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多发性骨髓瘤患者外周T淋巴细胞亚群和NK细胞比值与预后关系 预览
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作者 宋斌 万楚成 +6 位作者 王刚 露璐 荣耀 耿伟 周璐 常娟 胡平 《标记免疫分析与临床》 CAS 2019年第1期119-121,共3页
目的探讨多发性骨髓瘤患者外周T淋巴细胞亚群和NK细胞比值与预后的关系。方法采用流式细胞术检测123例初治骨髓瘤患者化疗前及化疗中和全疗程结束后外周血T淋巴细胞亚群与NK细胞的表达水平。比较各期患者治疗前后与健康对照组外周T淋巴... 目的探讨多发性骨髓瘤患者外周T淋巴细胞亚群和NK细胞比值与预后的关系。方法采用流式细胞术检测123例初治骨髓瘤患者化疗前及化疗中和全疗程结束后外周血T淋巴细胞亚群与NK细胞的表达水平。比较各期患者治疗前后与健康对照组外周T淋巴细胞亚群和NK细胞水平。结果Ⅰ期多发性骨髓瘤患者的CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+比值下降,CD8^+升高,与对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。CD56^+在Ⅰ期及Ⅲ期表达增高,Ⅱ期表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后CD4^+T细胞、CD4^+/CD8^+及CD56^+NK细胞的百分比与治疗前相比较明显上升,而CD8^+T细胞的百分比与治疗前相比较明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论外周T淋巴细胞亚群和NK细胞的检测可用于不同时期的多发性骨髓瘤的诊断及预后预测,具有重要的临床应用价值。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 T淋巴细胞亚群 NK细胞 预后
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CpG ODN对急性粒-单核细胞白血病荷瘤小鼠免疫治疗作用研究 预览
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作者 亦琳 王刚 +5 位作者 曹星梅 何爱丽 赵万红 王瑾 古流芳 陈社平 《现代肿瘤医学》 CAS 2019年第12期2070-2074,共5页
目的:探讨两种CpG ODN序列对急性粒-单核细胞白血病荷瘤小鼠模型的免疫治疗作用。方法:通过注射WEHI-3细胞构建急性粒-单核细胞白血病荷瘤小鼠模型,分别皮下注射PBS无菌缓冲液、CpG 1826、CpG Seq14,观察治疗后各组小鼠的一般状况、生... 目的:探讨两种CpG ODN序列对急性粒-单核细胞白血病荷瘤小鼠模型的免疫治疗作用。方法:通过注射WEHI-3细胞构建急性粒-单核细胞白血病荷瘤小鼠模型,分别皮下注射PBS无菌缓冲液、CpG 1826、CpG Seq14,观察治疗后各组小鼠的一般状况、生存时间、瘤结节生长、病理切片等,综合评价两种CpG ODN的治疗效果。结果:皮下接种1×10^6个WEHI-3细胞,成功建立急性粒-单核细胞白血病荷瘤小鼠模型。肿瘤组平均生存时间20.87天,CpG 1826组32.60天,CpG Seq14组28.35天,两种CpG治疗组小鼠平均存活时间明显较肿瘤组长,P<0.05;实验初期,肿瘤组及两CpG治疗组小鼠较正常组小鼠体重增长明显,终末期体重明显下降;肿瘤组小鼠瘤结节较同期两CpG治疗组小鼠大,且增长速度快;肿瘤组小鼠肝脏、脾脏、肿瘤组织中均可见广泛瘤细胞浸润,CpG治疗组肝脏、脾脏中瘤细胞浸润明显减少,脾脏白髓区明显较对照组扩大,小鼠免疫功能增强,减少了肿瘤细胞的器官浸润;两实验组小鼠注射CpG部位均未见红肿、硬结、坏死等不良反应。结论:CpG 1826、CpG Seq14直接用于急性粒-单核细胞白血病荷瘤小鼠模型的免疫治疗,均可增强小鼠抗肿瘤作用,延长生存时间,且无明显毒副作用。 展开更多
关键词 急性粒单核细胞白血病 CPGODN 免疫治疗
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WT1多肽疫苗对荷人单核细胞白血病SCID小鼠的抗肿瘤免疫效应 预览
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作者 李静 王刚 +4 位作者 钟波 白菊 刘海燕 王慧渊 耿妍 《西安交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期690-695,共6页
