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朴炳奎教授治疗肾脏肿瘤经验拾萃 认领 被引量:2
1
作者 张黎 《中医学报》 CAS 2014年第6期704-705,共2页
朴老治疗肿瘤以扶正培本为主要大法,深谙"养正邪自去,邪去正亦安"旨意,尤重补肾健脾,兼顾抗肿瘤。朴老在治疗肾脏肿瘤时,常用金匮肾气丸、六味地黄丸、左归丸、右归丸及五苓散加减,熟地黄、山茱萸、山药、茯苓、猪苓、泽泻、白术、肉... 朴老治疗肿瘤以扶正培本为主要大法,深谙"养正邪自去,邪去正亦安"旨意,尤重补肾健脾,兼顾抗肿瘤。朴老在治疗肾脏肿瘤时,常用金匮肾气丸、六味地黄丸、左归丸、右归丸及五苓散加减,熟地黄、山茱萸、山药、茯苓、猪苓、泽泻、白术、肉桂为朴老治疗肾脏肿瘤出现频率较高的药物,同时常配以砂仁、白豆蔻、陈皮、枳壳等理气药物,以防滋腻,熟地黄、砂仁为朴老最常用药对。 展开更多
关键词 朴炳奎 肾癌 肾盂癌 扶正培本 抗癌解毒
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清热化湿、凉血解毒法治疗乙型肝炎慢加急性肝衰竭临床观察 认领 被引量:12
2
作者 王晓静 沈云 +6 位作者 杨莉 刘龙 李斌 张黎 周桂琴 杨玉英 孙凤霞 《北京中医药》 2013年第3期204-207,共4页
目的观察清热化湿、凉『仉解毒法治疗乙犁肝炎慢加急性肝衰竭的疗效。方法将72例乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者分为治疗组和对照组,对照组采用西医综合治疗,治疗组在此基础上加用清热化湿、凉血解毒中药治疗,以8周为1个疗程观察2组疗... 目的观察清热化湿、凉『仉解毒法治疗乙犁肝炎慢加急性肝衰竭的疗效。方法将72例乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者分为治疗组和对照组,对照组采用西医综合治疗,治疗组在此基础上加用清热化湿、凉血解毒中药治疗,以8周为1个疗程观察2组疗效。结果治疗组在第1周末症状积分改善优于对照组(P〈0.叭);在第4周末终末期肝病模型(MELD)分值低于对照组、凝血酶原活动度(PTA)高于对照组,差异有统计学意义(P〈0.05),TBIL水平低于对照组,但差异无统计学意义(P〉0.05);治疗8周末治疗组和对照组的病死率分别为11.8%和15.8%,差异无统计学意义(P〉0.05)。结论清热化湿、凉血解毒中药可以改善慢加急性肝衰竭患者早期的临床症状,并在改善患者凝血功能和促进胆红素消退方而有一定的效果。 展开更多
关键词 清热化湿解毒凉血法 乙型肝炎慢加急性肝衰竭 疗效评价
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高效抗逆转录病毒治疗对艾滋病患者机体代谢的影响 认领 被引量:15
3
作者 肖江 郜桂菊 +6 位作者 李鑫 韩宁 刘龙 杨涤 张黎 赵红心 毛羽 《中华实验和临床感染病杂志(电子版)》 CAS 2011年第2期 5-10,共6页
目的探讨高效抗逆转录病毒治疗(HAART)后艾滋病患者代谢状态的临床及流行病学特征。方法选择本院收治的HAART后的高脂血症艾滋病患者42例与未经HAART治疗的艾滋病患者41例,就基线血脂水平、高脂血症类型、心血管事件的风险、非酒精性... 目的探讨高效抗逆转录病毒治疗(HAART)后艾滋病患者代谢状态的临床及流行病学特征。方法选择本院收治的HAART后的高脂血症艾滋病患者42例与未经HAART治疗的艾滋病患者41例,就基线血脂水平、高脂血症类型、心血管事件的风险、非酒精性脂肪肝、高血压、高血糖、代谢综合征以及心脏结构和功能进行横断面研究,对两组患者的上述指标进行比较。结果在艾滋病患者未进行HAART治疗组中,血脂异常以高密度脂蛋白(HDL)降低为主(24.32%),14.63%(6/41)患者评估为心血管病事件低危组;在HAART治疗组中,临床分型以混合性高脂血症为主,其中高TG+高TC血症者占42.86%,高TG+高TC+低HDL血症者占11.90%,高TG+低HDL血症者占23.81%,35.71%的患者评估为心血管病事件低危组,中危和高危组患者各占11.90%。HAART治疗组与未治疗组患者中,非酒精性脂肪肝(NAFLD)比例分别为78.58%和4.88%;分别有1例(2.44%)和16例(38.10%)患者诊断为代谢综合征;分别有19.05%和21.95%的患者出现心脏舒张功能减退。结论在未治疗的艾滋病患者中,血脂异常以低HDL血症为主,部分患者出现非酒精性脂肪肝、高血压、糖尿病、代谢综合征和心脏舒张功能不全等的临床表现;随着HAART的应用,血脂异常向混合高脂血症转化,且心血管事件的危险性明显增加,代谢综合征的临床特征表现得更加明显。本研究结果提示,艾滋病患者在HAART治疗前后应检测引起代谢综合征和心血管事件的危险因素,以便早期进行干预治疗。 展开更多
