人源抗C3d单链抗体的筛选与鉴定 认领

1

作者 赵信平 杜昕颖 +9 位作者 徐银凤 韩冬 赵江云 郭卫光 谢靖 李环 董灏 刘肖 杜鹏 贾雷立 《国际药学研究杂志》 CAS 北大核心 2020年第9期750-755,共6页

目的从噬菌体展示单链抗体库中筛选获得人源抗人C3d单链抗体,并评价其结合活性。方法以人C3d重组蛋白包被免疫管,对噬菌体展示单链抗体库进行固相筛选;C3d包被量逐轮降低,洗涤强度逐轮增强。采用ELISA对筛选产出进行鉴定,选择阳性克隆,... 目的从噬菌体展示单链抗体库中筛选获得人源抗人C3d单链抗体,并评价其结合活性。方法以人C3d重组蛋白包被免疫管,对噬菌体展示单链抗体库进行固相筛选;C3d包被量逐轮降低,洗涤强度逐轮增强。采用ELISA对筛选产出进行鉴定,选择阳性克隆,测序确定阳性单链抗体基因。分子克隆构建单链抗体的真核表达载体,转染HEK293-F细胞进行真核表达,镍柱亲和纯化获得单链抗体。采用生物膜干涉技术(BLI)检测单链抗体与重组人C3d的结合活性。结果经3轮筛选获得3个特异性结合C3d的噬菌体单链抗体(A1、A3和B6),重组表达获得高纯度的单链抗体蛋白,与C3d重组蛋白结合活性为22.7~171 pmol/L。结论获得了全新的高亲和力人源抗人C3d单链抗体。 展开更多

关键词 噬菌体展示抗体库 单链抗体 C3D 亲和力

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2012-2018年北京市抗结核药物使用趋势分析 认领

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作者 孔雨薇 王立贵 +4 位作者 杜昕颖 宋宏彬 林叶青 赵康涛 郑溪水 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1228-1233,共6页

目的分析北京市2012-2018年抗结核药物的使用情况与变化趋势,为北京市进一步规范及修改结核药物的使用策略提供数据参考。方法对2012-2018年北京市46家医院J04A类抗结核药物的销售金额、用药频度(Defined daily doses,DDDs)、药品限定... 目的分析北京市2012-2018年抗结核药物的使用情况与变化趋势,为北京市进一步规范及修改结核药物的使用策略提供数据参考。方法对2012-2018年北京市46家医院J04A类抗结核药物的销售金额、用药频度(Defined daily doses,DDDs)、药品限定日费用(Defined daily cost,DDC)等指标进行统计分析与评价。采用SPSS 22.0线性回归分析,判断变化趋势。结果 2012-2018年抗结核药销售金额逐年上升,而销售量在2016年到达高峰后缓慢下降;2012年和2018年相比抗结核的药物种类构成变动不大,各类药物销售金额构成变化较大;抗结核药物以一线、口服为主,二线、注射为辅,且二线用药的销售金额、DDDs和注射用药的销售金额有上升的趋势(P均<0.05);抗生素销售单价以注射类经济负担最重,且2018年较2012年,大部分种类药物都有不同程度的价格增长。结论抗结核药物的DDDs在2012-2018年间保持平稳,但大部分种类抗结核药物的DDC均出现上升趋势,患者经济负担增大,且抗结核药物使用存在用药集中的现象,带来的耐药风险不容忽视。 展开更多

关键词 抗结核病药物 医院 趋势分析

沙门菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 认领 被引量：1

3

作者 田赛 郭卫光 +8 位作者 包仁龙 向莹 张浩然 杨超杰 谢靖 刘鸿博 宋宏彬 邱少富 杜昕颖 《生物技术通讯》 CAS 2019年第6期805-809,816共6页

