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芽孢杆菌PB08次级代谢产物的分离与鉴定
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作者 郭木子 孙伊宁 +2 位作者 华奇 黄升东 白皎 《沈阳药科大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第7期539-542,573共5页
目的对土壤细菌Bacillus subtilis PB08的次级代谢产物进行研究。方法利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、ODS开放柱色谱、高效液相色谱等分离手段对所选定的流分进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据对分离得到的化合物进行鉴定。结果共分离... 目的对土壤细菌Bacillus subtilis PB08的次级代谢产物进行研究。方法利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、ODS开放柱色谱、高效液相色谱等分离手段对所选定的流分进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据对分离得到的化合物进行鉴定。结果共分离得到8个化合物,分别鉴定为:AI-77-C(1)、AI-77-F(2)、AI-77-H(3)、bacillcoumacin C(4)、amicoumacin B(5)、环(亮-丙)二肽[cyclo-(Leu-Ala),6]、环(羟脯-苯丙)二肽[cyclo-(Hyp-Phe),7]、环(羟脯-亮)二肽[cyclo-(Hyp-Leu),8]。结论化合物1-5为amicoumacin类异香豆素,化合物6-8为环二肽类化合物。其中化合物4,6-8为首次从该种细菌中分离得到。 展开更多
关键词 BACILLUS SUBTILIS 次级代谢产物 结构鉴定
培养调控激活卡伍尔氏链霉菌NA4产frontalamides类物质的研究 预览
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作者 张盈 华奇 +1 位作者 于素亚 胡江春 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2018年第2期29-36,共8页
微生物(尤其是链霉菌)是农用抗生素的主要来源之一。前期基因筛选发现卡沃尔氏链霉菌NA4具有产生多种PKS和NRPS类型化合物的潜能,但只分离到PKS I型的抗植物病原真菌的物质bafilomycins,为了挖掘更多的抗真菌先导化合物,采用Hiseq250... 微生物(尤其是链霉菌)是农用抗生素的主要来源之一。前期基因筛选发现卡沃尔氏链霉菌NA4具有产生多种PKS和NRPS类型化合物的潜能,但只分离到PKS I型的抗植物病原真菌的物质bafilomycins,为了挖掘更多的抗真菌先导化合物,采用Hiseq2500高通量测序技术获得其基因组扫描图,经生物信息学分析和文献检索发现,其除了能产生bafilomycins,还具有产生polycyclic tetramate macrolactam(PTM)、alkylresorcinol和valinomycin类型抗真菌活性物质的潜力。为了激活这些基因簇,采用基于OSMAC策略中的培养调控为手段,通过改变培养基碳氮源组分,添加氨基酸前体及不同金属离子,使用活性追踪和HPLC-UV发现用麸皮替代NM2培养基中甘油的培养条件能激活PTM类型frontalamides合成基因簇,经LC-MS分析有7个主要的化合物是PTM类化合物,其中的3个可能为新化合物。通过培养调控激活了PTM基因簇,为新型PTM类化合物进一步的分离鉴定提供参考。 展开更多
关键词 卡伍尔氏链霉菌 POLYCYCLIC tetramate macrolactam Frontalamides 培养调控 基因组挖掘
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雷公藤内生真菌Pestalotiopsis disseminata次级代谢产物研究 预览
3
作者 李博 王宇 +4 位作者 华奇 梁洪玥 赵楠 陈再兴 刘涛 《化学与生物工程》 CAS 2016年第12期27-30,共4页
