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中美贸易战的“得”与“失” 预览
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作者 童洁 +2 位作者 刘金泉 谢雨雯 汪洋(指导) 《经济技术协作信息》 2019年第4期5-7,共3页
2018年中美贸易战是世界关注的焦点。如今终于传来了休战的消息。经历了一年的激烈对抗,中美两国都受到了不同程度上的损失,但也达到了一些目的。尤其是美国,虽然贸易战取得的效果并不完全符合预期,却也还是取得了一些预想的成果。但无... 2018年中美贸易战是世界关注的焦点。如今终于传来了休战的消息。经历了一年的激烈对抗,中美两国都受到了不同程度上的损失,但也达到了一些目的。尤其是美国,虽然贸易战取得的效果并不完全符合预期,却也还是取得了一些预想的成果。但无论怎样,贸易战不光对中美两国的经济造成了损伤,还阻碍了世界经济的持续健康发展。中美两国应该明确此次得失,吸取经验教训,肩负起大国责任,共谋世界经济之大局。 展开更多
关键词 贸易战 中美 “得” 世界经济 持续健康发展 大国责任 损失
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尿富含半胱氨酸蛋白61在对比剂肾病中的早期诊断价值 预览
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作者 谢娟 +3 位作者 徐永 李祥 柏林 郑东辉 《临床肾脏病杂志》 2019年第4期240-244,共5页
目的探讨尿富含半胱氨酸蛋白61(cysteine-rich protein 61,CYR61)在对比剂肾病(contrast-induced nephropathy,CIN)早期诊断中的价值。方法于2017年1月至2018年8月在徐州医科大学附属淮安医院招募择期拟行经皮冠状动脉介入术的患者。采... 目的探讨尿富含半胱氨酸蛋白61(cysteine-rich protein 61,CYR61)在对比剂肾病(contrast-induced nephropathy,CIN)早期诊断中的价值。方法于2017年1月至2018年8月在徐州医科大学附属淮安医院招募择期拟行经皮冠状动脉介入术的患者。采集患者一般临床资料、血生化、血常规、血凝常规。留取患者术前及术后2 h、4 h、8 h尿标本,采用ELISA法检测尿CYR61水平。统计分析时根据术前估算肾小球滤过率(eGFR)将患者分为eGFR≥60 mL·min^-1·(1.73 m^2)^-1(n=197)和eGFR<60 mL·min^-1·(1.73 m^2)^-1(n=50)两组,两组中再按患者是否发生CIN分为CIN组与非CIN组,分别进行亚组分析,并绘制受试者工作曲线(ROC)评价尿CYR61在CIN早期诊断中的价值。结果在eGFR≥60 mL·min^-1·(1.73 m^2)-1组与eGFR<60 mL·min^-1·(1.73 m^2)^-1组中,发生CIN的患者的尿CYR61水平均在术后4 h达到高峰,此后尿CYR61水平出现下降。将术后4 h尿CYR61用于诊断CIN的发生,分别绘制ROC曲线,结果表明,eGFR≥60 mL·min^-1·(1.73 m^2)^-1患者采用术后4 h尿CYR61诊断CIN的最佳临界值为293.67 ng/L,灵敏度与特异度分别为90.91%、83.33%,AUC为0.88(95%CI 0.82~0.92);eGFR<60 mL·min^-1·(1.73 m^2)-1患者采用术后4 h尿CYR61诊断CIN的最佳临界值为266.23 ng/L,灵敏度与特异度分别为100.00%、78.79%,AUC为0.89(95%CI 0.77~0.96)。结论在eGFR≥60 mL·min^-1·(1.73 m^2)-1患者和eGFR<60 mL·min^-1·(1.73 m^2)-1患者中,术后4 h尿CYR61水平可作为CIN的早期诊断指标。 展开更多
关键词 对比剂肾病 尿富含半胱氨酸蛋白61 早期诊断
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CRISPR/Cas9介导绵羊成纤维细胞MSTN基因突变系统的构建