目的:建立一种可快速检测沙门菌的实时荧光定量PCR方法,对粪便、海鲜等样本中的沙门菌进行检测。方法:根据沙门菌ompF基因的特异性序列设计引物和TaqMan探针,建立检测沙门菌的实时荧光定量PCR快速检测方法,对方法的特异性、敏感性和稳... 目的:建立一种可快速检测沙门菌的实时荧光定量PCR方法,对粪便、海鲜等样本中的沙门菌进行检测。方法:根据沙门菌ompF基因的特异性序列设计引物和TaqMan探针,建立检测沙门菌的实时荧光定量PCR快速检测方法,对方法的特异性、敏感性和稳定性进行评价,并对临床样本中的沙门菌进行检测。结果:该检测方法可扩增不同型别沙门菌的基因组DNA,对其他10种不含沙门菌的肠道病原菌基因组DNA均不扩增,具有很好的特异性;对构建的阳性质粒模板检测灵敏度可达0.1 ng/L,对菌株样本基因组DNA检测灵敏度为10 CFU/mL,可快速准确地检出临床样本中分离的沙门菌阳性菌株,且与商业化沙门菌检测试剂盒的阳性检出率相同;该方法的重复性也很高,5次重复实验Ct值的变异系数低于0.8%。结论:建立的沙门菌TaqMan实时荧光定量PCR法具有简单快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,可应用于临床沙门菌核酸检测。 展开更多

关键词 沙门菌 荧光定量PCR TAQMAN探针

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16S扩增子技术研究海鲜样本菌群结构组成 认领 被引量：1

4

作者 李沛翰 林彦锋 +5 位作者 王凯英 杜昕颖 邱少富 王升启 李鹏 宋宏彬 《军事医学》 CAS 北大核心 2019年第4期282-287,共6页

目的使用高通量测序方法探究海鲜样本菌群组成,为基于宏基因组方法的食品潜在致病风险分析和病原体监测提供参考。方法对来自北戴河某海鲜市场的8种海鲜样本进行16S扩增子测序,使用生物信息学方法对物种组成和微生物多样性进行分析。结... 目的使用高通量测序方法探究海鲜样本菌群组成,为基于宏基因组方法的食品潜在致病风险分析和病原体监测提供参考。方法对来自北戴河某海鲜市场的8种海鲜样本进行16S扩增子测序,使用生物信息学方法对物种组成和微生物多样性进行分析。结果北戴河不同类型海鲜样品菌群结构均以变形菌门(Proteobacteria)、浮霉菌门(Planctomycetes)、柔膜菌门(Tenericutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、梭杆菌门(Fusobacteria)、蓝藻(Cyanobacteria)、疣微菌门(Verrucomicrobia)、放线菌门(Actinobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes)为主,变形菌门的流行说明具有腐败风险。样本间优势菌群存在差异,属水平栖热菌属和假单胞菌属的存在提示有致病的可能性。同源性序列比对检测到副溶血弧菌并使用PCR验证到2例副溶血弧菌阳性。结论该研究分析4种不同类型海鲜样本的优势菌群及可能的致病风险,并检测到致病病原副溶血弧菌,可为防控北戴河地区食源性疾病暴发提供决策依据。 展开更多

关键词 16S扩增子测序 海鲜样本 菌群组成

纳米孔测序技术在1例呼吸道感染患者病原检测中的应用 认领

5

作者 林彦锋 李逢将 +8 位作者 李中浤 刘慧莹 苑鑫 牛文凯 柏长青 杜昕颖 李鹏 刘雪林 宋宏彬 《军事医学》 CAS 北大核心 2019年第8期608-611,636共5页

目的探索快速识别呼吸道感染患者致病病原的方法,为临床早期诊断与治疗提供支持。方法基于纳米孔掌上测序仪MinION对1例患者肺泡灌洗液进行实时测序,用BGI测序平台对样本开展宏基因组测序,并对样本进行病原菌分离培养实验。结果基于纳... 目的探索快速识别呼吸道感染患者致病病原的方法,为临床早期诊断与治疗提供支持。方法基于纳米孔掌上测序仪MinION对1例患者肺泡灌洗液进行实时测序,用BGI测序平台对样本开展宏基因组测序,并对样本进行病原菌分离培养实验。结果基于纳米孔测序技术的宏基因组测序在55 min内即检测到铜绿假单胞菌特异序列,后续的二代测序及分离培养实验进一步证实了致病病原为铜绿假单胞菌。结论在该例病原检测中,纳米孔测序技术将检测周期缩短至12 h左右,与其他方法相比具有更短的检测周期,有望成为临床感染病原实时检测的重要辅助手段。 展开更多

