)引物及探针、优化反应时间和温度、用横向流体试纸条(LFD)和毛细管电泳检测扩增产物,建立人腺病毒RP... 目的 建立一种快速、敏感的人腺病毒等温核酸扩增检测方法.方法 针对人腺病毒hexon基因保守区序列设计特异性重组酶聚合酶扩增(RPA)引物及探针、优化反应时间和温度、用横向流体试纸条(LFD)和毛细管电泳检测扩增产物,建立人腺病毒RPA-LFD快速检测方法,评价该方法的敏感度和特异性并与Real-time PCR法比较.结果 RPA-LFD方法检测人腺病毒的最低检出限为2拷贝DNA分子/反应,且与其他呼吸道病原无交叉反应,临床样本检测结果与Real-time PCR法一致性为100%.结论 建立的RPA-LFD方法具有敏感性、特异性高、快速且不需要昂贵的仪器设备等优点,为人腺病毒快速检测提供了新工具. 展开更多
关键词 腺病毒 快速检测 重组酶聚合酶扩增 横向流体试纸条
实时荧光定量PCR直接检测粪便标本艰难梭菌tcdB基因 预览 被引量:2
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作者 谢乐 许雨乔 +5 位作者 刘成成 夏文颖 孙鹏飞 梅亚宁 刘根焰 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2016年第3期211-214,共4页
目的建立艰难梭菌实时荧光定量PCR检测方法,直接检测粪便标本艰难梭菌tcd B基因,并探讨其应用价值。方法根据艰难梭菌基因组设计tcd B基因特异性引物及探针,用ATCC 43255标准株评价其敏感性,选取艰难梭菌生物学特征相近的临床菌株验证... 目的建立艰难梭菌实时荧光定量PCR检测方法,直接检测粪便标本艰难梭菌tcd B基因,并探讨其应用价值。方法根据艰难梭菌基因组设计tcd B基因特异性引物及探针,用ATCC 43255标准株评价其敏感性,选取艰难梭菌生物学特征相近的临床菌株验证其特异性;收集2015年10-12月临床腹泻患者稀便标本115份,提取基因组总DNA后进行tcd B基因检测,并以产毒培养法为参考方法,探讨该方法的临床诊断价值。结果荧光定量PCR法最低检测限为1×10^(-3)ng,并且仅特异性地扩增产毒艰难梭菌;临床样本评价荧光定量PCR的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为75.0%、99.1%、85.7%和98.1%。结论实时荧光定量PCR直接检测稀便标本中的艰难梭菌tcd B基因可用于艰难梭菌相关腹泻的快速诊断。 展开更多
关键词 艰难梭菌 TCD B 实时荧光定量PCR 产毒培养
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1例上呼吸道感染病例的高通量测序病原鉴定
14
作者 郭喜玲 葛以跃 +7 位作者 赵康辰 朱小娟 祁贤 陈银 史智扬 朱凤才 周明浩 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2016年第5期421-424,共4页
目的以高通量测序技术对1例上呼吸道感染病例的可能病原进行鉴定并对样品前处理方法进行优化。方法以核酸酶和/或核糖体RNA探针杂交预处理患者咽拭子样本,非序列依赖单引物扩增(sequence-independent single primer amplification,SI... 目的以高通量测序技术对1例上呼吸道感染病例的可能病原进行鉴定并对样品前处理方法进行优化。方法以核酸酶和/或核糖体RNA探针杂交预处理患者咽拭子样本,非序列依赖单引物扩增(sequence-independent single primer amplification,SISPA)后制备测序文库,利用MiSeq高通量测序,对测序结果进行生物信息分析及Real time RT-PCR验证。结果测序reads经拼接后与病毒数据库比对发现存在乙型流感病毒序列,进化分析该毒株属于Yamagat系一株新的变种,核酸酶结合核糖体RNA探针杂交处理样本可提高高通量测序目标序列数及覆盖率。结论应用核酸酶和/或核糖体RNA探针杂交处理样本结合高通量测序技术可用于快速高效地鉴定不明原因感染的病原。 展开更多
关键词 流感病毒 乙型 高通量测序 SISPA 核酸酶 核糖体RNA
利用CRISPR/Cas9基因编辑技术抑制肠出血性大肠埃希菌O157:H7StxII基因表达 预览
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作者 樊欢 吴涛 +6 位作者 朱小娟 葛以跃 曾晓燕 焦永军 史智扬 朱凤才 《江苏预防医学》 CAS 2016年第5期520-523,共4页
目的利用cRIsPR/cas9基因编辑技术抑制肠出血性大肠埃希菌(EHEC)0157:H7 StxlI基因表达,并评价其对细菌生长的影响及细胞毒性。方法 针对EHEC 0157:H7 StxII基因设计引物,构建cRIsPR/Cas9表达质粒pdCas9-StxII并转化EHEC 0157... 目的利用cRIsPR/cas9基因编辑技术抑制肠出血性大肠埃希菌(EHEC)0157:H7 StxlI基因表达,并评价其对细菌生长的影响及细胞毒性。方法 针对EHEC 0157:H7 StxII基因设计引物,构建cRIsPR/Cas9表达质粒pdCas9-StxII并转化EHEC 0157:H7感受态细胞,采用RT—PCR及胶体金法检测StxII基因表达情况,绘制菌株生长曲线,将菌株培养上清液接种Vero细胞观察细胞病变情况。结果 测序分析显示pdCas9-StxlI表达质粒被成功构建;转化EHEC 0157:H7(00G097)感受态细胞后,StxlI基因mRNA、蛋白表达均受抑制,EHEC 0157:H7生长曲线未受影响(P值均〉0.05)。pdCas9-StxII-00G097菌株培养上清液对细胞的毒性效应(CPE为30%)显著低于对照菌株。0G0g7和pdCas9—00G097(CPE均〉80%)。结论 成功构建的pdCas9-StxII表达质粒能特异抑制EHEC 0157:H7 StxlI基因表达、降低细胞毒性,为进一步研究志贺毒素StxlI在EHEC 0157:H7致病机理和基因工程减毒活菌苗奠定了基础。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9基因编辑技术 EHEC0157:H7菌株 志贺毒素