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作者 魏海霞 罗健 +4 位作者 郭延华 王立民 唐红 周平 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2018年第8期1440-1448,共9页
肌肉生长抑制素(myostatin, MSTN)是肌肉生长负调控因子,MSTN基因突变可造成MSTN生物学功能缺陷,从而引起动物的双肌性状。本研究旨在筛选靶向绵羊(Ovis aries)MSTN基因的高效单导向RNA(single-guide RNA, sgRNA),并构建可标... 肌肉生长抑制素(myostatin, MSTN)是肌肉生长负调控因子,MSTN基因突变可造成MSTN生物学功能缺陷,从而引起动物的双肌性状。本研究旨在筛选靶向绵羊(Ovis aries)MSTN基因的高效单导向RNA(single-guide RNA, sgRNA),并构建可标记表达载体,以提高CRISPR/Cas9(clustered regulatory interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)介导的绵羊MSTN基因突变效率。利用Gibson Assembly法将增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)序列与串联表达原件2A序列插入pX330质粒载体中,构建pX330-EGFP质粒载体,并将设计好的12个sgRNA寡核苷酸链以Golden Gate法分别连入pX330-EGFP质粒载体,以构建12个不同的pX330-EGFP-sgRNA质粒表达载体;将构建好的pX330-EGFP-sgRNA表达载体以电转染的方法分别转入12组绵羊成纤维细胞,48 h后提取各组部分细胞基因组,利用SURVEROR分析初选获得3个具有靶向效果的细胞群(T2, T9, Q2),其对应转染质粒为pX330-EGFP-sgRNA;之后分别提取3组细胞中的阳性转染细胞基因组,扩增MSTN基因并进行测序分析,得出sgRNA-T2、sgRNA-T9、sgRNA-Q2的打靶效率分别为40%、40%、60%。本研究通过构建表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)的pX330-EGFP-sgRNA表达载体,成功筛选到高效靶向绵羊MSTN基因的sgRNA,并获得准确的编辑效率,为后续其他基因sgRNA的筛选提供了借鉴,并为MSTN基因编辑羊的生产提供科学依据。 展开更多
关键词 绵羊 肌肉生长抑制素基因(MSTN) CRISPR/Cas9 基因突变
绵羊iPS细胞诱导及转录组学分析 预览
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作者 郭延华 +4 位作者 王聪慧 唐红 南海艳 王立民 周平 《新疆农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第11期2142-2149,共8页
【目的】建立绵羊(Ovisaries)诱导性多能干细胞系,为绵羊转基因育种、应用绵羊诱导性多能干细胞奠定基础。【方法】利用电转将OCT4、SOX2、KLF4、l-Myc、Lin28转染至绵羊成纤维细胞中并诱导培养至有光滑隆起、边缘整齐的细胞克隆,形态... 【目的】建立绵羊(Ovisaries)诱导性多能干细胞系,为绵羊转基因育种、应用绵羊诱导性多能干细胞奠定基础。【方法】利用电转将OCT4、SOX2、KLF4、l-Myc、Lin28转染至绵羊成纤维细胞中并诱导培养至有光滑隆起、边缘整齐的细胞克隆,形态学、碱性磷酸酶(AP)染色、免疫荧光染色以及实时荧光定量PCR检测克隆细胞的生物学特性;利用高通量测序技术对诱导0、10、20、30d的阳性细胞的差异表达基因进行筛选。【结果】克隆细胞中SOX2、OCT4、SSEA-1蛋白免疫荧光染色均呈阳性;OCT4、SOX2、Nanog基因表达量均极显著高于成纤维细胞;0和30d转录组测序表明,被注释到GO数据库的差异表达基因有9465个,其中,上调基因6987个,下调基因2478个;KEGG分析共有5773个基因注释到259个通路中,其中,P53信号通路显著富集,且其在干细胞增殖方面起着非常重要的作用。【结论】初步成功建立了绵羊诱导性多能干细胞。 展开更多