关键词 纳米孔测序技术 宏基因组测序 铜绿假单胞菌 病原检测 呼吸道感染

一株mcr-1阳性多重耐药宋内志贺菌的鉴定和药物敏感性特征分析 认领

6

作者 董念 向莹 +5 位作者 胡晓丰 田赛 杜昕颖 邱少富 宋宏彬 孙岩松 《疾病监测》 CAS 2019年第4期359-364,共6页

目的对分离的1株mcr-1阳性多重耐药宋内志贺菌进行鉴定和耐药性分析。方法采用生化和血清凝集试验进行病原体鉴定;使用微量肉汤稀释法进行药敏试验,并用聚合酶链式反应方法检测耐药基因的存在情况;利用脉冲场凝胶电泳方法对菌株进行遗... 目的对分离的1株mcr-1阳性多重耐药宋内志贺菌进行鉴定和耐药性分析。方法采用生化和血清凝集试验进行病原体鉴定;使用微量肉汤稀释法进行药敏试验,并用聚合酶链式反应方法检测耐药基因的存在情况;利用脉冲场凝胶电泳方法对菌株进行遗传多态性和质粒图谱分析并进行Southern杂交试验;用质粒接合转移试验验证mcr-1基因的水平转移能力。结果在广西壮族自治区分离出1株mcr-1阳性的多重耐药宋内志贺菌,对萘啶酸、阿奇霉素、多粘菌素有较高耐药性。mcr-1基因、mph(A)和blaCTX-M-14基因分别在两个不同的质粒上,且mcr-1基因能通过质粒介导水平转移。结论加强志贺菌尤其是宋内志贺菌对头孢曲松和阿奇霉素共同耐药的监测及mcr-1传播的分子流行病学研究,为合理使用抗生素治疗细菌性痢疾提供依据。 展开更多

关键词 mcr-1 宋内志贺菌 多重耐药 mph(A) blaCTX-M-14

基于RNA-Seq的羊种布鲁氏菌新转录本与非编码RNA鉴定 认领 被引量：5

7

作者 郭英飞 王玉飞 +7 位作者 龚春丽 杨明娟 袁久云 庄妤冰 柯跃华 杜昕颖 汪舟佳 陈泽良 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期216-221,共6页

目的对羊种布鲁氏菌的转录本进行测序,鉴定基因组中新的转录本和非编码RNA。方法提取羊布鲁氏菌的总RNA,去除rRNA后连接接头逆转录成cDNA,PCR扩增后进行测序,以羊布鲁氏菌16M的基因组序列为参照对测序得到的reads进行比对作图,通过生物... 目的对羊种布鲁氏菌的转录本进行测序,鉴定基因组中新的转录本和非编码RNA。方法提取羊布鲁氏菌的总RNA,去除rRNA后连接接头逆转录成cDNA,PCR扩增后进行测序,以羊布鲁氏菌16M的基因组序列为参照对测序得到的reads进行比对作图,通过生物信息学方法进行新转录本和非编码RNA的鉴定。结果测序数据分析显示,reads在基因组上覆盖度较好。与现有注释基因相比,有773个基因的5′或3′端在基因组的原有位置基础上发生了延伸,并发现了16个新的转录本。根据测序结果,共鉴定出241条候选的非编码RNA（sRNA）,进一步的RT-PCR验证结果显示,预测的sRNA在体外条件下有表达。结论布鲁氏菌基因组中存在除了预测以外的新的转录本,布鲁氏菌中存在非编码RNA且在不同条件下有差异表达。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 RNA-SEQ 转录组 SRNA

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嗜肺军团菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 认领 被引量：3