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重组酶介导的等温扩增法检测H7N9禽流感病毒 预览 被引量:1
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作者 赵康辰 +6 位作者 葛以跃 陈银 朱小娟 刘宾 史智扬 朱凤才 周明浩 《江苏预防医学》 CAS 2016年第5期524-526,530共4页
目的 建立H7N9禽流感病毒一步法逆转录重组酶介导的等温扩增的检测方法(RT—RAA)。方法根据H7N9禽流感病毒HA片段和NA片段的保守区序列分别设计引物、探针,建立RT—RAA方法,研究其特异性、敏感性,并与Real—time RT—PCR方法进行... 目的 建立H7N9禽流感病毒一步法逆转录重组酶介导的等温扩增的检测方法(RT—RAA)。方法根据H7N9禽流感病毒HA片段和NA片段的保守区序列分别设计引物、探针,建立RT—RAA方法,研究其特异性、敏感性,并与Real—time RT—PCR方法进行比较。结果成功建立了H7N9禽流感病毒RT—RAA检测方法,H7反应体系和N9反应体系的最低检出限分别为10 copy/μL和100 eopy/μL,且与其他呼吸道病原无交叉反应。H7N9 RT_RAA体系检测结果与Real—timeRT—PCR一致性较高,Kappa检验M系数为0.933。结论 建立的RT—RAA检测方法具有快速、特异及灵敏的特点,为H7N9禽流感病毒的快速检测提供了新的分子工具。 展开更多
关键词 H7N9禽流感病毒 逆转录-重组酶介导的等温扩增技术 快速检测
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利用CRISPR/Cas9基因编辑技术抑制EV71复制 被引量:2
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作者 吴涛 朱小娟 +7 位作者 樊欢 葛以跃 陈银 郭喜玲 赵康辰 史智扬 朱凤才 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期859-864,共6页
目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对肠道病毒71型(EV71)的特定基因进行编辑,评价其抑制EV71复制的效应。方法针对EV71的VP4区设计CRISPR/Cas9表达质粒pCas-Guide-GFP-G1及含PAM序列的DNA片段并转染Vero细胞株。采用噻唑蓝( MTT)... 目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对肠道病毒71型(EV71)的特定基因进行编辑,评价其抑制EV71复制的效应。方法针对EV71的VP4区设计CRISPR/Cas9表达质粒pCas-Guide-GFP-G1及含PAM序列的DNA片段并转染Vero细胞株。采用噻唑蓝( MTT)法测定细胞毒性,转染后接种病毒观察细胞病变作用( CPE),荧光定量RT-PCR法检测EV71含量,免疫共沉淀结合荧光定量RT-PCR法测定 Cas9-gRNA 在细胞内与 EV71 RNA 特异性结合的能力。结果成功构建pCas-Guide-GFP-G1表达质粒;转染细胞后未见明显细胞毒性效应;细胞转染后接种病毒发现pCas-Guide-GFP-G1+PAM1组细胞病变明显少于其他对照组;培养上清中 EV71含量较对照组降低了40.4%(P=0.056),细胞中 EV71含量较对照组降低了52.8%(P=0.014);pCas-Guide-GFP-G1+PAM1组在细胞内与 EV71 RNA 特异性结合能力最高。结论针对 EV71的 VP4基因设计的CRISPR/Cas9表达质粒在特定PAM存在下能通过对EV71基因组的剪切实现抑制EV71病毒复制的作用,可以为EV71治疗提供新的途径。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9基因编辑技术 肠道病毒71型 病毒复制 抑制
多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色技术检测呼吸道病原体 被引量:1
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作者 樊欢 戚宇华 +4 位作者 朱政 葛以跃 吴涛 史智扬 《国际病毒学杂志》 2016年第5期326-331,共6页
