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猪粪便中戊肝病毒实时荧光RT-PCR定性检测方法的建立及其分子流行病学特征
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作者 李延霞 江涛 +5 位作者 李凤琴 王佳慧 李楠 张宏元 张立实 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期545-551,559共8页
目的建立以TaqMan探针为基础的戊肝病毒(HEV)实时荧光RT-PCR检测方法和构建系统发育树,对戊肝病毒进行基因分型,检测中国部分省市猪场的猪粪便样本HEV污染水平。方法参照GenBank HEV基因型序列,针对HEV保守区设计引物和探针,优化反应体... 目的建立以TaqMan探针为基础的戊肝病毒(HEV)实时荧光RT-PCR检测方法和构建系统发育树,对戊肝病毒进行基因分型,检测中国部分省市猪场的猪粪便样本HEV污染水平。方法参照GenBank HEV基因型序列,针对HEV保守区设计引物和探针,优化反应体系,建立实时荧光RT-PCR和巢式RT-PCR检测体系。结果建立的HEV实时荧光RT-PCR检测方法的灵敏度为19.9拷贝/μL,扩增效率92.9%~109.1%,与札如病毒(Sa)、诺如病毒(Nov)、甲肝病毒(HAV)均不发生交叉反应。荧光RT-PCR检测猪粪便样本342份,其中HEV阳性样本210份,阳性率61.4%,育肥前阳性率56.6%,育肥后阳性率66.9%,育肥前后样本阳性率差异具有统计学意义(χ~2=24.8,P<0.05);经基因分型鉴定体系测定阳性毒株基因型均为HEV-4型,且存在4b、4d、4h三种基因亚型。结论中国部分省市猪场中HEV感染普遍,基因型均为HEV-4型,各省市猪场感染率和基因亚型存在差异。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 实时荧光RT-PCR 巢式RT-PCR 猪粪便
陕西一养猪场4种细菌的流行状况及分型研究 预览
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作者 柳江山 黎娜 +6 位作者 张金蕾 张倩 杨俊 李凤琴 葛武鹏 杨保伟 《陕西农业科学》 2019年第7期63-69,共7页
为了解陕西省养猪场大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和肠球菌的流行状况,按照国家食品安全风险评估中心'动物源食物链中耐药性细菌污染和传递机制研究工作方案'规定,分别于生猪育肥前期(50~90日龄)和育肥后期(120~130日龄)... 为了解陕西省养猪场大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和肠球菌的流行状况,按照国家食品安全风险评估中心'动物源食物链中耐药性细菌污染和传递机制研究工作方案'规定,分别于生猪育肥前期(50~90日龄)和育肥后期(120~130日龄)在陕西省扶风县某养猪场采集猪粪、猪鼻拭子、猪舍地面涂抹样品和饲养员粪便等样品共150份。按照工作方案推荐的方法对4种细菌进行分离、鉴定,采用PCR技术对大肠杆菌和肠球菌进行分型,PCR结合DNA测序技术对金黄色葡萄球菌进行葡萄球菌蛋白A(Staphylococcus Protein A;SPA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus;MRSA)分型,采用血清凝集方法对沙门氏菌进行血清分型。结果表明,育肥前期采集的75份样品中,肠球菌阳性样品检出率(89.3%)最高,其次是大肠杆菌(69.3%)、沙门氏菌(38.7%)和金黄色葡萄球菌(12.0%)阳性样品。育肥后期75份样品中,肠球菌阳性样品检出率仍为最高(73.3%),其次分别为大肠杆菌(64.0%)、沙门氏菌(6.67%)和金黄色葡萄球菌(1.33%)阳性样品。肠黏附性大肠杆菌(Enteroadhersive Escherichia coli, EAEC)在检出的大肠杆菌中最为流行(40.0%),肠球菌则以粪肠球菌(Enterococcus faecalis)最为常见(58.6%)。检出的沙门氏菌均为鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhimurium)。1株金黄色葡萄球菌为T441型MRSA,2株金黄色葡萄球菌为T701型,T189型和T899型各1株,剩余2株未分出型。因此,该养猪场4种细菌污染严重,细菌型别相对单一,且在生猪育肥前期和后期均有检出,需要及时加以控制和防范。 展开更多