8

作者 杜昕颖 苏晓 +7 位作者 王玉飞 龚春丽 庄妤冰 苑锡铜 陈泽良 袁静 宋宏彬 黄留玉 《生物技术通讯》 CAS 2013年第6期843-846,共4页

目的：建立针对嗜肺军团菌Mip基因的实时荧光定量TaqMan PCR检测方法，并进行自来水和空调冷却水模拟标本的检测评价。方法：根据嗜肺军团菌Mip基因的特异性序列设计引物和TaqMan探针，建立嗜肺军团菌的实时荧光定量TaqMan PCR快速检测... 目的：建立针对嗜肺军团菌Mip基因的实时荧光定量TaqMan PCR检测方法，并进行自来水和空调冷却水模拟标本的检测评价。方法：根据嗜肺军团菌Mip基因的特异性序列设计引物和TaqMan探针，建立嗜肺军团菌的实时荧光定量TaqMan PCR快速检测方法，对方法进行灵敏度及特异性评价，并对自来水和空调冷却水模拟标本中的嗜肺军团菌进行检测。结果：建立的方法对嗜肺军团菌的检测具有高度特异性，与3种非嗜肺军团菌和6种其他呼吸道病原均没有交叉反应；基因组DNA的检测灵敏度为1.6pg／μL，模拟自来水和空调冷却水标本的检测灵敏度为10CFU／mL。结论：建立的TaqMan荧光定量PCR方法特异、灵敏、快速，适于嗜肺军团菌的日常监测和暴发疫情的应急诊断。 展开更多

关键词 嗜肺军团菌 荧光定量PCR TAQMAN探针 MIP基因

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利用自杀载体构建布鲁氏菌hfq表位标记菌株 认领 被引量：1

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作者 崔明全 徐杰 +12 位作者 张婷婷 王同坤 尚伟 陈泽良 袁静 杜昕颖 汪舟佳 柯跃华 钟志军 苑锡铜 黄留玉 彭广能 王玉飞 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期75-80,共6页

目的：建立一种利用自杀载体构建布鲁氏菌hfq表位标记菌株的方法。方法：在hfq的反向引物带上FLAG或HIS标签序列，以布鲁氏菌Brucellamelitensis16M为模板扩增出3’端带有标签的hfq标记盒。将其直接与布鲁氏菌的自杀载体pMDl8．Tvector... 目的：建立一种利用自杀载体构建布鲁氏菌hfq表位标记菌株的方法。方法：在hfq的反向引物带上FLAG或HIS标签序列，以布鲁氏菌Brucellamelitensis16M为模板扩增出3’端带有标签的hfq标记盒。将其直接与布鲁氏菌的自杀载体pMDl8．Tvector连接，获得带有标签的标记载体，将载体转入布鲁氏菌感受态细胞并筛选抗性克隆，进而获得表位标签与目的基因c末端融合的重组子。利用RT—PCR和Westernblot分析c末端融合了表位标签的目的蛋白的转录和表达的情况。结果：获得了布鲁氏菌的表位标记菌株16M．T．HfqFLA。和16M．T．HfqRT．PCR实验结果表明带有标签的hfq基因可以转录，Westernblot实验结果证实利用针对FLAG或HIs标签的抗体能够检测到Hfq蛋白的表达。结论：利用自杀载体可以快速构建布鲁氏菌的表位标记菌株，这不仅为Hfq的功能研究奠定了基础，也为布鲁氏菌的基因功能研究提供了一个有价值的研究手段。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 自杀载体 表位标记 HFQ

布鲁氏菌减毒活疫苗株的比较基因组学研究 认领 被引量：3

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作者 钟志军 徐杰 +11 位作者 于爽 王玉飞 周冬生 乔凤 曲勍 汪舟佳 杜昕颖 陈燕芬 黄克和 马晓平 陈泽良 彭广能 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期 555-560,共6页

目的探究布鲁氏菌减毒活疫苗株与亲本株的分子遗传差异。方法通过布鲁氏菌全基因组DNA芯片对4株减毒活疫苗株进行比较基因组学研究。结果通过比较基因组学研究,发现疫苗菌株中存在大片段基因缺失,同时发现一些基因以多拷贝形式存在。4... 目的探究布鲁氏菌减毒活疫苗株与亲本株的分子遗传差异。方法通过布鲁氏菌全基因组DNA芯片对4株减毒活疫苗株进行比较基因组学研究。结果通过比较基因组学研究,发现疫苗菌株中存在大片段基因缺失,同时发现一些基因以多拷贝形式存在。4株减毒活疫苗株分别缺失不同数目的功能基因,主要为胞内活动有关基因和功能未知基因（分别为31和45个）。较深入地认识了布鲁氏菌减毒活疫苗株基因构成上的差异。结论与亲本株相比,4株减毒活疫苗株缺失大量基因,构成了不同疫苗株差异的遗传基础。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 减毒活疫苗 比较基因组学