关键词 获得性免疫缺陷综合征 抗逆转录病毒治疗 高效 代谢综合征
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HAART后艾滋病病人脂肪肝临床特点分析 认领 被引量:5
4
作者 肖江 李鑫 +7 位作者 韩宁 王凌航 郜桂菊 刘龙 杨涤 张黎 赵红心 毛羽 《中国艾滋病性病》 CAS 2011年第2期118-121,共4页
目的为提高艾滋病(AIDS)病人高效抗反转录病毒治疗(HAART)后合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)的确诊率,对艾滋病病毒(HIV)感染者/AIDS病人(简称HIV/AIDS病人)HAART后出现的高脂血症、NAFLD的临床特征进行横断面研究,初步探讨艾滋病... 目的为提高艾滋病(AIDS)病人高效抗反转录病毒治疗(HAART)后合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)的确诊率,对艾滋病病毒(HIV)感染者/AIDS病人(简称HIV/AIDS病人)HAART后出现的高脂血症、NAFLD的临床特征进行横断面研究,初步探讨艾滋病病人HAART后合并非酒精性脂肪肝的临床和流行病学特征。方法以HAART后高脂血症作为切入点,分析HAART后高脂血症病人的体重指数(BMI)、血压、HIV感染时间、HAART治疗的药物和治疗时间、CD4细胞水平、空腹血糖、血脂水平、肝肾功能,完善腹腔彩超检查,通过影像学发现艾滋病病人中脂肪肝的变化。对有或无脂肪肝病人的上述指标进行比较。结果从2004年开始免费抗病毒治疗的300例病人中,筛查出42例HIV/AIDS病人,其中28例(66.7%)为NAFLD组,14例(33.3%)为非脂肪肝组。NAFLD组病人体重指数(23.61±2.55)kg/m2、空腹血糖(6.98±2.34)mmol/L、丙氨酸转氨酶(ALT)为(47.95±25.4)U/L;非脂肪肝组体重指数(22.06±1.96)kg/m2、空腹血糖(5.86±0.70)mmol/L,ALT为(25.22±6.75)U/L,两组比较差异有统计学意义。结论 NAFLD是HAART治疗后HIV/AIDS病人中常见的并发症,高脂血症、体重指数和高血糖与NAFLD的发生具有相关性;ALT升高是HIV/AIDS病人并发NAFLD的结果;HAART治疗的方案和治疗时间与NAFLD的发生无关。 展开更多
关键词 艾滋病 非酒精性脂肪肝 高效抗反转录病毒治疗 高脂血症
艾滋病患者眼科临床特点分析 认领 被引量:5
5
作者 肖江 何宏宇 +7 位作者 韩宁 王凌航 郜桂菊 刘龙 杨涤 张黎 赵红心 毛羽 《北京医学》 CAS 2011年第6期470-473,共4页
目的阐明艾滋病患者HIV相关眼病的临床特征。方法回顾性研究了92例艾滋病患者的临床资料及眼科会诊记录。结果在HIV相关眼病患者中,HIV微血管病变者32例(34.8%),其次为视网膜炎25例(27.5%),免疫重建综合症后出现的全葡萄膜炎2例(2... 目的阐明艾滋病患者HIV相关眼病的临床特征。方法回顾性研究了92例艾滋病患者的临床资料及眼科会诊记录。结果在HIV相关眼病患者中,HIV微血管病变者32例(34.8%),其次为视网膜炎25例(27.5%),免疫重建综合症后出现的全葡萄膜炎2例(2.2%)。在有或无HIV相关眼病患者中,伴有眼科症状的比例分别为28例(56.0%)和20例(47.6%);平均CD4水平分别为0.087×10^9/L和0.224×10^9/L(P〈0.05)。结论 HIV微血管病变是主要的HIV相关眼病,其次为视网膜炎,且不同的眼科病变可以并存;CD4+T淋巴细胞低于0.05×10^9/L与HIV相关眼病的发生有关;必须对所有CD4+T淋巴细胞低于0.05×10^9/L的艾滋病患者完善常规眼科学筛查,以期早期发现HIV相关眼病。 展开更多
关键词 艾滋病 HIV相关眼病 视网膜炎 微血管病变
艾滋病合并巨细胞病毒血症患者临床特点分析 认领 被引量:4
6
作者 肖江 韩宁 +7 位作者 何宏宇 王凌航 郜桂菊 梁洪远 杨涤 张黎 赵红心 毛羽 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期459-462,共4页
