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杆状病毒表达EV71病毒样颗粒的装配、制备纯化与鉴定 被引量:7
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作者 曹蕾 伊瑶 +6 位作者 宋敬东 苗苗 孟庆玲 邱丰 贾志远 毕胜利 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期 201-206,共6页
将EV71 P1和3CD基因片段克隆入同一杆状病毒穿梭质粒Bacmid中,构建出重组杆状病毒表达质粒Bacmid-P1-3CD;脂质体介导其转染Sf9昆虫细胞获得共表达P1和3CD的重组杆状病毒(AcMNPV-P1-3CD)。用IFA和Western-blot法对表达产物进行鉴定... 将EV71 P1和3CD基因片段克隆入同一杆状病毒穿梭质粒Bacmid中,构建出重组杆状病毒表达质粒Bacmid-P1-3CD;脂质体介导其转染Sf9昆虫细胞获得共表达P1和3CD的重组杆状病毒(AcMNPV-P1-3CD)。用IFA和Western-blot法对表达产物进行鉴定分析。电镜结果显示P1经3CD切割装配成了大小约为27nm的类球形颗粒(即EV71 VLPs)。进一步分析影响杆状病毒表达系统的因素以对表达条件进行优化,结果显示MOI值和时间均可影响目的蛋白的表达,其中时间是主要因素。选择优化后条件利用无血清培养基对贴壁Sf9细胞在多层细胞培养器中进行VLPs的大量表达,密度梯度离心法纯化,SDS-PAGE结果可见三条大小约为39kD、34kD和26kD的VP1、VP0和VP3特异性条带。纯化后EV71 VLPs颗粒结构完好,为下一步EV71蛋白结构的基础研究和基因工程疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 杆状病毒 肠道病毒71型(EV71) 病毒样颗粒(VLPs) 制备 鉴定 纯化
华西与华北两地区某市戊型肝炎病毒对人群健康影响的研究 被引量:7
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作者 鲁波 张伟 《中国卫生检验杂志》 2009年第7期1549-1551,共3页
目的:探讨华西与华北两地戊型肝炎病毒对人群健康影响。方法:采集2个地区的1464份人血清样本采用HEV间接法酶联免疫法(ELISA)检测抗HEV-IgG和HEV-IgM感染指标,对IgM阳性血清进行HEV基因的提取和PCR扩增,进行感染HEV指标检测。结果... 目的:探讨华西与华北两地戊型肝炎病毒对人群健康影响。方法:采集2个地区的1464份人血清样本采用HEV间接法酶联免疫法(ELISA)检测抗HEV-IgG和HEV-IgM感染指标,对IgM阳性血清进行HEV基因的提取和PCR扩增,进行感染HEV指标检测。结果:华西某市HEV抗体阳性率为45.04%(373/828),华北某市HEV抗体阳性率为27.2%(173/636),P〈0.01;其中男性人群中HEV抗体阳性率为40.36%(400/991),女性人群中HEV抗体阳性率为30.87%(146/473),P〈0.01。在60岁以下年龄组,华西某市HEV-IgG阳性率高于华北某市,而两地在60岁以上年龄组人群中的HEV-IgG阳性率没有显著性差异。两市人群HEV-IgG阳性率随着年龄的增长而增高,表明男性人群HEV-IgG阳性率高于女性。结论:华西某市人群HEV感染率高于华北某市且感染率男性高于女性。 展开更多
关键词 戊型肝炎 血清学 酶联免疫吸附试验
我国戊型肝炎ELISA诊断试剂的质量比较 预览 被引量:8
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作者 江永珍 +1 位作者 鲁建 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期 59-61,共3页
