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ACT001通过STAT3信号通路抑制U87-MG胶质瘤干细胞的成球能力及干性维持的实验研究
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作者 李佳 童鹿青 +4 位作者 易立 刘沛东 解杨 王旭亚 杨学军 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2019年第11期1160-1166,共7页
目的探讨倍半萜烯内酯类衍生物(ACT001)对U87-MG胶质瘤干细胞(GSCs)的成球能力及干性维持的影响。方法应用生物信息学分析CGGA、TCGA和GEO(GSE4290、GSE16011)数据库中1477例脑胶质瘤患者的信号转导和转录激活因子3(STAT3)mRNA与胶质瘤... 目的探讨倍半萜烯内酯类衍生物(ACT001)对U87-MG胶质瘤干细胞(GSCs)的成球能力及干性维持的影响。方法应用生物信息学分析CGGA、TCGA和GEO(GSE4290、GSE16011)数据库中1477例脑胶质瘤患者的信号转导和转录激活因子3(STAT3)mRNA与胶质瘤病理学级别及患者总生存期之间的关系。免疫磁珠法分选获得U87-MG细胞株CD133阳性的GSCs。CCK-8细胞增殖-毒性检测ACT001对U87-MG GSCs增殖活性的影响。通过单细胞成球实验观察不同浓度的ACT001对U87-MG GSCs成球能力的影响。免疫荧光染色检测ACT001对U87-MG GSCs干性标志物CD133、CD44及Nestin表达的影响。蛋白质印迹法(Western blot)检测ACT001处理后STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、CD133及CD44等蛋白的表达。结果生物信息学分析结果显示,随着脑胶质瘤级别的升高,STAT3 mRNA的表达量也逐渐升高(均P<0.05);而且STAT3高表达水平组的患者预后较差(均P<0.01);STAT3在神经球培养及干性细胞株的mRNA表达量较高(P<0.05)。CCK-8细胞增殖-毒性检测结果提示,随着ACT001浓度的增高,U87-MG GSCs的抑制率逐渐升高。单细胞成球实验结果显示,随着ACT001药物浓度的升高,各组的成球数目及细胞球体积逐渐降低(P<0.01)。免疫荧光染色结果显示,加药组的GSCs细胞球干性标志物CD133、CD44及Nestin的表达降低。蛋白质印迹法检测结果显示,随着ACT001药物浓度的升高,干性标志物CD133、CD44的蛋白表达量逐渐减低(均P<0.01);且STAT3的蛋白表达量的差异均无统计学意义(均P>0.05),而p-STAT3的蛋白表达量均呈降低趋势(均P<0.01)。结论ACT001通过抑制STAT3信号通路,从而抑制了U87-MG GSCs的成球能力并且降低了其干性维持能力。 展开更多
关键词 神经胶质瘤 肿瘤干细胞 倍半萜烯内酯类衍生物 STAT3信号通路
miR-32通过抑制靶基因KLF4促进胶质瘤增殖和侵袭
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作者 张亮 刘沛东 +7 位作者 解杨 童鹿青 易立 李佳 张锦浩 张一鸣 王旭亚 杨学军 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2019年第11期1167-1173,共7页
目的探讨miR-32通过靶向调控KLF4影响胶质瘤细胞增殖和侵袭的分子机制。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测miR-32在胶质细胞株(HA)和胶质瘤细胞株(U87、U373MG、U251)中的表达情况;进一步通过细胞增殖(MTT)、细胞侵袭及划痕实... 目的探讨miR-32通过靶向调控KLF4影响胶质瘤细胞增殖和侵袭的分子机制。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测miR-32在胶质细胞株(HA)和胶质瘤细胞株(U87、U373MG、U251)中的表达情况;进一步通过细胞增殖(MTT)、细胞侵袭及划痕实验判断miR-32对U87胶质瘤细胞株的影响。