关键词 绵羊 诱导性多能干细胞(iPSCs) 重编程 转录组测序
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几种常见细胞衰老检测指标的比较 被引量:1
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作者 肖芳 《中国药理学与毒理学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第4期352-357,共6页
细胞衰老是一种不可逆的生长停滞现象,可由各种不同的细胞应激触发。目前,在细胞衰老研究中涉及的检测指标包括衰老相关的β-半乳糖苷酶、端粒和端粒酶、衰老相关的异染色质灶、衰老相关的分泌表型、活性氧簇以及肿瘤抑制基因p53和p16... 细胞衰老是一种不可逆的生长停滞现象,可由各种不同的细胞应激触发。目前,在细胞衰老研究中涉及的检测指标包括衰老相关的β-半乳糖苷酶、端粒和端粒酶、衰老相关的异染色质灶、衰老相关的分泌表型、活性氧簇以及肿瘤抑制基因p53和p16等。这些检测指标在衰老研究中被广泛应用,各具特点,同时优缺点并存。本文综述几种常见的细胞衰老检测指标,并对其准确性、可信性、特异性和适用范围等方面进行比较。 展开更多
关键词 细胞衰老 检测 指标
绵羊体细胞核移植去核前程序的优化
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作者 郭延华 +3 位作者 王立民 唐红 李迎利 周平 《生物工程学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期730-742,共13页
目前绵羊体细胞克隆效率仍然很低,本研究拟对去核前的操作环节进行优化。主要为卵巢保存时间(3 h和3–5 h)、卵母细胞体外成熟时间(18 h和24 h)、供核细胞贴壁率(10%和30%)和盲吸法去核时间(16 hpm和18 hpm)等4个方面优化。以... 目前绵羊体细胞克隆效率仍然很低,本研究拟对去核前的操作环节进行优化。主要为卵巢保存时间(3 h和3–5 h)、卵母细胞体外成熟时间(18 h和24 h)、供核细胞贴壁率(10%和30%)和盲吸法去核时间(16 hpm和18 hpm)等4个方面优化。以成熟率、融合率和重构胚胎发育能力作为评价参数。结果表明:在卵巢保存方面,卵巢保存3 h组卵母细胞成熟率显著高于3–5 h组卵母细胞成熟率(60.18%vs 52.50%)(P〈0.05),重构胚胎发育力差异不显著(P〉0.05);在体外成熟时间方面,体外成熟18 h组和24 h组卵母细胞成熟率差异极显著(53.81%vs 89.06%)(P〈0.01),胚胎发育力差异不显著(P〉0.05);在融合率方面,贴壁率30%组极显著高于贴壁率10%组(80.85%vs 57.69%)(P〈0.01),在克隆胚胎发育率方面没有显著差异(P〉0.05),具有贴比率差异性的细胞在细胞生长平台期表现出差异性;在去核时间方面,16 hpm组和18 hpm组胚胎卵裂率差异显著,囊胚发育力差异不显著(P〉0.05),16 hpm组获得一只克隆羊,重复16 hpm获得4只妊娠克隆羊。组织微卫星序列经SDS-PAGE分析,DNA指纹与供体细胞相同。结论:去核前程序的优化保证了材料的质量,为提高克隆胚胎数量和质量奠定基础,可以获得体细胞克隆羊。 展开更多
关键词 核移植 卵巢保存时间 贴壁率 去核时间 克隆羊
从灸感灸效浅谈灸法操作 预览
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作者 王照钦 窦萌 《中国民间疗法》 2017年第1期2-3,共2页
灸法作为中医学的重要组成部分,有温通经络、行气活血、回阳固脱等作用。《医学入门》中提出:“凡病药之不及,针之不到,必须灸之”,说明灸法在治疗中的重要地位。
关键词 灸法 灸感 辨证选穴 手法操作
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绵羊血清蛋白双向凝胶电泳技术的建立 预览
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作者 唐红 +3 位作者 郭延华 王新华 王立民 周平 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期190-196,共7页