关键词 猪场 细菌 检出率
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中国四省份禽肉中耶尔森菌的耐药性及其耐药基因研究 被引量:2
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作者 邹明远 +9 位作者 徐进 关文英 李莹 刘丹茹 张淑红 郝琼 闫韶飞 王伟 余东敏 李凤琴 《中华预防医学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期358-363,共6页
目的 了解我国4省份禽肉中分离小肠结肠炎耶尔森菌、中间型耶尔森菌和弗氏耶尔森菌的耐药特征和耐药基因的携带情况。方法 本研究采用的22株小肠结肠炎耶尔森菌、2株中间型耶尔森菌和1株弗氏耶尔森菌来源于2016年全国污染物监测网,其... 目的 了解我国4省份禽肉中分离小肠结肠炎耶尔森菌、中间型耶尔森菌和弗氏耶尔森菌的耐药特征和耐药基因的携带情况。方法 本研究采用的22株小肠结肠炎耶尔森菌、2株中间型耶尔森菌和1株弗氏耶尔森菌来源于2016年全国污染物监测网,其中1株分离自宁夏回族自治区,3株分离自山东省,16株分离自河北省,5株分离自黑龙江省。采用肉汤稀释法测定25株分离菌对14类25种临床常用抗生素的药物敏感性,将菌株的全基因组序列与抗生素抗性基因数据库(ARDB)比对,对基因组中的耐药基因进行预测。结果 25株耶尔森菌对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸和头孢唑啉全部耐药,其中22株小肠结肠炎耶尔森菌中对头孢西丁、氨苄西林/舒巴坦、呋喃妥因和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑的耐药率分别为63.7%(14株)、22.8%(5株)、4.6%和4.6%(1株)。25株菌全部耐3类及以上抗生素(多重耐药株),耐4类及以上抗生素的比例为64.0%(16株),且4株分离自鸡肉的小肠结肠炎耶尔森菌对头孢曲松、环丙沙星出现了中介耐药。25株菌株中有20株携带有相同的6种耐药基因(簇),分别为mdtG、ksgA、bacA、blaA、rosAB和acrB,有5株分离自新鲜鸡肉的小肠结肠炎耶尔森菌还携带有耐药基因dfrA1、catB2和ant3ia。结论 我国部分地区生禽肉中耶尔森菌的耐药性严重,携带有多种耐药基因。 展开更多
关键词 耶尔森菌 小肠结肠炎 抗药性 耐药基因
中国六省份零售整鸡中沙门菌血清型分布和耐药性特征研究 被引量:4
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作者 胡豫杰 赫英英 +9 位作者 王晔茹 刘畅 王美美 甘辛 王伟 闫韶飞 白瑶 李凤琴 徐进 《中华预防医学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期372-377,共6页
目的 研究我国六省份零售环节整鸡中沙门菌血清型分布和耐药性特征。方法 于2010年8月至2012年3月,从北京、广东、吉林、江苏、内蒙古和陕西6个省份的共7个监测点零售市场中,每月采集冷冻、冷藏和现宰杀整鸡共计20份整鸡样品,连续... 目的 研究我国六省份零售环节整鸡中沙门菌血清型分布和耐药性特征。方法 于2010年8月至2012年3月,从北京、广东、吉林、江苏、内蒙古和陕西6个省份的共7个监测点零售市场中,每月采集冷冻、冷藏和现宰杀整鸡共计20份整鸡样品,连续采集12个月,共计1 680份样品,经PCR和生化鉴定获得2 629株沙门菌。使用Luminex结合传统血清凝集方法鉴定血清型,使用微量肉汤稀释法测定菌株对10类14种抗生素的耐药性,使用分子生物学方法测定环丙沙星(CIP)-头孢噻肟(CTX)-多黏菌素E(CT)耐药沙门菌相关耐药基因。结果 2 629株沙门菌中共检出17种血清群和58种血清型,B和D1血清群所占比例较高,分别占34.7%(913株)和31.0%(815株);Enteritidis(30.8%,810株)、Indiana(17.6%,463株)、Infantis(10.6%,278株)3种血清型为优势血清型。共检出224株CIP-CTX双重耐药印第安纳沙门菌,3株对CT耐药,其中1株中含有mcr-1基因且ESBL阳性,耐受本研究中9类11种抗生素。结论 中国六省份零售整鸡中沙门菌分离株血清型较复杂,耐药性较严重;CIP-CTX双耐药沙门菌多为印第安纳血清型,该类沙门菌多重耐药严重且存在mcr-1阳性株。 展开更多
关键词 沙门菌属 血清分型 抗药性 耐药基因 零售整鸡
