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Ⅲ型脊髓灰质炎病毒抗原表位嵌合蛋白的免疫学研究 预览
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作者 杨筱舟 王晶 +5 位作者 潘小霞 赵冰心 滕玉梅 陈元鼎 《生物技术通讯》 CAS 2018年第3期362-366,共5页
目的:对以轮状病毒(RV)重组VP6蛋白为载体插入Ⅲ型脊髓灰质炎病毒(PV3)VP1蛋白上1个抗原表位(VP1的91~102、254和168位氨基酸残基)所构建的嵌合蛋白6F/PV3N1进行体外免疫学研究。方法:利用分子克隆和基因重组技术将PV3抗原表位... 目的:对以轮状病毒(RV)重组VP6蛋白为载体插入Ⅲ型脊髓灰质炎病毒(PV3)VP1蛋白上1个抗原表位(VP1的91~102、254和168位氨基酸残基)所构建的嵌合蛋白6F/PV3N1进行体外免疫学研究。方法:利用分子克隆和基因重组技术将PV3抗原表位插入RV载体蛋白,构建重组抗原表位嵌合蛋白表达质粒,转染大肠杆菌后表达重组蛋白,经SDS-PAGE确认表达产物,再通过Western印迹分析嵌合蛋白的抗原反应性。结果:用载体蛋白VP6F、轮状病毒Wa病毒株免疫的豚鼠血清抗体分别都能与VP6F和6F/PV3N1产生特异性结合;PV3免疫的豚鼠血清抗体只能与6F/PV3N1产生特异性结合,不能与VP6F产生特异性结合;PV1免疫的豚鼠血清抗体则不能与6F/PV3N1和VP6F产生特异性结合。结论:PV1、PV3之间不存在交叉反应现象,以RV VP6为载体构建的嵌合蛋白6F/PV3N1具有较好的免疫原性,为研发RV/PV3嵌合疫苗提供了基础。 展开更多
关键词 轮状病毒 脊髓灰质炎病毒 抗原表位 嵌合蛋白 免疫原性
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Ⅱ型脊灰病毒抗原表位嵌合蛋白的免疫学研究
2
作者 王晶 +6 位作者 潘小霞 赵冰心 滕玉梅 李传印 杨筱舟 陈元鼎 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1-8,共8页
目的:评价以轮状病毒(RV)重组VP6蛋白为载体插入Ⅱ型脊髓灰质炎病毒(PV2)VPl蛋白上的1个抗原表位构建而成的嵌合蛋白的体外免疫学性质。方法:采用分子克隆和基因重组技术将PV2抗原表位插入到RV载体蛋白上,在大肠杆菌中表达并用SD... 目的:评价以轮状病毒(RV)重组VP6蛋白为载体插入Ⅱ型脊髓灰质炎病毒(PV2)VPl蛋白上的1个抗原表位构建而成的嵌合蛋白的体外免疫学性质。方法:采用分子克隆和基因重组技术将PV2抗原表位插入到RV载体蛋白上,在大肠杆菌中表达并用SDS.PAGE确认表达产物,再通过动物免疫、Westernblot、免疫荧光和病毒血清抗体中和试验分析嵌合蛋白的免疫学性质。结果:成功构建了以VP6为载体的PV2抗原表位嵌合蛋白6F/PV2N1,并且在E-coli系统中高效表达,嵌合蛋白免疫的豚鼠血清抗体对RV和PV2具备较好的中和活性。结论:以RVVP6为载体构建的嵌合蛋白具有较好的免疫原性,免疫豚鼠产生血清抗体可中和RV和PV2在体外细胞上的感染;进一步为研发Rv/PV2嵌合疫苗提供了较好的基础。 展开更多
关键词 轮状病毒 脊灰病毒 抗原表位 嵌合蛋白 免疫原性
大规模纯化脊髓灰质炎病毒的蔗糖垫层离心法的建立
3
作者 赵冰心 戴素萍 +4 位作者 潘小霞 廖国阳 陈元鼎 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第3期310-313,316共5页
