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IFN-λ1作为乙型脑炎病毒DNA疫苗佐剂的免疫效应研究
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作者 周亚红 田占成 +5 位作者 于瑞明 高闪电 独军政 刘光远 罗建勋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期841-846,共6页
为了评估IFN-λ1作为免疫佐剂能否提高乙型脑炎病毒DNA疫苗的免疫效应,利用RT-PCR方法扩增猪源IFN-λ1基因,构建重组真核表达载体pVAX1-IFN-λ1,通过Western-blot和间接免疫荧光试验鉴定免疫效果。结果表明,转染pVAX1-IFN-λ1重组质粒的... 为了评估IFN-λ1作为免疫佐剂能否提高乙型脑炎病毒DNA疫苗的免疫效应,利用RT-PCR方法扩增猪源IFN-λ1基因,构建重组真核表达载体pVAX1-IFN-λ1,通过Western-blot和间接免疫荧光试验鉴定免疫效果。结果表明,转染pVAX1-IFN-λ1重组质粒的BHK21细胞能够正确表达IFN-λ1;将重组IFN-λ1与pVAX1-prMEDNA疫苗免疫小鼠后,与对照组pVAX1-prME相比,IFN-λ1可以诱导小鼠产生乙型脑炎病毒EⅢ蛋白特异性抗体水平、乙脑病毒特异性中和抗体效价和淋巴细胞增殖水平显著提高。结论,重组猪源IFN-λ1作为乙型脑炎病毒DNA疫苗的分子免疫佐剂能够在小鼠动物模型上提高乙型脑炎病毒DNA疫苗的免疫效应。 展开更多
关键词 IFN-λ1 乙型脑炎病毒 DNA疫苗 鉴定 免疫
新分离植物乳杆菌的药敏性和抑菌性试验
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作者 李禤 贾丹 +10 位作者 刘军龙 王锦明 王佳慧 刘爱红 王杰 刘志杰 关贵全 刘光远 罗建勋 李有全 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期879-886,共8页
从市售泡菜、酸奶、肉牛牦牛粪便以及天然植物等基质中新分离出8株植物乳杆菌,采用K-B法和双层琼脂扩散法评价这8株植物乳杆菌对13种常用抗生素的耐药性以及对14株致病菌株的抗菌活性。结果表明,不同来源所分离植物乳杆菌的敏感性基本相... 从市售泡菜、酸奶、肉牛牦牛粪便以及天然植物等基质中新分离出8株植物乳杆菌,采用K-B法和双层琼脂扩散法评价这8株植物乳杆菌对13种常用抗生素的耐药性以及对14株致病菌株的抗菌活性。结果表明,不同来源所分离植物乳杆菌的敏感性基本相似,对β-内酰胺类抗生素敏感,但对万古霉素、氨基糖苷类和喹诺酮类等临床上常见抗生素均有抗性。这8株植物乳杆菌对12株指示菌有不同程度的抑制作用,对强致病性大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌等的抑菌功能较强。这些具有良好抗菌性的植物乳杆菌具有防治动物胃肠道疾病的潜能,但仍需对其益生潜能进行深入研究。 展开更多
关键词 植物乳杆菌 抑菌性 抗生素抗性
环形泰勒虫喀什株感染牛淋巴细胞系的建立及其生物学特征的鉴定
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作者 马全英 李有全 +8 位作者 刘军龙 刘爱红 王锦明 赵帅阳 陈银银 徐建林 关贵全 罗建勋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期144-151,共8页
建立1株环形泰勒虫(Theileria annulata)感染的牛淋巴细胞系,分析其生物学特征,为环形泰勒虫病疫苗研发提供新的细胞系。用环形泰勒虫喀什株感染的小亚璃眼蜱成蜱叮咬健康黄牛,当动物体温升高,体表淋巴结肿大时,用显微镜检查肩前和股前... 建立1株环形泰勒虫(Theileria annulata)感染的牛淋巴细胞系,分析其生物学特征,为环形泰勒虫病疫苗研发提供新的细胞系。用环形泰勒虫喀什株感染的小亚璃眼蜱成蜱叮咬健康黄牛,当动物体温升高,体表淋巴结肿大时,用显微镜检查肩前和股前淋巴结穿刺物涂片,出现裂殖体感染的淋巴细胞时,手术摘取淋巴结,无菌条件下进行淋巴细胞的分离培养;选择合适的培养条件对该细胞进行适应性传代培养,可稳定传代培养后,绘制细胞生长曲线,测定细胞倍增时间和细胞周期,测定细胞系环形泰勒虫18S rRNA基因序列,通过序列比对分析其亲缘关系。