目的 对戊型肝炎(戊肝)诊断试剂进行质量评价。方法 选择北京万泰生物药业(万泰),北京现代高达生物技术(高达),上海科华生物工程(科华),GeneLabs Diagnostic Inc(GeneLabs),和河南华美生物工程(华美)共5家公司生产的检... 目的 对戊型肝炎(戊肝)诊断试剂进行质量评价。方法 选择北京万泰生物药业(万泰),北京现代高达生物技术(高达),上海科华生物工程(科华),GeneLabs Diagnostic Inc(GeneLabs),和河南华美生物工程(华美)共5家公司生产的检测戊肝病毒够(HEV-IgG)抗体的ELISA试剂,分别检测戊肝诊断试剂参比品、可疑戊肝临床患者和正常人群血清HEV抗体。结果 对24份阳性和30份阴性参比品检测,以万泰试剂检测符合率最高,阳性和阴性符合率分别为95.83%(23/24)和96.67%(29/30),总符合率为96.30%,其次为高达试剂87.50%(21/24)和100%(30/30),总符合率为94.44%,华美试剂87.50%(21/24)和96.67%(29/30),总符合率92.59%,GeneLabs 66.67%(16/24)和100%(30/30),总符合率为85.18%,科华试剂45.83%(11/24)和100%(30/30),总符合率为75.93%。对42份可疑戊肝患者血清HEV抗体检测阳性率,高达试剂为100%(42),万泰和华美试剂均为97.62%(41),GeneLabs和科华试剂均为90.48%(38)。对230份正常人群HEV抗体检测阳性率,从高到低依次为万泰试剂31.74%(73),华美试剂为23.91%(55),高达试剂为17.39%(40),GeneLabs和科华试剂分别是7.83%(18)和3.48%(8)。结论 5家试剂检测急性期戊肝患者抗体阳性率均能达90%以上,具有很高的一致率,而应用于普通人群HEV感染的调查,其抗体阳性率从31.74%~3.48%不等。不同的试剂存在假阳性或和阳性漏检现象。依本室参比品和人群血清阳性率来看,万泰试剂检出率较高。 展开更多
关键词 肝炎 戊型 酶联免疫吸附测定 试剂盒 诊断 评价研究
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四川地区部分人群和与人接触密切的家畜禽戊型肝炎病毒感染的调查及基因分型的研究 被引量:6
4
作者 江永珍 鲁健 +3 位作者 张丽萍 刘青恋 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期468-471,共4页
目的了解四川地区人群和与人接触密切的家畜猪和鸡戊型肝炎(戊肝)病毒感染的分布及病毒基因分析。方法采用万泰生物药业的HEV EIA诊断试剂检测人群、猪和鸡血清中戊肝病毒(HEV)IgG抗体。采用逆转录套式PCR方法(RT-nPCR)检测猪胆... 目的了解四川地区人群和与人接触密切的家畜猪和鸡戊型肝炎(戊肝)病毒感染的分布及病毒基因分析。方法采用万泰生物药业的HEV EIA诊断试剂检测人群、猪和鸡血清中戊肝病毒(HEV)IgG抗体。采用逆转录套式PCR方法(RT-nPCR)检测猪胆汁和血清中戊肝病毒核酸,并对阳性产物进行纯化和部分核苷酸序列分析。结果学龄前儿童血清672份中有41份阳性,阳性率6.1%,成人血清661份中有280例阳性,阳性率42.36%,猪血清36份中有32份阳性,阳性率为88.89%,59份鸡血清HEV抗体均阴性。对15份HEV IgM抗体阳性的患者血清和54份猪胆汁进行RT-nPCR,从1份患者血清和3份猪胆汁扩增到戊肝病毒核酸,4株核苷酸序列之间同源性92.1%~98.6%,与GenBank HEV参考株ORF2相对应序列比较,核苷酸序列与Ch-T21(我国散发性急性肝炎人分离株HEV4B亚型)之间同源性最高占90.1%~96.9%。结论四川地区部分人群和与人接触密切的家畜猪均存在HEV感染,尤其是家畜猪感染率高达90%左右,从人和猪分离到的病毒株核苷酸同源性很高,均属于戊肝病毒基因4型。 展开更多
关键词 肝炎病毒 戊型 基因型 流行病学
表达丙型肝炎病毒NS3和Core融合蛋白基因的DNA疫苗免疫方案优化 被引量:5
5
作者 殷霄 鲁健 +7 位作者 谭文杰 邓瑶 管洁 王文 陈红 毕胜利 阮力 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期41-45,共5页
目的本研究旨在构建一种包含丙型肝炎病毒(HCV)保守区基因的新型DNA疫苗,并在小鼠模型中使用电转技术优化其免疫原性。方法首先,我们构建了包含HCV非结构蛋白NS3和核心蛋白Core部分基因序列的DNA疫苗,并证实了其表达;然后采用不... 目的本研究旨在构建一种包含丙型肝炎病毒(HCV)保守区基因的新型DNA疫苗,并在小鼠模型中使用电转技术优化其免疫原性。方法首先,我们构建了包含HCV非结构蛋白NS3和核心蛋白Core部分基因序列的DNA疫苗,并证实了其表达;然后采用不同的体内电转方式于第0、4周分别免疫BALB/c小鼠,比较分析不同免疫方案的体液免疫(特异性IgG与抗体亚类)与细胞免疫应答(IFN-γ ELISPOT)的效果。结果使用电转技术可显著增强新型DNA疫苗免疫原性,采用皮内注射加卡钳电极电转的方式产生最强NS3特异性T细胞免疫反应。结论包含HCV保守区基因的新型DNA疫苗可通过优化电转技术增强免疫应答效果。这为我们下一步优化HCVDNA疫苗的免疫方案提供了依据。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 DNA疫苗 体内电转