目的 研究WT1多肽疫苗对荷人单核细胞白血病重度联合免疫缺陷(SCID)小鼠的抗肿瘤免疫效应。方法 对SCID小鼠腹腔注射人外周血淋巴细胞(PBL)后24h,皮下接种THP1细胞,建立SCID小鼠荷人单核细胞白血病模型,随机分组,每组8只。空白对照组的... 目的 研究WT1多肽疫苗对荷人单核细胞白血病重度联合免疫缺陷(SCID)小鼠的抗肿瘤免疫效应。方法 对SCID小鼠腹腔注射人外周血淋巴细胞(PBL)后24h,皮下接种THP1细胞,建立SCID小鼠荷人单核细胞白血病模型,随机分组,每组8只。空白对照组的疫苗成分为不完全弗氏佐剂,辅助T细胞表位组的疫苗成分为辅助T细胞表位和不完全弗氏佐剂,WT1多肽组的疫苗成分为WT1多肽、辅助T细胞表位和不完全弗氏佐剂。当肿瘤体积约为100mm3时,开始腹腔注射疫苗成分,疫苗接种14d后处死SCID小鼠。采用乳酸脱氢酶法检测小鼠脾细胞特异性CTL杀伤活性,肿瘤组织HE染色后镜下观察组织学特点,利用流式细胞仪检测外周血CD3^+/CD4^+T细胞、CD3^+/CD8^+T细胞及CD4^+CD25^+T细胞水平,应用ELISA方法检测血清中免疫球蛋白、IL-2、IFN-γ、TGF-β及IL-10水平。结果 实验成功建立荷人单核细胞白血病SCID小鼠模型,各组中所有动物均成瘤;WT1组小鼠脾细胞对THP1细胞的CTL活性高于辅助T细胞表位组和空白对照组(P<0.05);WT1组小鼠的肿瘤平均体质量及体积均明显低于辅助T细胞表位组和空白对照组(P<0.05);WT1组肿瘤组织HE染色显示肿瘤细胞变性坏死,存活的肿瘤细胞减少;WT1组小鼠外周血CD3^+/CD4^+T细胞、CD3^+/CD8^+T细胞、IgG、IFN-γ和IL-2水平均明显高于辅助T细胞表位组和空白对照组(P<0.05);外周血CD4^+/CD25^+Treg细胞、TGF-β和IL-10水平均明显低于辅助T细胞表位组和空白对照组(P<0.05)。结论 WT1多肽疫苗可在荷人单核细胞白血病SCID小鼠体内产生抗肿瘤免疫效应,有效杀伤白血病细胞。 展开更多
关键词 WT1多肽疫苗 单核细胞白血病 抗肿瘤免疫效应 SCID小鼠
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急性单核细胞白血病新抗原基因MLAA-34启动子的克隆及其核心区鉴定
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作者 雷博 王刚 +8 位作者 何爱丽 陈银霞 曹星梅 赵万红 王剑利 刘捷 马肖容 鹏宇 白菊 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期641-645,共5页
目的:克隆急性单核细胞白血病新抗原基因MLAA-34上游启动子序列并检测其活性、鉴定核心区域。方法:PCR扩增MLAA-34基因启动子区全长片段,将其连接至p GL3-Basic载体,克隆重组质粒;构建一系列MLAA-34基因启动子5’侧翼区截短质粒;将含MLA... 目的:克隆急性单核细胞白血病新抗原基因MLAA-34上游启动子序列并检测其活性、鉴定核心区域。方法:PCR扩增MLAA-34基因启动子区全长片段,将其连接至p GL3-Basic载体,克隆重组质粒;构建一系列MLAA-34基因启动子5’侧翼区截短质粒;将含MLAA-34启动子序列的重组质粒及其截短型质粒转染至U937、HEK293细胞,应用双荧光素酶报告基因检测各片段的启动子活性,确定启动子最小活性区域,并通过生物信息学方法分析转录因子结合位点。结果:构建了含有MLAA-34启动子序列的重组质粒及其截短型质粒;与空载体相比,其启动子活性明显增加(P <0. 001)。MLAA-34最小活性区域位于转录起始位点-402 bp至-200 bp之间,其中包含E2F1,MZF-1,SP1,USF2和STAT3等多个转录因子结合位点。结论:成功构建急性单核细胞白血病新抗原基因MLAA-34不同缺失片段的启动子荧光素酶报告基因重组质粒,鉴定出核心启动子区,其中含有多个潜在的转录因子结合序列。 展开更多
关键词 急性单核细胞白血病 MLAA-34启动子 转录调控
具有三维异质结构的CdSe/TiO2纳米管阵列薄膜制备及性能测试 预览
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作者 杨飞 梁伟 +2 位作者 薛晋波 赵兴国 王刚 《太原理工大学学报》 CAS 北大核心 2019年第2期186-190,共5页
首先采用阳极氧化法制备TiO2纳米管阵列,结合不同的电化学方法制备具有三维异质结构的CdSe/TiO2纳米管阵列复合薄膜。结果表明:电解液中加入酒石酸钾钠,采用循环伏安法和恒压沉积法都得到了分散性好,尺寸小而均匀分布的CdSe纳米颗粒。... 首先采用阳极氧化法制备TiO2纳米管阵列,结合不同的电化学方法制备具有三维异质结构的CdSe/TiO2纳米管阵列复合薄膜。结果表明:电解液中加入酒石酸钾钠,采用循环伏安法和恒压沉积法都得到了分散性好,尺寸小而均匀分布的CdSe纳米颗粒。特别是采用循环伏安法制备CdSe/TiO2纳米管阵列薄膜时,得到直径为15~20nm的立方相CdSe颗粒,且均匀地分布在TiO2纳米管管内和管口,能够充分地利用TiO2纳米管阵列的三维结构,形成具有三维异质结构的CdSe/TiO2纳米管阵列复合薄膜。光电性能结果表明测试,这种具有三维异质结构的CdSe/TiO2纳米管阵列复合薄膜能够充分利用太阳光,并有效地促进光生载流子的分离和传输,呈现出最佳的光电化学性能。 展开更多
关键词 TIO2纳米管 CDSE 阳极氧化 电化学沉积 酒石酸钾钠