目的建立可大规模纯化脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)的蔗糖垫层离心法。方法病毒大量增殖后,收集病毒液,经PEG浓缩、三氟三氯乙烷抽提后,采用蔗糖垫层或Cs Cl密度梯度离心法纯化PV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型),电镜下观察病毒形态,进行核酸及感... 目的建立可大规模纯化脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)的蔗糖垫层离心法。方法病毒大量增殖后,收集病毒液,经PEG浓缩、三氟三氯乙烷抽提后,采用蔗糖垫层或Cs Cl密度梯度离心法纯化PV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型),电镜下观察病毒形态,进行核酸及感染性滴度的检测。将纯化的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型PV免疫豚鼠,心脏采血,分离血清,微量中和试验法检测血清中和抗体滴度。结果蔗糖垫层离心法纯化的各型PV,病毒颗粒形态典型,背景清晰,除完整的光滑型病毒颗粒外,还可见大量空心病毒颗粒样品,纯化效果较好;Cs Cl密度梯度离心法纯化的PV样品,病毒形态也较典型,但完整的病毒颗粒较多。两种纯化方法获得的病毒基因组核酸特征显著,背景清晰,无明显差异。蔗糖垫层离心法纯化的各型PV的感染性滴度及免疫后豚鼠血清中和抗体滴度均高于Cs Cl密度梯度离心法。结论蔗糖垫层离心法纯化的PV纯度高,免疫原性好,可用于大规模纯化PV或其他病毒。 展开更多
关键词 脊髓灰质炎病毒 蔗糖垫层 纯化
轮状病毒VP4抗原表位在VP6载体蛋白同一位点表达比较研究 被引量:1
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作者 王晶 +3 位作者 赵冰心 潘小霞 陈元鼎 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期9-15,共7页
目的:评价轮状病毒(RV)VP4两个抗原表位插入VP6载体蛋白同一位点所表达的重组嵌合蛋白免疫学性质及在研制嵌合蛋白疫苗中的意义。方法:采用分子克隆和基因重组技术将RV VP4的两个抗原表位插入到VP6载体蛋白同一位点上,构建重组抗原... 目的:评价轮状病毒(RV)VP4两个抗原表位插入VP6载体蛋白同一位点所表达的重组嵌合蛋白免疫学性质及在研制嵌合蛋白疫苗中的意义。方法:采用分子克隆和基因重组技术将RV VP4的两个抗原表位插入到VP6载体蛋白同一位点上,构建重组抗原表达质粒,表达携带不同抗原表位的重组嵌合蛋白,用Western blot和中和试验分析重组嵌合蛋白的抗原反应性和免疫原性。结果:成功构建了两个嵌合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达;表达的嵌合蛋白可与相应抗体特异性反应;可诱导豚鼠产生特异性血清抗体;抗嵌合蛋白血清抗体可特异性识别载体蛋白VP6F,Wa株病毒的VP6和VP4蛋白,可中和Wa株病毒在MA104细胞上的感染性;结果表明,所构建和表达的两个以VP6为载体的VP4抗原表位嵌合蛋白具有较高抗原反应性和免疫原性;嵌合蛋白携带的VP4抗原表位具有增强载体蛋白免疫原性作用;为研制新型RV重组蛋白疫苗的奠定了较好的基础。 展开更多
关键词 轮状病毒 抗原表位 重组嵌合蛋白载体 重组嵌合蛋白 免疫原性
轮状病毒结构蛋白VP6的原核表达及其作为检测抗原在病毒检测中的应用 被引量:2
5
作者 袁静 潘小霞 +3 位作者 滕玉梅 姬秋彦 陈元鼎 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第6期 730-733,共4页
目的原核表达轮状病毒(Rotavirus,RV)结构蛋白VP6,并初步应用于以VP6为检测抗原检测RV血清抗体的ELISA方法,用于不同型RV免疫后抗体水平的检测。方法提取TB-Chen株RV基因组RNA,采用RT-PCR法扩增VP6基因,插入表达载体pETL中,构建重组... 目的原核表达轮状病毒(Rotavirus,RV)结构蛋白VP6,并初步应用于以VP6为检测抗原检测RV血清抗体的ELISA方法,用于不同型RV免疫后抗体水平的检测。方法提取TB-Chen株RV基因组RNA,采用RT-PCR法扩增VP6基因,插入表达载体pETL中,构建重组表达质粒pET-VP6,转化E.coli BL21(DE3),表达rVP6。