【目的】建立和优化绵羊血清蛋白双向电泳体系(2-DE)。【方法】从样品提取及处理、IPG胶条的选择、SDS-PAGE浓度的选择等多个方面对双向电泳分离条件进行比较。【结果】采用10%TCA/丙酮沉淀法处理血清蛋白质,18 cm p H 4~7的IPG胶条2.... 【目的】建立和优化绵羊血清蛋白双向电泳体系(2-DE)。【方法】从样品提取及处理、IPG胶条的选择、SDS-PAGE浓度的选择等多个方面对双向电泳分离条件进行比较。【结果】采用10%TCA/丙酮沉淀法处理血清蛋白质,18 cm p H 4~7的IPG胶条2.5 mg上样量,10%SDS-PAGE,获得的2-DE图谱效果较好。【结论】获得良好的绵羊血清蛋白双向电泳图谱,建立并优化了绵羊蛋白质组学的双向电泳技术体系,为转基因绵羊生物安全性评价提供了重要的技术条件。 展开更多
关键词 绵羊 血清 蛋白质组 双向电泳
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绵羊母源基因TRIM28克隆、表达及生物信息学分析 预览
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作者 罗健 王立民 +4 位作者 郭延华 唐红 周平 刘守仁 《石河子大学学报:自然科学版》 CAS 2017年第2期139-145,共7页
为了研究TRIM28基因在绵羊早期克隆胚胎发育过程中基因组去甲基化与重新甲基化及其维持的机制,探索母源关键基因在体细胞克隆效率中的作用,本研究通过提取中国美利奴细毛羊卵巢组织RNA,经反转录获得cDNA,利用特异性引物扩增TRIM28基因... 为了研究TRIM28基因在绵羊早期克隆胚胎发育过程中基因组去甲基化与重新甲基化及其维持的机制,探索母源关键基因在体细胞克隆效率中的作用,本研究通过提取中国美利奴细毛羊卵巢组织RNA,经反转录获得cDNA,利用特异性引物扩增TRIM28基因编码区序列,测序后采用生物信息学软件对编码区序列及氨基酸序列进行相关生物信息学分析和结构预测,进一步采用RT-PCR对绵羊不同组织中TRIM28表达量进行检测。结果显示:克隆获得了绵羊TRIM28基因编码区序列全长2441bp,编码811个氨基酸。生物信息学分析结果表明,不同物种TRIM28基因编码区核苷酸和氨基酸序列具有较高保守性。组织表达谱结果显示,TRIM28 mRNA在中国美利奴细毛羊肺脏、脾脏和卵巢中高丰度表达,且与Zfp57表达情况一致。结论:TRIM28基因结构和进化方面高度保守,推测其在不同组织中行使转录中介因子这一特定的生物学功能相关,TRIM8与ZFP57复合体在分化组织中对基因组甲基化的维持起着重要作用。 展开更多
关键词 TRIM28 Zfp57 母源基因 DNA甲基化 生物信息学
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电针对兔面神经损伤的超微结构影响 被引量:1
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作者 刘立安 王照钦 +4 位作者 付静静 杜茜茜 矫翠翠 董京军 《针刺研究》 CSCD 北大核心 2017年第5期423-428,共6页
目的:对比电针与手针对面神经损伤兔面神经雪旺细胞、髓鞘及线粒体等结构形态学影响,探索电针治疗面神经损伤的机制。方法:新西兰兔随机分为正常组、假手术组、模型组、手针组、电针组,每组10只。经面神经压榨复制面神经损伤模型。电... 目的:对比电针与手针对面神经损伤兔面神经雪旺细胞、髓鞘及线粒体等结构形态学影响,探索电针治疗面神经损伤的机制。方法:新西兰兔随机分为正常组、假手术组、模型组、手针组、电针组,每组10只。经面神经压榨复制面神经损伤模型。电针组取“地仓”“下关”“太阳”“阳白”进行电针治疗,每次30min;手针组选穴同电针组,每10min平补平泻捻转手法行针1次,留针30min。两组均每日治疗1次,共治疗28d。每7d进行1次面肌运动评分,28d后电镜观察各组面神经超微结构。结果:治疗后,假手术组与正常组比较各项结果未见明显变化(P〉0.05)。模型组在面肌运动评分、超微结构形态学变化以及单位面积轴突数目、髓鞘厚度、轴突面积等方面均差于正常组(P〈0.05);两治疗组面肌运动评分、超微结构形态学变化以及单位面积轴突数目、髓鞘厚度、轴突面积均好于模型组(P〈0.05);电针组各项结果均好于手针组(P〈0.05)。结论:在面神经损伤的治疗中,电针比手针更能促进轴浆线粒体增殖、髓鞘恢复以及轴索再生,这可能是电针治疗面神经损伤效果优于手针的机制之一。 展开更多