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转录因子E2F1对急性单核细胞白血病新抗原基因MLAA-34的转录调控作用 预览
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作者 雷博 王刚 +9 位作者 何爱丽 陈银霞 曹星梅 鹏宇 赵万红 王剑利 刘捷 马肖容 彦平 刘海玲 《现代肿瘤医学》 CAS 2019年第20期3560-3565,共6页
目的:探讨转录因子E2F1对急性单核细胞白血病新抗原基因MLAA-34的转录调控作用。方法:利用双荧光素酶报告基因检测系统及定点突变技术分析E2F1对MLAA-34基因启动子转录活性的影响。通过凝胶迁移实验(EMSA)和染色质免疫共沉淀(ChIP)实验... 目的:探讨转录因子E2F1对急性单核细胞白血病新抗原基因MLAA-34的转录调控作用。方法:利用双荧光素酶报告基因检测系统及定点突变技术分析E2F1对MLAA-34基因启动子转录活性的影响。通过凝胶迁移实验(EMSA)和染色质免疫共沉淀(ChIP)实验,验证E2F1是否与MLAA-34启动子核心区直接特异性结合。构建E2F1真核表达载体和干涉载体,转染U937细胞,RT-PCR和Western Blot检测MLAA-34基因的转录和表达变化。结果:转录因子E2F1对MLAA-34基因表达具有调控作用,E2F1结合序列点突变后,相对荧光素酶活性升高(P<0.01),绿色荧光蛋白的表达增高。EMSA和ChIP实验,从细胞内、外水平分别证明E2F1可与MLAA-34启动子直接结合而发挥调控作用。在过表达试验中,E2F1的增加可下调MLAA-34的表达(P<0.05);在干涉试验中,E2F1的降低可上调MLAA-34的表达(P<0.05)。结论:转录因子E2F1可与MLAA-34基因启动子上的转录调控区结合,并抑制急性单核细胞白血病细胞中MLAA-34基因的转录。 展开更多
关键词 急性单核细胞白血病 MLAA-34 E2F1 转录调控
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铜掺杂TiO2纳米管阵列薄膜的制备及表征
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作者 孙研豪 刘一鸣 +3 位作者 王刚 温婧 牛晓峰 王红霞 《稀有金属材料与工程》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2019年第8期2568-2573,共6页
提出了一种磁控溅射和阳极氧化相结合制备Cu掺杂TiO2纳米管(Cu-TNT)阵列的方法。掺杂后的样品通过扫描电镜(SEM)、X射线衍射(XRD)、透射电镜(TEM)和X射线光电子能谱(XPS)等手段对其结构和光电性能做了研究与分析。结果表明:Cu以离子形... 提出了一种磁控溅射和阳极氧化相结合制备Cu掺杂TiO2纳米管(Cu-TNT)阵列的方法。掺杂后的样品通过扫描电镜(SEM)、X射线衍射(XRD)、透射电镜(TEM)和X射线光电子能谱(XPS)等手段对其结构和光电性能做了研究与分析。结果表明:Cu以离子形态均匀地掺杂进入TiO2纳米管中,且为取代掺杂;Cu掺杂对TiO2纳米管(TNT)的生长具有抑制作用,对TNT的形貌有明显影响;Cu掺杂对TNT晶体生长取向也有明显影响,抑制锐钛矿(101)晶面的生长,使(101)晶面产生晶格畸变、晶面间距变宽并促进锐钛矿(004)晶面的择优生长。瞬态光电流响应分析表明Cu掺杂TNT有利于抑制光生电子-空穴对的复合速率,提高太阳能利用率。 展开更多
关键词 CU掺杂 TIO2纳米管 阳极氧化 磁控溅射 光生电子-空穴
N-硬脂酰丝氨酸对APP/PS1转基因小鼠学习记忆及运动能力的影响 预览
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作者 刘沙 周毅 +4 位作者 郑琪雪 王刚 李淋淋 姜浩 尤思路 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第8期1252-1257,共6页
目的 研究N-硬脂酰丝氨酸(NSS)能否通过大麻素Ⅱ型(CB2)受体改善APP/PS1转基因小鼠行为学异常现象。方法 采用9月龄APP/PS1转基因小鼠模拟阿尔茨海默病模型;通过开场实验观察小鼠自主活动能力,疲劳转棒仪实验观察小鼠运动协调及抗疲劳能... 目的 研究N-硬脂酰丝氨酸(NSS)能否通过大麻素Ⅱ型(CB2)受体改善APP/PS1转基因小鼠行为学异常现象。方法 采用9月龄APP/PS1转基因小鼠模拟阿尔茨海默病模型;通过开场实验观察小鼠自主活动能力,疲劳转棒仪实验观察小鼠运动协调及抗疲劳能力,水迷宫实验观察小鼠学习记忆功能,通过ELISA方法测定β-淀粉样蛋白(Aβ)42及Aβ40水平,通过Western blot方法测定CB2蛋白表达水平。结果 NSS(2 mg/kg和5 mg/kg)能提高转基因小鼠运动协调及学习记忆能力,降低脑组织Aβ42及Aβ40水平,上调CB2蛋白水平;CB2受体拮抗剂AM630能抑制上述现象。结论 NSS改善APP/PS1转基因小鼠学习记忆障碍及运动失调,降低转基因小鼠海马组织Aβ42及Aβ40水平,此机制可能是通过CB2受体实现。 展开更多
