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敲除小RNA gcvB后沙门菌的转录组分析 预览
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作者 刘丽娟 董然然 +6 位作者 王开功 文明 温贵兰 李晨 杨琦 周碧君 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期840-850,共11页
为筛选与沙门菌小RNAgcvB相关的靶基因,采用高通量的转录组测序(RNA-seq)技术对野生型沙门菌和敲除小RNAgcvB沙门菌的mRNA进行对比分析,全面地预测GcvB的靶基因的数量与种类,通过GO和KEGG数据库对筛选基因进行比对注释,进一步分析筛选... 为筛选与沙门菌小RNAgcvB相关的靶基因,采用高通量的转录组测序(RNA-seq)技术对野生型沙门菌和敲除小RNAgcvB沙门菌的mRNA进行对比分析,全面地预测GcvB的靶基因的数量与种类,通过GO和KEGG数据库对筛选基因进行比对注释,进一步分析筛选基因的主要功能及涉及的生物过程。并利用荧光定量PCR对部分差异表达基因进行验证。结果显示:差异表达基因共1244个,其中基因表达上调678个,基因表达下调566个。GO富集分析显示,差异表达基因主要涉及氧化还原活性、铁离子结合、运动活性等分子功能,细菌鞭毛的细胞成分,细胞呼吸、钴胺素代谢过程和钴胺素生物合成过程等生物过程。KEGG数据库分析显示,差异表达基因主要参与细菌趋化性、卟啉和叶绿素代谢、不同环境中的微生物代谢、双组分系统、甲烷代谢等14个信号通路。对筛选出的10个差异表达基因进行荧光定量PCR验证,结果显示:差异表达基因相对表达量与RNA-seq测序结果基本一致。本研究为进一步探明小RNAgcvB与靶基因相互作用、小RNA的调控机制,以及沙门菌致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 沙门菌 小RNAgcvB 转录组测序 靶基因
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从江香猪IFN-β基因的序列分析及原核表达 预览
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作者 温贵兰 张升波 +6 位作者 李昌红 徐丽 田浪 文明 王开功 赵德刚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第1期10-19,共10页
试验旨在探明从江香猪β-干扰素(interferon-beta,IFN-β)基因编码区分子序列及原核表达产物特征。以从江香猪为研究对象,提取肝脏总RNA并反转录为cDNA,设计特异性引物扩增IFN-β基因编码区,将目的基因片段克隆至原核表达质粒pET-28a上... 试验旨在探明从江香猪β-干扰素(interferon-beta,IFN-β)基因编码区分子序列及原核表达产物特征。以从江香猪为研究对象,提取肝脏总RNA并反转录为cDNA,设计特异性引物扩增IFN-β基因编码区,将目的基因片段克隆至原核表达质粒pET-28a上,获得重组质粒pET28a-CJpoIFN-β,并利用生物学软件对江香猪IFN-β基因编码区进行序列分析;将鉴定正确的重组质粒pET28a-CJpoIFN-β转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达、SDS-PAGE与Western blotting分析原核表达蛋白。结果表明,从江香猪IFN-β基因编码区长为561bp,编码186个氨基酸;该蛋白为分泌性蛋白,前21个氨基酸为信号肽序列;二级结构主要以α-螺旋(77.42%)和无规则卷曲(17.74%)为主。从江香猪与其他猪源IFN-β基因核苷酸序列同源性为99.5%~100.0%,与禽的同源性最低(35.2%);从江香猪与巴马猪、梅山猪IFN-β氨基酸同源性均为100.0%,但与贵州白香猪IFN-β同源性为99.5%,存在E43Q、K73R和C161R3处氨基酸的差异。Western blotting结果显示,带His标签的重组表达蛋白能被His单抗识别,条带大小约为24ku。本试验结果为进一步研究IFN-β基因生物学活性及加快从江香猪这一品种资源的有效利用提供参考依据。 展开更多
关键词 从江香猪 IFN-β基因 序列分析 原核表达
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不同滴度鸭肠炎病毒感染对鸭脾脏的转录组变化分析
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作者 吴良 郑敏 +5 位作者 华敏 贺欣薇 万润 周碧君 文明 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第8期1487-1495,共9页