我国婴儿配方粉来源的克罗诺杆菌脉冲场凝胶电泳分子分型和多位点序列分型研究 被引量:1
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作者 甘辛 王伟 +3 位作者 胡豫杰 闫韶飞 徐进 《中国食品卫生杂志》 北大核心 2018年第3期235-238,共4页
目的探讨我国婴儿配方粉污染克罗诺杆菌的主要分子分型特征,分析不同地区间菌株亲缘相关性,为我国克罗诺杆菌引起的疾病溯源提供技术支撑。方法采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)两种方法,对全国19个省/自治区/直辖... 目的探讨我国婴儿配方粉污染克罗诺杆菌的主要分子分型特征,分析不同地区间菌株亲缘相关性,为我国克罗诺杆菌引起的疾病溯源提供技术支撑。方法采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)两种方法,对全国19个省/自治区/直辖市婴儿配方粉来源的49株克罗诺杆菌进行分型研究。结果 49株克罗诺杆菌PFGE分型得到38个带型,未发现有明显的优势分型和聚集现象。MLST共获得15个已知序列型(ST型)和2个新ST型,ST4、ST1和ST64为优势型别,分别占菌株总数的20.4%(10/49)、18.4%(9/49)、10.2%(5/49)。PFGE型和MLST型结果分析表明,具有相同PFGE型的菌株也有相同的MLST型,而相同MLST型却不一定具有较高的亲缘关系。结论我国婴儿配方粉来源的克罗诺杆菌图谱具有高多态性和离散性,据此预测我国婴儿配方粉污染克罗诺杆菌导致婴儿患病以散发为主,出现多人患病的暴发事件几率较低。 展开更多
关键词 克罗诺杆菌 脉冲场凝胶电泳 多位点序列分型 婴儿配方粉 食源性致病菌
肠球菌耐药机制与食源性传播研究进展
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作者 徐进 《中华预防医学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期1062-1066,共5页
肠球菌是社区和医院获得性感染的重要病原菌。目前,肠球菌耐药性日益加重,造成临床治疗肠球菌感染的用药选项在不断减少,给人群健康带来了严重危害。更值得注意的是,肠球菌是食物链中耐药基因的"存储池",可以将耐药基因传递给其... 肠球菌是社区和医院获得性感染的重要病原菌。目前,肠球菌耐药性日益加重,造成临床治疗肠球菌感染的用药选项在不断减少,给人群健康带来了严重危害。更值得注意的是,肠球菌是食物链中耐药基因的"存储池",可以将耐药基因传递给其他细菌,给食品安全和人群健康带来严重风险。本文综述了肠球菌的致病性、耐药性、耐药机制、食源性肠球菌耐药性在人畜间传播的最新研究进展,展望了控制和降低食源性肠球菌耐药性的措施。 展开更多
关键词 肠球菌属 抗药性 动物性食品
唐菖蒲伯克霍尔德菌椰毒致病型菌株Co14毒力相关基因解析
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作者 陈雪 +3 位作者 李孟寒 王伟 徐进 李凤琴 《中国食品卫生杂志》 北大核心 2018年第6期558-562,共5页
目的了解1株引起致死性食物中毒事件的唐菖蒲伯克霍尔德菌椰毒致病型菌株Co14的全基因组序列特征,对其基因组中米酵菌酸(BA)和毒黄素(TF)的生物合成相关基因进行了预测和分析。方法通过第三代高通量测序技术(PacBio)对Co14进行全基因组... 目的了解1株引起致死性食物中毒事件的唐菖蒲伯克霍尔德菌椰毒致病型菌株Co14的全基因组序列特征,对其基因组中米酵菌酸(BA)和毒黄素(TF)的生物合成相关基因进行了预测和分析。方法通过第三代高通量测序技术(PacBio)对Co14进行全基因组测序,使用BLAST软件预测BA和TF的生物合成相关基因。结果Co14基因组中含有2个闭合的环状染色体,大小分别为4.1和4.0 Mb,鸟嘌呤和胞嘧啶所占比例(GC含量)分别为67.82%和68.32%。Co14基因组中还携带有一个146 kb的闭合环状质粒,GC含量为63.25%,编码149个基因。通过同源序列比对,在Co14染色体1上发现了BA和TF的生物合成相关基因簇bonR1R2LJKFGABDEHIM和toxRABCDE。结论Co14全基因组数据为研究唐菖蒲伯克霍尔德菌食物中毒菌株的致病性和毒力因子产生机制奠定了遗传学基础。 展开更多
关键词 唐菖蒲伯克霍尔德菌椰毒致病型 食源性致病菌 全基因组分析 米酵菌酸 毒黄素 毒力基因 同源序列 比对
陕西省某养猪场4种细菌耐药性和毒力基因检测