关键词 电针 面神经损伤 电镜 髓鞘 线粒体
美育在大学生思想政治教育中的运用——“互联网”时代背景下的新探索 预览 被引量:4
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作者 《大学教育》 2017年第5期117-119,共3页
美育是审美教育与情操教育、心灵教育的统一体。美育与大学生思想政治教育在引导内容、教学目的、教学张力中有着相通之处。"互联网+"时代的到来,为解决以往美育在大学生思想政治教育中的覆盖面不广、流于表面化、缺乏有效实施途径... 美育是审美教育与情操教育、心灵教育的统一体。美育与大学生思想政治教育在引导内容、教学目的、教学张力中有着相通之处。"互联网+"时代的到来,为解决以往美育在大学生思想政治教育中的覆盖面不广、流于表面化、缺乏有效实施途径等问题提供了有利条件,为美育与思想政治教育的深度融合提供了技术支撑。面对"互联网+"时代的机遇与挑战,大学生思想政治教育课要主动创新教学路径,以"互联网+教育"为导向,将美育贯穿其中,努力开创高校思想政治教育工作发展新局面。 展开更多
关键词 互联网+ 美育 思想政治教育
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刘立安治疗周围性面瘫临床经验 预览
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作者 王照钦 刘立安 《中国民间疗法》 2017年第4期7-9,共3页
刘立安教授是医学博士,硕士研究生导师,中国针灸学会理事,中国针灸协会针法灸法分会常务理事,山东针灸学会副会长,现任青岛海慈医疗集团针灸推拿康复科主任。刘立安教授治疗面瘫经验丰富,疗效显著,且有独到之处。笔者在跟师学习过程中... 刘立安教授是医学博士,硕士研究生导师,中国针灸学会理事,中国针灸协会针法灸法分会常务理事,山东针灸学会副会长,现任青岛海慈医疗集团针灸推拿康复科主任。刘立安教授治疗面瘫经验丰富,疗效显著,且有独到之处。笔者在跟师学习过程中收获颇丰,现将其治疗面瘫的经验介绍如下。 展开更多
关键词 周围性面瘫 诊疗经验 表面肌电图 电针 辅助治疗
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供体细胞对绵羊转基因体细胞克隆胚胎体外发育影响的研究 预览
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作者 唐红 +4 位作者 郭延华 王立民 江中良 周平 《家畜生态学报》 北大核心 2016年第10期16-21,共6页
研究比较了转入不同外源基因、转同一基因的不同细胞克隆、供体细胞的培养代数及冷冻对转基因体细胞克隆羊重构胚体外发育的影响,旨在为进一步探寻建立供体细胞个性化准备方案,为提高动物克隆效率提供参考.结果表明,转不同外源基因的供... 研究比较了转入不同外源基因、转同一基因的不同细胞克隆、供体细胞的培养代数及冷冻对转基因体细胞克隆羊重构胚体外发育的影响,旨在为进一步探寻建立供体细胞个性化准备方案,为提高动物克隆效率提供参考.结果表明,转不同外源基因的供体细胞对转基因体细胞克隆羊重构胚体外发育无影响;转同一基因的不同细胞克隆对转基因体细胞克隆羊重构胚体外发育有一定影响,且转TERT了基因的不同克隆间的重构胚的融合率及囊胚率差异显著(P 〈 0 . 05 ) .随着供体细胞培养代数的增加,重构胚体外发育的桑葚胚率及囊胚率无显著影响,但融合率随着培养代数的增加有上升趋势,且差异显著(P〈 0 . 05 );供体细胞冷冻可促进其融合率、桑葚胚率及囊胚率.研究结果表明,供体细胞的不同克隆、培养代数、冷冻等因素对转基因效率有一定的影响. 展开更多
关键词 绵羊 体细胞核移植 供体细胞
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绵羊PGRMC1蛋白的cDNA克隆、序列分析及组织表达 被引量:3