关键词 N-硬脂酰丝氨酸 APP/PS1转基因小鼠 动物行为学 CB2受体
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血清CysC、Cr及LDH水平变化诊断多发性骨髓瘤早期肾损伤的价值 预览
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作者 宋斌 陈雁 +5 位作者 荣耀 李娜 耿伟 郭秀 王刚 万楚成 《现代肿瘤医学》 CAS 2018年第21期3471-3474,共4页
目的:研究多发性骨髓瘤早期肾损伤患者血清胱抑素C(CysC)、肌酐(Cr)及乳酸脱氢酶(LDH)变化的价值,为临床诊断提供参考。方法:回顾性分析我院及西安交通大学第二附属医院于2016年1月至2018年1月期间收治的40例多发性骨髓瘤患者... 目的:研究多发性骨髓瘤早期肾损伤患者血清胱抑素C(CysC)、肌酐(Cr)及乳酸脱氢酶(LDH)变化的价值,为临床诊断提供参考。方法:回顾性分析我院及西安交通大学第二附属医院于2016年1月至2018年1月期间收治的40例多发性骨髓瘤患者的临床资料作为观察组,另选取同期来院参加体检的健康志愿者40例作为对照组。对比两组受检者的血清CysC、Cr及LDH水平,并分析其诊断及联合诊断特异度及灵敏度。结果:两组间相比,观察组患者的血清CysC、Cr及LDH水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P〈0.05)。两组间相比,观察组患者的血清CysC、Cr及LDH阳性率分别为62.5%、42.5%、60.0%,均高于对照组,差异有统计学意义(P〈0.05)。而诊断效能对比,CysC、Cr及LDH三者联合检测的灵敏度最高,可达到95.0%。结论:多发性骨髓瘤早期肾损伤患者血清CysC、Cr及LDH水平及阳性率均明显升高,且三者联合诊断灵敏度最高,值得临床借鉴。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 早期肾损伤 血清胱抑素C 肌酐 乳酸脱氢酶
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iFISH技术检测多发性骨髓瘤遗传学异常及其临床意义 预览 被引量:1
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作者 蒙珊 赵万红 +5 位作者 杨云 王刚 曹星梅 龙进 蒙昕 田纬 《现代肿瘤医学》 CAS 2018年第3期440-445,共6页
目的:采用iFISH技术了解多发性骨髓瘤染色体异常情况,分析染色体异常与多发性骨髓瘤部分临床资料、治疗效果及预后之间的关系。方法:采用组合探针(1q21、DLEU/RB1、p53、IGH)对94例初诊MM患者骨髓细胞进行iFISH检测,分析其细胞遗... 目的:采用iFISH技术了解多发性骨髓瘤染色体异常情况,分析染色体异常与多发性骨髓瘤部分临床资料、治疗效果及预后之间的关系。方法:采用组合探针(1q21、DLEU/RB1、p53、IGH)对94例初诊MM患者骨髓细胞进行iFISH检测,分析其细胞遗传学异常,探讨其与临床资料及治疗效果之间的关系,明确其预后价值。结果:94例患者中,74例(78.72%)检测出1种及1种以上细胞遗传学异常;其中1种异常的34例(34/74,45.95%),2种异常的15例(15/74,20.27%),25例存在3种及3种以上异常(25/74,33.78%)。其异常的比例从高到低分别为:p53缺失(45/74,60.81%),1q21扩增(44/74,59.46%),IGH重排(31/74,41.89%),DLEU/RB1缺失(28/74,37.84%)。分析发现,p53缺失与血小板计数、白蛋白及球蛋白水平有关,IGH重排与白蛋白及瘤细胞负荷有关,DLEU/RB1缺失与血红蛋白、血沉、白蛋白及球蛋白水平有关,未发现1q21扩增与各项临床指标之间的关系。将患者按照治疗方案分为VAD组和硼替佐米组,结果显示VAD组中iFISH阴性者的疗效明显优于iFISH阳性者,而在硼替佐米组未发现FISH阳性者和阴性者的疗效有差异。生存分析发现,IGH重排与总生存时间相关,而p53缺失与总生存时间和无病生存时间均明显相关,为MM患者的独立预后因素。结论:多数MM患者存在细胞遗传学异常;1q21扩增、p53缺失及IGH重排的发生率较高;细胞遗传学异常与多种不良临床指标相关,并与临床治疗反应性相关,存在异常者治疗效果欠佳,预后较差。 展开更多
关键词 染色体异常 多发性骨髓瘤 间期荧光原位杂交
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非霍奇金淋巴瘤化疗后脂肪肝形成临床研究 预览
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作者 亦琳 赵万红 +10 位作者 王刚 何爱丽 曹星梅 刘捷 陈银霞 王剑利 陈社平 杨云 马肖容 古流芳 王瑾 《现代肿瘤医学》 CAS 2018年第24期4004-4007,共4页