结果显示,建立了1株可传代培养的环形泰勒虫喀什株裂殖体感染的淋巴细胞系(TaKashi),接种5.0×10^5 mL^-1的细胞,经72 h培养周期,细胞浓度可达到(2.8~3.0)×10^6mL^-1,细胞存活率维持在90%以上;细胞群体倍增时间为33.4 h。细胞周期分析显示,G1期占46.2%,G2期占10.4%,S1期占43.4%,TaKashi传50代后仍然保持着淋巴细胞的形态学特征。18S rRNA基因序列比对及抗原基因Tams1同源性分析显示,该虫株与我国不同省份流行的环形泰勒虫虫株的相似性在91.9%以上,并处于同一个分支。 展开更多
关键词 环形泰勒虫 细胞培养 牛淋巴细胞 细胞系
牛巴贝斯虫巢式PCR检测方法的建立
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作者 孙明 王锦明 +7 位作者 刘爱红 刘志杰 聂英 魏华 李玉峰 关贵全 罗建勋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期183-189,共7页
为建立一种适用于基层兽医实验室特异、敏感、快速检测牛巴贝斯虫感染的方法,以牛巴贝斯虫球状体蛋白4(SBP4)基因为靶基因设计引物,建立检测牛巴贝斯虫的巢式PCR方法。结果表明,该方法可特异性地检测牛巴贝斯虫感染,与14种动物梨形虫无... 为建立一种适用于基层兽医实验室特异、敏感、快速检测牛巴贝斯虫感染的方法,以牛巴贝斯虫球状体蛋白4(SBP4)基因为靶基因设计引物,建立检测牛巴贝斯虫的巢式PCR方法。结果表明,该方法可特异性地检测牛巴贝斯虫感染,与14种动物梨形虫无交叉反应。该方法能够检测到1 copy的SBP4基因,其敏感性分别是对应的内、外引物普通PCR的10倍和1 000倍。应用该巢式PCR方法,对田间随机采集的136份野外样品进行检测,检出阳性样品9份,显著高于AbouLaila等报道的方法(5份)。这些数据表明,建立的巢式PCR方法可用于基层兽医实验室敏感、准确地检测牛巴贝斯虫感染。 展开更多
关键词 牛巴贝斯虫 巢式PCR SBP4基因
几种常见试剂对柔嫩艾美耳球虫卵囊的漂浮效果 预览
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作者 魏红梅 龚振兴 +3 位作者 刘百林 常芳 蔡建平 《湖南农业科学》 2019年第7期78-80,共3页
为了研制经济环保的新型鸡球虫卵囊漂浮剂,试验配制了不同浓度的蔗糖溶液,对柔嫩艾美耳球虫卵囊进行漂浮试验。结果显示:0.9~1.2mol/L的蔗糖溶液对球虫卵囊的漂浮效果较好,漂浮率达92%以上,卵囊沉淀时应将蔗糖溶液稀释至0.3mol/L以下。... 为了研制经济环保的新型鸡球虫卵囊漂浮剂,试验配制了不同浓度的蔗糖溶液,对柔嫩艾美耳球虫卵囊进行漂浮试验。结果显示:0.9~1.2mol/L的蔗糖溶液对球虫卵囊的漂浮效果较好,漂浮率达92%以上,卵囊沉淀时应将蔗糖溶液稀释至0.3mol/L以下。试验还选择了几种实验室常见试剂,配制成密度在1.15~1.20g/mL之间的溶液进行柔嫩艾美耳球虫卵囊漂浮回收及孢子化试验,结果显示40%磷酸氢二钾溶液可以替代饱和食盐水和蔗糖溶液用于鸡球虫卵囊的漂浮纯化。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 卵囊 漂浮试剂 漂浮效果
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饱和食盐水漂浮鸡球虫卵囊的用量和处理时间研究 预览
6
作者 龚振兴 魏红梅 +3 位作者 刘百林 常芳 蔡建平 《湖南农业科学》 2019年第6期77-79,共3页
饱和食盐水是球虫卵囊分离纯化常用试剂,为降低鸡球虫病活疫苗生产成本,试验比较了不同用量的饱和食盐水对柔嫩艾美耳球虫卵囊的漂浮效果,同时研究了饱和食盐水处理柔嫩艾美耳球虫卵囊对其孢子化的影响.结果表明:饱和食盐水的使用量并... 饱和食盐水是球虫卵囊分离纯化常用试剂,为降低鸡球虫病活疫苗生产成本,试验比较了不同用量的饱和食盐水对柔嫩艾美耳球虫卵囊的漂浮效果,同时研究了饱和食盐水处理柔嫩艾美耳球虫卵囊对其孢子化的影响.结果表明:饱和食盐水的使用量并非越多越好,4~6倍体积的饱和食盐水可获得最佳漂浮效果,且饱和食盐水处理卵囊的时间不宜超过30min. 展开更多