表达的rVP6经纯化后,与TB-Chen株(G2P[4]型)、Wa株(G1P[8]型)和SA11株(G3P[2]型)RV分别免疫豚鼠,制备血清抗体,以SA11株血清抗体,经Western blot鉴定纯化的rVP6,以纯化的rVP6为检测抗原,采用ELISA法检测不同型RV免疫血清抗体。结果重组表达质粒pET-VP6经双酶切和测序鉴定证明构建正确;表达的rVP6相对分子质量约为45 000,表达量占菌体总蛋白的34.7%;纯化的rVP6纯度达90%以上,蛋白浓度为8.304μg/μl,可与豚鼠抗RV SA11株血清抗体发生特异性反应;以纯化的rVP6为检测抗原,可检测TB-Chen、Wa、SA11株和抗rVP6的豚鼠免疫血清抗体。结论成功地在大肠杆菌中表达了rVP6,以具有共同组/亚组抗原特异性的rVP6作为检测抗原,可检测同一组/亚组内不同型的RV血清抗体,为研制以VP6为检测抗原检测RV感染的ELISA试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 轮状病毒属 病毒结构蛋白质类 VP6 酶联免疫吸附测定
A组人轮状病毒VP3基因的原核表达及鉴定 被引量:2
6
作者 张顺 潘小霞 +2 位作者 袁静 陈元鼎 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第2期 152-156,共5页
目的克隆并原核表达A组人轮状病毒(Rotavirus,RV)TB-Chen株结构蛋白VP3基因,并进行分子系统进化和基因分型。方法采用PCR法扩增A组人轮状病毒TB.Chen株VP3编码基因,克隆至pETL载体上,构建重组原核表达质粒pET-VP3,转化大肠杆菌B... 目的克隆并原核表达A组人轮状病毒(Rotavirus,RV)TB-Chen株结构蛋白VP3基因,并进行分子系统进化和基因分型。方法采用PCR法扩增A组人轮状病毒TB.Chen株VP3编码基因,克隆至pETL载体上,构建重组原核表达质粒pET-VP3,转化大肠杆菌BL21(DE3),并进行表达。表达的重组蛋白经SDS-PAGE及Westernblot鉴定后,对VP3基因进行分子系统进化及基因型分析。结果重组表达质粒pET-VP3经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为98000,以包涵体形式存在;重组VP3蛋白可被抗SAll株全病毒豚鼠免疫血清识别;迄今发现的A组RVVP3可分为7个基因型,TB-Chen株和SAll株VP3基因分别属于M2型和345型。结论成功原核表达了A组人RVTB-Chen株VP3蛋白,为进一步研究VP3的结构功能及开发新型RV疫苗、诊断试剂和治疗药物奠定了基础。 展开更多
关键词 轮状病毒属 VP3基因 原核细胞 基因表达 基因分型
痘苗病毒/T7 RNA聚合酶辅助的原核基因在真核细胞中的表达
7
作者 潘小霞 张顺 +2 位作者 袁静 陈元鼎 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期48-54,共7页
痘苗病毒/T7RNA聚合酶这一瞬时表达系统由于具有很多优于其他表达系统的特点而被广泛地应用于表达外源蛋白。TB-Chen株轮状病毒的VP6 DNA编码片段插入到原核质粒pETL的噬菌体T7启动子和终止子之间,获得重组表达质粒pET-VP6。构建好的重... 痘苗病毒/T7RNA聚合酶这一瞬时表达系统由于具有很多优于其他表达系统的特点而被广泛地应用于表达外源蛋白。TB-Chen株轮状病毒的VP6 DNA编码片段插入到原核质粒pETL的噬菌体T7启动子和终止子之间,获得重组表达质粒pET-VP6。构建好的重组表达质粒pET-VP6通过脂质体转染到真核细胞MA104中,用携带噬菌体T7RNA聚合酶基因的重组痘苗病毒vTF7-3再感染,可在细胞检测到目的蛋白VP6的表达。研究结果还显示,痘苗病毒vTF7-3感染后,细胞病变较快,严重影响了蛋白的表达量。结果提示,如果能降低痘苗病毒vTF7-3的致细胞病变作用而不影响其在细胞中合成T7 RNA聚合酶的能力,蛋白可能会得到高效表达。为进一步研究VP6基因的特性及更好地应用痘苗病毒/T7 RNA聚合酶这一瞬时表达系统提供理论基础 展开更多
关键词 轮状病毒VP6 原核质粒表达 真核细胞 重组痘苗病毒vTF7-3 T7 RNA聚合酶