目的了解AIDS合并CMV血症患者的临床特征。方法回顾性分析2008年10月至2009年11月北京地坛医院住院的249例AIDS患者的临床资料,对其中43例确诊为CMV血症患者的临床症状、脑脊液检查结果、气管镜、胃镜和肠镜检查等资料通过Excel软件建... 目的了解AIDS合并CMV血症患者的临床特征。方法回顾性分析2008年10月至2009年11月北京地坛医院住院的249例AIDS患者的临床资料,对其中43例确诊为CMV血症患者的临床症状、脑脊液检查结果、气管镜、胃镜和肠镜检查等资料通过Excel软件建立数据库,并利用统计软件SPSS12.0分析细胞免疫功能和CMVDNA水平的相关性。结果在249例AIDS患者中,43例经过CMVpp65抗原和CMVDNA检测确诊为CMV血症;14例患者眼底镜检查提示视网膜渗出或视网膜出血;4例出现眼底视网膜渗出或出血后机化;通过气管镜肺泡灌洗液病理检查发现1例确诊CMV肺炎;低水平CD4^+T淋巴细胞和CMVDNA阳性具有相关性。结论对CD4^+T淋巴细胞〈100×10^6/L的AIDS患者应进行CMVDNA或pp65抗原的筛查,并予以全身抗CMV治疗;眼底镜和气管镜肺泡灌洗液病理检杏是确诊CMV视网膜炎和肺炎的有效方法。 展开更多
关键词 获得性免疫缺陷综合征 巨细胞病毒感染 视网膜炎 CD4阳性T淋巴细胞
149例重症手足口病患儿临床分析 认领 被引量:5
7
作者 徐艳利 陈志海 +7 位作者 张黎 张璐 曾慧慧 卢联合 王凌航 王玉光 任娜 李兴旺 《北京医学》 CAS 2010年第6期439-442,共4页
目的探讨重症手足口病(HFMD)的临床特征、分型和处置方案,提高重症HFMD患者的治愈率和生存率。方法对149例重症HFMD患儿的流行病学、临床表现、病情动态变化、实验室检查及物理检查、治疗及转归进行回顾性分析。结果 149例重症HFMD患... 目的探讨重症手足口病(HFMD)的临床特征、分型和处置方案,提高重症HFMD患者的治愈率和生存率。方法对149例重症HFMD患儿的流行病学、临床表现、病情动态变化、实验室检查及物理检查、治疗及转归进行回顾性分析。结果 149例重症HFMD患儿,男98例(65.8%),女51例(34.2%);年龄5个月~13岁,﹤3岁者92例(61.7%),平均年龄3.3岁。依据临床表现及并发症分为两组:Ⅰ组,并发症以神经系统症状为主要表现者,140例(94%),均存活;Ⅱ组,并发神经、循环、呼吸等系统多器官损害者,9例(6%),3例死亡。存活患儿目前无后遗症出现。结论 HFMD重症病例分为重型和危重型两型,危重型可引起死亡。在临床工作中密切监测,及时发现危重型倾向的病例,正确及时治疗,能提高重症HFMD患儿的生存率,减少并发症和后遗症,改善生存质量。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒EV71型 神经源性肺水肿 消化道出血
应用酵母双杂交技术筛选与前S1蛋白反式激活蛋白3结合的肝细胞蛋白基因 认领
8
作者 卫萍 成军 +3 位作者 楚庸烈 伦永志 张黎 洪源 《新乡医学院学报》 CAS 2010年第4期329-332,共4页
目的用酵母双杂交技术筛选白细胞中乙型肝炎病毒(HBV)前S1蛋白反式激活蛋白3(PS1TP3)的结合蛋白。方法通过聚合酶链反应扩增获得的PS1TP3基因,构建诱饵质粒pGBKT7-PS1TP3,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝细胞文库... 目的用酵母双杂交技术筛选白细胞中乙型肝炎病毒(HBV)前S1蛋白反式激活蛋白3(PS1TP3)的结合蛋白。方法通过聚合酶链反应扩增获得的PS1TP3基因,构建诱饵质粒pGBKT7-PS1TP3,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝细胞文库的质粒pACT2的单倍体酵母细胞Y187进行配合,在涂有X-α-Gal营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)上进行双重筛选,提取阳性酵母克隆的质粒转化大肠杆菌经BglII酶切后测序,进行生物信息学分析。结果筛选出30个与PS1TP3相互作用的蛋白,其中包括泛素蛋白酶E2、丝裂原活化蛋白激酶、β2-微球蛋白、磷酸酯酶张力蛋白等已知功能基因及4个未知功能序列,以及拼接新基因1个。结论成功克隆出PS1TP3蛋白的结合蛋白,为研究PS1TP3的分子生物学功能及HBV的致病机制提供了新的思路和线索。 展开更多
关键词 前S1蛋白反式激活蛋白3 乙型肝炎病毒 酵母双杂交
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艾滋病合并巨细胞病毒感染50例临床分析 认领 被引量:3
9
作者 郜桂菊 赵红心 +4 位作者 陈凤欣 肖江 杨涤 张黎 刘龙 《临床荟萃》 CAS 2010年第18期1622-1624,共3页