采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱及PHPLC等手段对雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)内生真菌广布拟盘多毛孢(Pestalotiopsis disseminata)的发酵次级代谢产物进行分离纯化,通过理化性质及波谱学数据分析对化合物结... 采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱及PHPLC等手段对雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)内生真菌广布拟盘多毛孢(Pestalotiopsis disseminata)的发酵次级代谢产物进行分离纯化,通过理化性质及波谱学数据分析对化合物结构进行鉴定。结果表明,从内生真菌Pestalotiopsis disseminata的次级代谢产物中共分离并鉴定了7个单体化合物,分别为7-羟基-5-甲氧基-4,6-二甲基苯酞(Ⅰ)、腺苷(Ⅱ)、尿苷(Ⅲ)、邻苯二甲酸二正丁酯(Ⅳ)、邻苯二甲酸二异丁酯(Ⅴ)、1,1′-二(1,1′-羧基乙基)醚(Ⅵ)、赤藓醇(Ⅶ),其中化合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ、Ⅶ为首次从该属真菌中分离得到,化合物Ⅰ、Ⅴ为首次从该种真菌中分离得到。 展开更多
关键词 雷公藤 内生真菌 广布拟盘多毛孢 次级代谢产物
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深海来源链霉菌12A35产生新抗生素lobophorinJ的分离和鉴定 预览
4
作者 宋春风 华奇 胡江春 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期721-727,784共8页
目的从分离自中国南海深海沉积物的链霉菌12A35中分离和鉴定lobophorins类抗菌活性产物。方法采用活性导向的分离方法,利用大孔吸附树脂、正相硅胶柱色谱、反相ODS柱色谱和半制备高效液相色谱进行活性产物的分离纯化;使用。D—NMR和HR... 目的从分离自中国南海深海沉积物的链霉菌12A35中分离和鉴定lobophorins类抗菌活性产物。方法采用活性导向的分离方法,利用大孔吸附树脂、正相硅胶柱色谱、反相ODS柱色谱和半制备高效液相色谱进行活性产物的分离纯化;使用。D—NMR和HR-ESI—MS进行结构鉴定。结果分离和鉴定了一个新的spirotetronates家族抗生素,命名为lobophorinJ。结论深海链霉菌12A35产生新的抗生素lobophorinJ。 展开更多
关键词 链霉菌属 海洋放线菌 特窗酸类螺环化合物:Lobophorins抗菌活性
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百合枯萎病拮抗细菌的筛选、鉴定及其抑菌物质研究 被引量:13
5
作者 武志江 李业燕 +4 位作者 王亚军 杨柳 华奇 谢忠奎 胡江春 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1307-1320,共14页
【目的】筛选对百合枯萎病具有抑菌活性的拮抗细菌,对其抑菌活性物质进行初步分离纯化分析。【方法】以强致病力的百合尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)为靶菌,采用系列稀释法和平板对峙法初筛拮抗细菌,并通过产铁载体能力、水解酶活... 【目的】筛选对百合枯萎病具有抑菌活性的拮抗细菌,对其抑菌活性物质进行初步分离纯化分析。【方法】以强致病力的百合尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)为靶菌,采用系列稀释法和平板对峙法初筛拮抗细菌,并通过产铁载体能力、水解酶活性、土壤定殖力等多种生防特性指标进行复筛,结合形态学特征、生理生化指标和16S r RNA基因序列比对鉴定其分类地位;利用百合尖孢镰刀菌作为靶菌进行活性追踪,结合酸沉淀、快速柱色谱、HPLC等分离纯化手段,对菌发酵液中的抑菌活性物质进行纯化分析。【结果】在64株百合根际细菌和386株海洋细菌中进行初筛,得到9株对百合镰刀菌具有较强拮抗活性的菌株,最后筛选了1株拮抗活性较强且产铁载体能力和水解酶活性、土壤定殖能力较高的菌株11B91,鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),其抑菌活性物质初步推测可能为Iturin和Fengycin脂肽类化合物。【结论】菌株11B91在百合枯萎病的生物防治中具有潜在的应用价值,证实海洋来源的微生物也具有防治陆地植物病原菌的潜力,为植物病害的防治拓宽了思路。 展开更多