增强型绿色荧光蛋白基因与轮状病毒VP6基因融合表达载体的构建及表达 预览
8
作者 潘小霞 张顺 +2 位作者 袁静 陈元鼎 《中国医药生物技术》 CSCD 2011年第4期 241-245,共5页
目的构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与轮状病毒(RV)VP6基因融合表达载体,研究融合蛋白表达及在细胞中的分布。方法提取A组人RVTB-Chen株VP6基因,用PCR扩增VP6编码cDNA片段。将此基因片段与真核表达载体pEGFP-C1携带的EGFP融合;运... 目的构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与轮状病毒(RV)VP6基因融合表达载体,研究融合蛋白表达及在细胞中的分布。方法提取A组人RVTB-Chen株VP6基因,用PCR扩增VP6编码cDNA片段。将此基因片段与真核表达载体pEGFP-C1携带的EGFP融合;运用脂质体的方法,将获得的重组质粒转染到MA104细胞中,在荧光显微镜下观察蛋白的表达及其在细胞中的分布情况。结果成功构建了融合表达质粒;转染细胞后,融合蛋白可在MA104细胞中表达且主要分布在胞质中。结论RVVP6可与EGFP融合表达,融合蛋白在细胞质中呈均匀的分布,与RV感染细胞中合成的VP6蛋白的分布有较大的差别。 展开更多
关键词 胃肠炎 轮状病毒属 基因融合 绿色荧光蛋白质类 生物医学研究
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A组轮状病毒NSP1基因克隆表达及免疫学性质研究 被引量:4
9
作者 魏海涛 张艳 +3 位作者 范耀春 李传印 陈元鼎 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期15-21,共7页
轮状病毒(rotavirus,RV)非结构蛋白1(non structural protein1,NSP1)在病毒与宿主的相互作用中发挥着重要的功能。运用基因克隆和表达技术在大肠杆菌中表达了TB-Chen株RVNSP1蛋白,进行了NSP1的免疫学性质和RV感染细胞中NSP1蛋白的... 轮状病毒(rotavirus,RV)非结构蛋白1(non structural protein1,NSP1)在病毒与宿主的相互作用中发挥着重要的功能。运用基因克隆和表达技术在大肠杆菌中表达了TB-Chen株RVNSP1蛋白,进行了NSP1的免疫学性质和RV感染细胞中NSP1蛋白的合成与分布以及NSP1的系统进化和基因分型研究。结果表明,大肠杆菌BL21(DE3)能高效表达重组NSP1蛋白(rNSP1),rNSP1表达量约占菌体总蛋白的34.4%。rNSP1能诱导免疫豚鼠产生特异性血清抗体。Western blot及免疫荧光检测结果表明,抗rNSP1血清抗体能特异性识别自身蛋白,对SA11、Wa株的NSP1蛋白有交叉反应性;免疫荧光结果还表明,SA11感染的MA104细胞中合成的NSP1蛋白在细胞质中区域化聚集形成辐射状排列的颗粒状结构,而Wa株的NSP1不能形成此样结构。至今发现的A组RV至少可以分为16个不同的NSP1基因型,TB-Chen株NSP1为A2型。不同基因型有独特的敏感宿主范围,同一基因型可能感染不同种动物,同一种动物也可能感染不同基因型。基因型A4型和A16型仅在鸟类病毒株中出现;而且鸟类中只有A4型和A16型。研究结果为进一步研究NSP1蛋白质的结构功能及其应用开发奠定了很好的基础。 展开更多
关键词 轮状病毒 NSP1 重组表达 免疫学性质 基因分型
A组轮状病毒VP5*和VP8*的表达和免疫学性质研究 被引量:1
10
作者 张艳 +3 位作者 魏海涛 李传印 范耀春 陈元鼎 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期32-38,共7页
