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草鱼脂酰辅酶A合成酶4基因全长cDNA分子克隆及表达调控 预览
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作者 韩振 高琦 +4 位作者 许建和 申欣 丁祝进 程汉良 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期2442-2450,共9页
本试验采用反转录PCR(RT-PCR)技术克隆草鱼脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)基因全长cDNA,利用实时荧光定量PCR技术研究ACSL4基因在草鱼大脑、心脏、脾脏、肝胰脏、肌肉、肾脏、肠系膜脂肪、前肠、中肠、后肠10种组织中的表达情况,并对投喂不同... 本试验采用反转录PCR(RT-PCR)技术克隆草鱼脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)基因全长cDNA,利用实时荧光定量PCR技术研究ACSL4基因在草鱼大脑、心脏、脾脏、肝胰脏、肌肉、肾脏、肠系膜脂肪、前肠、中肠、后肠10种组织中的表达情况,并对投喂不同淀粉源饲料以及饥饿再投喂0、3、6、12和24h后草鱼肝胰脏中ACSL4基因表达情况进行研究。结果显示:草鱼ACSL4基因cDNA全长2418bp,其开放阅读框2121bp,共编码706个氨基酸;草鱼ACSL4蛋白的氨基酸序列包含1个跨膜结构域、1个脂肪酸绑定基序和1个ATP/AMP绑定基序。草鱼ACSL4mRNA在大脑和脾脏中相对表达量较高,显著高于其他组织(P<0.05),在肌肉中相对表达量最低;投喂不同淀粉源饲料对草鱼肝胰脏中ACSL4mRNA相对表达量无显著影响(P>0.05);饥饿再投喂12h后,草鱼肝胰脏中ACSL4mRNA相对表达量达到最高值,显著高于其他时间段(P<0.05),24h后恢复至最初水平。本试验从草鱼10种混合组织中克隆了ACSL4基因全长cDNA,其所编码的氨基酸序列的主要功能性位点脂肪酸绑定基序和ATP/AMP绑定基序在不同物种间高度保守;草鱼ACSL4基因主要在大脑和脾脏中表达;饲料中淀粉源对草鱼肝胰脏中ACSL4基因的表达无显著影响;在饥饿再投喂12h后,草鱼肝胰脏中ACSL4mRNA相对表达量达到最高值,随后显著下降至最初水平。 展开更多
关键词 草鱼 长链脂酰辅酶A合成酶4 分子克隆 表达调控
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优化产教融合模式 服务海洋渔业产业--地方高校涉海专业双创人才培养模式探索与实践 预览
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作者 董志国 张冬冬 +3 位作者 阎斌伦 程汉良 许建和 《中国现代教育装备》 2018年第3期82-83,共2页
为满足我国对涉海专业人才的战略需求,构建了海洋渔业创新人才的产教融合培养模式。该模式主要围绕专业链、平台链、产业链,使三链对接,链内模块化,从而使模块间达到相互深度融合。通过“三建四举”策略,深入推进产教融合,社会、... 为满足我国对涉海专业人才的战略需求,构建了海洋渔业创新人才的产教融合培养模式。该模式主要围绕专业链、平台链、产业链,使三链对接,链内模块化,从而使模块间达到相互深度融合。通过“三建四举”策略,深入推进产教融合,社会、企业、高校相互融合,培养人才从应用型到双创型转变,最终取得了理想的人才培养效果。 展开更多
关键词 产教融合 海洋渔业产业 涉海专业 双创人才 培养模式
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草鱼乙酰辅酶A羧化酶β基因全长cDNA分子克隆与表达分析 预览 被引量:2
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作者 严媛 程汉良 +4 位作者 许建和 韩振 申欣 丁祝进 《动物营养学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期1827-1836,共10页