巨细胞病毒(CMV)感染十分常见,多为潜伏感染,但在免疫功能严重低下的机体,病毒复制十分活跃,引起临床症状,艾滋病(AIDS)患者由于人类免疫缺陷病毒侵犯免疫系统导致免疫功能低下,常合并多种机会性感染,而CMV感染是常见机会性... 巨细胞病毒(CMV)感染十分常见,多为潜伏感染,但在免疫功能严重低下的机体,病毒复制十分活跃,引起临床症状,艾滋病(AIDS)患者由于人类免疫缺陷病毒侵犯免疫系统导致免疫功能低下,常合并多种机会性感染,而CMV感染是常见机会性感染之一,在AIDS患者死亡尸检中发现率为16.7%~73.7%,仅次于肺孢子菌肺炎(PCP)。 展开更多
关键词 获得性免疫缺陷综合征 巨细胞病毒感染 体征和症状 临床实验室技术
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转化生长因子β1刺激肝星状细胞差异表达下调基因筛选 认领
10
作者 肖琳 成军 +9 位作者 郭江 张黎 洪源 伦永志 蓝贤勇 武会娟 张丽娟 张跃新 张建龙 李燕 《中华实验和临床感染病杂志(电子版)》 CAS 2010年第3期 1-5,共5页
目的 筛选并克隆转化生长因子β1(TGF-β1)刺激肝星状细胞差异表达下调基因,阐明TGF-β1导致肝纤维化的分子生物学机制.方法 以TGF-β1及磷酸盐缓冲液分别刺激大鼠肝星状细胞(即实验组和对照组),提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa Ⅰ酶... 目的 筛选并克隆转化生长因子β1(TGF-β1)刺激肝星状细胞差异表达下调基因,阐明TGF-β1导致肝纤维化的分子生物学机制.方法 以TGF-β1及磷酸盐缓冲液分别刺激大鼠肝星状细胞(即实验组和对照组),提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa Ⅰ酶切后,将对照组细胞cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与实验组细胞cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性PCR扩增,将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠埃希菌进行文库扩增,随机挑选克隆经PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果 成功构建了TGF-β1刺激肝星状细胞差异表达基因的cDNA消减文库.文库扩增后得到98个阳性克隆,进行菌落PCR分析,均得到200~1000 bp插入片段.选取含有插入片段的35个克隆进行测序,并通过生物信息学分析获得了19种已知基因序列和2个未知功能基因.结论 应用抑制性消减杂交技术成功构建了TGF-β1刺激的肝星状细胞差异表达基因的cDNA消减文库,为进一步阐明TGF-β1参与肝纤维化的分子生物学机制提供了理论依据. 展开更多
关键词 转化生长因子Β1 抑制性消减杂交技术 肝星状细胞 肝纤维化 反式激活
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支气管镜检查对艾滋病患者肺部感染病原学的诊断价值 认领 被引量:10
11
作者 王凌航 毛羽 +7 位作者 赵红心 郜桂菊 肖江 梁宏远 杨涤 张黎 韩宁 李兴旺 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期727-729,共3页
目的 评价支气管镜检查在艾滋病患者肺部感染病原诊断中的临床应用价值,探讨艾滋病合并肺部感染患者的病原谱及其分布.方法 收集2006年8月至2009年9月就诊于北京地坛医院的120例艾滋病合并肺部感染的患者,均行支气管镜检查及肺泡灌洗,收... 目的 评价支气管镜检查在艾滋病患者肺部感染病原诊断中的临床应用价值,探讨艾滋病合并肺部感染患者的病原谱及其分布.方法 收集2006年8月至2009年9月就诊于北京地坛医院的120例艾滋病合并肺部感染的患者,均行支气管镜检查及肺泡灌洗,收集BALF送检细菌培养及细胞病理检查;镜下可见明显组织异常者取支气管黏膜活检行病理学检查,并对患者的临床资料进行综合分析.结果 120例艾滋病合并肺部感染患者的BALF中,分枝杆菌抗酸染色阳性者30例,细菌培养阳性25例,肺孢子菌阳性12例,真菌培养阳性5例,巨细胞病毒阳性3例,阴性结果45例.26例行支气管黏膜活检,其中慢性炎性改变12例,鳞癌4例,腺癌2例,符合肉芽肿性炎性改变7例,淋巴瘤1例.结论 气管镜检查对艾滋病患者肺部感染病原学诊断具有明确的诊断价值.目前艾滋病合并肺部感染患者以结核病、细菌感染及肺孢子菌肺炎为主. 展开更多