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布鲁氏菌比较基因组学研究进展 认领 被引量：12

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作者 钟志军 于爽 +10 位作者 徐杰 王玉飞 彭广能 陈燕芬 白耀霞 付思美 王同坤 汪舟佳 杜昕颖 黄克和 陈泽良 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期 346-350,共5页

依据宿主偏好性的不同,布鲁氏菌分为6个经典种。根据生物学特性又将其分为19个亚型。包括：B.melitensis（羊种,主要感染绵羊和山羊种,

关键词 布鲁氏菌 比较基因组学 生物学特性 羊种

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布鲁氏菌全基因组DNA芯片研制及比较基因组杂交方法的建立 认领 被引量：4

12

作者 钟志军 徐杰 +11 位作者 于爽 王玉飞 周冬生 汪舟佳 杜昕颖 白耀霞 陈燕芬 付思美 王同坤 黄克和 陈泽良 彭广能 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期 1215-1222,共8页

为利用布鲁氏菌强毒株马耳他布鲁氏菌（B.melitensis）16M和流产布鲁氏菌（B.abortus）9-941全基因组序列,构建布鲁氏菌全基因组DNA芯片,并将其应用于比较基因组学分析,从基因库下载马耳他布鲁氏菌16M和流产布鲁氏菌9-941中的3 218个基... 为利用布鲁氏菌强毒株马耳他布鲁氏菌（B.melitensis）16M和流产布鲁氏菌（B.abortus）9-941全基因组序列,构建布鲁氏菌全基因组DNA芯片,并将其应用于比较基因组学分析,从基因库下载马耳他布鲁氏菌16M和流产布鲁氏菌9-941中的3 218个基因设计引物,经过条件优化和重新设计引物等方法进行大规模PCR扩增,成功扩增3 212条基因。产物纯化后点制醛基修饰玻片,每个基因2个点,加上阳性和阴性对照,芯片上合计6 912个探针。囊括了布鲁氏菌3 212条基因和阳性、阴性对照点。采用Cy3/Cy5双色荧光杂交技术,分别以马耳他布鲁氏菌16M和流产布鲁氏菌9-941作为参照和待测样本进行荧光双色杂交分析,成功建立了布鲁氏菌比较基因组杂交分析方法。若干质控杂交结果表明,建立的全基因组DNA芯片杂交结果与全基因组测序结果完全一致。证明成功建立了基于全基因组DNA芯片的布鲁氏菌比较基因组学技术平台。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 DNA芯片 比较基因组学

布鲁菌进化和分类学研究进展 认领 被引量：20

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作者 钟志军 于爽 +10 位作者 徐杰 王玉飞 白耀霞 陈燕芬 付思美 王同坤 汪舟佳 杜昕颖 彭广能 黄克和 陈泽良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1228-1235,1240共9页

布鲁菌属革兰氏阴性兼性胞内寄生菌,能感染多种宿主动物和人。该属可分为6个典型种,包括羊种、牛种、猪种、沙林鼠种、绵羊附睾种以及犬种布鲁菌等。此分类是基于其致病性以及宿主偏好性的差异划分。尽管6个种通过传统表型试验能区分,... 布鲁菌属革兰氏阴性兼性胞内寄生菌,能感染多种宿主动物和人。该属可分为6个典型种,包括羊种、牛种、猪种、沙林鼠种、绵羊附睾种以及犬种布鲁菌等。此分类是基于其致病性以及宿主偏好性的差异划分。尽管6个种通过传统表型试验能区分,但布鲁菌种内采用DNA-DNA杂交证明DNA同源性高度一致（相似性大于90%）。因此有人提议布鲁菌由单一种组成,即布鲁菌属中只有羊种布鲁菌,其他种都是羊种菌的生物亚型之一。然而基于其他分子技术的基因分型表明其DNA多态性表现明显,说明目前对这个种的分型还是比较准确。而最近分离的海洋种布鲁氏菌分离株（鳍型和鲸型）采用传统分型标准和一些特异的分子标记也证明这种分型比较正确。本文对目前布鲁菌种属进化和分类学进行综述,希望对研究其进化和分类有所帮助。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 进化 分类学