轮状病毒是引起婴幼儿腹泻的主要病原,VP4是RV重要的抗原蛋白,在早期病毒与细胞黏附过程中发挥重要作用,包括受体结合和细胞渗透。在细胞黏附过程中,VP4易被切割成VP5*和VP8*2个片段并以此增强病毒感染性。为了深入研究VP5*和VP8*... 轮状病毒是引起婴幼儿腹泻的主要病原,VP4是RV重要的抗原蛋白,在早期病毒与细胞黏附过程中发挥重要作用,包括受体结合和细胞渗透。在细胞黏附过程中,VP4易被切割成VP5*和VP8*2个片段并以此增强病毒感染性。为了深入研究VP5*和VP8*的免疫学性质,进一步评价其应用前景,从TB-Chen株RV基因组中编码VP4蛋白基因上克隆了VP5*和VP8*开放读码框核苷酸序列,构建了表达质粒,在原核大肠杆菌系统中重组表达了VP5*和VP8*蛋白,进一步分析了它们的免疫学性质。结果显示,VP5*和VP8*可在E.coli中高效表达,重组蛋白VP5*(rVP5*)和VP8*(rVP8*)可诱导免疫豚鼠产生特异性血清抗体,这些抗体可特异性识别自身蛋白(rVP5*或rVP8*),可识别来自TB-Chen株的重组VP4蛋白,并可识别SA11和Wa感染的MA104细胞中合成的病毒VP4蛋白。这些结果表明,rVP5*和rVP8*蛋白具有较高的免疫原性,抗rVP5*和抗rVP8*的抗体具有高度特异性和交叉反应性。 展开更多
关键词 轮状病毒 VP5* VP8* 重组表达 抗原性
A组人轮状病毒NSP2基因的克隆、表达及免疫学性质研究 被引量:1
11
作者 范耀春 +2 位作者 尹兴晓 李传印 陈元鼎 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期17-23,共7页
轮状病毒非结构蛋白NSP2在病毒基因组复制过程中起重要作用。在原核系统中重组表达了来自中国的第一株全基因组被克隆和研究了的轮状病毒NSP2,并进一步对其免疫学性质进行了研究。结果显示,在大肠杆菌中能够高效表达重组NSP2蛋白,而... 轮状病毒非结构蛋白NSP2在病毒基因组复制过程中起重要作用。在原核系统中重组表达了来自中国的第一株全基因组被克隆和研究了的轮状病毒NSP2,并进一步对其免疫学性质进行了研究。结果显示,在大肠杆菌中能够高效表达重组NSP2蛋白,而且该蛋白能够诱发豚鼠产生特异性抗体。Western blot和免疫荧光检测表明所得抗体不仅能与该重组NSP2蛋白发生特异性反应,而且可以与轮状病毒SA11株或Wa株感染的MA104细胞中表达的NSP2发生反应。以上这些结果为进一步研究该重组NSP2蛋白的结构、功能及免疫学性质奠定了基础 展开更多
关键词 轮状病毒 NSP2 重组表达 免疫学性质
一种简捷检测重组痘苗病毒蚀斑的方法 预览 被引量:1
12
作者 李传印 +3 位作者 范耀春 张艳 魏海涛 陈元鼎 《昆明医科大学学报》 2009年第S2期1-4,49共5页
目的建立一种简捷准确测定重组痘苗病毒滴度的方法.方法重组痘苗病毒vTF7-3经胰酶处理后,在37℃,吸附MA104细胞单层2h,覆盖不同的覆盖物.(1)琼脂法:细胞单层覆盖琼脂-MEM营养层,放37℃,5%CO2孵箱培养3~4d后,用含中性红的第二层营养琼... 目的建立一种简捷准确测定重组痘苗病毒滴度的方法.方法重组痘苗病毒vTF7-3经胰酶处理后,在37℃,吸附MA104细胞单层2h,覆盖不同的覆盖物.(1)琼脂法:细胞单层覆盖琼脂-MEM营养层,放37℃,5%CO2孵箱培养3~4d后,用含中性红的第二层营养琼脂覆盖,4h后计数病毒蚀斑;(2)甲基纤维素法:细胞单层覆盖甲基纤维素-MEM营养液,放37℃,5%CO2孵箱培养3~4d后,吸出营养液,用结晶紫染色20min后计数病毒蚀斑.结果琼脂法和甲基纤维素法中痘苗病毒vTF7-3的蚀斑均呈圆形,大小均匀,边缘清晰光滑,但甲基纤维素法中痘苗病毒的斑型较大,滴度较高,操作简单.琼脂法蚀斑平均滴度为1.27×109/mL,甲基纤维素法蚀斑平均滴度为1.54×109/mL,统计学分析二者差异无统计学意义(P】0.05).结论琼脂法和甲基纤维素法均可用于测定重组痘苗病毒滴度,甲基纤维素蚀斑法优于琼脂法. 展开更多
关键词 重组痘苗病毒 蚀斑滴定 甲基纤维素
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TB-Chen株轮状病毒NSP5/NSP6及基因型的初步研究 被引量:6
13
作者 李传印 +3 位作者 范耀春 张艳 魏海涛 陈元鼎 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期349-354,共6页