本试验采用反转录PCR(RT-PCR)和c DNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得草鱼乙酰辅酶A羧化酶β(ACC2)基因全长c DNA,并采用实时荧光定量PCR技术研究ACC2基因在肝胰脏、脾脏、大脑、前肠、中肠、后肠、肾脏、肌肉、心脏和肠系膜脂肪... 本试验采用反转录PCR(RT-PCR)和c DNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得草鱼乙酰辅酶A羧化酶β(ACC2)基因全长c DNA,并采用实时荧光定量PCR技术研究ACC2基因在肝胰脏、脾脏、大脑、前肠、中肠、后肠、肾脏、肌肉、心脏和肠系膜脂肪等组织中的表达,同时,还对饲喂不同脂肪源饲料12周后草鱼肝胰脏和肌肉中以及饥饿再次投喂后3、6、12和24 h肝胰脏中ACC2 mRNA的表达变化进行了研究。结果显示:草鱼ACC2基因c DNA全长7 533 bp,含1个7 149 bp的开放阅读框,编码2 382个氨基酸,ACC2蛋白计算分子质量为268.34 ku,等电点为6.13。草鱼ACC2基因存在可变剪接,形成另外1个同工型(isoforms),比分子质量为268.34 ku的ACC2蛋白少8个氨基酸。ACC2基因在所有检测组织中均有表达,ACC2 mRNA的相对表达量在肌肉中最高,为29.13,在肝胰脏中最低,仅为1.90。肌肉中ACC2 mRNA的相对表达量与大脑、前肠和心脏差异不显著(P〉0.05),但显著高于其他组织(P〈0.05)。投喂不同脂肪源饲料对草鱼肝胰脏及肌肉中ACC2 mRNA相对表达量无显著影响(P〉0.05);饥饿再投喂后草鱼肝胰脏中ACC2 mRNA相对表达量在12 h达到高峰值,为6.17,之后明显下降,24 h时仅为2.84。本试验成功克隆了草鱼ACC2基因全长c DNA,其主要的功能位点ATP结合位点、生物素结合位点与其他脊椎动物相比基本保守。草鱼ACC2基因主要在肌肉等脂肪分解活跃的组织中表达,投喂不同脂肪源饲料对草鱼肝胰脏中ACC2 mRNA的相对表达量无显著影响;饥饿再投喂后,肝胰脏中ACC2 mRNA的相对表达量在投喂12 h后最高。 展开更多
关键词 草鱼 乙酰辅酶A羧化酶β 分子克隆 基因表达
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条斑紫菜Mu型谷胱甘肽S-转移酶基因克隆与分析 预览 被引量:4
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作者 郝伟 +1 位作者 李信书 阎斌伦 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期67-71,共5页
谷胱甘肽S-转移酶是动植物重要的解毒酶,分布广泛,类型众多。本研究利用生物信息学方法和RT-PCR技术获得了条斑紫菜一条新谷胱甘肽S-转移酶(PyGST2)基因的cDNA序列,该基因含有完整的开放阅读框,并且受到铅胁迫的诱导表达。PyGST2蛋白... 谷胱甘肽S-转移酶是动植物重要的解毒酶,分布广泛,类型众多。本研究利用生物信息学方法和RT-PCR技术获得了条斑紫菜一条新谷胱甘肽S-转移酶(PyGST2)基因的cDNA序列,该基因含有完整的开放阅读框,并且受到铅胁迫的诱导表达。PyGST2蛋白具有谷胱甘肽S-转移酶家族的保守结构域和保守氨基酸残基,与Mu型谷胱甘肽S-转移酶的序列一致性最高,与Alpha、Sigma和Pi型谷胱甘肽S-转移酶的次之,在进化树上远离高等植物的各型谷胱甘肽S-转移酶,而与动物的Mu型谷胱甘肽S-转移酶聚为一支。该Mu型谷胱甘肽S-转移酶的克隆为后续研究条斑紫菜抗逆机制奠定了基础。 展开更多
关键词 条斑紫菜 谷胱甘肽S-转移酶 克隆 表达
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凡纳滨对虾总RNA完整性的正确评估 预览 被引量:2
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作者 穆亮亮 仲改 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第12期2007-2013,共7页