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作者 柳江山 高诗琦 +4 位作者 李凤琴 黎娜 葛武鹏 杨保伟 《中国食品卫生杂志》 北大核心 2018年第6期577-581,共5页
目的研究陕西省某养猪场4种细菌的耐药性和毒力基因流行状况。方法采用纸片扩散法测定2015-2016年从陕西省扶风县某养猪场分离的85株大肠埃希菌、93株肠球菌、33株沙门菌和7株金黄色葡萄球菌对14种抗生素的耐药性。采用聚合酶链式反应(P... 目的研究陕西省某养猪场4种细菌的耐药性和毒力基因流行状况。方法采用纸片扩散法测定2015-2016年从陕西省扶风县某养猪场分离的85株大肠埃希菌、93株肠球菌、33株沙门菌和7株金黄色葡萄球菌对14种抗生素的耐药性。采用聚合酶链式反应(PCR)方法检测肠球菌和沙门菌携带的部分耐药基因,以及肠球菌和金黄色葡萄球菌携带的毒力基因。结果7株金黄色葡萄球菌均对庆大霉素、阿米卡星、阿莫西林/克拉维酸、头孢哌酮和头孢西丁敏感,对萘啶酸的耐药率(100.00%,7/7)高于其他抗生素,差异有统计学意义(χ^2=54.77,P<0.05)。33株沙门菌均对阿莫西林/克拉维酸、头孢哌酮和头孢西丁敏感,对甲氧苄啶/磺胺甲噁唑(100.00%,33/33)和四环素(96.97%,32/33)的耐药率高于其他9种抗生素,差异有统计学意义(χ^2=5.83,P<0.05)。大肠埃希菌对四环素的耐药率(87.06%,74/85)高于其他13种抗生素,差异有统计学意义(χ^2=4.68,P<0.05),对阿莫西林/克拉维酸和头孢西丁的耐药率较低。肠球菌对甲氧苄啶/磺胺甲噁唑的耐药率最高(97.85%,91/93)。肠球菌中aph(3′)-Ⅲ耐药基因的检出率最高(47.13%,41/87)。沙门菌中aadA1、aadA2耐药基因的检出率最高,均为84.85%(28/33)。肠球菌中毒力基因asal的检出率最高(50.57%,44/87)。金黄色葡萄球菌中sea、see和seb毒力基因的检出率分别为42.86%(3/7)、42.86%(3/7)和14.29%(1/7)。结论陕西省某养猪场中4种细菌的耐药现象较为严重,部分菌株携带常见毒力和耐药基因,需要进一步加强监测,科学使用抗生素,从源头上保障猪肉食品的安全。 展开更多
关键词 养猪场 食源性致病菌 耐药性 毒力基因 陕西 大肠埃希菌 肠球菌 沙门菌 金黄色葡萄球菌
北京市集贸市场生鲜猪肉肠球菌种水平鉴定及耐药特征 被引量:1
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作者 张思雨 +4 位作者 闫韶飞 王帅 王伟 张建中 李凤琴 《中国食品卫生杂志》 2017年第3期283-288,共6页
目的评价和比较不同肠球菌种水平鉴定方法的准确性,了解北京市集贸市场生鲜猪肉肠球菌的种水平分布及耐药特征。方法利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和VITEK 2 COMPACT两种方法对北京市集贸市场生鲜猪肉肠球菌开... 目的评价和比较不同肠球菌种水平鉴定方法的准确性,了解北京市集贸市场生鲜猪肉肠球菌的种水平分布及耐药特征。方法利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和VITEK 2 COMPACT两种方法对北京市集贸市场生鲜猪肉肠球菌开展种水平鉴定,两种方法鉴定结果不一致的菌株使用API 20 Strep、16S rRNA和23S rRNA序列分析再次鉴定。比较不同种肠球菌对10种临床常用抗生素的药物敏感性。结果在5种肠球菌种水平鉴定方法中,16S rRNA序列分析和最终结果的符合率最高,为100.0%;VITEK 2 COMPACT符合率最低,仅为4.0%(1/25)。在86株肠球菌中,粪肠球菌占82.6%(71/86),其次为希拉肠球菌占14.0%(12/86)。粪肠球菌对环丙沙星(CIP)的耐药率高于希拉肠球菌,差异有统计学意义(χ~2=10.751,P〈0.01);对四环素(TET)、高浓度链霉素(HLSR)和高浓度庆大霉素(HLGR)的耐药率均高于希拉肠球菌,但差异无统计学意义(TET:χ~2=3.865,P〉0.05;HLSR:χ~2=1.608,P〉0.05;HLGR:χ~2=0.553,P〉0.05),但对红霉素(ERY)和氯霉素(CHL)的耐药率明显低于希拉肠球菌,差异有统计学意义(ERY:χ~2=20.244,P〈0.01;CHL:χ~2=14.139,P〈0.01)。结论 16S rRNA和MALDI-TOF-MS序列分析技术在肠球菌种水平快速鉴定上有较高准确性,不同种属肠球菌呈现不同耐药特征,本研究为有效监测食源性耐药肠球菌的传播和流行提供了科学数据。 展开更多