之后,利用Target Scan Human 7.1在线检测系统找到miR-32的靶基因,并利用双荧光素酶报告实验进一步验证。验证成功后采用RT-qPCR和蛋白质免疫印迹实验判断miR-32对靶基因KLF4 mRNA的调控,并采用MTT、细胞侵袭及划痕实验进一步判断靶基因KLF4对胶质瘤细胞株的影响。最后利用拯救实验判断miR-32如何调控靶基因KLF4进而影响胶质瘤的增殖和侵袭能力。结果RT-qPCR结果显示,U87、U373MG及U251细胞株中miR-32的表达水平均显著高于HA细胞株(均P<0.01)。与转染miRNA-NC比较,转染miR-32 mimic的U87细胞株中miR-32的表达水平、增殖、侵袭及迁移能力均显著上调(均P<0.05),而转染miR-32 inhibitor的表达水平、增殖、侵袭、迁移能力均显著下调(均P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶报告结果显示KLF4为miR-32的靶基因,miR-32过表达,细胞荧光素酶活性显著下降,KLF4表达下调;miR-32表达沉默,细胞荧光素酶活性显著上升,KLF4表达上调。U87、U373MG及U251细胞株中KLF4的表达明显低于HA细胞株(均P<0.01)。KLF4高表达时抑制胶质瘤细胞株的增殖、侵袭及迁移。拯救实验显示,KLF4表达沉默可逆转miR-32表达沉默胶质瘤细胞增殖和侵袭能力的下调;KLF4过表达时可逆转miR-32过表达对胶质瘤细胞增殖和侵袭的促进作用。结论miR-32通过抑制靶基因KLF4的表达促进胶质瘤细胞的增殖和侵袭。 展开更多
关键词 神经胶质瘤 细胞增殖 肿瘤浸润 miR-32 KLF4
miR-325通过调控TFRC抑制胶质瘤细胞恶性生物学特征的实验研究
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作者 张亮 刘沛东 +7 位作者 解杨 易立 童鹿青 李佳 张锦浩 张一鸣 王旭亚 杨学军 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期885-895,共11页
目的研究miR-325通过调控转铁蛋白受体(TFRC)基因在胶质瘤细胞中的表达对胶质瘤细胞进程的影响和分子机理。方法(1)收集天津医科大学总医院神经外科自2015年1月至2018年1月手术切除并经病理证实的脑胶质瘤标本35例,以患者癌旁正常组织... 目的研究miR-325通过调控转铁蛋白受体(TFRC)基因在胶质瘤细胞中的表达对胶质瘤细胞进程的影响和分子机理。方法(1)收集天津医科大学总医院神经外科自2015年1月至2018年1月手术切除并经病理证实的脑胶质瘤标本35例,以患者癌旁正常组织作为对照。反转录-定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测肿瘤组织和癌旁组织miR-325、TFRC mRNA的表达,比较不同临床特征患者肿瘤组织miR-325的表达及miR-325低表达、高表达患者的生存曲线。(2)RT-qPCR检测体外培养的HA、U251和U87细胞miR-325的表达;荧光素酶活性实验检测U251和U87细胞miR-325与靶基因TFRC的调控关系;将U251、U87细胞分为miR-325模拟物组、无义序列组,分别转染miR-325模拟物和无义序列,48 h后分别应用RT-qPCR、Western blotting检测细胞TFRC mRNA和蛋白的表达;将U251、U87细胞分为对照小干扰RNA(siRNA)+无义抑制物组、TFRC干扰RNA(siTFRC)+无义抑制物组、siTFRC+miR-325抑制物组,分别转染对应物质后48 h应用Western blotting检测细胞TFRC蛋白的表达。CCK-8实验检测细胞的增殖,Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力;将U251、U87细胞分为pcDNA3.1空载体+无义序列组、TFRC pcDNA3.1+无义序列组、TFRC pcDNA3.1+miR-325模拟物组,分别转染对应物质后48 h应用Western blotting检测细胞TFRC蛋白的表达,CCK-8实验检测细胞的增殖,Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力。