关键词 尖孢镰刀菌 平板对峙法 铁载体 土壤定殖力 脂肽
不同年生的辽宁GAP基地龙胆根际土壤真菌变化特征 被引量:1
6
作者 葛彩艳 段宇 +3 位作者 韩威 华奇 吴小兰 刘晓秋 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期152-155,共4页
目的研究龙胆根际土壤真菌在不同月份、不同年限变化的特征和趋势,为寻找防治病害的有益真菌种类奠定基础。方法对辽宁省清原县英额门镇龙胆GAP基地6~9月的二年生和三年生龙胆根际土壤样品进行真菌分离、纯化及分子生物学鉴定。结果鉴... 目的研究龙胆根际土壤真菌在不同月份、不同年限变化的特征和趋势,为寻找防治病害的有益真菌种类奠定基础。方法对辽宁省清原县英额门镇龙胆GAP基地6~9月的二年生和三年生龙胆根际土壤样品进行真菌分离、纯化及分子生物学鉴定。结果鉴定11个属,分属于28种真菌,分别为青霉属(Penicillium)9种,木霉属(Trichoderma)4种,镰刀菌属(Fusarium)4种,毛霉属(Mucor)3种,Plectosphaerella2种,毛壳属(Chaetomium)、肉座菌属(Hypocrea)、小球腔菌属(Leptosphaeria)、Gongronella、Simplicillium和Myrmecridium各1种。结论随生长年限增加,其中真菌属增多,真菌总数增多,有益真菌总数减少,有害真菌总数增多。说明根际土壤微生物种群平衡遭到破坏,可能是植物病害原因之一。 展开更多
关键词 龙胆 根际土壤 真菌 变化特征
杉木人工林土壤质量演变过程中土壤微生物群落结构变化 预览 被引量:48
7
作者 刘丽 徐明恺 +4 位作者 汪思龙 张倩茹 王楠 华奇 胡江春 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第15期4692-4706,共15页
以中国科学院会同森林生态站自然林、杉木连栽林和杉木阔叶树混交林地土壤为研究对象,采用PCR-DGGE、DNA-sequencing和主成分分析(PCA)等方法分析土壤微生物群落结构变化及其与土壤质量变化之间的关系。结果表明,该地区杉木人工林土... 以中国科学院会同森林生态站自然林、杉木连栽林和杉木阔叶树混交林地土壤为研究对象,采用PCR-DGGE、DNA-sequencing和主成分分析(PCA)等方法分析土壤微生物群落结构变化及其与土壤质量变化之间的关系。结果表明,该地区杉木人工林土壤中细菌优势种群为α-、β-、γ-proteobacteria和Cytophaga-Flexibacter-Bacterioides(CFB)类群;真菌优势种群为子囊菌(Ascomycetes)和担子菌(Basidiomycetes)亚门的种属。杉木人工林替代自然林后,土壤细菌多样性指数显著降低,且随连栽代数增加呈持续降低趋势;杉木人工林土壤中与Pedobacter cryoconitis亲缘关系密切的细菌种群消失,出现与Xanthomonas sp.和Rhodanobacter sp.亲缘关系密切的细菌种群。土壤真菌群落结构的变化与细菌相反,杉木人工林替代自然林后并不断连栽时,土壤真菌多样性指数呈现上升的趋势,自然林土壤中优势真菌种群在杉木三代林中消失。杉木与火力楠或桤木混交后土壤细菌和真菌种群结构与自然林类似。土壤细菌多样性指数与土壤总有机碳、全氮、可溶性有机碳、铵态氮、速效磷、速效钾含量以及土壤pH值呈显著正相关关系(P〈0.05)。土壤真菌多样性指数仅与土壤碳氮比呈显著正相关关系,而与土壤pH值呈显著负相关关系。杉木林土壤质量变化对土壤细菌和真菌优势种群有较大影响,细菌Burkholderia sp.、Pedobacter sp.、Xanthomonas sp.和真菌Sclerotinia sclerotiorum、Mycosphaerella cannabis可能是引起土壤质量变化的关键种群。 展开更多
关键词 杉木人工林 微生物群落 DGGE PCA 土壤质量
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海洋微生物抗菌脂肽及新生物农药研发 预览 被引量:7
8
作者 胡江春 王楠 +1 位作者 华奇 王书锦 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2013年第6期1-5,共5页