不同温度、时间、IPTG和菌种浓度对丁肝抗原蛋白表达量的影响 预览 被引量:4
6
作者 丁军颖 伊瑶 +4 位作者 卢学新 苏秋东 邱丰 毕胜利 《医学研究杂志》 2012年第5期31-34,共4页
目的确定以大肠杆菌表达丁肝抗原的最佳条件,为规模生产以求研发丁肝ELISA诊断试剂奠定基础。方法在不同温度、时间、IPTG和菌种浓度条件下,分别进行蛋白表达,取等体积样本进行SDS—PAGE电泳,经ImageLab软件分析,比较目的蛋白表达... 目的确定以大肠杆菌表达丁肝抗原的最佳条件,为规模生产以求研发丁肝ELISA诊断试剂奠定基础。方法在不同温度、时间、IPTG和菌种浓度条件下,分别进行蛋白表达,取等体积样本进行SDS—PAGE电泳,经ImageLab软件分析,比较目的蛋白表达量,确定最佳表达条件。结果在25℃、29°C、33°C和37%条件下,蛋白表达量无统计意义的差别;在添加IPTG后的1、2、3、4、5和6h,表达量无统计意义的差别;在以0.25、0.5、1、2和4mmol/LIPTG诱导时,表达量无统计意义的差别。当添加诱导剂前,菌种的OD600。值分别为1.236、0.772、0.542和0.384,目的蛋白表达量有显著意义的差别。以OD600值为1.236和0.772时,表达量最高,两者之间无统计意义的差别;OD600值为0.542时,表达量次之;OD600值为0.384时,表达量最低。结论温度、表达时间和IPTG浓度在一定范围内对丁肝抗原蛋白表达量无影响;菌种的浓度是影响蛋白表达量的决定性因素;当菌种浓度在OD600值约为0.7~1.2时,以0.25mmol/LIPTG在37℃,诱导表达1h为最佳表达条件。该条件下,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的41.5%。 展开更多
关键词 丁肝 基因工程 抗原 表达
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四种乙肝病毒表面抗原ELISA诊断试剂的评价 预览 被引量:5
7
作者 贾志远 余陶 +2 位作者 伊瑶 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期 384-386,共3页
目的 对四种国内乙肝病毒表面抗原诊断试剂进行评价。方法 用四种试剂分别对标准品和未知血清进行检测,用几种常用诊断试验评价方法对检测结果进行分析和比较。结果 四种试剂对标准血清的检测结果较好,A、B两种试剂的总符合率为100%... 目的 对四种国内乙肝病毒表面抗原诊断试剂进行评价。方法 用四种试剂分别对标准品和未知血清进行检测,用几种常用诊断试验评价方法对检测结果进行分析和比较。结果 四种试剂对标准血清的检测结果较好,A、B两种试剂的总符合率为100%,另两种的总符合率也在90%以上,其中B试剂有较好的精密性。δ值比较显示A和B两种试剂有较好的诊断特性。四种试剂在一定的抗原浓度范围内都有良好的线性关系。针对于未知样本的检测中,四种试剂与采用电发光法的罗氏诊断试剂有较好的一致性。结论 国内主要厂家的HBsAg ELISA诊断试剂具有较高的检测效能。在实际工作中,可以通过常用的诊断试剂筛选实验,经统计分析后筛选出较高效能诊断试剂用于检测。 展开更多
关键词 肝炎 乙型 肝炎表面抗原 乙型 评价 诊断试剂
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我国六省市(区)部分人群丙型肝炎病毒感染调查 被引量:4
8
作者 鲁健 蒋郁青 +5 位作者 赵洪兰 江永珍 张勇 王笑怡 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期 448-449,共2页