关键词 肠球菌 种水平鉴定 药物敏感性 耐药 粪肠球菌 希拉肠球菌 生鲜猪肉 食源性致病菌
产CTX-M-55型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌全基因组序列耐药和毒力特征研究 被引量:2
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作者 王伟 胡豫杰 +7 位作者 徐进 李孟寒 闫韶飞 甘辛 董银苹 白瑶 李凤琴 《中国食品卫生杂志》 2017年第5期519-525,共7页
目的基于全基因组序列,对2株食源性产CTX-M-55型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药和毒力分子机制进行研究。方法采用微量肉汤稀释法对大肠埃希菌食品分离株进行药敏试验,设计产ESBLs基因引物并通过聚合酶链式反应(PCR)扩... 目的基于全基因组序列,对2株食源性产CTX-M-55型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药和毒力分子机制进行研究。方法采用微量肉汤稀释法对大肠埃希菌食品分离株进行药敏试验,设计产ESBLs基因引物并通过聚合酶链式反应(PCR)扩增筛选出2株产CTX-M-55型ESBLs大肠埃希菌(编号为EC001和EC002)进行全基因组测序,并进行序列型(ST)、质粒复制子类型、血清型、耐药基因和毒力因子识别。结果 2株大肠埃希菌均为头孢类和喹诺酮类抗生素双重耐药ESBLs菌株;全基因组序列分析结果显示,2株菌的血清型均为肠道致病性大肠埃希菌(EPEC)O119∶H8,ST型分别为ST21(EC001)和ST342(EC002),EC001菌株含有Inc FII、IncX1、IncY、Col156和IncI2 5个不相容群质粒,EC002菌株含有IncFII和IncX1 2个不相容群质粒,2株菌株染色体中均携带bla_(CTX-M-55)和bla_(TEM-141)2种ESBLs基因。此外,EC001菌株还携带sul2/3、tet(A)/(B)、dfrA12、strA/B、aph(3')-IIa、cml/cmlA1、floR和oqxA/B耐药相关基因,其染色体喹诺酮耐药决定区gyr A基因存在2个突变位点(S83L,D87H)、parC基因存在1个突变位点(S80I),多粘菌素耐药相关基因pmr E基因存在3个突变位点(D73Y,M185T,S225T);而EC002菌株携带fosA和qnrS1耐药相关基因。2株菌均携带致黏附与脱落(A/E)损伤的肠细胞脱落位点(LEE)毒力岛基因esc、esp、eae A和tir,且EC001菌株还携带增强菌株在血清中存活能力的iss基因。结论对2株食源性产CTX-M-55型ESBLs大肠埃希菌进行全基因组测序以及耐药和毒力的分子机制的研究,其结果可为后续开展大肠埃希菌耐药和毒力表型预测、指导食用畜禽养殖过程中抗生素合理使用及耐药菌株防控提供依据。 展开更多
关键词 全基因组测序 CTX-M-55型 超广谱Β-内酰胺酶 耐药 大肠埃希菌
食源性希拉肠球菌R17基因组中前噬菌体的结构特征及其与宿主菌的相互影响
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作者 张思雨 +5 位作者 闫韶飞 王伟 王帅 甘辛 张建中 李凤琴 《中国食品卫生杂志》 2017年第4期393-399,共7页
目的了解生鲜猪肉中分离的希拉肠球菌R17基因组中前噬菌体的结构特征及其和宿主菌的相互影响。方法利用PHAST软件预测希拉肠球菌R17基因组中前噬菌体基因的分布及其编码基因特征,分析前噬菌体中含有的毒力基因、耐药基因和环境抗性基因... 目的了解生鲜猪肉中分离的希拉肠球菌R17基因组中前噬菌体的结构特征及其和宿主菌的相互影响。方法利用PHAST软件预测希拉肠球菌R17基因组中前噬菌体基因的分布及其编码基因特征,分析前噬菌体中含有的毒力基因、耐药基因和环境抗性基因。结果在希拉肠球菌R17染色体上有3个前噬菌体,其中Prophage-1和Prophage-2是不完整的前噬菌体,Prophage-3是完整的前噬菌体。染色体上的噬菌体携带了多个细菌功能编码基因,包括与核苷酸转运和代谢功能相关的基因。希拉肠球菌R17质粒上有一个不完整的、携带了红霉素和杆菌肽耐药基因的前噬菌体Prophage-p,推测前噬菌体介导的基因水平转移使希拉肠球菌R17对红霉素和杆菌肽产生了耐药性。结论希拉肠球菌基因组中的前噬菌体具有多样性。前噬菌体在肠球菌向耐药菌进化过程中发挥了重要作用,应重视监控噬菌体介导的耐药性和致病性在食品中的扩散。 展开更多