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作者 高磊 沈敏 +2 位作者 甘尚权 杨井泉 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期52-60,共9页
孕激素受体膜组分1(progesterone receptor membrane component 1,PGRMC1)是膜相关孕激素受体蛋白家族成员之一,参与哺乳动物颗粒细胞和黄体细胞孕酮的抗凋亡过程,在促进卵母细胞成熟和维持卵巢机能方面具有重要作用。本研究通过RT-PC... 孕激素受体膜组分1(progesterone receptor membrane component 1,PGRMC1)是膜相关孕激素受体蛋白家族成员之一,参与哺乳动物颗粒细胞和黄体细胞孕酮的抗凋亡过程,在促进卵母细胞成熟和维持卵巢机能方面具有重要作用。本研究通过RT-PCR对绵羊(Ovis aires)PGRMC1基因进行了克隆和组织表达谱分析,并利用实时荧光定量PCR对该基因在繁殖特性上存在明显差异的两个绵羊品种——多浪羊(常年发情)与中国美利奴羊(季节性繁殖)发情期和乏情期性腺轴组织的表达情况进行了检测。结果获得了绵羊PGRMC1基因部分c DNA序列(Gen Bank登录号:KM114208),其中编码区(Coding sequence,CDS)全长585 bp,编码194个氨基酸。其编码蛋白中包含一个Cyt-b5保守结构域。该基因在所检测绵羊各组织中广泛表达,其中以卵巢、子宫、肝脏、肾脏和下丘脑组织表达丰度较高。实时荧光定量PCR结果显示,同一绵羊品种发情期子宫、卵巢和松果体PGRMC1 m RNA水平均高于乏情期;不同绵羊品种间性腺轴组织基因表达水平存在一定差异,无论是发情期还是乏情期,多浪羊子宫、卵巢和松果体中PGRMC1 m RNA水平均高于同期的中国美利奴羊。本研究结果表明,PGRMC1在维持绵羊子宫与卵巢机能、调节激素分泌和发情行为等方面可能发挥重要作用。为进一步了解PGRMC1的生物学功能提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 绵羊 孕激素受体膜组分(1PGRMC1) 克隆 序列分析 组织表达
绵羊胚胎不同发育阶段及其组织中MicroRNA-483-5p表达分析 预览
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作者 唐红 +3 位作者 郭延华 王新华 王立民 周平 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期778-784,共7页
【目的】研究MicroRNA(miR)483-5p在中国美利奴羊胚胎不同发育阶段肾脏和脐带组织中的表达变化,以了解其在绵羊胚胎发育中的重要作用。【方法】选择中国美利奴羊胚胎不同发育时期(45、85、115和135 d 4个时期)肾脏和脐带组织为研究... 【目的】研究MicroRNA(miR)483-5p在中国美利奴羊胚胎不同发育阶段肾脏和脐带组织中的表达变化,以了解其在绵羊胚胎发育中的重要作用。【方法】选择中国美利奴羊胚胎不同发育时期(45、85、115和135 d 4个时期)肾脏和脐带组织为研究材料,采用半定量RT-PCR检测第45 d绵羊胚胎不同组织中miR-483-5p的表达;同时利用实时荧光定量PCR对miR-483-5p在绵羊胚胎不同发育阶段肾脏和脐带组织的表达变化进行实时检测。【结果】miR-483-5p在所检测的绵羊45 d胚胎各组织中广泛表达,其中以肌肉、心脏和肺脏组织表达丰度最高。实时荧光定量PCR结果显示,不同发育阶段绵羊胚胎肾脏和脐带组织miR-483-5p的表达具有明显的时空选择性。脐带组织miR-483-5p随着胚胎发育其表达量呈逐渐下降的趋势;肾脏组织miR-483-5p则是随着胚胎发育在第85 d其表达量下降到最低,其后在115和135 d其表达量又逐渐上升。不同发育阶段胚胎肾脏、脐带组织miR-483-5p的表达量呈显著性差异(P〈0.05)。【结论】miR-483-5p在绵羊胚胎不同发育阶段肾脏或脐带组织中表达明显不同,表明其表达具有选择性;依据miR-483-5p表达的差异性及其涉及的生物学功能,推测miR-483-5p在绵羊脐带和肾脏组织中具有一定的调控作用。研究为进一步了解miR-483-5p在胚胎肾脏和脐带发育中的作用机制提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 绵羊 胚胎 miR-483-5p 表达分析