关键词 艾滋病 感染 支气管镜 病原分析
艾滋病并发脂肪肝患者HAART治疗后左心室结构及功能变化 认领 被引量:1
12
作者 肖江 郜桂菊 +7 位作者 李鑫 韩宁 王凌航 刘龙 杨涤 张黎 赵红心 毛羽 《中国肝脏病杂志(电子版)》 CAS 2010年第4期7-11,共5页
目的使用超声心动图检测艾滋病并发非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者长期高效抗反转录病毒治疗后左心室结构和功能变化。方法本研究以高效抗反转录病毒治疗后高脂血症作为切入点,检测42例高效抗反转录病毒治疗后高脂血症患者的体重指数(BMI)... 目的使用超声心动图检测艾滋病并发非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者长期高效抗反转录病毒治疗后左心室结构和功能变化。方法本研究以高效抗反转录病毒治疗后高脂血症作为切入点,检测42例高效抗反转录病毒治疗后高脂血症患者的体重指数(BMI)、血压、高效抗反转录病毒治疗时间、CD4细胞水平、空腹血脂水平,完善腹腔彩色超声检查,通过彩色超声发现艾滋病患者脂肪肝变化;通过超声心动图检测左心室结构、收缩和舒张功能变化。结果 42例艾滋病患者中,NAFLD患者共28例,占66.7%;NAFLD组患者BMI(23.61±2.55)㎏/㎡,非脂肪肝组BMI(22.06±1.96)㎏/㎡。NAFLD组中,晚期血流充盈速度(A值)为(55.61±13.12)㎝/s、E/A比值为(1.19±0.29);非脂肪肝组A值为(43.36±10.88)㎝/s、E/A比值为(1.65±0.41),两组间差异有统计学意义。NAFLD组和非脂肪肝组中,左室结构参数和左室射血分数无显著性差异;但左室短轴收缩率分别为(34.67±4.92)%和(38.14±7.27)%,P=0.07。结论艾滋病并发NAFLD患者长期高效抗反转录病毒治疗后出现左室舒张功能不全,收缩功能亦出现一定程度降低,应定期完善心脏彩色超声检查,警惕心血管事件发生。 展开更多
关键词 获得性免疫缺陷综合征 脂肪肝 非酒精性 高效抗逆转录病毒治疗 心室功能
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转化生长因子β1活化肝星状细胞反式激活新基因剪切体的功能 认领
13
作者 肖琳 成军 +9 位作者 张黎 郭江 洪源 张丽娟 伦永志 蓝贤勇 武会娟 张跃新 张建龙 李燕 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期925-929,共5页
目的探讨反式激活新基因剪切体TTG1A的生物学功能和参与肝纤维化的致病机制。方法应用酵母双杂交系统3,将PCR扩增的TTG1A基因与酵母表达载体pGBKT7连接,转化酵母细胞AH109,并在其内表达,而后与转化了人白细胞文库的质粒pACT2的单倍... 目的探讨反式激活新基因剪切体TTG1A的生物学功能和参与肝纤维化的致病机制。方法应用酵母双杂交系统3,将PCR扩增的TTG1A基因与酵母表达载体pGBKT7连接,转化酵母细胞AH109,并在其内表达,而后与转化了人白细胞文库的质粒pACT2的单倍体酵母细胞Y187进行配合,在涂有X—α—gal营养缺陷型培养基上进行双重筛选,提取阳性酵母克隆的质粒转化大肠杆菌经BglⅡ酶切后测序,进行生物信息学分析。结果成功构建了重组酵母表达载体pGBKT7-TTG1A。应用酵母双杂交系统3从人白细胞文库中筛选出19个与TTG1A相互作用的蛋白,其中包括人类主要组织相容性复合物Ⅱ型DPD(HLA—DPB)、人类核糖体蛋白L30、人类核磷蛋白B23、人类核组蛋白2、人类ash2、人类变异的家族性脾性贫血和变异的异染性脑白质营养不良相关蛋白、人类死亡因子4(MORF4L1)、人类遍在蛋白偶连酶E2L3、人类载脂蛋白A-1(APOA1)、人类半乳凝素1以及5个未知功能蛋白。结论成功构建了重组酵母表达载体pGBKT7-TTG1A,初步揭示了新基因TTG1A的生物学功能,为进一步研究TGFβ1介导的肝纤维化分子发病机制中的作用提供基础。 展开更多
关键词 转化生长因子Β 肝星状细胞 肝硬化 基因 TTG1A
丙型肝炎病毒非结构蛋白2反式激活蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 认领
14
作者 洪源 兰孟东 +5 位作者 王琦 张黎 刘秀财 李晓光 郝晓花 成军 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期217-220,共4页