为探讨不同滴度鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)感染对鸭组织器官转录组的影响,本研究采用2个不同DELD50滴度的DEV,接种50日龄健康鸭90h后,采集脾脏样本,高通量测序技术进行转录组测序,筛选差异表达基因,并应用GO与KEGG... 为探讨不同滴度鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)感染对鸭组织器官转录组的影响,本研究采用2个不同DELD50滴度的DEV,接种50日龄健康鸭90h后,采集脾脏样本,高通量测序技术进行转录组测序,筛选差异表达基因,并应用GO与KEGG数据库进行分析。结果显示,当接种量为10^0xDELD50时,鸭脾脏差异表达基因有685个,其中上调基因341个,主要参与免疫反应、核糖体结构和酶活性等生物学过程,并在核糖体、氧化磷酸化和吞噬体信号通路中显著富集;TN基N为344个,主要参与细胞分化正调控、口转化生长因子生成正调控、酶与相关受体活性、细胞结构等生物学过程,并在细胞黏附分子、内吞作用、肠道免疫网络lgA产生、ECM受体互作、缝隙连接和黏着信号通路上显著富集。当接种量为10^0xDELD50时,鸭脾脏差异表达基因有485个,其中上调基因297个,主要参与细胞功能、蛋白结合和蛋白复合物等生物学过程,并在细胞黏附分子、吞噬体、肠道免疫网络IgA产生、球系列鞘糖脂生物合成及N-糖链合成信号通路中显著富集;下调基因188个,主要参与补体激活、肌肉组织活动调节、受体复合物、酶与受体活性等生物学过程,并在基础转录因子、PPAR信号通路、a-亚麻酸代谢等代谢途径与信号通路上显著富集。这些结果表明不同滴度DEV感染对鸭脾脏转录组产生不同的影响,为深入探究DEV致病分子机制提供基础资料。 展开更多
关键词 病毒滴度 鸭肠炎病毒 脾脏 转录组 高通量测序技术
三穗麻鸭Cofilin2基因序列分析及其组织表达研究 预览
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作者 华敏 贺欣薇 +3 位作者 万润 周碧君 文明 《中国畜牧兽医》 北大核心 2018年第4期858-865,共8页
为探究三穗麻鸭丝切蛋白2(Cofilin2)基因特征及其在鸭组织中的表达规律,试验根据GenBank中鸡Cofilin 2基因序列设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增获得目的基因,利用生物信息学软件分析三穗麻鸭Cofilin 2基因特征,实时荧光定量PCR方法检... 为探究三穗麻鸭丝切蛋白2(Cofilin2)基因特征及其在鸭组织中的表达规律,试验根据GenBank中鸡Cofilin 2基因序列设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增获得目的基因,利用生物信息学软件分析三穗麻鸭Cofilin 2基因特征,实时荧光定量PCR方法检测Cofilin 2基因在三穗麻鸭不同组织中的表达情况。结果显示,三穗麻鸭Cofilin 2基因编码区大小为498 bp,可编码166个氨基酸;三穗麻鸭Cofilin 2基因序列与鸡、猕猴、牛、小鼠、安大略鲑、人和猪相应序列的同源性分别为94.4%、91.6%、91.6%、87.6%、77.7%、70.5%和69.5%;系统进化树显示,Cofilin 2基因在不同物种进化过程中高度保守;Cofilin 2基因编码蛋白的二级结构由α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲组成,三级结构呈弯曲螺旋结构;实时荧光定量PCR检测显示,三穗麻鸭Cofilin 2基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑、胸腺、十二指肠、腿肌和法氏囊等组织器官中均有不同程度表达,其中心脏中表达量最高,法氏囊中表达量最低。本试验结果为三穗麻鸭抗病分子机理研究奠定了基础。 展开更多
关键词 三穗鸭 Cofilin2基因 克隆 实时荧光定量PCR
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猪流行性腹泻病毒贵州株M全基因遗传变异分析 预览
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作者 田琴 柳晓飞 +9 位作者 张双翔 胡兴义 张羽 田祥强 潘永 杨兰兰 王开功 周碧君 文明 《中国兽医杂志》 北大核心 2018年第6期12-15,共4页
为了解贵州省猪流行性腹泻病毒(PEDV)新流行毒株的遗传变异情况。本试验对贵州省2017年6月采集20份腹泻样本进行PEDV检测,并选取其2株PEDV M基因进行克隆和遗传进化分析,取名为GZFQ06-2017。结果显示,贵州省PEDV M基因与GenBank公布... 为了解贵州省猪流行性腹泻病毒(PEDV)新流行毒株的遗传变异情况。本试验对贵州省2017年6月采集20份腹泻样本进行PEDV检测,并选取其2株PEDV M基因进行克隆和遗传进化分析,取名为GZFQ06-2017。结果显示,贵州省PEDV M基因与GenBank公布的26株参考序列(除韩国毒株SM98)的核苷酸相似性为94. 0%-95. 2%,与中国福建CH/FJZZ-9/201毒株和中国海南CH/HNQX-3/14毒株核苷酸相似性最低,为94. 0%,与中国江苏SQ2014毒株核苷酸相似性最高,为95. 2%;从遗传进化树可以看出,除韩国毒株SM98外,2017年6月贵州省PEDV流行毒株GZFQ06-2017与韩国疫苗株Attenuated DR13、中国江苏SQ2014和中国四川SC1402毒株同在一分支上,其亲缘关系较近,与中国湖北CH-hubei-2016和中国云南CH/YNKM-8/2013亲缘关系较远。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 M全基因 克隆与测序 序列分析