关键词 饱和食盐水 鸡球虫卵囊 漂浮效果 处理时间
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我国羊巴贝斯虫棒状体颈部蛋白RON2基因的克隆与结构和遗传进化分析
7
作者 徐建林 王锦明 +5 位作者 刘军龙 刘爱红 李有全 罗建勋 关贵全 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期551-559,共9页
用牛巴贝斯虫棒状体颈部蛋白RON2基因序列BLAST我国羊感染的2种巴贝斯虫全基因组数据库,以获得的RON2基因保守序列片段为模板设计PCR引物;从6株羊巴贝斯虫基因组DNA和c DNA中扩增RON2基因全长序列,分析其基因结构特征;并通过序列比对和... 用牛巴贝斯虫棒状体颈部蛋白RON2基因序列BLAST我国羊感染的2种巴贝斯虫全基因组数据库,以获得的RON2基因保守序列片段为模板设计PCR引物;从6株羊巴贝斯虫基因组DNA和c DNA中扩增RON2基因全长序列,分析其基因结构特征;并通过序列比对和进化树构建,分析我国羊巴贝斯虫的遗传进化关系。结果显示,该基因无内含子,羊巴贝斯虫未定种新疆株/敦煌株(BspX J/DH)、莫氏巴贝斯虫天祝株/临潭株(BmTZ/LT)和莫氏巴贝斯虫宁县株/河北株(BmNX/HB)RON2蛋白基因ORF的大小分别为4 029、4 047和4 044 bp,编码1 345、1 349和1 348个氨基酸。RON2蛋白的分子质量约为151 ku,等电点为8.91,具有3个跨膜区,N端第1~29位氨基酸为其信号肽区域。RON2核苷酸和氨基酸序列比对分析结果显示,BspXJ/DH与BmTZ/LT和BmNX/HB的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为67.0%~67.4%和69.2%~69.3%,BmTZ/LT和BmNX/HB间的相似性分别为92.8%~92.9%和91.1%~91.2%。系统发生树上羊巴贝斯虫未定种和莫氏巴贝斯虫分别位于2大支,莫氏巴贝斯虫又被分为2小支。该结果为开展我国羊巴贝斯虫的分类关系和RON2基因功能的研究提供了基础数据。 展开更多
关键词 羊巴贝斯虫 棒状体颈部蛋白2 基因结构 序列比对 遗传进化
双芽巴贝斯虫Hsp20一新基因型的发现及生物学特性分析
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作者 曲志强 张亮 +10 位作者 罗金 陈泽 任巧云 刘文阁 倪军 许肖枫 吴泽功 罗建勋 孙晓林 刘光远 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期567-573,共7页
为了鉴定分离自甘肃永靖的1株双芽巴贝斯虫Hsp20基因型为一新基因型,参考双芽巴贝斯虫Hsp20核苷酸序列,设计特异性引物。对其进行扩增,利用生物信息学方法对其进行比对分析。结果显示,扩增获得了700 bp的核苷酸片段。与GenBank中公布的1... 为了鉴定分离自甘肃永靖的1株双芽巴贝斯虫Hsp20基因型为一新基因型,参考双芽巴贝斯虫Hsp20核苷酸序列,设计特异性引物。对其进行扩增,利用生物信息学方法对其进行比对分析。结果显示,扩增获得了700 bp的核苷酸片段。与GenBank中公布的18种不同物种的氨基酸序列构建遗传发育树,结果表明本实验获得的双芽巴贝斯虫与美国株和中国新疆株的亲缘关系最近。对其氨基酸序列进行比对分析,发现在第31~85位点存在冗余,与公布的Hsp20氨基酸序列存在明显的差异。通过同源建模分析,发现该冗余致使Hsp20蛋白在第7号位形成1个环形结构,从而引起了第3号位的拉伸。通过生物信息学分析得出,获得的双芽巴贝斯虫甘肃株的Hsp20基因是一新基因型。该基因型的存在为更加准确诊断双芽巴贝斯虫病提供了依据。 展开更多
关键词 双芽巴贝斯虫 Hsp20 基因型 生物学特征
非洲猪瘟病毒K205R蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
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作者 赵亚茹 韩蓉 +7 位作者 杨吉飞 牛庆丽 关贵全 罗建勋 刘光远 GRZEGORZ Wozniakowski 刘志杰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期805-811,共7页