关键词 前噬菌体 希拉肠球菌 毒力基因 耐药基因 相互影响 食源性致病菌 宿主
鼠伤寒沙门菌婴幼儿分离株耐药基因及毒力基因研究 被引量:2
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作者 王伟 胡豫杰 +5 位作者 徐进 张宏元 赵熙 许学斌 李凤琴 《中国食品卫生杂志》 2016年第5期567-575,共9页
目的基于全基因组测序结果,分析鼠伤寒沙门菌耐药表型和耐药基因的关系,研究其耐药发生机制和毒力因子。方法利用美国临床和实验室标准委员会(CLSI)推荐的微量肉汤稀释法对5岁以下腹泻患儿粪便中分离的321株鼠伤寒沙门菌开展药物敏感... 目的基于全基因组测序结果,分析鼠伤寒沙门菌耐药表型和耐药基因的关系,研究其耐药发生机制和毒力因子。方法利用美国临床和实验室标准委员会(CLSI)推荐的微量肉汤稀释法对5岁以下腹泻患儿粪便中分离的321株鼠伤寒沙门菌开展药物敏感性试验,从中选择不同耐药表型的3株鼠伤寒沙门菌(S1:敏感;S2:TET耐药;S3:ESBLs阳性,10重耐药)进行全基因组测序,通过与抗生素抗性基因数据库(ARDB)和病原毒力因子数据库(VFDB)比对以及美国国立生物技术信息中心(NCBI)核酸数据库人工检索,对耐药基因和毒力基因进行注释。结果 321株鼠伤寒沙门菌对IPM和MEM均敏感,对TET和AMP的耐药率最高,分别为84.4%(271/321)和83.8%(269/321),206株菌株显示为耐3类以上抗生素(64.2%,206/321),11株CIP-CTX耐药株均为ESBLs阳性(3.4%,11/321);全基因组测序结果显示,S1、S2和S3的全基因组大小依次为4 876 427、4 970 690、5 133 380 bp,预测编码基因数分别为4 825、4 936和5 082个,GC含量依次为52.18%、52.14%、51.87%;对S1、S2和S3基因组中18、20和32个耐药基因进行注释,除共有基因外,S2主要携带tet A和sul2基因,S3主要携带sul1/2/3、tetB、AAC(3)-IV、AAC(6')-I、ANT(2″)-I、ANT(3″)-I、aph A1、bla_(CTX-M-14)、bla_(OXA-1)、catB3、cml_e1和cml_e3基因。与阳性鼠伤寒沙门菌株LT2的gyr A基因进行序列比对发现,S3 gyr A基因第87位密码子由GAC突变为AAC(Asp87→Asn);分别注释S1、S2和S3基因组的130、129和120个毒力基因,发现主要以三型分泌系统和粘附因子为主。结论 5岁以下腹泻患儿粪便样品中鼠伤寒沙门菌耐药现象严重;全基因组测序分析发现耐药基因与耐药表型一致,且存在多种毒力因子;为后续开展耐药基因传播机制和菌株致病性研究,评估其对人群的健康风险,防控鼠伤寒沙门菌感染提供技术支持。 展开更多
关键词 腹泻 婴幼儿 鼠伤寒沙门菌 耐药基因 毒力基因 全基因组测序 食源性致病菌
北京市集贸市场生鲜猪肉肠球菌的耐药特征分析 被引量:4
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作者 张爽 +4 位作者 王伟 胡豫杰 吕涵阳 张建中 李凤琴 《中国食品卫生杂志》 2016年第6期738-743,共6页
目的了解北京市某大型集贸市场内部环境样品和零售生鲜猪肉中分离肠球菌的耐药性特征。方法采用肉汤稀释法测定86株肠球菌对10种临床常用抗生素的药物敏感性。结果 86株肠球菌对四环素、红霉素、高浓度链霉素、环丙沙星、高浓度庆大霉... 目的了解北京市某大型集贸市场内部环境样品和零售生鲜猪肉中分离肠球菌的耐药性特征。方法采用肉汤稀释法测定86株肠球菌对10种临床常用抗生素的药物敏感性。结果 86株肠球菌对四环素、红霉素、高浓度链霉素、环丙沙星、高浓度庆大霉素和氯霉素的耐药率分别为67.44%(58/86)、54.65%(47/86)、38.37%(33/86)、26.74%(23/86)、23.26%(20/86)和20.93%(18/86),耐3种以上抗生素的多重耐药肠球菌有30株,占34.88%,耐药谱共有22种。所有肠球菌对氨苄西林、青霉素和万古霉素均敏感。耐药谱型分析发现,不同样品来源肠球菌的耐药谱差异较大。另外,本研究从国内食品中分离到对达托霉素耐药的肠球菌,此前我国未见相关报道。结论北京市集贸市场内部环境和零售生鲜猪肉中分离的肠球菌耐药严重,并呈现一定的耐药谱型差异,而且分离到达托霉素耐药株,应引起关注。 展开更多
关键词 肠球菌 药敏试验 耐药性 生鲜猪肉 集贸市场 食源性致病菌
食品及环境样品中肠球菌快速检验方法的建立及优化 被引量:4
