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姜黄素联合干扰素-β/维甲酸对乳腺癌细胞的协同效应 预览
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作者 葛素侠 任敏 +1 位作者 晓军 吴晓东 《安徽医科大学学报》 北大核心 2018年第2期200-203,共4页
目的 研究姜黄素和干扰素-β/维甲酸(IFN-β/RA)联合用药对人乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制效应,探讨姜黄素和IFN-β/RA联合用药的合理性及科学性。方法 实验分组如下:对照组(加培养基)、姜黄素组(40μmol/L)、IFN-β/RA组(IFN-β7... 目的 研究姜黄素和干扰素-β/维甲酸(IFN-β/RA)联合用药对人乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制效应,探讨姜黄素和IFN-β/RA联合用药的合理性及科学性。方法 实验分组如下:对照组(加培养基)、姜黄素组(40μmol/L)、IFN-β/RA组(IFN-β750 U/ml,RA 1.5μmol/L)、姜黄素联合IFN-β/RA组(姜黄素40μmol/L,IFN-β375 U/ml,RA0.75μmol/L),分别处理乳腺癌细胞MCF-7,采用MTT法检测细胞活性,采用Annexin-V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 姜黄素和IFN-β/RA联合用药可显著抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,同时诱导细胞凋亡,这种作用强于单药(P〈0.05),表现为协同作用。结论 姜黄素联合IFN-β/RA对乳腺癌MCF-7细胞增殖具有更强的抑制作用,并能促进细胞凋亡,具有协同作用。 展开更多
关键词 姜黄素 干扰素-Β 维甲酸 乳腺癌 MCF-7
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LCE3C在皮肤癌组织中分布和细胞定位及其调控机制的初步研究 预览 被引量:5
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作者 陈琼琼 涂珍珍 +5 位作者 王瑞 张思平 赵盼 成芳 晓军 周海胜 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第10期1413-1417,共5页
目的 研究LCE3C蛋白在皮肤鳞状细胞癌( SCC)以及基底细胞癌( BCC)中的分布及其调控的分子机制. 方法免疫组织化学法检测LCE3C在SCC和BCC组织中的表达. 构建绿色荧光蛋白融合表达的 LCE3C 重组表达载体pLCE3C-GFP,转染人SCC细胞系A4... 目的 研究LCE3C蛋白在皮肤鳞状细胞癌( SCC)以及基底细胞癌( BCC)中的分布及其调控的分子机制. 方法免疫组织化学法检测LCE3C在SCC和BCC组织中的表达. 构建绿色荧光蛋白融合表达的 LCE3C 重组表达载体pLCE3C-GFP,转染人SCC细胞系A431,采用激光共聚焦显微镜分析LCE3C在A431细胞中的定位. Western blot法检测转录因子GRHL3对LCE3C表达的影响.结果 免疫组化结果显示,与正常皮肤组织比较,LCE3C在SCC和BCC组织中表达明显增加;在皮肤癌组织中LCE3C主要分布在表皮的角质层. 激光共聚焦结果显示,LCE3C主要分布在细胞外基质( ECM )中;Western blot 结果显示,与角质形成细胞( HaCaT)比较, A431 细胞中 GRHL3 表达量显著降低,而LCE3C表达量明显增高;过量表达 GRHL3 的细胞( A431/GRHL3)LCE3C表达量显著降低.结论 与正常皮肤组织比较, LCE3C在皮肤癌中的表达增加,主要分布在皮肤角质层的ECM;转录因子GRHL3与皮肤癌组织LCE3C的表达呈负相关性. 展开更多
关键词 皮肤鳞状细胞癌 基底细胞癌 细胞定位
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稳定敲低SIGIRR的人肾小管上皮细胞的构建及其初步功能的研究 预览 被引量:2