近年来,微生物脂肽作为生物农药的研究与应用,在国内外得到了广泛重视,成为今后生物农药发展的一个重要方向。从不同生境分离获得多批海洋微生物,通过筛选抗植物病原真菌活性强的菌株,发酵、分离、纯化及鉴定其代谢产物,从3种芽... 近年来,微生物脂肽作为生物农药的研究与应用,在国内外得到了广泛重视,成为今后生物农药发展的一个重要方向。从不同生境分离获得多批海洋微生物,通过筛选抗植物病原真菌活性强的菌株,发酵、分离、纯化及鉴定其代谢产物,从3种芽胞杆菌中发现了6个新的抗菌脂肽,属于iturins和fengycin类化合物。芽胞杆菌的芽胞及脂肽可研发防治植物真菌病害新生物农药。 展开更多
关键词 抗菌脂肽 海洋微生物 芽胞杆菌 生物农药
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深海放线菌08A4的鉴定及其抗真菌活性产物研究 预览 被引量:5
9
作者 于素亚 华奇 +2 位作者 胡江春 王楠 王书锦 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第5期1-5,共5页
从南海深海分离得到1株放线菌08A4,其发酵产物具有抗植物病原真菌活性,分离纯化得到3个化合物,通过1H-NMR初步鉴定为抗霉素类物质。结合形态学鉴定方法与16S rDNA序列分析方法,鉴定该菌株为微白黄链霉菌(Streptomyces albidoflavus)。
关键词 深海放线菌 微白黄链霉菌 抗霉素
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海洋细菌B177的鉴定及活性物质研究 预览 被引量:4
10
作者 张爽 华奇 +2 位作者 任大明 胡江春 王书锦 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期 329-334,共6页
运用卤虫和玉米纹枯病菌为筛选靶标,从中国南海海泥的94株细菌中分离筛选到1株具有杀虫、抗菌活性的海洋细菌B177菌株。卤虫和玉米纹枯病菌筛选模型测定结果表明,当PSA为发酵液时,LD50值最低,为1.3μg·mL^-1;当滤纸片加20μL... 运用卤虫和玉米纹枯病菌为筛选靶标,从中国南海海泥的94株细菌中分离筛选到1株具有杀虫、抗菌活性的海洋细菌B177菌株。卤虫和玉米纹枯病菌筛选模型测定结果表明,当PSA为发酵液时,LD50值最低,为1.3μg·mL^-1;当滤纸片加20μL(5mg·mL^-1浓度)发酵粗提取物溶液时,抗玉米纹枯病菌抑菌圈直径可达26mm。对B177的形态特征、培养特征、生理生化特征、16SrDNA序列进行了系统的研究,鉴定其为Micrococcus yunnanensis,其16S rDNA GenBank登录号为HQ439904。对其活性物质进行初步分离纯化研究。 展开更多
关键词 云南微球菌 B177 玉米纹枯病菌 卤虫 系统发育树
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转化牛蒡子苷牛蒡内生菌的分离及L2菌株的鉴定 被引量:4
11
作者 张淼 华奇 +3 位作者 胡江春 窦德强 王书锦 康廷国 《药物生物技术》 CAS CSCD 2010年第2期111-116,共6页
从牛蒡(ArctiumlappaL.)的根、茎、叶、总苞、种子中分离纯化了57株内生菌。以牛蒡子粉为底物,采用高效液相色谱法定量测定转化培养液中牛蒡子苷和牛蒡子苷元的含量,筛选得到6株转化牛蒡子苷的内生菌。其中L2的转化率最高,可达76... 从牛蒡(ArctiumlappaL.)的根、茎、叶、总苞、种子中分离纯化了57株内生菌。以牛蒡子粉为底物,采用高效液相色谱法定量测定转化培养液中牛蒡子苷和牛蒡子苷元的含量,筛选得到6株转化牛蒡子苷的内生菌。其中L2的转化率最高,可达76.9%。利用LC—MS方法对其转化产物牛蒡子苷元进行了验证。L2经过形态观察、生理生化特征分析及16SrDNA序列分析,鉴定为氧化微杆菌(Microbacteriumaxydans)。本试验结果为探索牛蒡内生菌转化牛蒡子苷成主要药效成分牛蒡子苷元技术提供了科学依据。 展开更多
关键词 牛蒡子苷 牛蒡子苷元 微生物转化 内生菌 鉴定 氧化微杆菌
右旋磷霉素生物转化菌株的筛选和鉴定 预览 被引量:3
12
作者 胡芳欣 胡江春 +2 位作者 徐慧 华奇 徐杨 《生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第2期 21-24,共4页