目的 了解我国健康人群丙型肝炎病毒感染现状.方法 采用北京万泰生物药业的HCV EIA诊断试剂检测人群血清丙型肝炎病毒(丙肝,HCV)IgG抗体.结果 六省市(区)人群血清共9 538份,HCV抗体阳性数37份,总阳性率为0.39%,其中北京人群阳性率0... 目的 了解我国健康人群丙型肝炎病毒感染现状.方法 采用北京万泰生物药业的HCV EIA诊断试剂检测人群血清丙型肝炎病毒(丙肝,HCV)IgG抗体.结果 六省市(区)人群血清共9 538份,HCV抗体阳性数37份,总阳性率为0.39%,其中北京人群阳性率0.23%,黑龙江人群为0.74%,山东人群为0.26%,宁夏人群为0.10%,甘肃和四川人群阳性率均为0.44%.对37例HCV阳性者性别及年龄分析,男性19例占51.35%,女性18例占48.65%,<10岁年龄组1例,占2.70%,10~19岁组5例,占13.51%,20~29岁4例占10.81%,30~39岁组6例,占16.22%,40~49岁组9例,占24.32%,≥50岁有12例占32.43%.对HCV阳性者重叠其他型别肝炎病毒感染分析,单独HCV阳性2例,占5.41%,伴有HAV-IgG抗体阳性35例,占94.59%,伴有HEV-IgG抗体阳性10例,占27.03%,伴有HBsAg、HBcAb和HbeAb阳性者2例,占5.41%,该2例HAV和HEV抗体也阳性.结论 六省市(区)人群HCV感染率均在1%以下,感染者年龄以50岁以上最高,决大多数HCV阳性者重叠有其他型别的肝炎病毒感染. 展开更多
关键词 肝炎病毒属 肝炎 丙型 抗体 病毒 流行病学
模拟表位型EB病毒感染诊断抗原的制备
9
作者 苏秋东 郭敏卓 +7 位作者 邱丰 贾志远 范雪亭 孟庆玲 毕胜利 伊瑶 杨俊梅 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2018年第5期538-542,共5页
目的利用大肠埃希菌表达系统获取模拟表位型诊断抗原用于EB病毒(epstein—Barr virus,EBV)感染的早期诊断,并初步评价其抗原性。方法将EB病毒模拟表位GP125、F1、A2、A3C2多肽序列用特定连接臂串联,密码子优化后全基因合成;将目... 目的利用大肠埃希菌表达系统获取模拟表位型诊断抗原用于EB病毒(epstein—Barr virus,EBV)感染的早期诊断,并初步评价其抗原性。方法将EB病毒模拟表位GP125、F1、A2、A3C2多肽序列用特定连接臂串联,密码子优化后全基因合成;将目的片段插入带有Trx标签的表达质粒中,在大肠埃希菌中进行表达,并利用亲和层析和离子交换层析纯化目的蛋白;利用Western blot技术对目的蛋白抗原性进行鉴定,并建立EBV—IgM抗体检测捕获法ELISA技术,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力。结果所获取EBV模拟表位诊断抗原浓度为2.8mg/ml,纯度为99.01%;Western blot实验发现,以anti-Trx单克隆抗体或EBV—IgM阳性血清作为第一抗体,在NC膜约26×10^3处都可以发现特异条带(与预期一致);对50份EBV急性感染阳性血清和50份阴性血清进行检测得出,阳性血清样本OD值1.352(95%CI:1.233~1.489)与阴性血清样本OD值0.135(95%CI:0.113~0.159)分布区组明显(P〈0.05),其中灵敏度为98.0%,特异性为96.0%,一致性检验kappa值为0.940,一致性优异。结论原核表达与亲和及离子交换层析纯化可以获取抗原性良好的EBV感染诊断抗原,偶联HRP后可以作为检测抗原应用于EBV-IgM捕获法ELISA血清学检测中。 展开更多
关键词 模拟表位 EB病毒 原核表达 层析纯化
我国汉、回和藏族部分人群HEV感染的血清学调查 被引量:3
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作者 鲁波 赵洪兰 +5 位作者 李红育 詹军 王笑怡 鲁健 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2012年第1期 46-47,共2页
目的了解我国不同民族的健康人群戊型肝炎病毒感染情况。方法采用ELISA方法检测人群血清中戊型肝炎病毒(戊肝,HEV)IgG抗体。汉族人群血清分别来自于四川、北京、黑龙江和山东,回族和藏族人群血清来自于甘肃、宁夏和青海,总共10448... 目的了解我国不同民族的健康人群戊型肝炎病毒感染情况。方法采用ELISA方法检测人群血清中戊型肝炎病毒(戊肝,HEV)IgG抗体。汉族人群血清分别来自于四川、北京、黑龙江和山东,回族和藏族人群血清来自于甘肃、宁夏和青海,总共10448份血清采集于2006—2008年。结果七省市人群HEV抗体总阳性率为17.97%(1878/10448)。汉、回和藏不同民族人群HEV抗体阳性率分别为24.32%(1794/7376)、3.59%(81/2258)和0.37%(3/814)。