目的:探讨非霍奇金淋巴瘤患者化疗后脂肪肝的发生率与影响因素。方法:2014年1月至2015年12月,共收集了西安交通大学医学院第二附属医院血液科158例非霍奇金淋巴瘤患者的临床资料,对比化疗前后肝脏B超、生化指标转氨酶[肝功谷草转氨酶... 目的:探讨非霍奇金淋巴瘤患者化疗后脂肪肝的发生率与影响因素。方法:2014年1月至2015年12月,共收集了西安交通大学医学院第二附属医院血液科158例非霍奇金淋巴瘤患者的临床资料,对比化疗前后肝脏B超、生化指标转氨酶[肝功谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)、谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)]及血脂[胆固醇(cholesterol,CHOL)、甘油三脂(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low densith lipoprotein,LDL)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)]等水平的变化。结果:在158例患者中,化疗期间共有59例患者超声检查诊断为脂肪肝,发生率达37. 3%,与化疗前具有显著差异;出现脂肪肝时间为化疗后1. 5~17. 0个月,平均5. 4个月;化疗2. 0~12. 0个疗程出现,平均4. 2个疗程。出现脂肪肝患者从初诊到诊断脂肪肝时体重增长-7. 1~23. 2 kg,平均增长5. 5 kg。不同性别、年龄、淋巴瘤类型之间,脂肪肝发生率差异不具有统计学意义。化疗后患者肝功转氨酶及血脂水平均有不同程度升高,差异具有统计学意义,11例合并脂肪肝患者在化疗完全结束后3~9个月B超检测肝脏恢复正常,无脂肪肝表现。结论:非霍奇金淋巴瘤患者化疗后可发生肝功损害、血脂异常,部分可发展为脂肪肝,临床医师应认识到脂肪肝危害,及早发现并处理。 展开更多
关键词 非霍奇金淋巴瘤 化疗 脂肪肝
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MLAA-22基因上游调控区的分离及启动子活性分析 预览
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作者 崔鹤 王刚 《现代肿瘤医学》 CAS 2018年第4期489-493,共5页
目的:分离MLAA-22 基因上游转录调控区序列,进行启动子活性鉴定。方法:人工合成MLAA-22 基因上游转录调控区序列MLAA-22(-999-+1)和MLAA-22(-1999-+1)两个区段,将两个区段插入到双荧光素酶报告基因表达载体psiCHECK-2的BglⅡ/... 目的:分离MLAA-22 基因上游转录调控区序列,进行启动子活性鉴定。方法:人工合成MLAA-22 基因上游转录调控区序列MLAA-22(-999-+1)和MLAA-22(-1999-+1)两个区段,将两个区段插入到双荧光素酶报告基因表达载体psiCHECK-2的BglⅡ/NheI限制性内切酶位点中,构建双荧光素酶报告基因表达质粒,将重组质粒分别命名为psiCHECK-2-MLAA-22(-999-+1)和psiCHECK-2-MLAA-22(-1999-+1);采用双荧光素酶报告基因系统检测所分离区段的启动子活性。结果:MLAA-22(-999-+1)和MLAA-22(-1999-+1)两个区段均具有较强的相对荧光素酶活性,并且MLAA-22(-999-+1)区段的相对荧光素酶活性明显高于MLAA-22(-1999-+1)区段。结论:MLAA-22 基因上游转录调控区(-999-+1)区段将是今后我们进行MLAA-22 基因上游转录调控区启动子活性研究的重点区域。 展开更多
关键词 MLAA-22基因 转录调控区 双荧光素酶报告基因 启动子
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人急性单核细胞白血病相关抗原22RNA干扰序列的筛选及鉴定
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作者 古流芳 鹏宇 +1 位作者 曹星梅 王刚 《白血病.淋巴瘤》 CAS 2018年第3期149-153,共5页
目的筛选获得急性单核细胞白血病相关抗原22(MLAA-22)最佳RNA干扰序列,为后期MLAA-22功能研究奠定基础。方法采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)克隆MLAA-22蛋白质编码区序列(CDS),将测序正确的MLAA-22CDS插入pEGFP-N1-3FLAG载体... 目的筛选获得急性单核细胞白血病相关抗原22(MLAA-22)最佳RNA干扰序列,为后期MLAA-22功能研究奠定基础。方法采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)克隆MLAA-22蛋白质编码区序列(CDS),将测序正确的MLAA-22CDS插入pEGFP-N1-3FLAG载体,构建真核pEGFP-N1-3FLAG表达载体,同时构建4个MLAA-22靶向RNA干扰载体,共转染293T细胞后通过细胞荧光强度分析及蛋白印迹法筛选最佳MLAA-22RNA干扰序列。结果成功构建了MIJAA-22真核pEGFP-N1-3FLAG表达载体,同时构建了4个RNA干扰载体,共转染293T细胞后筛选获得KD2为最佳干扰序列。结论KD2是靶向MLAA-22抗原基因的最佳RNA干扰序列。 展开更多