以右旋磷霉素为唯一碳源进行固体初筛和液体复筛,获得生物转化能力较强的32株菌;再以杀卤虫模型筛选具有杀虫活性物质的菌株,得到一株具有较强杀虫活性的真菌FM94,通过对该菌的形态特征观察及ITS序列分析,鉴定为腾仓赤霉(Gibberella fu... 以右旋磷霉素为唯一碳源进行固体初筛和液体复筛,获得生物转化能力较强的32株菌;再以杀卤虫模型筛选具有杀虫活性物质的菌株,得到一株具有较强杀虫活性的真菌FM94,通过对该菌的形态特征观察及ITS序列分析,鉴定为腾仓赤霉(Gibberella fujikuroi);初步考察其生物转化条件,结果表明在以右旋磷霉素为唯一碳源,初始pH值为3.5,转化培养第4d时转化产物杀卤虫活性最高。 展开更多
关键词 右旋磷霉素 生物转化 筛选 杀虫活性
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几种PCR方法在克隆鸭肠炎病毒未知基因中的应用 被引量:1
13
作者 华奇 曹瑞兵 +4 位作者 陈溥言 刘磊 王书锦 光炎 胡江春 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1842-1848,共7页
以DEV基因组DNA为模板,用简并PCR、改良Targeted gene walkingPCR、改良的热不对称交错PCR和Long—PCR,获得了5350bp、11083bp和2905bp3段DEV未知基因片段,DNA序列分析发现包含9个开放阅读框,将这些序列提交GenBank分别获得的登录... 以DEV基因组DNA为模板,用简并PCR、改良Targeted gene walkingPCR、改良的热不对称交错PCR和Long—PCR,获得了5350bp、11083bp和2905bp3段DEV未知基因片段,DNA序列分析发现包含9个开放阅读框,将这些序列提交GenBank分别获得的登录号为:EF554396~EF554403。结果表明,多种PCR方法联合使用可以高效的实现对鸭肠炎病毒未知基因的克隆。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 未知基因 简并PCR TARGETED gene WALKING PCR 热不对称交错PCR Long—PCR
牛蒡根际土壤致害菌Fusarium solani分离鉴定 预览 被引量:2
14
作者 华奇 张森 +4 位作者 刘丽 王楠 胡江春 窦德强 王书锦 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期 46-50,共5页
目的:探索牛蒡根际镰刀菌与牛蒡之间的相互关系。方法:从全国30个地区采集牛蒡根际土壤样品,进行了根际土壤真菌数量和群落的生态学研究,测定镰刀菌发酵液对牛蒡幼苗和牛蒡子萌发的影响,并对其中毒性最强的两株镰刀菌F130和F131进行... 目的:探索牛蒡根际镰刀菌与牛蒡之间的相互关系。方法:从全国30个地区采集牛蒡根际土壤样品,进行了根际土壤真菌数量和群落的生态学研究,测定镰刀菌发酵液对牛蒡幼苗和牛蒡子萌发的影响,并对其中毒性最强的两株镰刀菌F130和F131进行了形态学和分子生物学的鉴定。结果:镰刀菌为牛蒡根际的最优势类群,贡献率为34.297%,其次为木霉,贡献率为22.519%;绝大多数镰刀菌对牛蒡有明显的毒性作用,其中F130和F131被鉴定为Fusarium solani。结论:Fusarium solani是牛蒡根际土壤中的致害菌。 展开更多
关键词 牛蒡 根际真菌 微生物区系 镰刀菌
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产纤溶酶海洋微生物B5815菌株的筛选及鉴定 预览 被引量:2
15
作者 李占强 胡江春 +1 位作者 华奇 王书锦 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第6期 41-44,共4页
采用酪素平板、纤维蛋白平板的初筛和摇瓶复筛的方法从205株海洋微生物中筛选得到4株纤溶酶活性较强的菌株,其中菌株B5815产纤溶酶活性最高,平均达258 IU/mL。通过对菌株B5815的形态特征、生理生化特性的测定及16S rDNA序列分析,综合鉴... 采用酪素平板、纤维蛋白平板的初筛和摇瓶复筛的方法从205株海洋微生物中筛选得到4株纤溶酶活性较强的菌株,其中菌株B5815产纤溶酶活性最高,平均达258 IU/mL。通过对菌株B5815的形态特征、生理生化特性的测定及16S rDNA序列分析,综合鉴定其为短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)。 展开更多