不同地区人群HEV抗体阳性率分布,四川、北京、黑龙江和山东汉族人群阳性率分别为27.45%、20.30%、22.89%和22.68%,甘肃汉和回族分别为24.63%(184/747)和6.12%(77/1258),宁夏回族和青海藏族分别0.40%和0.37%。汉回藏不同民族各年龄组人群HEV感染分布,汉族各年龄组人群HEV抗体阳性率,在≤10岁年龄组为5.19%,11~20岁组为11.64%,21~30岁组为20.08%,31~40岁组为34.17%,41—50岁为41.75%,51~60岁组为48.58%,≥61岁组为57.43%。回族人群各年龄组人群HEV抗体阳性率依次为3.11%,3.96%,2.11%,3.98%,2.52%,4.57%和6.67%。藏族人群3份阳性者分布在21—30岁组、31—40岁组和51~60岁组各1份,阳性率为0.63%、0.58%和1.01%。结论汉族人群戊肝病毒感染明显高于回族和藏族,感染率随年龄增长而升高。回藏族人群HEV抗体阳性率低下,应加强对HEV感染的监测。 展开更多
关键词 肝炎病毒 戊型 感染 血清学
丁型肝炎病毒抗原的原核表达及抗原性分析 预览 被引量:3
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作者 江永珍 张明程 +3 位作者 鲁健 张文英 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期 38-41,共4页
目的 利用含T7启动子和His纯化标签pRSET B质粒构建丁型肝炎病毒抗原(HDAg)重组表达质粒(pRSETB-HDAg),转化宿主菌,表达并纯化,获得生物活性高抗原性强的基因工程重组抗原.方法 将中国河南株HDAg基因片段插入pRSET B表达质粒,转化B... 目的 利用含T7启动子和His纯化标签pRSET B质粒构建丁型肝炎病毒抗原(HDAg)重组表达质粒(pRSETB-HDAg),转化宿主菌,表达并纯化,获得生物活性高抗原性强的基因工程重组抗原.方法 将中国河南株HDAg基因片段插入pRSET B表达质粒,转化BL21宿主菌,经IPTG诱导表达.表达产物经Chelating亲和层析纯化后,采用EIA方法分析HDAg的抗原性.结果 重组HDAg稀释1000倍(10 ng/ml)仍与抗体有较强的反应.经与美国HDAg和华美公司生产的HDV诊断试剂同时检测26份HDV阳性参比血清,三者结果比较,除美国抗原漏检1份,检出率为96.15%(25/26份)外,病毒CDC和华美试剂均无漏检,检出率为100%,三者检测结果具有很高的符合率.结论 成功构建了丁型肝炎病毒抗原重组表达质粒(pRSETB-HDAg),在原核细胞获得稳定高效表达,EIA 检测证明HDAg抗原性好,可用于组装HDV诊断试剂,用于临床丁型肝炎患者的诊断和我国丁型肝炎病毒感染流行病学的调查. 展开更多
关键词 δ肝炎病毒 抗原 基因 表达的序列标记
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甘肃省部分人群甲、乙、丙和戊型肝炎感染的血清学调查 被引量:2
12
作者 鲁健 李红育 +5 位作者 江永珍 许亚宁 于德山 蒋建祥 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期349-351,共3页
目的了解健康人群肝炎病毒感染现状。方法采用ELISA方法检测人群血清中抗甲(HAV-IgG)、乙(HBsAg和HBsAb)、丙(HCV.IgG)和戊型肝炎病毒抗体(HEV.IgG)。1977份人群血清收集于2008年5—10月。结果人群肝炎病毒抗体阳性率,HAV—... 目的了解健康人群肝炎病毒感染现状。方法采用ELISA方法检测人群血清中抗甲(HAV-IgG)、乙(HBsAg和HBsAb)、丙(HCV.IgG)和戊型肝炎病毒抗体(HEV.IgG)。1977份人群血清收集于2008年5—10月。结果人群肝炎病毒抗体阳性率,HAV—IgG为84.57%(1672/1977),HBsAg和HBsAb为4.81%(95/1977)和28.73%(568/1977),HCV—IgG为0.46%(9/1977),HEV—IgG为13.10%(259/1977)。不同年龄段的人群肝炎病毒抗体阳性率分布,HAV—IgG阳性率,在≤9岁组至≥60岁组为43.21%-95.56%。HBsAg和HBsAb阳性率为2.09%-36.43%。HCV.IgG阳性总数9份,分布在30~59岁年龄组阳性为0.59%-1.79%。HEV-IgG阳性率,≤9岁组至≥3岁组分别为3.48%~21.67%。结论低年龄组人群HAV和HBsAb抗体明显低于人群总体水平,应及时加强免疫预防。HBsAg携带和HCV戚染下隆.HEV臆染晡年龄增长而升高.汉和同旗人群HEV感染室存存明显善别. 展开更多