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作者 王伟 +1 位作者 胡豫杰 李凤琴 《食品安全质量检测学报》 CAS 2016年第6期2240-2246,共7页
目的建立并优化食品及环境样品中肠球菌的快速检验方法。方法用mEI培养基作为选择性培养基,肠球菌tuf基因为靶基因设计引物,建立食品及环境样品中肠球菌的快速检验方法。通过添加肠球菌和非肠球菌标准菌株,验证方法的检测限、灵敏度及... 目的建立并优化食品及环境样品中肠球菌的快速检验方法。方法用mEI培养基作为选择性培养基,肠球菌tuf基因为靶基因设计引物,建立食品及环境样品中肠球菌的快速检验方法。通过添加肠球菌和非肠球菌标准菌株,验证方法的检测限、灵敏度及特异性,并使用优化后的方法对北京市丰台区某大型生鲜猪肉集贸市场的地面、墙壁、污水和生鲜猪肉等样品中的肠球菌进行检验。结果所建方法的检测限为1 CFU/100cm2和1 CFU/25 g(mL),且与10种非肠球菌无交叉反应;地面涂抹、墙壁涂抹、污水和生鲜猪肉等样品中均检验出肠球菌,检出率为100%。结论建立了简便、快速、灵敏、特异的肠球菌检验方法;集贸市场内部环境和生鲜猪肉存在肠球菌污染。应加强市售生鲜肉中肠球菌的监测,并采取相应措施降低其污染水平。 展开更多
关键词 肠球菌 生鲜猪肉 环境
抗菌肽在断奶仔猪生产中的应用效果研究进展 被引量:1
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作者 王丹玉 +1 位作者 王洪彬 王安如 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2015年第7期83-86,共4页
抗菌肽是由宿主先天性免疫防御系统产生的一类可抵抗外界病原体感染的小分子阳离子多肽。抗菌肽具有抗菌谱广、对多重耐药菌有良好杀伤作用、热稳定性和水溶性好、对哺乳动物正常细胞几乎无毒害作用等特点,因此在畜牧业中有望替代抗生... 抗菌肽是由宿主先天性免疫防御系统产生的一类可抵抗外界病原体感染的小分子阳离子多肽。抗菌肽具有抗菌谱广、对多重耐药菌有良好杀伤作用、热稳定性和水溶性好、对哺乳动物正常细胞几乎无毒害作用等特点,因此在畜牧业中有望替代抗生素成为新一代抗菌添加剂。本文主要就抗菌肽在提高断奶仔猪生长性能、减少腹泻、改善肠道平衡以及促进机体免疫功能等方面的作用进行了阐述。 展开更多
关键词 抗菌肽 生长性能 肠道菌群 免疫 断奶仔猪
猪防御素的研究进展及其在饲料中的应用 被引量:1
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作者 王丹玉 +1 位作者 王洪彬 王安如 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2015年第5期86-90,共5页
防御素是一类富合半胱氨酸的阳离子活性多肽,是动物先天性免疫防御系统的重要组成部分,防御素在动物组织细胞中广泛表达,是宿主抵抗外界病原微生物入侵的第一道防线。防御素具有的抗菌谱广、抗菌机制特殊、不易产生耐药性、残留低、对... 防御素是一类富合半胱氨酸的阳离子活性多肽,是动物先天性免疫防御系统的重要组成部分,防御素在动物组织细胞中广泛表达,是宿主抵抗外界病原微生物入侵的第一道防线。防御素具有的抗菌谱广、抗菌机制特殊、不易产生耐药性、残留低、对动物自身正常细胞没有伤害等特点,使防御素成为替代抗生素的最佳候选之一,未来将在畜禽生产中具有广阔的应用前景。本文主要对猪防御素基因的特点及其在动物组织中的表达谱、防御素在猪体内的表达调控特性、基因工程菌以及防御素在饲料业中的应用等方面进行阐述。 展开更多
关键词 猪防御素 表达调控 基因工程菌 饲料添加剂
猪β-防御素-2基因在大肠杆菌中的融合表达及抑菌活性检测 预览 被引量:2
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作者 谢飞 吴雅琨 +3 位作者 冯秋月 陈慧鑫 王安如 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第2期6-9,共4页