TB-Chen病毒是一株分离自中国胃肠炎患儿的A组轮状病毒。研究结果表明,TB-Chen病毒的NSP5和NSP6由第10基因组节段编码,该节段全长816bp。NSP5含200个氨基酸,由第22~624位核苷酸(nt)编码,预测分子量为21.9 kD,等电点为7.86。NSP6含92... TB-Chen病毒是一株分离自中国胃肠炎患儿的A组轮状病毒。研究结果表明,TB-Chen病毒的NSP5和NSP6由第10基因组节段编码,该节段全长816bp。NSP5含200个氨基酸,由第22~624位核苷酸(nt)编码,预测分子量为21.9 kD,等电点为7.86。NSP6含92个氨基酸,由第80~355位nt编码,预测分子量为11 kD,等电点为9.65。对编码NSP5和NSP6的ORF核苷酸序列的分子进化分析结果表明,A组RV的NSP5至少可分为7个不同的基因型(H1~H7型),TB-Chen株NSP5属于H2型;NSP6至少可分为8个基因型(h1~h8型),TB-Chen株NSP6属于h2型。这是首个对A组人RV的NSP6基因分型的研究结果的报道,并且我们建议NSP6的基因型以英文字母"h"代表,如TB-Chen株的NSP5/NSP6基因型为H2h2,69M株的NSP5/NSP6基因型为H7h7,Wa株与KU株的NSP5/NSP6基因型为H1h8。 展开更多
关键词 A组人轮状病毒 NSP5 NSP6 分子进化 基因型分析
A组轮状病毒NSP6蛋白表达及免疫学性质研究
14
作者 李传印 范耀春 +3 位作者 张艳 魏海涛 陈元鼎 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期33-39,共7页
轮状病毒(RV)NSP6与NSP5由同一基因片段编码,至今对NSP6性质了解很少。用基因重组表达和免疫学方法,重组表达了A组人RV NSP6蛋白,进行了NSP6的动物免疫及其抗原反应性、免疫原性研究以及RV感染细胞中NSP6的合成及亚细胞分布研究。... 轮状病毒(RV)NSP6与NSP5由同一基因片段编码,至今对NSP6性质了解很少。用基因重组表达和免疫学方法,重组表达了A组人RV NSP6蛋白,进行了NSP6的动物免疫及其抗原反应性、免疫原性研究以及RV感染细胞中NSP6的合成及亚细胞分布研究。研究结果表明,NSP6可在原核系统中高效表达,表达蛋白占菌体总蛋白的34.2%;NSP6免疫豚鼠血清抗体可特异性识别菌体细胞中表达的NSP6和SA11及Wa病毒感染的MA104细胞中合成的NSP6蛋白;病毒感染细胞中合成的NSP6在感染后3h就可检测到,12h表达量达到最高;NSP6在病毒感染细胞质中呈弥散状分布,并主要积聚在细胞核的周围,未观察到毒质体样结构。研究结果对深入了解RV NSP6的结构与功能具有重要的意义,具有重要的潜在应用价值。 展开更多
关键词 轮状病毒 NSP6 重组表达 免疫学特性 细胞内分布
轮状病毒Vp6蛋白的免疫荧光检测 预览 被引量:6
15
作者 尹兴晓 +2 位作者 赵庆欢 于洋 陈元鼎 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第5期 434-437,共4页
目的检测在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的重组轮状病毒(Rotavirus,RV)Vp6蛋白和RvSAll感染的MA104细胞中不同时间表达的Vp6蛋白及其分布规律。方法应用纯化的重组A组人轮状病毒TB-Chen株Vp6(Wp6)蛋白和RvSAll分别免疫豚鼠,制备抗... 目的检测在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的重组轮状病毒(Rotavirus,RV)Vp6蛋白和RvSAll感染的MA104细胞中不同时间表达的Vp6蛋白及其分布规律。方法应用纯化的重组A组人轮状病毒TB-Chen株Vp6(Wp6)蛋白和RvSAll分别免疫豚鼠,制备抗血清,以抗rVp6豚鼠血清作为检测抗体,应用间接免疫荧光技术检测rVp6蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达。分别用抗Vp6和抗RVSA11豚鼠血清检测Vp6蛋白和RVSAll株在感染的MA104细胞中的分布。结果在轮状病毒感染的MA104细胞和大肠杆菌BL21(DE3)中均能检测到轮状病毒Vp6蛋白。以抗RVSAll血清作为一抗检测感染细胞,比用抗rVp6血清检测具有更强的敏感性。结论免疫荧光试验可用于轮状病毒Vp6蛋白的检测。 展开更多