目的 建立一种呼吸道病原体多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色的检测方法.方法 针对几种重要的呼吸道病原体(甲型流感病毒、乙型流感病毒、SARS冠状病毒、嗜肺军团菌、脑膜炎奈瑟菌以及腺病毒)保守区基因设计引物,进行多重PCR反应... 目的 建立一种呼吸道病原体多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色的检测方法.方法 针对几种重要的呼吸道病原体(甲型流感病毒、乙型流感病毒、SARS冠状病毒、嗜肺军团菌、脑膜炎奈瑟菌以及腺病毒)保守区基因设计引物,进行多重PCR反应、核酸侵入反应及纳米金显色反应,对多种呼吸道病原体同时进行检测,以人偏肺病毒、呼吸道合胞病毒、人鼻病毒、肺炎链球菌4种呼吸道病原核酸评价其检测特异性,以体外转录的病毒RNA或扩增的PCR片段评价其检测敏感性.结果 成功建立了一种呼吸道病原体多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色的检测技术.建立的检测方法可特异的检测目的病原体,且与人偏肺病毒、呼吸道合胞病毒、人鼻病毒、肺炎链球菌无交叉反应.该方法对不同靶标的检测灵敏度介0.5 ~50拷贝/μL.结论 建立的呼吸道病原体多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色技术的检测方法,具有较高的检测特异性及灵敏度,检测通量高,肉眼即可观察结果,在传染病病原体检测方面具有广阔的应用前景. 展开更多
关键词 呼吸道病原体 多重PCR 侵入反应 纳米金显色
2012年江苏部分地区动物中发热伴血小板减少综合征病毒携带状况调查 预览 被引量:1
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作者 彭海燕 +7 位作者 胡建利 鲍倡俊 李燕 焦永军 卞倩 史智扬 周明浩 《华中科技大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期235-238,共4页
目的了解江苏部分地区动物中发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)携带状况,探讨其可能的传播媒介和自然宿主。方法 2012年3月-12月在江苏省发现发热伴血小板减少综合征病例的7个市/县,采集鼠、牛、羊、刺猬、鸟类和蜱等动物标本,提取... 目的了解江苏部分地区动物中发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)携带状况,探讨其可能的传播媒介和自然宿主。方法 2012年3月-12月在江苏省发现发热伴血小板减少综合征病例的7个市/县,采集鼠、牛、羊、刺猬、鸟类和蜱等动物标本,提取总核酸后,应用实时荧光RT-PCR法对标本进行布尼亚病毒S基因核酸的检测,阳性标本采用Vero细胞进行病毒分离。结果采集761只(管)动物,43只(管)检出SFTSV核酸阳性,阳性率为5.65%。采集3 728份标本,阳性49份,阳性率为1.31%。鼠的病毒携带率最高(6.84%),蜱标本阳性率最高(4.94%)。除蜱标本外的3 647份标本中检出阳性45份,阳性率为1.23%,不同器官阳性率分别为淋巴结(50.00%)、血清(2.34%)、脾(1.64%)、心(1.64%)、肝(1.28%)、肺(1.09%)、脑(0.94%)、肾(0.73%)、血块(0.41%)。5月标本阳性率最高(4.01%)。从1份羊血清及其体表1份蜱标本中各分离出1株SFTSV病毒。结论鼠、牛、羊和蜱均可携带SFTSV,可能是其自然宿主或传播媒介。 展开更多
关键词 发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV) 实时荧光RT-PCR 宿主 媒介 监测
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江苏省部分地区716例食源性疾病病毒感染检测与分析 被引量:4
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作者 单云峰 童晶 +3 位作者 吴涛 郑东宇 唐震 《中国卫生检验杂志》 2015年第13期2195-2197,共3页
目的监测和评价江苏地区食源性疾病常见病毒感染状况,为食源性疾病的控制和早期治疗提供科学依据。方法收集2012年3月-2013年2月江苏省徐州、常州、南京3市哨点医院相关食源性疾病患者的肛拭子标本,采用荧光定量RT—PCR方法检测轮状... 目的监测和评价江苏地区食源性疾病常见病毒感染状况,为食源性疾病的控制和早期治疗提供科学依据。方法收集2012年3月-2013年2月江苏省徐州、常州、南京3市哨点医院相关食源性疾病患者的肛拭子标本,采用荧光定量RT—PCR方法检测轮状病毒、星状病毒、杯状病毒和腺病毒。结果共计716份肛拭子标本,病毒检测阳性173例,阳性率为24.16%。其中轮状病毒占检出病毒阳性数的50.29%(87/173),杯状病毒占26.59%(46/173),星状病毒占13.29%(23/173),腺病毒占9.83%(17/173)。上述病毒感染均以〈2岁婴幼儿为主。不同月份病毒检出阳性率差异有统计学意义(P〈0.05),其中7月份最高,达34.38%。结论江苏省徐州、常州、南京3市食源性疾病感染的主要病毒为轮状病毒,同时也应重视杯状病毒、星状病毒及腺病毒等感染在食源性疾病中的致病作用。建议提高健康儿童相关疫苗的覆盖率,加强食源性病毒的监测,阻止疾病的传播流行。 展开更多
关键词 食源性疾病 食源性病毒 监测
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