将猪β-防御素-2基因(pBD-2)片段正确连接到pET32a载体上,从而得到稳定表达pBD-2的大肠杆菌表达株。根据已报道的pBD-2基因序列,按大肠杆菌密码子优化原则合成了5条pBD-2基因片段,通过重叠延伸PCR(SOE PCR)方法将这5段延伸成完整的p... 将猪β-防御素-2基因(pBD-2)片段正确连接到pET32a载体上,从而得到稳定表达pBD-2的大肠杆菌表达株。根据已报道的pBD-2基因序列,按大肠杆菌密码子优化原则合成了5条pBD-2基因片段,通过重叠延伸PCR(SOE PCR)方法将这5段延伸成完整的pBD-2基因序列,将该基因定向插入原核表达质粒pET32a的多克隆位点上,成功地在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出TrxA-pBD2融合蛋白。结果显示,表达的融合蛋白用肠激酶切掉TrxA后做琼脂孔穴扩散法检测,pBD-2对金黄色葡萄球菌有较好的抑菌活性,表明试验获得表达pBD-2的大肠杆菌菌株。 展开更多
关键词 猪β-防御素-2 原核表达 融合蛋白 抗菌活性
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猪β-防御素-2转化酿酒酵母方法的比较分析 预览 被引量:1
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作者 吴雅琨 +3 位作者 冯秋月 谢飞 刘鹏 王安如 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第7期138-141,共4页
为了建立操作简单、高效率的猪β-防御素-2转化酿酒酵母的方法,试验比较了酿酒酵母的两种转化方法,即电转化和醋酸锂法。结果显示,两种转化方法对细胞生长状态均有严格的要求。在醋酸锂转化中,以培养10h,D600nm为1.051的细胞制备感受态... 为了建立操作简单、高效率的猪β-防御素-2转化酿酒酵母的方法,试验比较了酿酒酵母的两种转化方法,即电转化和醋酸锂法。结果显示,两种转化方法对细胞生长状态均有严格的要求。在醋酸锂转化中,以培养10h,D600nm为1.051的细胞制备感受态,热激时间为60min时,转化率为136个/μg DNA;在电转化中,以培养12h,D600nm为1.359的细胞制备感受态,电击电压2.5kV时转化效率为154个/μg DNA。但综合操作效率,最终选择醋酸锂法进行酿酒酵母的转化。 展开更多
关键词 Β-防御素-2 酿酒酵母 转化
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固态发酵豆粕营养价值及其应用研究 预览 被引量:8
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作者 郝耿 胡婷 +5 位作者 马桢 艾布什 陈童 王安如 王洪彬 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第2期 81-85,共5页
固态发酵法是一种切实可行的提高豆粕营养价值的方法。豆粕是畜禽最重要的植物性蛋白源,但其含有的抗营养因子限制了幼龄动物对蛋白质的有效利用。研究结果表明,发酵豆粕对动物的生长性能、消化和免疫功能具有积极的影响。作者就固态发... 固态发酵法是一种切实可行的提高豆粕营养价值的方法。豆粕是畜禽最重要的植物性蛋白源,但其含有的抗营养因子限制了幼龄动物对蛋白质的有效利用。研究结果表明,发酵豆粕对动物的生长性能、消化和免疫功能具有积极的影响。作者就固态发酵豆粕的营养价值研究及其在动物饲养中的应用进行了综述。 展开更多
关键词 固态发酵 豆粕 抗营养因子 多菌种混合发酵
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细菌素抗菌作用机理及其应用 预览 被引量:1
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作者 胡婷 +3 位作者 王安如 王丹玉 王洪彬 宋维平 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第7期 50-52,共3页
细菌素是微生物在代谢过程中通过核糖体途径合成的一类具有抗菌活性的多肽物质,对细菌素产生菌自身没有抑制作用。细菌素在自然界中普遍存在,30%~999/6的细菌和古生菌可以产生至少一种细菌素。细菌素对多种蛋白酶敏感,因此在体内... 细菌素是微生物在代谢过程中通过核糖体途径合成的一类具有抗菌活性的多肽物质,对细菌素产生菌自身没有抑制作用。细菌素在自然界中普遍存在,30%~999/6的细菌和古生菌可以产生至少一种细菌素。细菌素对多种蛋白酶敏感,因此在体内不容易产生残留和抗药性,另外细菌素对高温、酸性环境具有良好的耐受性,因此细菌素可以被用于开发低毒、低残留、安全、高效的生物饲料和生物药品替代传统抗生素类药品。 展开更多
关键词 细菌素 抗菌作用 应用 机理 生物药品 多肽物质 抗菌活性 代谢过程
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