关键词 轮状病毒 Vp6蛋白 免疫荧光
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A组人轮状病毒全基因组克隆和基因型分析 预览 被引量:9
16
作者 陈元鼎 刘晓 +7 位作者 熊新宇 曹志亮 赵庆欢 余洋 尹兴晓 李传印 范耀春 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期 25-31,共7页
运用基因克隆和重组技术,从一急性胃肠炎患儿样品中克隆到一株轮状病毒(RV)全基因组eDNA。核苷酸序列测定结果表明,该株RV基因组11条RNA共含有18613个核苷酸(3302bp~751bp),编码5791个氨基酸。全基因组研究结果表明,该株RV(TB... 运用基因克隆和重组技术,从一急性胃肠炎患儿样品中克隆到一株轮状病毒(RV)全基因组eDNA。核苷酸序列测定结果表明,该株RV基因组11条RNA共含有18613个核苷酸(3302bp~751bp),编码5791个氨基酸。全基因组研究结果表明,该株RV(TB—Chen)为A组,II亚组,基因型为G2P[4]/NSP4[A]。这是首个A组人RV全基因组研究结果的报道,对研究和开发RV疫苗具有积极的意义。 展开更多
关键词 A组人轮状病毒 全基因组 克隆 基因型分析
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免疫荧光法检测原核和真核细胞中表达的轮状病毒外壳蛋白VP4 预览
17
作者 赵庆欢 +1 位作者 于洋 陈元鼎 《生物技术通讯》 CAS 2008年第2期 210-212,共3页
目的:用免疫荧光法快速检测原核和真核细胞中表达的轮状病毒(RV)外壳蛋白VP4。方法:以抗VP4的抗体为一抗、FITC标记的羊抗豚鼠IgG为二抗,用免疫荧光方法检测在大肠杆菌BL21(DE3)中重组表达的同源RVVP4;检测SA11或Wa株RV感染MA10... 目的:用免疫荧光法快速检测原核和真核细胞中表达的轮状病毒(RV)外壳蛋白VP4。方法:以抗VP4的抗体为一抗、FITC标记的羊抗豚鼠IgG为二抗,用免疫荧光方法检测在大肠杆菌BL21(DE3)中重组表达的同源RVVP4;检测SA11或Wa株RV感染MA104细胞后不同时间段病毒VP4的合成及其在感染细胞中的分布情况。结果:用免疫荧光法可直接检测到原核细胞中表达的外源蛋白,也可检测到病毒蛋白在真核细胞中的分布情况。结论:免疫荧光法可特异、方便、快速地检测RV VP4在原核和真核细胞中的表达;来源于RV TB—Chen株的VP4抗体可特异性识别同源病毒VP4,交叉识别SA11或Wa株的VP4。 展开更多
关键词 免疫荧光法 轮状病毒 外壳蛋白 VP4 原核表达 真核表达
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A组人轮状病毒NSP3基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 预览 被引量:1
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作者 于洋 +2 位作者 赵庆欢 曹志亮 陈元鼎 《生物技术通讯》 CAS 2007年第3期 388-391,共4页
目的:获得轮状病毒NSP3基因的表达产物及其抗血清。方法:将TB—Chen株轮状病毒NSP3基因插入质粒pETL,构建重组表达质粒pET—NSP3,并转化大肠杆菌BL21(DE3)表达重组蛋白NSP3;用凝胶分离回收的方法纯化该蛋白,免疫豚鼠制备该蛋白... 目的:获得轮状病毒NSP3基因的表达产物及其抗血清。方法:将TB—Chen株轮状病毒NSP3基因插入质粒pETL,构建重组表达质粒pET—NSP3,并转化大肠杆菌BL21(DE3)表达重组蛋白NSP3;用凝胶分离回收的方法纯化该蛋白,免疫豚鼠制备该蛋白的抗血清。结果:构建了重组表达质粒pET—NSP3,并在大肠杆菌中高效表达了重组蛋白NSP3,目的蛋白表达量占菌体总蛋白量的28.6%;有效地纯化了目的蛋白并制备了该蛋白的抗血清,Western印迹表明该抗血清能与重组蛋白NSP3发生特异性免疫反应。结论:通过质粒pETL能高效表达轮状病毒NSP3蛋白,该重组蛋白具有较好的免疫反应性。为进一步研究其结构、功能及免疫学性质奠定了基础。 展开更多