将合成的非洲猪瘟病毒K205R基因序列插入pET-28a(+)表达载体,经IPTG诱导表达pET-28a-K205R重组蛋白。用制备的重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用化学融合方法融合、筛选,获得了6A4、7F5和7G3三株抗K205R蛋白的杂交瘤细胞株。经鉴定,这3株单... 将合成的非洲猪瘟病毒K205R基因序列插入pET-28a(+)表达载体,经IPTG诱导表达pET-28a-K205R重组蛋白。用制备的重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用化学融合方法融合、筛选,获得了6A4、7F5和7G3三株抗K205R蛋白的杂交瘤细胞株。经鉴定,这3株单克隆抗体(单抗)的亚类均为IgG1型;单抗的腹水效价分别为1∶51200、1∶409600和1∶102400。将这3株杂交瘤细胞连续培养20代,在第20代仍有很高的分泌抗体的能力,表明其稳定性较好。Western-blot检测结果表明,这3株单抗与K205R重组蛋白有良好的反应性和特异性。上述结果表明,本研究制备的这3株杂交瘤细胞株能够稳定分泌抗体,分泌的抗体特异性高,为非洲猪瘟诊断技术的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 非洲猪瘟病毒 K205R蛋白 单克隆抗体
蓝舌病毒NS2蛋白的抗体制备及鉴定 预览
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作者 张国芮 独军政 +6 位作者 高闪电 田占成 Darien Kheder Ali Mohamed 康棣 郭艳妮 薛慧文 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第2期12-18,共7页
本研究参考GenBank中蓝舌病毒16型(Bluetongue virus serotype16,BTV-16)标准株RSAvvvv的序列,人工合成编码BTV-16NS2蛋白的S8基因,将其亚克隆至原核表达载体pPRoEx-HTb中,构建重组表达质粒pPro-NS2,并转化大肠杆菌BL21进行IPTG诱导表达... 本研究参考GenBank中蓝舌病毒16型(Bluetongue virus serotype16,BTV-16)标准株RSAvvvv的序列,人工合成编码BTV-16NS2蛋白的S8基因,将其亚克隆至原核表达载体pPRoEx-HTb中,构建重组表达质粒pPro-NS2,并转化大肠杆菌BL21进行IPTG诱导表达,并进行可溶性分析。SDS-PAGE结果显示,表达的rNS2蛋白主要以包涵体的形式存在于菌体中。利用组氨酸标签纯化树脂获得了高纯度的NS2蛋白,免疫新西兰白兔制备抗NS2蛋白的多克隆抗体。Westernblot结果显示,制备的抗NS2蛋白多克隆抗体不仅可与重组表达的rNS2蛋白反应,而且可与BTV感染细胞后的天然NS2蛋白反应。间接免疫荧光结果显示,该抗体也可与BTV感染C6/36细胞中的天然NS2蛋白反应,且发现NS2大量分布于C6/36细胞的胞质中。本研究所制备的NS2蛋白的多克隆抗体具有很好的反应性和特异性,为进一步研究NS2蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 蓝舌病毒 NS2蛋白 多克隆抗体 鉴定
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余吾煤业高强度立体式瓦斯综合抽放技术 预览
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作者 《现代矿业》 CAS 2019年第4期201-202,共2页
随着现代煤矿开采深度持续增加,传统风排方法无法有效解决瓦斯超限问题。以余吾煤业某工作面为例,通过分析该工作面瓦斯涌出规律,采用高强度立体式瓦斯综合抽放技术进行瓦斯治理,取得了较好效果,可供类似矿山参考。
关键词 深部开采 瓦斯超限 瓦斯涌出规律 瓦斯抽放
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Φ800/650棒材精轧线14H减速机故障诊断实践 预览