疑似霍乱弧菌鉴定及分子分型检测 认领 被引量：3

14

作者 陈琛 王中强 +10 位作者 柳楠 刘雯静 李婧 薛文仲 张伶 杜昕颖 邱少富 王勇 黄留玉 李承毅 宋宏彬 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期57-58,共2页

目的对北京市某医院肠道门诊2株疑似霍乱弧菌进行鉴定,检测其主要毒力基因,并分析其基因型别特征。方法利用细菌生化鉴定条（API 20 E）进行生化鉴定,玻片凝集法确定其血清型别,应用PCR及测序技术分析其16 S rRNA基因;PCR检测其8个主要... 目的对北京市某医院肠道门诊2株疑似霍乱弧菌进行鉴定,检测其主要毒力基因,并分析其基因型别特征。方法利用细菌生化鉴定条（API 20 E）进行生化鉴定,玻片凝集法确定其血清型别,应用PCR及测序技术分析其16 S rRNA基因;PCR检测其8个主要毒力基因,脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析其基因型别。结果经鉴定,该2株疑似霍乱菌株均为非O1非139群霍乱弧菌,经16 SrRNA分析与美国国家生物技术信息中心数据库中霍乱弧菌相似性达100%,均包含毒力基因hylA、ompW和toxR,PFGE结果显示2株菌具有完全不同的带型。结论 2株疑似霍乱弧菌为非O1非139群霍乱弧菌,其致病因素与（hylA）、（ompW）、（toxR）毒力基因有关,并且2株菌遗传关系较远。 展开更多

关键词 霍乱弧菌 毒力基因 脉冲场凝胶电泳

泛耐药细菌NDM-1基因Taqman PCR快速检测方法的建立 认领 被引量：4

15

作者 杜昕颖 汪舟佳 +6 位作者 王玉飞 邱少富 袁静 宋宏彬 孙岩松 陈泽良 黄留玉 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期81-85,共5页

产NDM-1（New Delhi Metallo-β-laetamase1，I型新德里金属β-内酰胺酶）细菌是新近报道的一种泛耐药细菌，由于对绝大多数常用抗生素均耐药，又被称为超级细菌。目的：建立一种可快速检测泛耐药细菌NDM-1基因的Taqman探针实时荧光定量... 产NDM-1（New Delhi Metallo-β-laetamase1，I型新德里金属β-内酰胺酶）细菌是新近报道的一种泛耐药细菌，由于对绝大多数常用抗生素均耐药，又被称为超级细菌。目的：建立一种可快速检测泛耐药细菌NDM-1基因的Taqman探针实时荧光定量PCR法。方法：根据NDM．1基因序列，设计引物和Taqman探针，建立Taqman探针实时定量PCR检测方法，对方法的敏感性、重复性和特异性进行了评价，并对临床模拟标本中的产NDM-1细菌进行了检测。结果：该方法在9个浓度（5×10^0～5X10^8拷贝）梯度范围内呈现很好的线性关系，检测灵敏度可达5个质粒拷贝，与不含NDM-1基因的肠杆菌无交叉反应，对尿液模拟标本的检出限为10CFU，可快速准确地检出临床样本中分离的NDM-1阳性菌株。结论：建立的Taqman探针实时荧光定量PCR法具有快速、简单、灵敏度高和特异性强等优点，可应用于临床上泛耐药细菌NDM．1基因的核酸检测。 展开更多

关键词 NDM-1 荧光定量PCR 检测

羊布鲁氏菌非编码小RNA分子BSR-2的预测与鉴定 认领 被引量：2

16

作者 王同坤 王立贵 +5 位作者 陈泽良 杜昕颖 汪舟佳 黄留玉 刘波 王玉飞 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期923-929,共7页