关键词 轮状病毒 NSP3 克隆 表达
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重组轮状病毒抗原表位亚单位疫苗的小鼠保护性 预览 被引量:2
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作者 刘晓 李嘉琦 +5 位作者 熊新宇 陈瑜娜 彭梅 代青 陈元鼎 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期 216-222,共7页
目的评价重组表达的轮状病毒(RV)抗原表位疫苗的小鼠体内保护效果及安全性.方法在以FlockHouse virus病毒外壳蛋白为载体的外源抗原表位呈递系统(FHV-RNA2系统)中构建和重组表达RV Vp4蛋白上第223~262位抗原表位(REABC);在原核系统[质... 目的评价重组表达的轮状病毒(RV)抗原表位疫苗的小鼠体内保护效果及安全性.方法在以FlockHouse virus病毒外壳蛋白为载体的外源抗原表位呈递系统(FHV-RNA2系统)中构建和重组表达RV Vp4蛋白上第223~262位抗原表位(REABC);在原核系统[质粒pET,大肠杆菌BL21(DE3)]中表达的REABC免疫小鼠用细胞培养适应的参照RV Wa(G1PA型)和SA11(G3P2型)经口腔灌胃攻击,对RV攻击后的免疫小鼠和对照小鼠的感染症状、排毒情况、血清抗体中和病毒感染性效价进行测定和分析.结果REABC可诱导免疫小鼠产生较强的抗-Wa和抗-SA11株血清中和抗体和特异的免疫记忆反应,有效保护免疫小鼠对Wa和SA11的攻击(不腹泻),减少病毒在体内复制水平和排毒时间,与对照组相比差异具有显著性(P<0.001).结论重组表达RV抗原表位REABC对小鼠具有较好的免疫保护效果和安全性. 展开更多
关键词 轮状病毒 重组抗原表位亚单位疫苗 免疫保护性
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抗脊髓灰质炎病毒单克隆抗体试剂盒的研制及应用 预览 被引量:3
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作者 唐恩华 庄俊英 +7 位作者 王立言 刘名英 王宪焘 谢天宏 阮永良 秦红星 郭仁 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1991年第2期66-70,共5页
本文从34株脊髓灰质炎病毒单克隆抗体中,挑选23株单克隆抗体(McAb)组成两套试剂盒:一套是具有各型毒株共同特异的单克隆抗体,偶联上异硫氰酸荧光素,用直接免疫荧光试验,对脊髓灰质炎病毒进行病原学诊断;一套是具有不同毒株特异的单克... 本文从34株脊髓灰质炎病毒单克隆抗体中,挑选23株单克隆抗体(McAb)组成两套试剂盒:一套是具有各型毒株共同特异的单克隆抗体,偶联上异硫氰酸荧光素,用直接免疫荧光试验,对脊髓灰质炎病毒进行病原学诊断;一套是具有不同毒株特异的单克隆抗体,用中和试验或间接免疫荧光试验,根据抗体在抗原上识别表位的不同及其表位分布关系,可用于脊髓灰质炎病毒毒株问的差异和抗原变异的研究,以及疫苗株与野毒株的鉴别。近年来我们收集了286株脊髓灰质炎病毒标本,用上述试剂进行了病原学的诊断及抗原性质方面的分析研究。证明了这些试剂具有高度的特异性,可快速、简便、敏感地进行病原学诊断。应用单克隆抗体试剂从抗原表位水平来分析研究毒株的性质,鉴别疫苗相关株,这是一种较为理想的选择。 展开更多
关键词 脊髓灰质炎病毒 单克隆抗体 试剂盒 免疫荧光试验 中和试验
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