目的对HCV非结构蛋白2反式激活蛋白(NS2TP)进行原核表达,制备多克隆抗体,并探讨其在不同肝组织中的表达情况。方法PCR法获得HCVNS2TP基因,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+)上,并转化入E.coliBL21。在大肠埃希菌中诱导表达,... 目的对HCV非结构蛋白2反式激活蛋白(NS2TP)进行原核表达,制备多克隆抗体,并探讨其在不同肝组织中的表达情况。方法PCR法获得HCVNS2TP基因,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+)上,并转化入E.coliBL21。在大肠埃希菌中诱导表达,表达产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,经免疫印迹分析验证后,大量表达并纯化该重组蛋白。将重组蛋白免疫家兔后获取多克隆抗体,应用免疫组织化学技术检测健康人及慢性HCV患者的肝组织。结果成功获得了重组目的蛋白(相对分子质量为33×10^2)及高滴度、高特异度的多克隆抗体。慢性HCV患者肝组织内NS2TP的表达高于健康肝组织,且以细胞核内分布为主。结论明确了慢性HCV患者肝组织内NS2TP表达量及细胞内定位的变化,为进一步研究NS2TP的生物学功能和HCV的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 反式激活因子类 基因表达 抗体 免疫组织化学 肝炎病毒
筛选转化生长因子β1刺激肝星状细胞差异表达基因的研究 认领 被引量:2
15
作者 肖琳 成军 +5 位作者 郭江 洪源 张黎 张跃新 张建龙 李燕 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期752-756,共5页
【摘要】目的筛选转化生长因子β1(TGFβ1)刺激大鼠肝星状细胞(HSC)的差异表达基因,以揭示TGFβ1介导肝纤维化的分子发病机制。方法分别用Trizol法抽提TGFβ1刺激的HSC及磷酸盐缓冲液刺激为对照的HSC总RNA,逆转录合成双链cDNA,... 【摘要】目的筛选转化生长因子β1(TGFβ1)刺激大鼠肝星状细胞(HSC)的差异表达基因,以揭示TGFβ1介导肝纤维化的分子发病机制。方法分别用Trizol法抽提TGFβ1刺激的HSC及磷酸盐缓冲液刺激为对照的HSC总RNA,逆转录合成双链cDNA,制备掺入生物素标记的cDNA探针,与人基因表达谱芯片杂交,用Agilent扫描仪对芯片结果进行扫描,利用软件对差异表达基因进行生物信息学分析。结果从13824条目的基因中筛选出177条差异表达基因,其中123条基因表达上调,其中包括:结缔组织生长因子,微管蛋白ε1,V型胶原α2,连环蛋白δ2,钙粘蛋白6,2型,Smad3,丝裂源活化蛋白激酶4,生长因子受体结合蛋白7,丝裂原活化蛋白激酶相互作用/丝氨酸/苏氨酸激酶l等;54条基因表达下调,包括:肿瘤坏死因子受体相关因子4,干扰素调节因子7,干扰素诱生蛋白p78,骨形态发生蛋白7,基质gLa蛋白,人类丝氨酸蛋白酶抑制剂进化支B成员8,干扰素刺激基因2.0×10^4,死亡相关蛋白6,金属硫蛋白1H,超氧化物歧化酶2等;同时筛选到8个未知功能蛋白。结论应用基因表达谱芯片技术成功筛选了TGFβ1刺激HSC的差异表达基因,初步揭示了TGFβ1致肝纤维化的分子机制是诸多因素共同作用的结果,为进一步寻找新的基因治疗靶点奠定了基础。 展开更多
关键词 肝纤维化 肝星状细胞 转化生长因子Β1 基因表达
应用酵母双杂交技术筛选与乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白2结合的肝细胞蛋白编码基因 认领 被引量:1
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作者 梁赟磊 成军 +7 位作者 邢卉春 王琦 李越 张斌 樊万虎 袁菊 张黎 洪源 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期 793-795,共3页
目的构建乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白2(HBEBP2)的真核表达载体并筛选人肝细胞中与HBEBP2相互作用的基因。方法通过PCR扩增获得HBEBP2基因,构建真核表达载体pGBKT7-HBEBP2,转化酵母菌AH109并在其中进行表达。随后与预转化了人肝细胞文... 目的构建乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白2(HBEBP2)的真核表达载体并筛选人肝细胞中与HBEBP2相互作用的基因。方法通过PCR扩增获得HBEBP2基因,构建真核表达载体pGBKT7-HBEBP2,转化酵母菌AH109并在其中进行表达。