凝胶电泳技术通常被用于总RNA完整性检测,一般认为28S和18S rRNA条带亮度的比值大于等于2表示总RNA完整性良好,该比值越小表明总RNA降解越严重。为了检测这一标准在水产虾蟹类中是否继续适用,分别对凡纳滨对虾rRNA和mRNA的完整性进行了... 凝胶电泳技术通常被用于总RNA完整性检测,一般认为28S和18S rRNA条带亮度的比值大于等于2表示总RNA完整性良好,该比值越小表明总RNA降解越严重。为了检测这一标准在水产虾蟹类中是否继续适用,分别对凡纳滨对虾rRNA和mRNA的完整性进行了分析。用TRIzol分离纯化的凡纳滨对虾总RNA经凝胶电泳检测,发现其28S∶18S rRNA的比值远小于2;但是以同样的总RNA为模板进行RT-PCR,能顺利扩增出长约1 100 bp的ACT和e EF1A基因序列。进一步的3'∶5'分析显示这2个内参基因mRNA的3'∶5'ratio分别为2.79和1.53,直接表明被测mRNA完整性良好。因此,凝胶电泳低估了水产虾蟹类总RNA的完整性,建议采用3'∶5'分析技术对水产虾蟹类总RNA完整性进行检测。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 总RNA完整性 定量PCR 3'∶5'分析 隐裂
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半滑舌鳎乙酰辅酶A羧化酶α基因全长cDNA分子克隆及饲料脂肪水平对其在肝脏中表达的影响 预览 被引量:2
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作者 张夏青 许建和 +7 位作者 潘茜 彭永兴 申欣 阎斌伦 高焕 王雯祥 程汉良 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期485-497,共13页
本试验采用反转录PCR(RT-PCR)和c DNA末端快速扩增(RACE)技术从半滑舌鳎肝脏中克隆了乙酰辅酶A羧化酶α(ACC1)基因全长c DNA,并采用实时荧光定量PCR方法对半滑舌鳎ACC1基因在肠道、肝脏、肌肉、卵巢、脾脏、全脑、肾脏、心脏、肠... 本试验采用反转录PCR(RT-PCR)和c DNA末端快速扩增(RACE)技术从半滑舌鳎肝脏中克隆了乙酰辅酶A羧化酶α(ACC1)基因全长c DNA,并采用实时荧光定量PCR方法对半滑舌鳎ACC1基因在肠道、肝脏、肌肉、卵巢、脾脏、全脑、肾脏、心脏、肠系膜脂肪等组织中的表达进行了研究;此外,还研究了饲料脂肪水平对半滑舌鳎肝脏中ACC1基因表达的影响。结果表明:1)半滑舌鳎ACC1基因c DNA全长7 811 bp,含1个7 074 bp的开放阅读框,编码2 357个氨基酸,ACC1蛋白计算分子质量为266 ku,等电点为6.42。半滑舌鳎ACC1氨基酸序列保守位点包括1个ATP结合位点(Gly^316~Gly^321)、1个生物素结合位点(Val^785)-Met^786)-Lys^787-Met^788)、1个辅酶A结合位点(Ser^1969~Val^1995)。此外,半滑舌鳎ACC1基因存在可变剪接,形成另外2个同工型(isoforms),与分子质量为266 ku的ACC1相比,分别少8和15个氨基酸。2)半滑舌鳎所有组织中均检测到ACC1基因的表达,肝脏和全脑中ACC1 mRNA相对表达量显著高于其他组织(P〈0.05),分别为2.67和2.53;肠道、肠系膜脂肪和卵巢中次之,分别为1.14、1.10和0.97;肾脏中最低,仅为0.48。3)与对照组(未添加鱼油组)相比,3.5%鱼油组肝脏中A CC1 mRNA相对表达量显著降低(P〈0.05);7.0%和10.0%鱼油组肝脏中A CC1 mRNA相对表达量进一步降低,显著低于3.5%组和对照组(P〈0.05),同时10.0%鱼油组低于7.0%鱼油组(P〉0.05)。综上,本试验克隆出了半滑舌鳎ACC1基因的全长c DNA,并得出半滑舌鳎ACC1蛋白的主要功能位点为ATP结合位点、生物素结合位点、辅酶A结合位点,与其他脊椎动物相比基本保守。半滑舌鳎ACC1基因主要在肝脏和全脑等生脂组织中表达,饲料中添加鱼油显著抑制其肝脏中ACC1基因的表达,且抑制作用与鱼油添加量呈正相关。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 乙酰辅酶A羧化酶α 分子克隆 营养调控 组织表达
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罗氏沼虾组织蛋白酶D基因的克隆及其组织表达分析 预览