结果(1)与癌旁组织比较,患者肿瘤组织miR-325的表达下降,TFRC mRNA的表达上升,差异均有统计学意义(P<0.05);肿瘤组织TFRC mRNA、miR-325的表达呈负相关关系(r=-0.363,P=0.001)。与Karnofsky功能状态评分≥80分患者比较,<80分患者肿瘤组织miR-325的表达降低;与WHO分级Ⅰ~Ⅱ级胶质瘤比较,Ⅲ~Ⅳ级胶质瘤组织miR-325的表达降低;差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-325低表达患者的生存率低于miR-325高表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与HA细胞比� 展开更多
关键词 miR-325 转铁蛋白受体 神经胶质瘤 U87细胞 U251细胞
酸性肿瘤微环境对胶质瘤细胞侵袭迁移能力的影响及其机制研究
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作者 解杨 童鹿青 +6 位作者 易立 刘沛东 李佳 张亮 王旭亚 白宇 杨学军 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期217-224,共8页
目的探讨酸性肿瘤微环境对胶质瘤细胞侵袭迁移能力的影响及其机制。方法(1)采用酸碱滴定法调节培养基pH值,分别用pH值为6.4、7.4的培养基(酸性组、正常组)培养人胶质瘤细胞U87、U251,培养3d后采用Westernblotting检测细胞缺氧诱导因子-2... 目的探讨酸性肿瘤微环境对胶质瘤细胞侵袭迁移能力的影响及其机制。方法(1)采用酸碱滴定法调节培养基pH值,分别用pH值为6.4、7.4的培养基(酸性组、正常组)培养人胶质瘤细胞U87、U251,培养3d后采用Westernblotting检测细胞缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)、CD44蛋白的表达。采用Transwell实验检测细胞的迁移、侵袭能力,采用免疫荧光染色检测细胞CD44的表达。(2)分别取U87、U251细胞,分为小干扰RNA(siRNA)无义序列组、siRNA-CD44-1组,分别经Lipofectin-3000介导转染siRNA无义序列、siRNA-CD44-1干扰片段,转染后3d采用Transwell实验检测2组细胞的迁移、侵袭能力。(3)取U87、U251细胞,分为酸性组(用pH值为6.4的培养基培养)、空白对照组、siRNA无义序列组、siRNA-CD44-1组、siRNA-CD44-2组,后4组细胞均用pH值为7.4的培养基培养。培养4d后,siRNA无义序列组、siRNA-CD44-1组、siRNA-CD44-2组细胞分别转染siRNA无义序列、siRNA-CD44-1干扰片段、siRNA-CD44-2干扰片段。转染后3d采用Westernblotting检测5组细胞CD44、N型钙黏素(N-Ca)、波形蛋白及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白的表达。结果(1)Westernblotting检测显示:与正常组比较,酸性组U87、U251细胞HIF-2α、CD44蛋白的表达量明显增高。Transwell迁移和侵袭实验均显示酸性组穿膜细胞数明显多于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光染色显示,酸性组细胞CD44的表达明显多于正常组。(2)Transwell迁移和侵袭实验均显示siRNA-CD44-1组穿膜细胞数明显少于siRNA无义序列组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)Westernblotting检测显示:与酸性组比较,空白对照组、siRNA无义序列组、siRNA-CD44-1组、siRNA-CD44-2组U87、U251细胞CD44、N-Ca、波形蛋白、MMP-2的表达量降低。与siRNA无义序列组相比,siRNA-CD44-1组、siRNA-CD44-2组U87、U251细胞CD44、N-Ca、波形蛋白、MMP-2蛋白的表达量明显降低。结论酸性肿瘤微环境可通过提� 展开更多
关键词 神经胶质瘤 酸性肿瘤微环境 CD44 细胞侵袭 细胞迁移
第三届中国脑胶质瘤学术大会会议纪要 预览