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作者 蒋克国 王德光 +7 位作者 周海胜 晓军 张桂霞 金福泉 季爽 潘海峰 叶冬青 郝丽 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第2期129-135,共7页
目的:建立稳定敲低单免疫球蛋白白介素1相关受体(SIGIRR)基因的人肾小管上皮细胞株(HKC),并初步研究其功能。方法针对SIGIRR基因的有效靶点设计shRNA序列,与 GV248-GFP-Puro 慢病毒载体连接产生重组体( GV248-GFP-Puro-shSIGIRR... 目的:建立稳定敲低单免疫球蛋白白介素1相关受体(SIGIRR)基因的人肾小管上皮细胞株(HKC),并初步研究其功能。方法针对SIGIRR基因的有效靶点设计shRNA序列,与 GV248-GFP-Puro 慢病毒载体连接产生重组体( GV248-GFP-Puro-shSIGIRR)。将测序验证正确的重组体与包装质粒(pMDL、pRev、pVSVG)共转染293T细胞进行病毒包装,收集病毒并感染HKC细胞。实时荧光定量PCR( qRT-PCR)和Western blot法分析检测HKC细胞中SIGIRR干涉效率。应用白细胞介素-1β( IL-1β)刺激成功敲低SIGIRR的HKC细胞及对照细胞, Western blot法检测其下游核转录因子NF-κB(p65)的磷酸化水平,qRT-PCR分析单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、正常 T细胞表达和分泌的活化调节蛋白( RANTES) mRNA水平。结果成功构建重组慢病毒载体GV248-GFP-Puro-shSIGIRR。 qRT-PCR 和 Western blot 法均证实在HKC细胞中成功敲低SIGIRR的表达。此外, IL-1β刺激后,与对照细胞相比,敲低SIGIRR的HKC细胞( HKC/shSIGIRR)的p65磷酸化水平上调, MCP-1和 RANTES mR-NA表达水平升高。结论 HKC的炎症反应中,SIGIRR蛋白对Toll样受体/白介素1受体(TLR/IL-1R)通路起“刹车”作用。该研究为狼疮性肾炎的治疗提供了新的潜在的靶点。 展开更多
关键词 狼疮性肾炎 人肾小管上皮细胞 SIGIRR 慢病毒载体 NF-ΚB 趋化因子
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雷帕霉素对皮肤鳞癌细胞体外转移潜能的影响 预览 被引量:3
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作者 郭思佳 晓军 周海胜 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期550-554,共5页
摘要:目的研究雷帕霉素(rapamycin,RAPA)在体外对上皮鳞癌细胞系A431的增殖、迁移以及侵袭能力的影响。方法体外培养人上皮鳞癌细胞A431,通过噻唑蓝(MTT)实验检测不同浓度的RAPA(5、10、20nmol·L-1)对A431增殖的影响,并... 摘要:目的研究雷帕霉素(rapamycin,RAPA)在体外对上皮鳞癌细胞系A431的增殖、迁移以及侵袭能力的影响。方法体外培养人上皮鳞癌细胞A431,通过噻唑蓝(MTT)实验检测不同浓度的RAPA(5、10、20nmol·L-1)对A431增殖的影响,并筛选出最适浓度。依此浓度分别通过划痕、Tr—answell试验检测A431的迁移和侵袭能力变化。经RAPA处理后,采用逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)和Westernblot检测A431中骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的mRNA和蛋白的表达水平的变化。结果MTF实验结果显示不同浓度RAPA对A431增殖有抑制作用,且表现浓度依赖性。RAPA作用于A431细胞48h后,划痕实验及Transwell实验显示A431的迁移和侵袭能力受到明显抑制。RT—PCR和Westernblot结果都显示RAPA处理的A431细胞中OPN的表达下调。结论RAPA可降低鳞癌细胞A431的增殖、迁移以及侵袭能力,其机制可能与RAPA抑制OPN的表达有关。 展开更多