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作者 张夏青 许建和 +7 位作者 潘茜 彭永兴 高焕 阎斌伦 王姗 韩振 程汉良 《淮海工学院学报》 CAS 2016年第4期71-77,共7页
采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)从罗氏沼虾肝胰腺中克隆了组织蛋白酶D基因(CATD)全长cDNA,采用实时荧光定量PCR技术对罗氏沼虾CATD在肝胰腺、眼柄、鳃、心脏、肌肉、胃等组织中的表达进行了研究.结果显示,罗氏沼虾CATDcDNA全长1 36... 采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)从罗氏沼虾肝胰腺中克隆了组织蛋白酶D基因(CATD)全长cDNA,采用实时荧光定量PCR技术对罗氏沼虾CATD在肝胰腺、眼柄、鳃、心脏、肌肉、胃等组织中的表达进行了研究.结果显示,罗氏沼虾CATDcDNA全长1 361bp,开放阅读框为1 158bp,编码385个氨基酸,CATD蛋白预测分子质量为42.1kDa,理论等电点为6.602;基于CATD氨基酸同源序列比对和系统发育分析显示,罗氏沼虾与脊尾白虾、日本囊对虾、斑节对虾和美洲螯龙虾紧密聚为一枝,相似度分别是94%,88%,87%和82%;罗氏沼虾所有组织中均检测到CATD的表达,其在眼柄中的相对表达量最高,其次是心脏. 展开更多
关键词 罗氏沼虾 组织蛋白酶D 基因克隆 组织表达
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基于线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ基因序列的帘蛤科贝类分子系统发育研究 预览 被引量:7
8
作者 程汉良 彭永兴 +5 位作者 董志国 孟学平 申欣 周旻纯 陈冬勤 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期2744-2753,共10页
对21种帘蛤科贝类线粒体细胞色素C氧化酶亚基I(cytochromeCoxidasesubunitI,C01)基因核苷酸序列进行了分析,以探讨这一序列在种质鉴定、分子系统发生研究中的应用价值。测序结果表明,所有物种扩增片段长度均为707bp(含引物),序... 对21种帘蛤科贝类线粒体细胞色素C氧化酶亚基I(cytochromeCoxidasesubunitI,C01)基因核苷酸序列进行了分析,以探讨这一序列在种质鉴定、分子系统发生研究中的应用价值。测序结果表明,所有物种扩增片段长度均为707bp(含引物),序列A+T含量(62.4%-67.8%)明显高于G+C含量。物种间共有变异位点379个,其中简约信息位点334个;此区段共编码235个氨基酸,种间共有氨基酸变异位点100个。以COI基因片段序列为标记,用中国蛤蜊(Mactrachinensis)作外群,构建了35种帘蛤科贝类(其中14种贝类C01序列从GenBank下载)的系统发生树,结合拓扑结构分析和序列比对分析,结果表明:支持将短文蛤(Meretrixpetechinalis)和丽文蛤(M.1usoria)订为文蛤(M.meretrix)的同物异名的观点,建议将丽文蛤和短文蛤订为文蛤的地理亚种;支持将薄片镜蛤(Dosiniacorrugata)和D.angulosa订为2个独立种的观点;认为将波纹巴非蛤(Paphiaundulata)和织锦巴非蛤(P.textile)订为2个独立种是合适的。C01基因序列含有丰富的遗传信息,适合作为帘蛤科贝类种群遗传结构和系统发生研究的分子标记。. 展开更多
关键词 帘蛤科 线粒体DNA 细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ 系统发生
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高盐下条斑紫菜光合特性和S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因表达的变化 预览 被引量:6
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作者 周向红 +2 位作者 徐军田 李信书 阎斌伦 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第20期6730-6735,共6页