利用RT-PCR和RACE等方法对生物信息学预测的羊布鲁氏菌非编码小RNA（smallnon-codingRNA,sRNA）BSR-2进行了实验鉴定,并通过分析BSR-2在胞内生存缺陷株中的转录情况以及预测BSR-2的靶标基因对BSR-2的功能进行初步探讨.RT-PCR结果表明,BS... 利用RT-PCR和RACE等方法对生物信息学预测的羊布鲁氏菌非编码小RNA（smallnon-codingRNA,sRNA）BSR-2进行了实验鉴定,并通过分析BSR-2在胞内生存缺陷株中的转录情况以及预测BSR-2的靶标基因对BSR-2的功能进行初步探讨.RT-PCR结果表明,BSR-2在羊布鲁氏菌的总RNA中存在转录本,而且在不同的应激条件下转录水平不同.RACE结果表明,BSR-2长224nt,位于Ⅱ号染色体的BMEII0742和BMEII0743之间的基因间区.进一步的实验结果表明,BSR-2可能与布鲁氏菌的胞内生存能力相关. 展开更多

关键词 布鲁氏菌 非编码小RNA 胞内生存 靶基因

布鲁杆菌Cu-Zn SOD和GroEL的克隆表达及细胞免疫特性比较分析 认领 被引量：3

17

作者 于爽 徐杰 +11 位作者 付思美 王玉飞 白耀霞 钟志军 陈燕芬 王同坤 杨毅 杜昕颖 汪舟佳 李竞 黄留玉 陈泽良 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1102-1105,共4页

目的分析比较布鲁杆菌两种外膜蛋白Cu-Zn SOD和GroEL的细胞免疫特性。方法以布鲁杆菌16M基因组为模板,PCR扩增Cu-Zn SOD和GroEL蛋白的基因序列。采用Gateway方法构建表达载体,在大肠埃希菌中诱导表达并纯化,用获得的纯化蛋白刺激减毒活... 目的分析比较布鲁杆菌两种外膜蛋白Cu-Zn SOD和GroEL的细胞免疫特性。方法以布鲁杆菌16M基因组为模板,PCR扩增Cu-Zn SOD和GroEL蛋白的基因序列。采用Gateway方法构建表达载体,在大肠埃希菌中诱导表达并纯化,用获得的纯化蛋白刺激减毒活疫苗S19免疫小鼠的脾细胞,并测定细胞上清中IFN-γ的水平。结果成功克隆表达了Cu-Zn SOD和GroEL蛋白,用这两种蛋白刺激S19免疫小鼠脾细胞后,细胞上清中的IFN-γ水平明显升高,并且GroEL刺激后的IFN-γ水平高于Cu-Zn SOD刺激后的IFN-γ水平。结论 GroEL和Cu-Zn SOD蛋白均具有细胞免疫反应特性,且GroEL的细胞免疫反应特性强于Cu-ZnSOD。 展开更多

关键词 布鲁杆菌属 GATEWAY技术 免疫 细胞

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副溶血弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 认领 被引量：6

18

作者 孙宏迪 杜昕颖 +6 位作者 汪舟佳 王玉飞 宋宏彬 孙岩松 黄留玉 杨振洲 陈泽良 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期969-972,共4页

目的建立一种快速检测副溶血弧菌的实时荧光定量PCR方法。方法根据副溶血弧菌tdh基因设计合成引物及TaqMan探针,利用阳性质粒和模拟标本建立副溶血弧菌实时荧光定量PCR检测方法。结果以副溶血弧菌DNA为模板克隆了tdh基因,得到阳性质粒... 目的建立一种快速检测副溶血弧菌的实时荧光定量PCR方法。方法根据副溶血弧菌tdh基因设计合成引物及TaqMan探针,利用阳性质粒和模拟标本建立副溶血弧菌实时荧光定量PCR检测方法。结果以副溶血弧菌DNA为模板克隆了tdh基因,得到阳性质粒。利用阳性质粒建立了定量PCR方法 ,得到标准曲线y=-4.9197x＋58.72,决定系数（R2）为0.9864。此方法具有很好的特异性,在对15种肠道致病菌的检测中,只有副溶血弧菌基因组DNA的扩增结果为阳性。对粪便和食物模拟标本进行检测,敏感性均为102cfu/μl。此方法重复性较好,对4种浓度（105、104、103、102cfu/μl）的菌液各进行3次检测,结果均为阳性,且Ct值的变异系数〈2%。结论建立了一种检测副溶血弧菌的荧光定量PCR方法 ,该法的敏感性和特异均较好,适用于快速、准确地检测食品和粪便中的沙门菌。 展开更多