关键词 雷帕霉素 上皮鳞状细胞癌 骨桥蛋白 细胞增殖 胞迁移 细胞侵袭
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高糖激活PI3 K/AKT/mTORC1通路诱导人肾小管上皮细胞骨桥蛋白的表达 预览 被引量:5
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作者 王凤梅 蒋克国 +4 位作者 张桂霞 周海胜 晓军 郝丽 王德光 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1156-1160,共5页
目的:探讨高糖刺激上调人肾小管上皮细胞株( HK-2)骨桥蛋白(OPN)表达的分子机制。方法利用高糖(25 mmol&#183;L-1)刺激 HK-2细胞,并应用特异性抑制剂、siRNA抑制PI3K和(或)mTOR活性,应用Real-time PCR检测OPN mRNA表达;Weste... 目的:探讨高糖刺激上调人肾小管上皮细胞株( HK-2)骨桥蛋白(OPN)表达的分子机制。方法利用高糖(25 mmol&#183;L-1)刺激 HK-2细胞,并应用特异性抑制剂、siRNA抑制PI3K和(或)mTOR活性,应用Real-time PCR检测OPN mRNA表达;Western blot 检测 OPN、p-AKT、p-S6、Raptor 和Rictor蛋白表达。结果高糖刺激呈时间依赖性上调HK-2细胞OPN 表达,其中, OPN mRNA 在刺激48h 后达高峰;OPN蛋白表达在72h达到最高。此外,高糖刺激激活PI3K/AKT/mTORC1信号通路。利用 PI3K 特异性抑制剂LY294002、mTORC1特异性抑制剂 rapamycin 抑制 PI3K/AKT/mTOR通路后,HK-2细胞的OPN表达明显降低。进一步,siRNA敲低Raptor降低HK-2细胞中OPN蛋白的表达,而敲低Rictor对OPN蛋白表达无影响。结论高糖通过激活PI3K/AKT/mTORC1通路上调HK-2细胞OPN的表达。 展开更多
关键词 高糖 人肾小管上皮细胞 骨桥蛋白 雷帕霉素 调控机制
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过量表达LMO2对成血管细胞增殖和造血分化的作用 预览 被引量:1
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作者 周海胜 李春 +2 位作者 晓军 陈兵 刘德培 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期177-184,共8页
目的利用小鼠胚胎干细胞进行体外造血细胞分化,研究LMO2蛋白在成血管细胞分化过程中的作用。方法构建小鼠成血管细胞特异性表达lmo2或绿色荧光蛋白的表达载体,分别转染小鼠胚胎干细胞。经过筛选获得细胞克隆进行自发分化以形成胚胎体。... 目的利用小鼠胚胎干细胞进行体外造血细胞分化,研究LMO2蛋白在成血管细胞分化过程中的作用。方法构建小鼠成血管细胞特异性表达lmo2或绿色荧光蛋白的表达载体,分别转染小鼠胚胎干细胞。经过筛选获得细胞克隆进行自发分化以形成胚胎体。收集分化0~12 d的胚胎体细胞,检测造血细胞相关基因的表达;利用EB细胞进行细胞集落形成实验及血细胞集落形成单位实验,并统计集落形成数。结果成功构建了成血管细胞特异性表达目的基因的表达载体,转染目的基因的小鼠胚胎干细胞在其分化中产生的成血管细胞可特异表达目的基因。过量表达lmo2能够促进造血相关基因的表达,所产生细胞集落数是对照组的2倍,晚期造血分化的血细胞集落形成单位总数是对照组的2.5倍,其中红系集落单位数是对照组的3倍。结论在成血管细胞中过量表达LMO2,促进其细胞增殖及其造血细胞分化。 展开更多
关键词 LMO2 胚胎干细胞 成血管细胞 增殖 分化
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肾小管上皮-间质细胞转分化模型的建立 预览 被引量:5
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作者 陈芳 成芳 +4 位作者 项倩彤 郭思佳 晓军 王德光 周海胜 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2013年第6期595-600,共6页