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实时定量PCR检测转基因绵羊拷贝数 预览 被引量:1
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作者 赵帅 王立民 +8 位作者 王聪慧 唐红 郭延华 赵兴旺 丁新平 银国 周平 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1517-1521,共5页
【目的】利用高通量、快速、灵敏的实时荧光定量PCR法,检测转类胰岛素样生长因子1-红色荧光蛋白基因(insulin-like growth factor 1-red fluorescent protein,IGF1-RFP)绵羊中外源基因的拷贝数。【方法】以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gly... 【目的】利用高通量、快速、灵敏的实时荧光定量PCR法,检测转类胰岛素样生长因子1-红色荧光蛋白基因(insulin-like growth factor 1-red fluorescent protein,IGF1-RFP)绵羊中外源基因的拷贝数。【方法】以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)作为绵羊的内源参照基因,梯度稀释法。【结果】分别获得RFP和GAPDH基因的Ct值与起始模板数的相关性标准曲线,R2分别为0.999和0.999,相关性高。通过比较目的基因RFP和GAPDH起始模板数,得到外源基因在转基因绵羊中的拷贝数。编号0152、0216、0217、0218的转基因绵羊拷贝数分别为3、1、1、1。【结论】以IGF-I转基因细毛羊为研究对象,针对外源基因序列和内源参照基因序列设计特异性引物,利用实时荧光定量PCR法对IGF-I转基因细毛羊外源基因的拷贝数进行检测,并且准确检测外源基因的拷贝数。 展开更多
关键词 转基因绵羊 实时荧光定量PCR 拷贝数
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电穿孔转染制备绵羊诱导多潜能干细胞条件的优化 预览 被引量:2
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作者 王聪慧 赵帅 +6 位作者 王立民 李炜杰 赵兴旺 丁新平 银国 周平 《西北农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第9期9-15,共7页
为优化获得绵羊诱导性多潜能干细胞(iPS cell)的诱导条件,通过4-D电转染仪,将含有人Oct4、Soac2及KIf4、cMyc及gin28基因的3个质粒共转染绵羊成纤维细胞,从EH-100、EN150、CZ-167、CA137电转程序筛选出适合绵羊成纤维细胞的电转染... 为优化获得绵羊诱导性多潜能干细胞(iPS cell)的诱导条件,通过4-D电转染仪,将含有人Oct4、Soac2及KIf4、cMyc及gin28基因的3个质粒共转染绵羊成纤维细胞,从EH-100、EN150、CZ-167、CA137电转程序筛选出适合绵羊成纤维细胞的电转染程序;探讨不同细胞密度、质粒质量浓度、质粒质量浓度比及维生素c对诱导性多潜能干细胞克隆形成的影响。结果表明,采用EH100电转程序,在细胞密度为5×10^6mL-1、质粒质量浓度比为1:1:1、质粒总质量浓度为0.1mg·L-1、培养液中添加维生素C的质量浓度为0.05mg.L-1。时,AP染色阳性(AP+)克隆形成的效率可达到14.0%。说明,优化后的电转染方法和培养方案可有效提高绵羊诱导性多潜能干细胞的制备效率。 展开更多
关键词 电穿孔转染 绵羊成纤维细胞 诱导性多潜能性干细胞
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TALENs编辑绵羊成纤维细胞FGF 5基因 预览 被引量:2