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作者 李佳 王旭亚 +3 位作者 张亮 解杨 易立 杨学军 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 北大核心 2019年第5期377-380,共4页
2019年3月14-16日,由中国医师协会、中国医师协会脑胶质瘤专业委员会主办,中国抗癌协会脑胶质瘤专业委员会、首都医科大学附属北京天坛医院、首都医科大学脑胶质瘤临床诊疗与研究中心、北京市神经外科研究所、美国癌症研究基金会共同协... 2019年3月14-16日,由中国医师协会、中国医师协会脑胶质瘤专业委员会主办,中国抗癌协会脑胶质瘤专业委员会、首都医科大学附属北京天坛医院、首都医科大学脑胶质瘤临床诊疗与研究中心、北京市神经外科研究所、美国癌症研究基金会共同协办,空军军医大学唐都医院承办的第三届中国脑胶质瘤学术大会暨中国医师协会脑胶质瘤专业委员会第三届年会在陕西省西安市成功举办。会议特别邀请了美国哈佛医学院神经科学中心Patrick Y.Wen教授和美国德州大学MD安德森癌症中心W.K.Alfred Yung教授等30余位国外神经肿瘤领域著名专家,以及中国工程院院士郝希山教授、陈志南教授和中国科学院院士赵继宗教授等国内享有盛誉的肿瘤或神经肿瘤领域专家,同时还吸引了1100余位国内神经肿瘤相关专业临床医师和学者。 展开更多
关键词 神经胶质瘤 药物疗法 放射疗法 免疫疗法
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索菲布韦的合成研究进展 预览
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作者 李冰 郝小燕 李佳 《生物化工》 2018年第3期130-132,共3页
索菲布韦是一种HCV特异性NS5B聚合酶的核苷抑制剂,针对特定基因型丙肝治疗,脱离对干扰素的依赖,属于新型抗丙型肝炎病毒药。本文综述了索菲布韦以及关键中间体的几种合成路线,并对各路线进行了初步评价,发现以尿苷为起始原料,经醚化、... 索菲布韦是一种HCV特异性NS5B聚合酶的核苷抑制剂,针对特定基因型丙肝治疗,脱离对干扰素的依赖,属于新型抗丙型肝炎病毒药。本文综述了索菲布韦以及关键中间体的几种合成路线,并对各路线进行了初步评价,发现以尿苷为起始原料,经醚化、氧化、羰基加成和水解等反应合成索菲布韦的合成路线最有工业前景和研究价值。 展开更多
关键词 索菲布韦 丙型肝炎病毒 合成
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基于高阶接触啮合理论的新型人字齿同步带传动设计 被引量:8
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作者 姜洪源 郭建华 +2 位作者 胡清明 李佳 吴贻珍 《机械传动》 CSCD 北大核心 2013年第8期17-20,共4页
人字齿同步带因具有降噪、传动误差小、承载性能高等优异性能,在带传动领域备受关注。本文基于等共轭曲率高阶接触啮合理论,对具有高阶接触曲面特性的同步带与带轮齿廓进行研究,提出邻域间隙具有2阶无穷小的同步带与带轮齿廓的主要参数... 人字齿同步带因具有降噪、传动误差小、承载性能高等优异性能,在带传动领域备受关注。本文基于等共轭曲率高阶接触啮合理论,对具有高阶接触曲面特性的同步带与带轮齿廓进行研究,提出邻域间隙具有2阶无穷小的同步带与带轮齿廓的主要参数,并建立齿廓三维模型,为新型人字齿同步带制造、传动性能研究奠定基础。 展开更多
关键词 高阶接触啮合 人字齿同步带传动 同步带齿廓 啮合传动 齿廓三维建模
心怀感恩,促教育成长 预览
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作者 李佳 《读写算(教师版):素质教育论坛》 2017年第43期51-51,共1页
自从读书会开通之后,拜读各位教师感悟之时,唏嘘自己资历尚浅,今日轮及本人发表感触,不禁略有战兢之感,本想拿某日所写班级管理反思用以过关,也不至于过于露怯,后说服自己,还需流露真情实感,记录此刻心境,鉴于此,此文遂成。
关键词 班级管理 教育成长 因材施教
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