为了研究条斑紫菜耐盐机理,对条斑紫菜叶状体进行了高盐胁迫处理,继而采用氧电极法测量了光合放氧速率和呼吸耗氧速率的变化,采用实时荧光定量PCR技术测量了s-腺苷甲硫氨酸合成酶(命名为PySAMS)基因的表达变化。结果显示藻体的光... 为了研究条斑紫菜耐盐机理,对条斑紫菜叶状体进行了高盐胁迫处理,继而采用氧电极法测量了光合放氧速率和呼吸耗氧速率的变化,采用实时荧光定量PCR技术测量了s-腺苷甲硫氨酸合成酶(命名为PySAMS)基因的表达变化。结果显示藻体的光合与呼吸作用均受到高盐度海水的显著影响,随着盐度的增加,光合放氧率逐渐降低,呼吸耗氧率也逐渐降低。高盐度海水对PySAMS基因表达量也产生了显著影响,40和50盐度的海水诱导了PySAMS表达,但60至80盐度的海水却不同程度地抑制了PySAMS表达。据此推测,在面对较高盐度胁迫时条斑紫菜叶状体将逐步降低体内新陈代谢以度过不良环境。 展开更多
关键词 条斑紫菜 盐胁迫 S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS) 基因表达 光合作用 呼吸作用
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向日葵BADH基因表达的定量PCR检测方法建立与初步应用 被引量:1
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作者 周科峰 王萍 《作物杂志》 CSCD 北大核心 2013年第5期70-74,共5页
向日葵不是盐生作物,但具有较强的耐盐和耐旱能力.甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)是植物重要的抗逆基因之一.检测BADH基因表达有助于研究向日葵对逆境胁迫的响应机制.因此本文以真核延伸因子1A(eEF1A)为内参,采用SYBRGreen I荧光染料法,... 向日葵不是盐生作物,但具有较强的耐盐和耐旱能力.甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)是植物重要的抗逆基因之一.检测BADH基因表达有助于研究向日葵对逆境胁迫的响应机制.因此本文以真核延伸因子1A(eEF1A)为内参,采用SYBRGreen I荧光染料法,建立向日葵BADH基因表达的定量PCR检测方法.BADH和eEF1A的扩增曲线基线平整、指数区明显,熔解曲线上仅显示单一特异峰,扩增效率分别为1.90和1.96,Cq值平均变异系数分别为0.51%和0.65%.这些数据表明检测方法特异性强、重复性好、结果可靠.应用建立的检测方法初步检测了盐和干旱胁迫对向日葵BADH基因表达的影响,结果显示BADH受盐和干旱胁迫的诱导表达. 展开更多
关键词 向日葵 甜菜碱醛脱氢酶 BADH基 定量PCR 盐胁迫 干旱胁迫
向日葵保守性microRNA的预测与分析
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作者 周向红 王萍 《作物杂志》 CSCD 北大核心 2012年第6期38-41,共4页
microRNA是一类非编码的小分子RNA,通过与靶mRNA的互补来抑制靶mRNA的翻译或者降解靶mRNA,从而在转录后水平对基因表达发挥调控作用。为了快速挖掘向目葵microRNA及其靶基因的相关信息,根据microRNA序列及其前体结构的保守性,在向... microRNA是一类非编码的小分子RNA,通过与靶mRNA的互补来抑制靶mRNA的翻译或者降解靶mRNA,从而在转录后水平对基因表达发挥调控作用。为了快速挖掘向目葵microRNA及其靶基因的相关信息,根据microRNA序列及其前体结构的保守性,在向日葵核酸数据库中预测并分析了向日葵microRNA及其靶基因。经过筛选最终获得了7个向日葵microRNA,其成熟microRNA的长度为18~2Int,前体长度为72~148nt,最小折叠自由能系数为0.90~1.19。获得了向日葵mi.croRNA的靶基因16条,这些靶基因参与了转录调控、营养阶段转换调控、种子萌发调控、花发育调控、信号传递以及环境刺激的响应等过程。 展开更多
关键词 向日葵 MICRORNA 生物信息学