关键词 白血病 单核细胞 急性 RNA干扰 急性单核细胞白血病相关抗原22
改良的CHOPE方案治疗EBV阳性恶性淋巴瘤的临床疗效观察 预览 被引量:1
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作者 古流芳 冯远栋 +3 位作者 崔晓光 何爱丽 王刚 曹星梅 《现代肿瘤医学》 CAS 2018年第6期928-931,共4页
目的:观察改良的CHOPE方案(环磷酰胺+柔红霉素+长春新碱+泼尼松)治疗EBV阳性的恶性淋巴瘤的临床疗效及毒副反应。方法:本研究采用改良的CHOPE[KG(*9]方案联合抗病毒及局部放射治疗,治疗了46例EBV阳性的恶性[KG)]淋巴瘤。结果:3个疗程评... 目的:观察改良的CHOPE方案(环磷酰胺+柔红霉素+长春新碱+泼尼松)治疗EBV阳性的恶性淋巴瘤的临床疗效及毒副反应。方法:本研究采用改良的CHOPE[KG(*9]方案联合抗病毒及局部放射治疗,治疗了46例EBV阳性的恶性[KG)]淋巴瘤。结果:3个疗程评估完全缓解(CR)21例(45.7%),部分缓解(PR)12例(26.1%),8例为稳定状态(SD),5例疾病进展(PD),总有效率为71.7%。治疗结束后总有效率达81.2%,46例患者1年总生存率(OS)为78%,1年无病生存率(DFS)69%;3年OS为34.7%,3年DFS为31%。结论:总体而言改良的CHOPE方案治疗EBV阳性淋巴瘤有效,毒副反应可安全耐受,但长期生存率仍然较差,因此对于EBV阳性的恶性淋巴瘤患者在强调早期强化疗的基础上应把异基因造血干细胞移植提上议程,以获得更好的治疗效果。 展开更多
关键词 EB病毒 恶性淋巴瘤 改良的CHOPE方案 生存率
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粒细胞刺激因子对白血病细胞趋化因子受体4表达及趋化能力和骨髓微环境的影响 预览
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作者 王瑾 牛奔 +1 位作者 马肖容 王刚 《中国组织工程研究》 北大核心 2018年第33期5268-5273,共6页
背景:骨髓微环境可通过细胞黏附分子介导白血病细胞耐药和免疫逃逸。这些黏附分子可作为新的作用靶点,通过降低其表达水平和功能,有望打破白血病耐药机制。目的:观察重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony sti... 背景:骨髓微环境可通过细胞黏附分子介导白血病细胞耐药和免疫逃逸。这些黏附分子可作为新的作用靶点,通过降低其表达水平和功能,有望打破白血病耐药机制。目的:观察重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony stimulating factor,rhG-CSF)对急性白血病WEHI-3细胞趋化因子受体4表达水平和趋化性的影响,以及在小鼠体内对骨髓基质细胞衍生因子1和外周血Treg细胞的作用。方法:①将急性白血病细胞株WEHI-3与rhG-CSF共同孵育6,12,18,24 h后,用流式细胞术检测趋化因子受体4表达水平,微孔细胞转移实验检测其迁移能力;②健康Balb/C小鼠给予rhG-CSF皮下注射,ELISA法检测骨髓及外周血中基质细胞衍生因子1水平,流式细胞术检测脾脏及外周血Treg细胞比例。结果与结论:①rhG-CSF作用后WEHI-3细胞表面趋化因子受体4的表达水平明显下降(P<0.05),细胞对基质细胞衍生因子1的趋化性显著降低(P<0.05);②健康小鼠应用rhG-CSF处理后,骨髓中基质细胞衍生因子1水平较生理盐水组明显降低(P<0.05),外周血及骨髓Treg细胞比例显著升高(P<0.05);③结果表明,rhG-CSF可以下调白血病细胞表面趋化因子受体4的表达,降低骨髓中基质细胞衍生因子1水平,并可动员Treg细胞进入外周血,从而打破骨髓微环境介导的免疫逃逸和耐药,改善白血病的免疫治疗效果。 展开更多
关键词 粒细胞集落刺激因子 基质细胞衍生因子1 趋化因子受体4 Treg 骨髓微环境 免疫逃逸 陕西省自然科学基金 粒细胞集落刺激因子 趋化因子CXCL12 受体 趋化因子 T淋巴细胞 调节 组织工程
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下调MLAA-22基因对U937细胞增殖与分化的影响 预览
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作者 崔鹤 王刚 《西安交通大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第4期519-524,共6页