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作者 皮文辉 周平 +5 位作者 王立民 唐红 郭延华 刘守仁 王新华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期704-710,共7页
类转录激活因子效应物(Transcription activator-like effector,TALE)已经成为基因组编辑和基因转录调控的有效工具,在多个物种的基因组中实现特定位点的删除、插入和突变。针对绵羊成纤维细胞生长因子5(Fibroblast growth factor 5,FG... 类转录激活因子效应物(Transcription activator-like effector,TALE)已经成为基因组编辑和基因转录调控的有效工具,在多个物种的基因组中实现特定位点的删除、插入和突变。针对绵羊成纤维细胞生长因子5(Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因起始密码子ATG位点,设计构建TALENs(Transcription activator-like effector nucleases,TALENs)。通过比较分析正常培养和基因组编辑处理的绵羊成纤维细胞,电转TALENs组合,Surveyor突变检测,筛选获得1对有效的TALENs。有限稀释细胞传代培养,PCR扩增FGF5基因片段,经PAGE检测筛选发生突变的细胞,测序确认FGF5基因ATG位点产生缺失突变细胞。获得具有编辑活性的TALENs,为该基因的定点编辑奠定基础。Surveyor检测和测序结果表明,在绵羊FGF5基因ATG起始密码子上游104碱基位点,存在1个G/C单核苷酸多态。 展开更多
关键词 类转录激活因子效应物核酸酶 基因组编辑 成纤维细胞生长因子5基因 单核苷酸多态 绵羊
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中拉能源合作的机遇与挑战 预览
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作者 《中国市场》 2015年第4期47-48,54共3页
中国油气资源相对匮乏而拉美地区的油气资源则比较丰裕,资源的互补性使得中拉能源合作具有广阔的空间,主要的合作领域包括油气资源的勘探和开发、工程技术和劳务出口、新能源和清洁能源等。但与此同时,中拉能源合作也存在一些有待克服... 中国油气资源相对匮乏而拉美地区的油气资源则比较丰裕,资源的互补性使得中拉能源合作具有广阔的空间,主要的合作领域包括油气资源的勘探和开发、工程技术和劳务出口、新能源和清洁能源等。但与此同时,中拉能源合作也存在一些有待克服的困难,比如距离遥远及运输成本高,地缘政治风险较大,拉美地区经济社会具有不稳定性,环境成本逐年增大等。本文最后提出趋利避害地深化中拉能源合作的几点政策建议:一是深化“融资基金”及大额专项贷款机制,二是正确处理好与美国的关系,三是积极探索新型合作模式,四是建立风险应急机制。 展开更多
关键词 中拉能源合作 机遇 挑战
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感知收益对公众参与众筹行为的影响——基于不同偏好视角 预览 被引量:2
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作者 李万帅 黄诗静 《市场论坛》 2015年第4期17-18,21共3页
2015年两会李克强总理鼓励大众创新创业,众筹是为创业者提供资金的一种重要途径,对众筹的研究有利于推动全民创新创业。众筹是指为了支持他人发起的创业项目而将许多投资人的小额资金汇集在一起的活动。文章以不同的风险偏好人群为基础... 2015年两会李克强总理鼓励大众创新创业,众筹是为创业者提供资金的一种重要途径,对众筹的研究有利于推动全民创新创业。众筹是指为了支持他人发起的创业项目而将许多投资人的小额资金汇集在一起的活动。文章以不同的风险偏好人群为基础,在预先选定的几种感知收益中研究哪些感知收益对公众对众筹的参与度影响最为明显。这些核心研究以按风险偏好分类的不同人群为基础,在投资者风险偏好的研究上同样取得一定成果。 展开更多
关键词 众筹 感知收益 风险偏好 参与度
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