关键词 肝炎病毒 抗体 病毒 血清学
风疹病毒多表位诊断抗原的制备与评价 被引量:2
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作者 苏秋东 郭敏卓 +6 位作者 邱丰 贾志远 卢学新 孟庆玲 毕胜利 伊瑶 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期249-255,共7页
原核表达与层析纯化获取风疹病毒(Rubella Virus,RV)多表位诊断抗原,并初步评价其抗原性。将RV衣壳蛋白C aa 3~29、aa 96~123以及包膜糖蛋白E1aa208~247三个主要免疫显性表位串联,密码子优化后全基因合成;利用基因重组技术将多表... 原核表达与层析纯化获取风疹病毒(Rubella Virus,RV)多表位诊断抗原,并初步评价其抗原性。将RV衣壳蛋白C aa 3~29、aa 96~123以及包膜糖蛋白E1aa208~247三个主要免疫显性表位串联,密码子优化后全基因合成;利用基因重组技术将多表位串联片段插入带有GST标签的表达质粒中,在大肠杆菌中进行表达,并利用亲和层析和离子交换层析纯化目的蛋白;利用Western Blot(WB)技术对目的蛋白抗原性进行鉴定,并建立RV-IgM抗体检测ELISA技术,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力。获取高度均质的RV多表位诊断抗原,WB实验表明目的蛋白不但可以被anti-GST单克隆抗体识别,还可以被anti-RV多克隆抗体、RV-IgM阳性血清相应抗体所识别。分别对48份RV急性感染病例的阳性血清、阴性血清和健康人血清进行检测,发现一致性优异。原核表达与层析纯化可以获取抗原性良好的RV多表位诊断抗原,偶联HRP后可以作为检测抗原应用于RV-IgM ELISA血清学检测中。 展开更多
关键词 多表位抗原 风疹病毒 原核表达 层析纯化 GST标签
人白细胞介素12在哺乳动物细胞中的稳定表达及其生物活性的研究 预览 被引量:2
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作者 焦宏远 詹美云 +5 位作者 郭敏卓 伊瑶 丛郁 张文英 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期 235-237,共3页
目的采用遗传基因工程方法获得具有生物活性的人白细胞介素12,探索其治疗肿瘤和慢性肝炎的可行性。方法采用已克隆的国人IL-12基因序列,利用内部核糖体切人位点(IRES)完成IL-12P35、P40双亚基共表达载体的构建,通过转染CHODHFR缺... 目的采用遗传基因工程方法获得具有生物活性的人白细胞介素12,探索其治疗肿瘤和慢性肝炎的可行性。方法采用已克隆的国人IL-12基因序列,利用内部核糖体切人位点(IRES)完成IL-12P35、P40双亚基共表达载体的构建,通过转染CHODHFR缺陷细胞,双抗夹心ELISA法筛选阳性克隆,MTX加压扩增,PCR检测其基因整合,T淋巴细胞增殖和诱生γ干扰素实验检测其生物活性。结果获得了稳定高效表达人IL-12的工程细胞系,表达产物为70×10^3左右的糖蛋白。结论本研究得到的基因重组人IL-12具有良好的生物活性,有强的诱导产生γ干扰素的能力和诱导活化T淋巴细胞增殖能力。 展开更多
关键词 白细胞介素12 细胞系 哺乳动物 重组蛋白质类
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自发生物素化风疹病毒重组诊断抗原的制备 被引量:2
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作者 苏秋东 郭敏卓 +7 位作者 邱丰 贾志远 卢学新 孟庆玲 高燕 毕胜利 伊瑶 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2016年第2期236-240,共5页