目的研究MLAA-22基因的表达下调对U937细胞增殖及分化的影响。方法采用规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关核酸酶9(Cas9)系统下调U937细胞MLAA-22基因的表达;CruiserTM酶切法检测单链引导RNA(single guide RNA,sgRNA... 目的研究MLAA-22基因的表达下调对U937细胞增殖及分化的影响。方法采用规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关核酸酶9(Cas9)系统下调U937细胞MLAA-22基因的表达;CruiserTM酶切法检测单链引导RNA(single guide RNA,sgRNA)的活性;基因突变区PCR产物的TA克隆及测序法检测MLAA-22基因的突变率;细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖;流式细胞仪检测CD11b的表达。结果CruiserTM酶切结果显示:所采用的CRISPR/Cas9系统的sgRNA序列能够高效地识别基因编辑靶点;TA克隆及测序结果显示:MLAA-22基因的突变率为61.3%;CCK-8检测结果显示:MLAA-22基因下调后,U937细胞的增殖明显受到抑制;流式细胞仪检测结果显示:MLAA-22基因下调后,CD11b阳性细胞率显著升高。结论 MLAA-22基因可能通过调控细胞分化而影响U937细胞增殖,从而促进急性单核细胞白血病的发生与发展。 展开更多
关键词 MLAA-22基因 细胞增殖 细胞分化 急性单核细胞白血病
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CCK-8法在淋巴细胞增殖检测中最佳实验条件的筛选 预览 被引量:3
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作者 王瑾 马肖容 王刚 《中国医药导报》 CAS 2018年第23期13-16,共4页
目的筛选CCK-8法在淋巴细胞增殖检测中的最佳实验条件。方法采用正交实验设计,对初始细胞浓度、培养时间、LPS浓度、显色时间这4个主要因素各水平对人外周血单个核细胞(PBMC)和小鼠脾细胞增殖的影响进行试验研究,对各实验组合测得的... 目的筛选CCK-8法在淋巴细胞增殖检测中的最佳实验条件。方法采用正交实验设计,对初始细胞浓度、培养时间、LPS浓度、显色时间这4个主要因素各水平对人外周血单个核细胞(PBMC)和小鼠脾细胞增殖的影响进行试验研究,对各实验组合测得的刺激指数进行方差分析。结果 CCK-8检测人PBMC增殖试验的最佳条件:初始细胞浓度为2.5×10~6/mL,培养时间为48 h,LPS浓度为1μg/mL,加入CCK-8后孵育4.5 h;检测小鼠脾细胞增殖试验的最佳条件:初始细胞浓度为5.0×10~6/mL,培养时间为48 h,LPS浓度为1μg/mL,加入CCK-8后孵育4.5 h。结论 CCK-8法便捷、灵敏、重复性好,可作为检测淋巴细胞增殖的稳定方法。本研究建立的CCK-8最佳实验条件可为免疫调节作用的药物体外筛选和免疫药理学作用的研究提供依据。 展开更多
关键词 CCK-8 PBMC 淋巴细胞增殖 正交实验
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急性单核细胞白血病相关抗原基因MLAA-22全长的克隆及生物信息学分析 预览
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作者 古流芳 鹏宇 +2 位作者 曹星梅 何爱丽 王刚 《实用癌症杂志》 2018年第12期1920-1923,1927共5页
目的 获得急性单核细胞白血病相关抗原基因MLAA-22cDNA全长序列,以便进行新基因的生物学功能研究。方法 本研究采用cDNA末端快速扩增法(rapid-amplification of cDNA ends,RACE),从人急性单核细胞白血病细胞株U937中克隆获得了的cDNA全... 目的 获得急性单核细胞白血病相关抗原基因MLAA-22cDNA全长序列,以便进行新基因的生物学功能研究。方法 本研究采用cDNA末端快速扩增法(rapid-amplification of cDNA ends,RACE),从人急性单核细胞白血病细胞株U937中克隆获得了的cDNA全长,并对MLAA-22进行了生物信息学分析及预测。结果 MLAA-22 cDNA全长3067bp,染色体定位于17q11.2,基因包含12个外显子和11个内含子。生物信息学预测其有完整的ORF框,编码1个含有701个氨基酸残基的蛋白质,蛋白分子量约80.5kD,非分泌型,亚细胞定位为胞质蛋白。大多数capase酶均对MLAA-22无剪切作用。新的MLAA-22序列的5'端序列1-349bp与KIAA0100mRNA无同源性,但这一段序列与人类基因组序列完全匹配,属于MLAA-22的5'UTR(untranslated regions,UTR)。结论 MLAA-22基因cDNA全长3067bp,5'UTR可能发生了选择性剪接,推测MLAA-22可能是一个和急性单核细胞白血病相关的新的选择性剪接变体,它参与了急性单核细胞白血病的发生,值得进一步深入研究。 展开更多