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作者 王旭升 《设备管理与维修》 2019年第1期158-160,共3页
应用设备振动诊断技术中的窄带包络解调法,准确监测了Φ800/650 mm棒材精轧线14H减速机的运行状态,确定了故障部位及原因。说明设备振动诊断技术在精轧生产线设备管理中的可行性。
关键词 振动诊断技术 频谱 包络解调技术
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基于BP神经网络的故障诊断模型研究 预览
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作者 冯玉芳 卢厚清 +1 位作者 曹林 《计算机工程与应用》 CSCD 北大核心 2019年第6期24-30,共7页
滚动轴承是旋转机械中最常用的部件之一。滚动轴承很容易损坏,而它的工作条件通常比较复杂,很难对其故障进行准确判断。为了提高滚动轴承故障诊断的有效性,构建了一种新的基于改进量子蜂群算法和BP神经网络的滚动轴承故障诊断模型(IQABC... 滚动轴承是旋转机械中最常用的部件之一。滚动轴承很容易损坏,而它的工作条件通常比较复杂,很难对其故障进行准确判断。为了提高滚动轴承故障诊断的有效性,构建了一种新的基于改进量子蜂群算法和BP神经网络的滚动轴承故障诊断模型(IQABC-BP)。首先针对量子蜂群算法在种群初始化和进化过程中存在的问题,提出了一种改进量子蜂群算法,然后利用改进量子蜂群算法对BP神经网络的初始权值、阈值和隐含层单元数进行优化,建立了一种具有超并行超高速的基于改进量子蜂群算法的BP神经网络模型,并应用于滚动轴承的故障诊断中。实验结果表明,IQABC-BP模型收敛速度更快,故障诊断效果更好,具有很好的应用价值。 展开更多
关键词 BP神经网络 量子蜂群算法 故障诊断
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环介导等温扩增微流控检测方法研究进展 预览
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作者 汤小玉 +1 位作者 薛强 邹明强 《检验检疫学刊》 2018年第3期50-53,共4页
环介导等温扩增技术是由日本荣研株式会社的Notomi等人提出的新型核酸扩增方法,在等温条件(60-65℃)下可高效、快速、特异性地扩增靶序列。微流控分析是微全分析系统的核心关键技术,将具有微小可控、功能集成的微流控芯片分析技术与... 环介导等温扩增技术是由日本荣研株式会社的Notomi等人提出的新型核酸扩增方法,在等温条件(60-65℃)下可高效、快速、特异性地扩增靶序列。微流控分析是微全分析系统的核心关键技术,将具有微小可控、功能集成的微流控芯片分析技术与环介导等温核酸扩增技术相结合,发展快速、灵敏、特异和适合即时检测的生物分子分析技术,可为我国食品安全、重大传染病防控、肿瘤及遗传性疾病等快速检测及诊断提供强有力的技术保障。 展开更多
关键词 环介导等温扩增 微流控芯片 快速检测
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吕氏泰勒虫TlSP重组亚单位疫苗免疫保护效果的评估
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作者 韩元 郭鹏飞 +9 位作者 李禤 刘军龙 刘爱红 王锦明 关贵全 刘志杰 刘光远 李有全 罗建勋 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第8期939-945,共7页
为了评价吕氏泰勒虫表面蛋白Tl SP(Theileria luwenshuni surface protein)的免疫保护效果,分别用150 g/只和300 g/只乳化后的Tl SP蛋白免疫试验Ⅰ组和Ⅱ组绵羊,对照组为等量PBS,每组5只。二免后第14天,每只绵羊用50只青海血蜱饥饿成... 为了评价吕氏泰勒虫表面蛋白Tl SP(Theileria luwenshuni surface protein)的免疫保护效果,分别用150 g/只和300 g/只乳化后的Tl SP蛋白免疫试验Ⅰ组和Ⅱ组绵羊,对照组为等量PBS,每组5只。二免后第14天,每只绵羊用50只青海血蜱饥饿成蜱进行攻蜱试验。结果显示,对照组绵羊攻蜱后出现跛行、体温2次升高和淋巴结肿大等症状,发病率为100%,死亡率为40%,染虫率在2.23%~3.50%之间;试验Ⅰ组和Ⅱ组绵羊免疫后产生的最高抗体效价分别为1∶102 400和1∶25 600,发病率均为60%,表现轻度临床症状而未发生死亡,染虫率在1.23%~1.89%之间。上述结果证实,制备的Tl SP重组亚单位疫苗在抗泰勒虫感染上具有良好的免疫保护效果,为进一步开展羊泰勒虫病亚单位疫苗的研制奠定了实验基础。 展开更多