关键词 短小芽胞杆菌 纤溶酶 海洋微生物 鉴定
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含LoxP位点和EGFP的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体的构建 预览 被引量:4
16
作者 华奇 刘磊 +5 位作者 曹瑞兵 魏凡华 袁立科 李娟 孙海亮 光炎 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第2期 8-12,共5页
提取鸭瘟病毒(DPV)疫苗株基因组DNA为PCR扩增模板,并根据GenBank已发表的DPV UL区UL24、UL23、UL22基因序列,选择保守序列设计了两对引物,分别扩增出位于UL23(TK)两侧的可用于同源重组的左臂片段(L)和右臂片段(R),L包括部分UL2... 提取鸭瘟病毒(DPV)疫苗株基因组DNA为PCR扩增模板,并根据GenBank已发表的DPV UL区UL24、UL23、UL22基因序列,选择保守序列设计了两对引物,分别扩增出位于UL23(TK)两侧的可用于同源重组的左臂片段(L)和右臂片段(R),L包括部分UL24、部分TK,R包括部分TK及部分UL22,L和R的拼接片段中TK基因内部缺失468个核苷酸.将L片段和R片段克隆于pBluescript M13-载体上,获得了pSKLR;再将含2个LoxP位点的表达绿色荧光蛋白的基因表达盒插入pSKLR的L片段和R片段之间构成转移载体pSKLR-EGEP-LoxP.大量提取pSKLR-EGEP-LoxP质粒,用脂质体转染鸭胚成纤维细胞,24 h后蛋白被正确表达,表明含LoxP位点的表达EGFP的鸭瘟病毒TK基因缺失的重组转移载体被成功构建. 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 EGFP Cre/LoxP TK基因 转移载体
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鸭瘟病毒gB蛋白N端主要抗原域的表达及间接ELISA检测 预览 被引量:9
17
作者 华奇 曹瑞兵 +4 位作者 刘磊 孙海亮 姬向波 陈勇军 陈溥言 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期 98-102,共5页
在分析鸭瘟病毒gB蛋白抗原性的基础上,设计一对引物克隆gB蛋白N端抗原性较好的抗原域编码基因。将克隆的基因定向插入pET-32a的EcoRI和HindHI之间,构建了gB蛋白主要抗原域原核表达载体pET-gB1。将pET-gB1质粒转化BL(21)宿主菌后,... 在分析鸭瘟病毒gB蛋白抗原性的基础上,设计一对引物克隆gB蛋白N端抗原性较好的抗原域编码基因。将克隆的基因定向插入pET-32a的EcoRI和HindHI之间,构建了gB蛋白主要抗原域原核表达载体pET-gB1。将pET-gB1质粒转化BL(21)宿主菌后,对培养和表达条件进行了优化,实现了DPVgB蛋白主要抗原域的高效表达。免疫印迹试验表明获得的表达产物具有良好的反应原性。应用His-Bind亲和层析柱纯化重组DPVgB蛋白,以纯化的重组gBl蛋白作为检测抗原,初步建立了检测鸭瘟病毒抗体的igBl-ELISA。结果表明,抗原的最佳包被浓度为6.5gg/mL,血清的最佳稀释度为1:80,阳性标准初步定为:待检血清019490〉0.4,且待检血清OD49d阴性血清019490〉2。应用igB1-ELISA对鸭血清样品进行检测,结果表明igB1-ELISA与全病毒包被的iDPV-ELISA符合率达到95.6%。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 gB蛋白 原核表达 抗原域 间接ELISA
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鸭瘟病毒gB蛋白N端抗原域的高效表达及其免疫特性 预览 被引量:3
18
作者 华奇 曹瑞兵 +5 位作者 王楠 刘丽 刘磊 胡江春 陈溥言 王书锦 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 2008年第5期 743-747,共5页