目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)在人肾小管上皮细胞转分化中的作用,建立肾小管上皮-间质细胞转分化(TEMT)模型。方法实验分为正常对照组和TGF-β1处理组,利用TGF-β1处理人肾小管上皮细胞(HK-2)24 h,分别应用Western blot和免... 目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)在人肾小管上皮细胞转分化中的作用,建立肾小管上皮-间质细胞转分化(TEMT)模型。方法实验分为正常对照组和TGF-β1处理组,利用TGF-β1处理人肾小管上皮细胞(HK-2)24 h,分别应用Western blot和免疫荧光方法检测上皮细胞和间质细胞分子标记的表达变化;应用划痕和Transwell assay方法检测细胞迁移及侵袭能力。结果与正常对照组比较,TGF-β1处理组HK-2细胞呈梭形,上皮细胞标记分子E-cadherin表达减弱,差异有统计学意义(P〈0.01),间质细胞标记分子骨架蛋白Vimentin和β-catenin表达增强,差异有统计学意义(P〈0.01);细胞的迁移及侵袭能力亦明显增强。结论 TGF-β1刺激后HK-2细胞促进上皮细胞转化为间质细胞。 展开更多
关键词 肾间质纤维化 肾小管上皮细胞 转分化 转化生长因子Β1
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Lactoferricin B基因与几种变异克隆的构建及其在酿酒酵母中的表达与鉴定 预览 被引量:11
8
作者 冯永潜 晓军 翟朝阳 《四川大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期 578-582,共5页
目的构建牛乳铁多肽(Lactoferricin B)的真核表达质粒pYES2/Lactoferricin B,实现其在酿酒酵母S.cerevisiae中的表达,并初步检测其不同变异的体外抗菌活性。方法通过分别合成Lactoferricin B基因两条单链的部分序列,让其互为模板、引... 目的构建牛乳铁多肽(Lactoferricin B)的真核表达质粒pYES2/Lactoferricin B,实现其在酿酒酵母S.cerevisiae中的表达,并初步检测其不同变异的体外抗菌活性。方法通过分别合成Lactoferricin B基因两条单链的部分序列,让其互为模板、引物进行PCR扩增,得到Lactoferricin B与3种变异的基因序列。将它们克隆到穿梭质粒pYES2中,构建pYES2/Lactoferricin B及3种变异基因重组质粒,转化到大肠杆菌Top10中,让其大量增殖。提取重组质粒经纯化后将其转化到S.cerevisiae中,通过营养缺陷型筛选获得重组酵母菌并通过半乳糖诱导使其表达目的蛋白。经离子交换柱纯化收集目的蛋白后,通过体外抑菌实验比较Lactoferricin B及3种变异重组蛋白的抗菌活性。结果经PCR扩增检验、DNA测序表明成功构建pYES2/Lactoferricin B与3种变异基因重组质粒。提取诱导后的蛋白进行SDS-PAGE电泳及质谱检测,证实目的蛋白的存在,相对分子质量约为3.4×103。在大肠埃希菌及金黄色葡萄球菌的抑菌实验中观测到Lactoferricin B和A17-Lactoferricin B产生了抑菌圈。结论成功构建pYES2/Lactoferricin B及变异基因重组质粒,该重组质粒能在S.cerevisiae中诱导表达目的蛋白,为进一步研究其生物功能及抗菌活性奠定了基础。 展开更多
关键词 抗菌肽 乳铁蛋白B 基因序列变异 酵母表达
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浅谈井下机电技术管理 预览 被引量:1
9
作者 晓军 《科技信息》 2007年第33期 299,277,共2页
企业要生存要发展,加强管理是关键。机电技术管理作为煤矿管理系统中一个重要体系,具有重要的至关重要的作用;井下电气设备、采区供电的技术管理工作是当前煤矿机电工作的一个重点。本文结合淮南煤矿的做法,分析了如何从健全管理组... 企业要生存要发展,加强管理是关键。机电技术管理作为煤矿管理系统中一个重要体系,具有重要的至关重要的作用;井下电气设备、采区供电的技术管理工作是当前煤矿机电工作的一个重点。本文结合淮南煤矿的做法,分析了如何从健全管理组织、抓好、提高性能等方面切实搞好井下电气设备的管理工作。 展开更多