关键词 吕氏泰勒虫 TL SP蛋白 染虫率 抗体水平 免疫保护效果
犊牛粪便中益生菌的分离与鉴定 预览
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作者 韩元 李禤 +6 位作者 郭鹏飞 关贵全 刘军龙 刘爱红 罗建勋 李有全 《中国奶牛》 2018年第7期21-24,共4页
为了筛选出能够抑制犊牛腹泻的益生菌株,本研究采集了20份健康犊牛新鲜粪便,采用厌氧培养、形态学观察以及分子鉴定技术,初步分离得到3株革兰氏阳性杆菌(A1、A2和A3)和4株革兰氏阳性球菌(B1、B2、B3和B4),并对这些菌株进行分子鉴定... 为了筛选出能够抑制犊牛腹泻的益生菌株,本研究采集了20份健康犊牛新鲜粪便,采用厌氧培养、形态学观察以及分子鉴定技术,初步分离得到3株革兰氏阳性杆菌(A1、A2和A3)和4株革兰氏阳性球菌(B1、B2、B3和B4),并对这些菌株进行分子鉴定。鉴定结果表明:A1和A2均为罗伊乳杆菌,A3为黏膜乳杆菌;B1为坚强肠球菌,B2为海氏肠球菌,B3和B4均为屎肠球菌。本研究为防治犊牛腹泻提供了更多的候选菌种。 展开更多
关键词 厌氧培养 犊牛粪便 益生菌
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真核表达的吕氏泰勒虫TlSP重组蛋白的免疫保护效果评价
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作者 郭鹏飞 韩元 +11 位作者 李禤 刘军龙 刘爱红 贾丹 魏永红 王锦明 关贵全 刘志杰 刘光远 罗建勋 李有全 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第12期1475-1481,共7页
为评价重组吕氏泰勒虫TlSP蛋白的免疫保护效果,以真核表达的不同浓度的重组TlSP抗原分别与等体积的佐剂MONTANIDE ISA 61 VG混合后充分乳化,于首次免疫后第0天和第21天分别免疫绵羊2次,于第35天进行攻蜱试验,通过观察在试验期间各组绵... 为评价重组吕氏泰勒虫TlSP蛋白的免疫保护效果,以真核表达的不同浓度的重组TlSP抗原分别与等体积的佐剂MONTANIDE ISA 61 VG混合后充分乳化,于首次免疫后第0天和第21天分别免疫绵羊2次,于第35天进行攻蜱试验,通过观察在试验期间各组绵羊的临床症状、红细胞染虫率和特异性抗体效价等来评价免疫保护效果;空白对照组以等量PBS代替抗原进行同步参照分析。结果显示,空白对照组的绵羊出现高热、贫血和淋巴结肿胀等典型的临床症状,而2个重组蛋白免疫组只出现轻微贫血。空白对照组、免疫A组(600 g)和免疫B组(300 g)分别于攻蜱后第20天、36天和29天最早发现血液中出现泰勒虫,最高染虫率分别为8.60%、1.12%和3.00%,特异性抗体最高效价分别为1∶8 192、1∶65 536和1∶32 768。TlSP重组亚单位疫苗能刺激特异性T淋巴细胞的增殖,提高机体IL-2、IL-4和IFN-γ的分泌水平。本研究为今后羊泰勒虫病的防治奠定了基础。 展开更多
关键词 吕氏泰勒虫 TlSP 免疫保护效果
蓝舌病毒VP5蛋白抗体的制备及鉴定
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作者 康棣 独军政 +6 位作者 高闪电 田占成 Darien Kheder ALI MOHAMED 郭艳妮 刘光远 罗建勋 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第6期671-677,共7页