在分析鸭瘟病毒(Duck plague virus, DPV )gB蛋白抗原性的基础上,设计1对引物克隆gB蛋白N端抗原性较好的抗原域编码基因,克隆到表达载体pET32a中,构建了原核表达质粒pET-gB1。将pET-gB1转化到感受态大肠杆菌( Escherichia coli )... 在分析鸭瘟病毒(Duck plague virus, DPV )gB蛋白抗原性的基础上,设计1对引物克隆gB蛋白N端抗原性较好的抗原域编码基因,克隆到表达载体pET32a中,构建了原核表达质粒pET-gB1。将pET-gB1转化到感受态大肠杆菌( Escherichia coli ) BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约42.4kD的目的蛋白以包涵体形式表达。Western blot分析发现,表达产物与抗鸭瘟的鼠阳性血清发生特异性反应。将包涵体溶解于8mol/L的尿素中,利用His·Bind试剂盒获得纯化的蛋白,将纯化的蛋白皮下注射免疫小鼠,间接ELISA法测得抗体的效价,MTT法检测免疫小鼠的T淋巴细胞增殖反应能力。结果说明,该融合蛋白能够诱导机体产生较强的体液免疫和细胞免疫。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 糖蛋白B 原核表达 抗原域 免疫原性
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猪圆环病毒Ⅱ型DT株的分离鉴定及动物模型建立 预览 被引量:1
19
作者 孙海亮 曹瑞兵 +3 位作者 陈溥言 魏威 华奇 刘磊 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第5期 6-12,共7页
应用PCR方法对江苏省东台市某猪场送检的一头无名高热病死猪的腹股沟淋巴结及肺脏病料进行检测.结果表明:该病料中存在PCV2;病料转染PK-15细胞,盲传3代后,IFA方法检测结果显示有明显的特异性荧光.利用设计的一对特异性引物对PCV2-DT株... 应用PCR方法对江苏省东台市某猪场送检的一头无名高热病死猪的腹股沟淋巴结及肺脏病料进行检测.结果表明:该病料中存在PCV2;病料转染PK-15细胞,盲传3代后,IFA方法检测结果显示有明显的特异性荧光.利用设计的一对特异性引物对PCV2-DT株(东台分离株)全长基因进行扩增,测序结果显示所扩增基因为PCV2全长基因,大小为1 767 bp,包括11个完整的开放阅读框(ORF).PCV2-DT分离株与其他20株PCV2分离株序列比较发现,核苷酸同源性都在95%以上,并与欧美株处于同一分支.PCV2-DTRep、Cap序列同国内分离的16株相比较,核苷酸序列同源性分别为97.5%~100%和94.2%~99.9%.氨基酸序列同源性分别为98.4%~99.7%和93.2%~99.6%.用PK-15细胞从病料中分离的细胞毒接种3头42日龄健康仔猪(血清学检测无PCV1、PPV、PRV等感染),于首次接毒后的第10天出现发热、咳嗽、水样腹泻等症状,食欲几乎废绝,出现了PM-WS症状,初步建立了PMWS动物模型. 展开更多
关键词 PCV2 分离 鉴定 动物模型
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鸭瘟病毒TK基因及其编码蛋白的生物信息学分析 预览 被引量:7
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作者 宋得华 华奇 +1 位作者 黎应胜 杨宇泽 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第31期 9935-9936,共2页
运用生物信息学方法,对鸭瘟病毒Ⅸ基因的基本元件和TK蛋白的理化性质、结构、功能进行分析。明确了TK基因启动子、转录起始位点、编码区、PolyA的位置;发现TK蛋白的二级结构以α螺旋为主,属于混合型蛋白,在结构和功能上与疱疹病毒... 运用生物信息学方法,对鸭瘟病毒Ⅸ基因的基本元件和TK蛋白的理化性质、结构、功能进行分析。明确了TK基因启动子、转录起始位点、编码区、PolyA的位置;发现TK蛋白的二级结构以α螺旋为主,属于混合型蛋白,在结构和功能上与疱疹病毒胸苷激酶高度相似。生物信息学分析结果说明,鸭瘟病毒TK蛋白具有疱疹病毒胸苷激酶的活性,鸭瘟病毒TK基因可能为鸭瘟病毒的非必需毒力基因。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 TK基因 TK蛋白 结构 功能 生物信息学分析
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