关键词 管理体制 电气设备 防爆性能 安全保护 计划性管理
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人纤溶酶原K5基因的结构改造及其在大肠杆菌中的表达、纯化与鉴定 预览 被引量:2
10
作者 晓军 王鹏 +2 位作者 李保国 王健琪 翟朝阳 《华西药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期 22-24,共3页
目的 改造人纤溶酶原Kringle 5(K5)基因,构建RGDRGD—liteK5融合表达质粒,并表达纯化所得RGDRGD—liteK5蛋白。方法以人纤溶酶原K5cDNA为模板,通过PCR得到RGDRGD—liteK5基因片段,并克隆到质粒pGEX1-λT中,构建重组原核融合表达... 目的 改造人纤溶酶原Kringle 5(K5)基因,构建RGDRGD—liteK5融合表达质粒,并表达纯化所得RGDRGD—liteK5蛋白。方法以人纤溶酶原K5cDNA为模板,通过PCR得到RGDRGD—liteK5基因片段,并克隆到质粒pGEX1-λT中,构建重组原核融合表达载体pGEX—RGDRGD—liteK5;在IPTG诱导下,观察融合蛋白在大肠杆菌Rosetta中的表达情况;利用亲合层析柱纯化表达产物,用Westernblot分析鉴定表达产物。结果PCR扩增得到274bp的片段,并成功插入pGEX1-λT质粒;含重组质粒的大肠杆菌在IPTG诱导下表达了特异性的融合蛋白,其分子量为36kD;获得的融合蛋白经凝血酶酶切后,得到了分子量约为10kD的RGDRGD—liteK5蛋白;Westernblot证实了表达产物的正确性。结论成功地改造了人纤溶酶原K5基因,构建了重组融合表达质粒pGEX—RGDRGD—liteK5,并纯化了其表达产物。 展开更多
关键词 人纤溶酶原K5 KRINGLE 5 RGD序列 融合表达 血管增生抑制剂
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配筋砌块砌体结构的抗震性 预览 被引量:1
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作者 李俊 晓军 +1 位作者 张孝生 姜攀 《墙材革新与建筑节能》 2005年第1期 58-59,共2页
配筋砌块砌体结构自重小,抗震性能优越,并且实现了强度、刚度和韧性的统一,是一种很有竞争力的抗震结构体系.
关键词 配筋砌块砌体 抗震性能 抗震结构体系 刚度 强度 自重 韧性
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金属粉芯焊丝在石油管道工程中的应用 预览
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作者 晓军 《新丝路》 2017年第6期67-67,共1页
金属粉芯焊丝具有优良的焊接工艺性能和高熔敷率,在国内石油管道工程中得到应用。本文介绍了金属粉芯焊丝的性能及其效率,也对半自动焊及全位置自动焊的工艺方案进行了简要介绍。
关键词 金属粉芯焊丝 焊接工艺 焊接效率
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浅谈井下机电技术管理 预览
13
作者 晓军 《中小企业管理与科技》 2008年第26期 191,共1页
企业要生存要发展,加强管理是关键。机电技术管理作为煤矿管理系统中一个重要体系,具有重要的至关重要的作用;井下电气设备、采区供电的技术管理工作是当前煤矿机电工作的一个重点。本文结合淮南煤矿的做法,分析了如何从健全管理组... 企业要生存要发展,加强管理是关键。机电技术管理作为煤矿管理系统中一个重要体系,具有重要的至关重要的作用;井下电气设备、采区供电的技术管理工作是当前煤矿机电工作的一个重点。本文结合淮南煤矿的做法,分析了如何从健全管理组织、抓好、提高性能等方面切实搞好井下电气设备的管理工作。 展开更多
关键词 管理体制 电气设备 防爆性能 安全保护 计划性管理
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