基于16S rDNA序列的帘蛤科贝类分子系统发育研究 预览 被引量:7
12
作者 程汉良 周旻纯 +5 位作者 陈冬勤 彭永兴 董志国 孟学平 申欣 《水产科学》 CAS 北大核心 2012年第11期657-662,共6页
对21种帘蛤科贝类线粒体16SrRNA基因片段的核苷酸序列进行了分析,以探讨这一序列在种质鉴定、分子系统发育研究中的应用价值。试验结果表明,所有物种扩增片段长度504~642bp,具有明显的长度多态性,序列A+T含量59.2%~69.0%,明显高于GC... 对21种帘蛤科贝类线粒体16SrRNA基因片段的核苷酸序列进行了分析,以探讨这一序列在种质鉴定、分子系统发育研究中的应用价值。试验结果表明,所有物种扩增片段长度504~642bp,具有明显的长度多态性,序列A+T含量59.2%~69.0%,明显高于GC含量。物种间共有变异位点447个,其中简约信息位点351个。以16SrDNA片段序列为标记,以中国蛤蜊做外群,构建了帘蛤科贝类的系统发生树,拓扑结构显示,帘蛤科贝类形成3个明显类群,缀锦蛤亚科的13个种形成一个单系群,其结点自展值为93%。第二类群由雪蛤亚科、帘蛤亚科和镜蛤亚科的种类组成,结点自展值为87%。第三类群由仙女蛤亚科、青蛤亚科、楔形蛤亚科和文蛤亚科的种类组成,结点自展值为100%。结合拓扑结构分析和序列比对分析,本研究支持将短文蛤和丽文蛤订为文蛤的同物异名的观点,建议将丽文蛤和短文蛤订为文蛤的地理亚种;支持将薄片镜蛤和Dosinia angulosa订为2个独立种的观点;宜将波纹巴非蛤和织锦巴非蛤订为2个独立种。 展开更多
关键词 帘蛤科 线粒体DNA 16S RDNA 系统发育
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条斑紫菜谷胱甘肽S-转移酶基因的克隆与表达分析 预览 被引量:9
13
作者 周向红 +2 位作者 李信书 王萍 阎斌伦 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期 1354-1361,共8页
谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)是一类多功能蛋白家族,主要参与解毒和抗氧化防御过程。为了研究GST在条斑紫菜叶状体解毒过程中的作用,克隆并分析了条斑紫菜一个可溶性谷胱甘肽S-转移酶基因(命名为PyGST)的基因组... 谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)是一类多功能蛋白家族,主要参与解毒和抗氧化防御过程。为了研究GST在条斑紫菜叶状体解毒过程中的作用,克隆并分析了条斑紫菜一个可溶性谷胱甘肽S-转移酶基因(命名为PyGST)的基因组DNA序列和cDNA序列,采用实时荧光定量PCR研究了其在铅胁迫下的表达规律。PyGST包含一个长624 bp的完整开放阅读框,编码区内含有一个长248 bp的内含子。PyGST具有GST蛋白家族的保守碱基和保守结构域。PyGST与藻类GST的亲缘关系最近,与动物Sigma型GST的亲缘关系次之;在进化树上PyGST等大多数藻类GST与动物Sigma型GST聚为一簇,表明PyGST属类Sigma型GST。铅胁迫能显著诱导PyGST表达,说明在叶状体细胞内PyGST参与了重金属铅的解毒过程。 展开更多
关键词 条斑紫菜 谷胱甘肽S-转移酶 克隆 表达
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遗传学实验教学改革与创新型人才培养 预览 被引量:10
14
作者 王萍 +1 位作者 程汉良 周向红 《中国现代教育装备》 2011年第3期 93-94,共2页
针对传统遗传学实验教学的不足,改革了实验内容体系和教学方式,激发了学生的主观能动性、增强了学生的创新能力和科研能力。
关键词 遗传学实验 教学改革 创新人才
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桑椹总RNA抽提方法的比较 预览 被引量:7
15
作者 周向红 王萍 《食品科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期209-212,共4页