目的 获取原核表达过程中自发生物素化的风疹病毒(Rubella Virus,RV)重组抗原E1(RV-E1),并初步评价其抗原性.方法 将2×BirA酶底物(BSP)插入到RV-E1抗原优势表位区域aa 148-295的羧基端,硫氧还蛋白(Thioredoxin,TRX)插入到R... 目的 获取原核表达过程中自发生物素化的风疹病毒(Rubella Virus,RV)重组抗原E1(RV-E1),并初步评价其抗原性.方法 将2×BirA酶底物(BSP)插入到RV-E1抗原优势表位区域aa 148-295的羧基端,硫氧还蛋白(Thioredoxin,TRX)插入到RV-E1的氨基端,密码子优化后全基因合成;在大肠埃希进行表达,并利用亲和层析和离子交换层析纯化获取生物素化的RV-E1抗原;利用Western Blotting技术对目的蛋白进行鉴定,并建立风疹病毒IgM抗体检测方法,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力.结果 获取高度均质的生物素化的可溶性RV-E1抗原,WB实验表明目的蛋白不但可以被RV-E1抗原和TRX抗原单克隆抗体识别,而且可以被标记HRP的链霉亲和素所识别.分别对50份风疹病毒感染阳性血清、阴性血清和健康人血清进行检测,发现一致性优异.结论 RV-E1诊断抗原携带BSP,可以在大肠埃希菌表达过程中自发共价结合生物素分子,并可以作为新型诊断抗原应用于生物素-亲和素ELISA血清学检测中. 展开更多
关键词 BirA酶底物 风疹病毒E1抗原 原核表达 生物素化抗原
表位依赖型急性期戊型肝炎诊断抗原的制备与抗原性分析 被引量:1
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作者 苏秋东 郭敏卓 +4 位作者 伊瑶 邱丰 毕胜利 贾志远 《国际病毒学杂志》 2017年第1期9-12,共4页
目的原核表达制备表位依赖型戊型肝炎诊断抗原,并对其抗原性及其在急性戊肝诊断的性能进行评价。方法以包含密码子优化的GST、HEV优势表位的H15质粒为模板,PCR获取GST-HEV优势表位片段,将其插人表达质粒pET43.1a中,在大肠杆菌中进... 目的原核表达制备表位依赖型戊型肝炎诊断抗原,并对其抗原性及其在急性戊肝诊断的性能进行评价。方法以包含密码子优化的GST、HEV优势表位的H15质粒为模板,PCR获取GST-HEV优势表位片段,将其插人表达质粒pET43.1a中,在大肠杆菌中进行表达;利用亲和层析和阴离子交换层析纯化目的蛋白;利用Western Blotting技术对目的蛋白抗原性进行鉴定;建立HEV-IgM抗体检测ELISA方法,初步评价其对阴、阳血清样本的鉴别能力。结果获取高度均质的表位依赖型急性戊肝诊断抗原;WB实验表明目的蛋白不但可以被anti-GST单克隆抗体识别,还可以被戊肝急性期血清相应抗体所识别;分别对60份戊肝急性期血清、阴性血清进行检测,发现其与临床和实验室诊断结果一致性较高。结论原核表达与层析纯化可以获取抗原性优异的表位依赖型急性戊肝诊断抗原,偶联HRP后可应用于HEV-IgM ELISA血清学检测。 展开更多
关键词 多表位抗原 戊型肝炎病毒 原核表达 层析纯化 偶联反应
甘肃省部分县农村人群病毒性肝炎血清流行病学研究 被引量:1
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作者 于德山 李红育 +4 位作者 鲁健 蒋建祥 江永珍 许亚宁 《卫生职业教育》 2011年第16期 108-110,共3页
目的 了解甘肃省国家级扶贫县农村人群病毒性肝炎病毒的感染状况.方法 采用ELISA方法检测人群血清中抗甲(HAV-IgG)、乙(HBsAg和HBsAb)、丙(HCV-IgG)和戊型肝炎病毒抗体(HEV-IgG).血清来自5个县一般人群不同年龄组,共采集血清2 ... 目的 了解甘肃省国家级扶贫县农村人群病毒性肝炎病毒的感染状况.方法 采用ELISA方法检测人群血清中抗甲(HAV-IgG)、乙(HBsAg和HBsAb)、丙(HCV-IgG)和戊型肝炎病毒抗体(HEV-IgG).血清来自5个县一般人群不同年龄组,共采集血清2 429份.结果 人群肝炎病毒抗体阳性率,抗-HAV、抗-HCV、抗-HEV流行率分别为77.97%、0.74%和13.92%,HBsAg阳性率为5.15%,抗-HBs阳性率为42.94%,HBeAg、抗-HBe阳性率分别为1.31%和2.48%,抗-HBc阳性率为41.70%.HAV感染率随年龄的增加而升高,10~14岁组68.99%的儿童已感染HAV.HBsAg阳性率显著低于1992年和2003年的7.74%和10.70%,15岁以下儿童HBsAg携带率为2.96%.结论 低年龄人群及局部地区甲肝的感染率较低.乙肝疫苗免疫接种工作已经取得效果.HCV感染率低于其他地区.戊型肝炎病毒感染率与居民的生活习性密切相关. 展开更多