随后与预转化了人肝细胞文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和铺有X-α-gal的营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)上进行双重筛选获得阳性克隆。提取文库质粒pACT2-DNA并与pGBKT7-HBEBP2共同转化AH109酵母菌株,于铺有X-α-gal的营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)上进行筛选以排除假阳性克隆。挑取真阳性克隆送测序,并进行生物信息学分析。结果筛选出6种与HBEBP2相互作用的蛋白,其中包括人类线粒体蛋白、人类α-2-糖蛋白1、人类磷酸甘露糖-p-长醇利用缺陷1和人类丝氨酸蛋白酶抑制剂等4个已知功能蛋白及2个未知功能序列。结论筛出人肝细胞中一组与HBEBP2相互作用的蛋白,为进一步探讨HBEBP2在HBV致病过程中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 HBEBP2 双杂交系统技术 蛋白质相互作用
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丙型肝炎病毒F蛋白反式激活基因2的表达纯化及多克隆抗体制备 认领 被引量:3
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作者 王丹琼 郭江 +4 位作者 成军 张健康 赵龙凤 洪源 张黎 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期 798-800,共3页
目的构建丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白反式激活基因2(FTP2)的原核表达载体并诱导其表达,制备多克隆抗体并探讨其在临床病理组织中表达的意义。方法通过PCR获得HCVFTP2基因,将其克隆至原核表达载体pET32a(+)上,构建重组表达载体,在大... 目的构建丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白反式激活基因2(FTP2)的原核表达载体并诱导其表达,制备多克隆抗体并探讨其在临床病理组织中表达的意义。方法通过PCR获得HCVFTP2基因,将其克隆至原核表达载体pET32a(+)上,构建重组表达载体,在大肠埃希菌BL21中诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blotting验证后进行大量表达并纯化。将纯化的重组蛋白免疫家兔获得多克隆抗体,并将此抗体作为诊断试剂观察其在正常肝组织和临床病理组织中的表达情况。结果以pET32a(+)-FTP2表达载体转化BL21菌后,经IPTG诱导,成功获得大量重组蛋白,分子量约为25kD。将此重组蛋白免疫新西兰兔获得多克隆抗体,经抗体间接ELISA检测证明,多克隆抗体效价〉1:128000,免疫组化显示多克隆抗体能够与丙型肝炎、肝硬化、肝细胞癌等临床病理组织产生FTP2抗原反应。结论成功表达了HCV的FTP2蛋白并制备了其多克隆抗体,证实FTP2与丙型肝炎、肝硬化的发病机制密切相关。 展开更多
关键词 肝炎病毒 F蛋白反式激活基因2 原核表达
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乙型肝炎病毒前S1蛋白反式调节基因2的克隆、表达及功能 认领 被引量:4
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作者 王丹琼 郭江 +4 位作者 成军 张健康 赵龙凤 洪源 张黎 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期88-92,共5页
目的应用原核表达系统表达HBV前S1蛋白反式调节基因2(PS1TP2),酵母双杂交技术筛选白细胞文库中与之结合的蛋白质,了解该基因产物在肝癌细胞系中的亚细胞定位。方法应用生物信息学初步探讨PS1TP2结构及功能。PCR扩增PS1TP2基因,构建... 目的应用原核表达系统表达HBV前S1蛋白反式调节基因2(PS1TP2),酵母双杂交技术筛选白细胞文库中与之结合的蛋白质,了解该基因产物在肝癌细胞系中的亚细胞定位。方法应用生物信息学初步探讨PS1TP2结构及功能。PCR扩增PS1TP2基因,构建pET32a(+)-PS1TP2表达载体,在大肠埃希菌Rosettap中进行诱导表达。构建pGBKT7-PS1TP2重组载体,应用酵母双杂交技术,在营养缺陷型培养基上筛选白细胞cDNA文库中与之结合的蛋白质。