为对比CTAB改良法、E.Z.N.A.TM总RNA抽提试剂盒Ⅱ、EZ-10柱式总RNA抽提试剂盒和异硫氰酸胍法4种方法抽提桑椹总RNA的效果,对该4种方法抽提后的总RNA进行纯度、得率和完整性检测以及进一步的RT-PCR检测。结果显示:CTAB改良法和E.Z.N.A.T... 为对比CTAB改良法、E.Z.N.A.TM总RNA抽提试剂盒Ⅱ、EZ-10柱式总RNA抽提试剂盒和异硫氰酸胍法4种方法抽提桑椹总RNA的效果,对该4种方法抽提后的总RNA进行纯度、得率和完整性检测以及进一步的RT-PCR检测。结果显示:CTAB改良法和E.Z.N.A.TM总RNA抽提试剂盒Ⅱ均适用于桑椹总RNA抽提,获得的总RNA纯度高、得率高、完整性好,完全可用于后续的分子生物学实验;但两者相比,CTAB改良法成本更低,操作更简单。 展开更多
关键词 桑椹 总RNA 抽提 方法比较 多酚 多糖
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高温胁迫下条斑紫菜叶状体HSP70基因的表达谱分析 预览 被引量:5
16
作者 周向红 李信书 +3 位作者 王萍 阎斌伦 滕亚娟 《水产科学》 CAS 北大核心 2011年第4期 233-237,共5页
采用实时荧光定量RT-PCR技术检测了条斑紫菜叶状体在25℃高温胁迫下PyHSP70-1基因的相对表达量变化。定量分析显示PyHSP70-1基因表达受到高温胁迫的显著诱导。在持续高温胁迫下,PyHSP70-1表达量在8 h时达到最大,此后一直维持在较高水平... 采用实时荧光定量RT-PCR技术检测了条斑紫菜叶状体在25℃高温胁迫下PyHSP70-1基因的相对表达量变化。定量分析显示PyHSP70-1基因表达受到高温胁迫的显著诱导。在持续高温胁迫下,PyHSP70-1表达量在8 h时达到最大,此后一直维持在较高水平,且与对照差异显著。在短暂高温胁迫结束后PyHSP70-1表达量最大,随着恢复时间的增加,其mRNA量逐渐减少,在恢复的24 h时间内,mRNA量仍然显著高于对照。结果表明PyHSP70-1是诱导型HSP,受热激诱导表达,在热激胁迫中维持细胞蛋白与膜的稳定,对细胞具有重要的保护作用。 展开更多
关键词 条斑紫菜 HSP70 高温胁迫 表达 实时荧光定量PCR
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条斑紫菜半胱氨酸合成酶基因表达对重金属铅胁迫的响应 预览 被引量:1
17
作者 周向红 李信书 +2 位作者 阎斌伦 王萍 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第10期 111-114,共4页
为了研究条斑紫菜的重金属解毒机制,分别采用Pb2+1、4、7、10 mg/L对条斑紫菜叶状体进行短期铅胁迫,同时,用10 mg/L的Pb2+对叶状体进行持续铅胁迫,胁迫处理后提取总RNA并采用实时荧光定量PCR技术检测条斑紫菜半胱氨酸合成酶基因(PyCS... 为了研究条斑紫菜的重金属解毒机制,分别采用Pb2+1、4、7、10 mg/L对条斑紫菜叶状体进行短期铅胁迫,同时,用10 mg/L的Pb2+对叶状体进行持续铅胁迫,胁迫处理后提取总RNA并采用实时荧光定量PCR技术检测条斑紫菜半胱氨酸合成酶基因(PyCSase-B)的表达变化。结果显示,铅胁迫能迅速且显著诱导PyCSase-B的表达。短期铅胁迫试验中,随着Pb2+质量浓度的升高,PyCSase-B的表达量呈先上升而后下降的趋势,在7 mg/L Pb2+胁迫下,PyCSase-B的表达量最高,是未处理样品的2.73倍。持续铅胁迫试验中,在前6 h内随着处理时间的增加,PyCSase-B的表达逐步上升,在6 h时PyCSase-B的表达量最高,是未处理样品的3.71倍;在8~12 h内PyCSase-B的表达量一直在较高水平波动。铅胁迫诱导PyCSase-B表达,说明PyCSase-B参与了条斑紫菜叶状体的重金属解毒过程。 展开更多
关键词 条斑紫菜 半胱氨酸合成酶 基因表达 铅胁迫
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大型海藻DNA与RNA同步抽提技术比较 预览 被引量:1
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作者 李信书 阎斌伦 《水产科学》 CAS 北大核心 2011年第11期 693-697,共5页