关键词 农村人群 病毒性肝炎 血清流行病学 抗体
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广东省佛山市乙型肝炎患者伴随丁型肝炎感染的现状调查
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作者 李炜煊 丁军颖 +6 位作者 卢学新 苏秋东 伊瑶 贾志远 邱丰 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2012年第5期382-383,共2页
目的了解广东省佛山市的丁型肝炎(丁肝)感染现状,为全国的丁肝流行病学调查工作奠定基础。方法搜集广东省佛山市第一人民医院2011年的乙型肝炎(乙肝)阳性血清,以不同公司的丁肝酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent as... 目的了解广东省佛山市的丁型肝炎(丁肝)感染现状,为全国的丁肝流行病学调查工作奠定基础。方法搜集广东省佛山市第一人民医院2011年的乙型肝炎(乙肝)阳性血清,以不同公司的丁肝酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)诊断试剂平行检测;进一步以反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT—PCR)方法辅证。结果两种ELISA丁肝诊断试剂检测结果一致,8例阳性;经RT-PCR进一步验证,结果正确。结论广东省佛山市丁肝病毒感染率高于全国平均水平,无性别统计学差异,且感染人群偏于高年龄组。 展开更多
关键词 δ肝炎病毒 感染 流行病学研究
应用痘苗病毒载体表达的重组甲肝抗原特性的研究
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作者 赵洪兰 邱丰 +5 位作者 孟庆玲 伊瑶 鲁健 曹经瑗 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期 450-452,共3页
目的 探讨以痘苗病毒载体表达的甲肝病毒培养合适的细胞系和重组病毒灭活以及甲肝病毒抗原保存条件.方法 将构建成功的表达甲肝抗原的重组痘苗病毒分别接种于K4、143、HEL、Hep-2和Vero等细胞,用ELISA测定重组甲肝抗原的表达产量和不同... 目的 探讨以痘苗病毒载体表达的甲肝病毒培养合适的细胞系和重组病毒灭活以及甲肝病毒抗原保存条件.方法 将构建成功的表达甲肝抗原的重组痘苗病毒分别接种于K4、143、HEL、Hep-2和Vero等细胞,用ELISA测定重组甲肝抗原的表达产量和不同方法灭活重组病毒后的抗原活性.结果 在K4、143和HEL细胞表达重组甲肝抗原的产量略优于Hep-2和Vero细胞,重组病毒经β-丙内酯和甲醛灭活后,甲肝抗原活性不变,制备的重组甲肝抗原稳定性好.结论 痘苗病毒表达载体可以提高甲肝抗原表达效率,具有十分广阔的应用前景. 展开更多
关键词 痘苗病毒 肝炎 甲型 酶联免疫吸附测定
河南省人民医院门诊患者戊型病毒性肝炎的阳性率调查
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作者 许泼男 郭敏卓 +4 位作者 伊瑶 余陶 贾志远 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2014年第4期294-295,共2页
目的 通过检测部分门诊病例血清的戊型肝炎病毒标志物(HEV IgG),简要描述本地区的戊型病毒性肝炎的感染水平.方法 收集河南省人民医院内科门诊病例血清415份,应用万泰公司的戊型病毒性肝炎诊断试剂盒进行ELISA检测,检测结果进行统计... 目的 通过检测部分门诊病例血清的戊型肝炎病毒标志物(HEV IgG),简要描述本地区的戊型病毒性肝炎的感染水平.方法 收集河南省人民医院内科门诊病例血清415份,应用万泰公司的戊型病毒性肝炎诊断试剂盒进行ELISA检测,检测结果进行统计学分析,对不同分组进行x2检验.结果 415例门诊病例的HEV阳性率为21.93%,在性别间、年龄分组间,差异有统计学意义,而在城乡间的差别无统计学意义.结论 我市的戊型病毒性肝炎阳性率处于全国HEV感染率的平均水平,成人的HEV阳性率显著性高于青少年.在低年龄阶段进行有效的疫苗接种,可以控制戊型病毒性肝炎在我省的流行. 展开更多
关键词 肝炎 戊型 肝炎病毒 戊型 流行病学
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