构建pEGFPC1-PS1TP2表达质粒,转染肝癌细胞株HepG2,利用荧光显微镜和共聚焦显微镜观察PS1TP2的亚细胞分布。结果PS1TP2基因位于6q24.1,疏水指数较高。PS1TP2能在原核系统中表达,表达产物相对分子质量约4.1×10^4。酵母双杂交技术筛选出白细胞cDNA文库中与之结合的蛋白质26个。PS1TP2亚细胞定位于细胞质中。结论在原核表达系统中成功表达了PS1TP2,为抗体的制备奠定了基础。PS1TP2可与白细胞表达的某些蛋白质相互作用,在肝癌细胞系中定位于细胞质,为进一步探究HBV感染的发病机制提供了新线索。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 生物信息学 原核表达 酵母双杂交 PS1TP2
抑制性消减杂交技术克隆乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活蛋白2的反式激活基因 认领
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作者 郭江 成军 +4 位作者 张黎 纪冬 赵龙凤 刘妍 高学松 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期279-281,共3页
HBV为带包膜的嗜肝DNA病毒属,其基因组由松弛环状、部分双链DNA(rcDNA)组成。负链较长,约为3200个核苷酸(nt),其5’端共价结合病毒多聚酶;正链较短,长度可变,为1700~2800nt,在其5’端有寡聚核糖核苷酸帽。HBV基因组具有4个... HBV为带包膜的嗜肝DNA病毒属,其基因组由松弛环状、部分双链DNA(rcDNA)组成。负链较长,约为3200个核苷酸(nt),其5’端共价结合病毒多聚酶;正链较短,长度可变,为1700~2800nt,在其5’端有寡聚核糖核苷酸帽。HBV基因组具有4个开放读码框(ORF),通过不同的起始密码子(ATG)编码至少7个蛋白,包括3个表面抗原: 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 抑制性消减杂交技术 反式激活基因 蛋白反式激活 蛋白2 嗜肝DNA病毒 核糖核苷酸 克隆
应用抑制性消减杂交技术筛选转化生长因子β1刺激LX02细胞的反式调节基因 认领 被引量:3
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作者 肖琳 成军 +9 位作者 郭江 张黎 洪源 伦永志 蓝贤勇 武会娟 张丽娟 张跃新 张建龙 李燕 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期854-857,共4页
目的构建转化生长因子(TGF)β1刺激大鼠肝星状细胞(LX02)反式调节基因的cDNA消减文库,筛选并克隆TGFβ1反式调节相关基因,以阐明TGF β1介导肝纤维化的分子生物学机制。方法以TGFβ1刺激LX02细胞,同时以磷酸盐缓冲液刺激的LX02... 目的构建转化生长因子(TGF)β1刺激大鼠肝星状细胞(LX02)反式调节基因的cDNA消减文库,筛选并克隆TGFβ1反式调节相关基因,以阐明TGF β1介导肝纤维化的分子生物学机制。方法以TGFβ1刺激LX02细胞,同时以磷酸盐缓冲液刺激的LX02细胞作为对照。提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa I酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性多聚酶链反应。将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增;随机挑选克隆经PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果成功构建了TGF β1刺激LX02细胞反式调节基因的cDNA消减文库。文库扩增后得到146个200~1000bp插入片段的阳性克隆;随机挑取其中35个克隆进行测序,30个列序成功,并通过生物信息学分析发现有28个与已知基因序列和2个与未知功能基因序列高度同源。结论应用抑制性消减杂交技术成功构建了TGF β1刺激LX02细胞反式调节基因的cDNA消减文库,筛选到一些与细胞生长调节、蛋白质合成、信号传导、细胞外基质代谢、抗脂质过氧化等密切相关的蛋白质编码基因,为进一步阐明TGFβ1介导肝纤维化的分子生物学机制提供了线索。 展开更多
关键词 肝纤维化 肝星状细胞 转化生长因子Β 杂交
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