本研究参考GenBank中蓝舌病毒16型(BTV-16)标准株RSAvvvv的序列,首先人工合成编码BTV-16 VP5蛋白的S6全长基因,并克隆于pUC-57载体。设计表达引物,利用PCR方法扩增N末端缺少编码第1~41位氨基酸的截短基因VP5Δ41aa,将其亚克隆到表达载... 本研究参考GenBank中蓝舌病毒16型(BTV-16)标准株RSAvvvv的序列,首先人工合成编码BTV-16 VP5蛋白的S6全长基因,并克隆于pUC-57载体。设计表达引物,利用PCR方法扩增N末端缺少编码第1~41位氨基酸的截短基因VP5Δ41aa,将其亚克隆到表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-VP5Δ41aa。将表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后,利用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE结果显示,重组蛋白VP5Δ41aa在大肠杆菌中大量表达。利用组氨酸标签纯化树脂获得了高纯度的VP5Δ41aa蛋白,用其3次免疫新西兰大白兔制备相应的抗血清,Western-blot检测显示,抗血清不仅可与重组表达的VP5Δ41aa蛋白反应,而且可与BTV感染细胞中的VP5蛋白反应。免疫荧光试验表明,该抗体也可与BTV感染C6/36细胞中具有天然构象的VP5蛋白反应。上述结果表明,本试验制备的VP5抗体将为深入研究VP5蛋白的生物学功能奠定基础。 展开更多
关键词 蓝舌病毒 VP5基因 原核表达 多克隆抗体 鉴定
牛支原体中国株的多位点序列分型 被引量:1
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作者 赵萍 王展慧 +5 位作者 陈胜利 郝华芳 张勇 储岳峰 刘永生 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期671-675,共5页
为了解中国牛支原体的流行趋势,本试验应用已经建立的牛支原体分型方法,将中国的15株牛支原体进行MI。ST分型,同时结合数据库中已有的11株中国株的ST型,分析牛支原体中国株的种群结构及进化关系。分型结果显示,15株分离株均获得一... 为了解中国牛支原体的流行趋势,本试验应用已经建立的牛支原体分型方法,将中国的15株牛支原体进行MI。ST分型,同时结合数据库中已有的11株中国株的ST型,分析牛支原体中国株的种群结构及进化关系。分型结果显示,15株分离株均获得一样的等位基因号及ST型;共计26株中国株分属于3个ST型,即R—ST10(16/26),R—ST33(9/26),RST34(1/26),而且彼此之间只有1个等位基因的差异,10型和33型之间的差异是rpoD基因,33型和34型之间的差异是danA基因;说明目前牛支原体中国株的种群结构相对单一,流行菌株相对稳定。 展开更多
关键词 牛支原体 多位点序列分型 种群结构
牛支原体黏附宿主细胞间接免疫荧光检测方法的建立
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作者 李明霞 陈胜利 +6 位作者 郝华芳 赵萍 季文恒 王展慧 刘永生 储岳峰 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第7期1310-1314,1345共6页
牛支原体可引起牛肺炎、乳腺炎和关节炎等多系统炎症,关于其黏附宿主细胞的机理有待深入研究。本试验以牛支原体08M株和牛肾细胞MDBK为研究对象,抗牛支原体多克隆抗体为一抗,FITC标记的兔抗牛IgG为二抗,通过优化牛支原体黏附滴度、... 牛支原体可引起牛肺炎、乳腺炎和关节炎等多系统炎症,关于其黏附宿主细胞的机理有待深入研究。本试验以牛支原体08M株和牛肾细胞MDBK为研究对象,抗牛支原体多克隆抗体为一抗,FITC标记的兔抗牛IgG为二抗,通过优化牛支原体黏附滴度、黏附时间及一抗、二抗工作浓度,建立牛支原体黏附宿主细胞的间接免疫荧光检测方法。最终确定牛支原体的最适黏附滴度为1×10^9CFU/mL,黏附时间为4h,一抗最适工作浓度为1:250,二抗最适工作浓度为1:250。本试验建立的间接免疫荧光方法可用于牛支原体黏附宿主细胞的检测,为牛支原体体外感染的检测及黏附机理的研究提供有效的技术手段。 展开更多
关键词 牛支原体 黏附 MDBK细胞 间接免疫荧光
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