关键词 弧菌 副溶血性 基因 tdh 实时定量聚合酶链反应 DNA探针

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肠炎沙门菌临床分离株耐药性与耐药基因分析 认领 被引量：2

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作者 刘雯静 邱少富 +10 位作者 王勇 王中强 陈琛 李婧 张伶 杜昕颖 汪舟佳 薛文仲 黄留玉 宋宏彬 刘雪林 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1542-1543,共2页

目的对分离自北京、广州、新疆3个地区腹泻病人粪便标本中的肠炎沙门菌菌株进行耐药性监测,并分析其耐药基因的变异情况。方法应用生化试验、血清凝集试验对分离的疑似沙门菌菌株进行鉴定。采用K-B药敏纸片法对鉴定出的肠炎沙门菌进行... 目的对分离自北京、广州、新疆3个地区腹泻病人粪便标本中的肠炎沙门菌菌株进行耐药性监测,并分析其耐药基因的变异情况。方法应用生化试验、血清凝集试验对分离的疑似沙门菌菌株进行鉴定。采用K-B药敏纸片法对鉴定出的肠炎沙门菌进行抗生素敏感性试验。利用PCR技术扩增其耐药基因DNA促旋酶gyrA基因和拓扑异构酶parC基因,同时进行测序。结果共分离鉴定出20株肠炎沙门菌,分离菌株对环丙沙星、庆大霉素、头孢他定、亚胺培南的敏感率为100%,对萘啶酸耐药;75%的菌株呈现多重耐药性（multidrug resistance,MDR）序列比对结果显示gyrA基因Asp87及Gly133密码子处发生了点突变,其中Gly133是新的突变点。未发现parC基因密码子突变。结论肠炎沙门菌临床分离株MDR情况比较严重,对萘啶酸普遍耐药,这可能与20株菌的gyrA基因QRDR的突变相关。为防止多重耐药现象的蔓延和加重,除了应加强耐药性及耐药性相关基因的实验室监测外,临床治疗沙门菌感染时需慎用抗生素。 展开更多

关键词 肠炎沙门菌 多重耐药性 DNA促旋酶gyrA基因 拓扑异构酶parC基因 喹诺酮耐药决定区

布鲁氏菌vjbR突变株的构建及其毒力表型分析 认领 被引量：3

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作者 付思美 白耀霞 +12 位作者 曲勍 徐杰 王玉飞 钟志军 于爽 王同坤 杨毅 陈燕芬 汪舟佳 杜昕颖 黄留玉 甄清 陈泽良 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1188-1193,共6页

为分析vjbR在布鲁氏菌毒力中的作用,构建了vjbR的突变株和互补株,并分析了它们在巨噬细胞和小鼠体内的存活能力。利用同源重组的方法,用卡那抗性基因替换了16M的vjbR（BMEII1116）基因,得到了vjbR的缺失突变株16M△vjbR。将vjbR基因的OR... 为分析vjbR在布鲁氏菌毒力中的作用,构建了vjbR的突变株和互补株,并分析了它们在巨噬细胞和小鼠体内的存活能力。利用同源重组的方法,用卡那抗性基因替换了16M的vjbR（BMEII1116）基因,得到了vjbR的缺失突变株16M△vjbR。将vjbR基因的ORF克隆到pMD18-T载体中,然后将其转入到突变株16M△vjbR中得到互补株16M△vjbR-C。用16M、16M△vjbR和16M△vjbR-C侵染巨噬细胞和感染小鼠,比较分析它们在巨噬细胞内的生存能力及小鼠毒力。研究结果表明vjbR突变株在巨噬细胞和小鼠体内的毒力减弱,存活能力下降,说明vjbR基因是布鲁氏菌16M的毒力相关基因,对于布鲁氏菌建立慢性感染是必要的。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 vjbR QS系统 毒力