关键词 急性单核细胞白血病 MLAA-22 RACE CDNA全长 生物信息学分析
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急性单核细胞白血病新抗原MLAA-34基因突变的检测及其与疗效相关性的研究 被引量:1
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作者 雷博 王刚 +10 位作者 陈银霞 何爱丽 曹星梅 赵万红 王剑利 刘捷 马肖容 杨云 鹏宇 罗静 蒙昕 《中国实验血液学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第1期97-104,共8页
目的:研究MLAA-34全外显子突变与白血病疗效的相关性。方法:对AML-M5组(40例)及健康对照组(5例),应用RT-PCR方法检测MLAA-34基因的表达水平,研究其对化疗疗效的影响。对该基因全部12个外显子进行测序,研究MLAA-34突变对M5患者OS和... 目的:研究MLAA-34全外显子突变与白血病疗效的相关性。方法:对AML-M5组(40例)及健康对照组(5例),应用RT-PCR方法检测MLAA-34基因的表达水平,研究其对化疗疗效的影响。对该基因全部12个外显子进行测序,研究MLAA-34突变对M5患者OS和PFS的影响;分析白血病重要的5个预后基因突变与MLAA-34基因突变的相关性。结果:M5组MLAA-34基因表达显著高于正常对照组,高表达的患者化疗疗效差。E2外显子第59号碱基存在多态性,C59T位点突变的患者具有更高的MLAA-34基因表达。MLAA-34基因C59T位点突变与重要的分子标志基因FLT-3和DNMT3A的突变显著相关。结论:MLAA-34基因C59T位点突变为白血病复发的高危因素,并可成为一个白血病治疗的候选靶点。 展开更多
关键词 急性单核细胞白血病 MLAA-34基因 基因突变 白血病复发
下调MMSA-8基因对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖和侵袭能力的影响 预览
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作者 何蕊 王刚 +3 位作者 杨楠 刘捷 鹏宇 李军辉 《山西医科大学学报》 CAS 2018年第5期482-487,共6页
目的探讨慢病毒介导的sh RNA干扰下调MMSA-8基因表达对骨髓瘤细胞RPMI8226体外增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨MMSA-8表达水平变化与P53及MDM2表达水平变化的关系。方法用慢病毒介导的sh RNA稳定转染骨髓瘤RPMI8226细胞,下调MMS... 目的探讨慢病毒介导的sh RNA干扰下调MMSA-8基因表达对骨髓瘤细胞RPMI8226体外增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨MMSA-8表达水平变化与P53及MDM2表达水平变化的关系。方法用慢病毒介导的sh RNA稳定转染骨髓瘤RPMI8226细胞,下调MMSA-8基因表达。设立五个实验组,RNAi组MMSA-8-sh RNA1、MMSA-8-sh RNA2、MMSA-8-sh RNA3(RNAi1、RNAi2、RNAi3组),空载体组(阴参组)和细胞未做任何处理组(空白组)用Q-PCR和Western blot方法检测RNA干扰后各组间MMSA-8、P53、MDM2的m RNA水平和蛋白水平。通过MTT增殖实验,流式细胞术检测各组间RPMI8226细胞细胞周期的差异。通过Transwell小室迁移和侵袭实验观察各组RPMI8226细胞侵袭数的差异。结果 RNA干扰后72 h,Q-PCR和Western blot检测表明,RNAi组(RNAi1、RNAi2、RNAi3组)MMSA-8的m RNA和蛋白水平较空白组和阴参组显著下降,其中RNAi3组下降最为明显(P〈0.05);MTT实验显示RNAi3组的RPMI8226细胞增殖受到明显抑制(P〈0.05);流式细胞仪检测细胞周期显示RNAi3组停留在sub-G1期的比例明显增大(P〈0.05);Transwell实验显示RNAi3组的侵袭的细胞数较空白组和阴参组显著减少(P〈0.01)。此外,RNAi3组P53表达水平较空白组和阴参组高,MDM2表达水平较空白组和阴参组高,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论慢病毒介导的sh RNA干扰能显著下调MMSA-8的表达水平,能够显著抑制骨髓瘤细胞RPMI8226的体外增殖、迁移和侵袭能力。MMSA-8对骨髓瘤细胞增殖、侵袭能力的影响可能是通过调节P53-MDM2环路实现的。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 RNA干扰 MMSA-8 细胞增殖 细胞侵袭
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