海藻含有的多糖、多酚等物质容易与核酸(DNA与RNA)结合形成不溶于水的复合物,干扰了后续的酶反应,制约了海藻核酸抽提。但抽提高质量核酸却是海藻分子生物学研究的第一步,因此比较了2种同步抽提技术对大型海藻DNA与RNA同步抽提的效果... 海藻含有的多糖、多酚等物质容易与核酸(DNA与RNA)结合形成不溶于水的复合物,干扰了后续的酶反应,制约了海藻核酸抽提。但抽提高质量核酸却是海藻分子生物学研究的第一步,因此比较了2种同步抽提技术对大型海藻DNA与RNA同步抽提的效果。应用TRIZOL法和CTAB+LiCl法同步抽提了3种海藻的DNA与RNA,接着应用紫外吸收、电泳、PCR、RT-PCR和荧光定量RT-PCR等检测核酸质量。结果显示2种方法均能获得较高纯度的总RNA,总RNA质量完全适合后续的反转录等反应;但在DNA抽提方面CTAB+LiCl法能获得更高质量的DNA。CTAB+LiCl法是一项适用于大型海藻的DNA与RNA同步抽提技术。 展开更多
关键词 CTAB TRIZOL RNA DNA 同步抽提 海藻
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孔雀鱼HSC70基因的电子克隆与序列分析 预览
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作者 周向红 彭永兴 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2011年第6期 3-8,共6页
为了研究热激同源蛋白70(70 kDa heat shock cognate,HSC70)在孔雀鱼(Poecilia reticulata Peters)对环境适应中的作用,采用电子克隆与传统实验克隆相结合的技术,分析了孔雀鱼的一个HSC70基因(命名为PrHSC70)。PrHSC70基因包含一... 为了研究热激同源蛋白70(70 kDa heat shock cognate,HSC70)在孔雀鱼(Poecilia reticulata Peters)对环境适应中的作用,采用电子克隆与传统实验克隆相结合的技术,分析了孔雀鱼的一个HSC70基因(命名为PrHSC70)。PrHSC70基因包含一个长1941 bp的完整编码区,含有8个内含子。PrHSC70蛋白具有HSP70蛋白家族的特征序列,且与其他动物HSC70和HSP70都高度相似。在进化树上PrHSC70与所有鱼类HSC70聚为一簇,与它们的氨基酸序列一致性为93.2%~98.9%。 展开更多
关键词 孔雀鱼(Poecilia RETICULATA Peters) HSC70 电子克隆 生物信息学
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条斑紫菜HSP90基因实时荧光定量PCR检测方法的构建 预览 被引量:1
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作者 周向红 阎斌伦 +1 位作者 王萍 《淮海工学院学报》 CAS 2010年第2期 81-84,共4页
以管家基因18S rRNA为内参,采用SYBR GreenI荧光染料法,构建了条斑紫菜HSP90基因实时荧光定量PCR的检测方法,为条斑紫菜HSP90和18S rRNA基因筛选出定量引物各1对,获得的扩增曲线基线平整、指数区明显、斜率大且固定。两基因的熔解曲线... 以管家基因18S rRNA为内参,采用SYBR GreenI荧光染料法,构建了条斑紫菜HSP90基因实时荧光定量PCR的检测方法,为条斑紫菜HSP90和18S rRNA基因筛选出定量引物各1对,获得的扩增曲线基线平整、指数区明显、斜率大且固定。两基因的熔解曲线显示单特异峰,Tm分别为88.5和85℃。两基因标准曲线的斜率分别为-3.307和-3.308,扩增效率都约为100.6%,Ct值在13~32范围内有良好的线性关系。构建的实时荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强,准确可靠、重复性好,检测周期短,为进一步研究HSP90基因在胁迫下的表达差异奠定了基础。 展开更多
关键词 条斑紫菜 HSP90基因 18S RRNA基因 实时荧光定量PCR SYBR GreenI
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