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Marc-145 细胞源DDX6 基因的克隆及生物信息学分析
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作者 张升波 李昌红 +7 位作者 温贵兰 徐丽 田浪 杨佰启 陈彦希 文明 王开功 《生物技术》 2018年第6期566-571,596共7页
[目的]克隆并生物信息学分析Marc-145细胞源DDX6基因。[方法]根据GenBank预测的猴源DDX6基因序列(XM_008021118)设计合成特异性引物,通过RT-PCR从Marc-145细胞中扩增DDX6基因CDS区并进行克隆和生物信息学分析。[结果]Marc-145细胞源DDX... [目的]克隆并生物信息学分析Marc-145细胞源DDX6基因。[方法]根据GenBank预测的猴源DDX6基因序列(XM_008021118)设计合成特异性引物,通过RT-PCR从Marc-145细胞中扩增DDX6基因CDS区并进行克隆和生物信息学分析。[结果]Marc-145细胞源DDX6基因CDS全长1452bp,编码483个氨基酸。DDX6蛋白有4个基序,含有DEAD-like解旋酶超家族结构域和C端结构域。二级结构主要以α-螺旋(37.27%)和无规则卷曲(36.44%)为主。同源性及系统进化树分析结果表明Marc-145细胞源与人DDX6核苷酸同源性最高,亲缘关系最近。[结论]DDX6分子在同种属之间具有高度保守性,提示Marc-145细胞源DDX6可能与人源DDX6分子具有相似的功能和作用。 展开更多
关键词 DDX6基因 克隆 生物信息学分析
2013—2016年贵州省猪腹泻发病情况调查
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作者 罗引幸 冯旭芳 +9 位作者 张双翔 柳晓飞 胡兴义 张海 周碧君 苟万里 王开功 文明 李晨 《畜牧与兽医》 北大核心 2018年第8期73-77,共5页
旨在调查分析贵州省2013-2016年猪腹泻发病的情况。对贵州省5个地州(市)14县(区)24个种猪场和规模养猪场共9 133头猪进行猪腹泻发病情况、临床症状调查,并对病变组织进行病理组织学检查。调查结果显示:贵州省2013—2016年猪腹泻发... 旨在调查分析贵州省2013-2016年猪腹泻发病的情况。对贵州省5个地州(市)14县(区)24个种猪场和规模养猪场共9 133头猪进行猪腹泻发病情况、临床症状调查,并对病变组织进行病理组织学检查。调查结果显示:贵州省2013—2016年猪腹泻发生率为55.41%(5 061/9133),病死率为68.07%(3 445/5 061),其中安顺市的猪腹泻发病率和死亡率都较高;猪腹泻发病时间在冬春季节较为集中,主要危害产房仔猪;对具有明显腹泻症状的发病猪进行剖检,观察到病变有腹股沟淋巴结充血、胃壁和肠壁变薄、肠壁充气、黄色水样肠道内容物等;对病变组织切片,HE染色镜检,观察到小肠绒毛上皮脱落、变短。结果表明,贵州省近4年猪腹泻发病率和病死率高,产房仔猪危害较大。 展开更多
关键词 猪腹泻 发病情况调查 剖解变化 组织切片
贵州省PEDV与PoRV分子流行病学调查
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作者 丁尊俄 冯旭芳 +11 位作者 张双翔 何贤海 胡兴义 张海 王开功 文明 李晨 蒲翠敏 罗引幸 刘丽娟 周碧君 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第6期2397-2402,共6页
为探明贵州省近几年引起猪病毒性腹泻两个主要病原PEDV与PoRV的变异情况,本研究对贵州省贵阳市、遵义市、安顺市、黔东南洲等5个地(州市)26个规模化养猪场采集了213份疑似腹泻的粪便样品,采用实验室建立的PEDV、TGEV和PoRV三重RT-PCR... 为探明贵州省近几年引起猪病毒性腹泻两个主要病原PEDV与PoRV的变异情况,本研究对贵州省贵阳市、遵义市、安顺市、黔东南洲等5个地(州市)26个规模化养猪场采集了213份疑似腹泻的粪便样品,采用实验室建立的PEDV、TGEV和PoRV三重RT-PCR检出PEDV阳性的病料12份和PoRV阳性病料4份。根据GenBank登录的PEDV和PoRV基因序列,分别设计PEDV M基因和PoRV VP7基因特异性引物,扩增目的基因、克隆、测序和遗传进化分析。结果显示:成功克隆了12株PEDV M基因(681 bp)和4株PoRV的VP7基因(981 bp),M基因核苷酸及推导的氨基酸同源性分别在98.1%~100%和98.2%~100%之间,与国内外参考毒株核苷酸及氨基酸同源性分别在97.4%~100%和97.3%~100%之间;VP7基因核苷酸及推导的氨基酸同源性分别为95.5%~99.7%和96.9%~99.7%,与国内外参考毒株核苷酸及氨基酸同源性分别为71.9%~95.1%和72.7%~99.1%。贵州省PEDV地方流行株与疫苗株CV777、Attenuated DR13亲缘关系较远,PoRV地方流行株与G4型毒株Gottfried、HeN4等属于同一群。结果表明,本研究从分子流行病学角度证实了贵州省PEDV和PoRV流行与变异情况,为贵州省PEDV和PoRV合理的防控措施提供参考依据。 展开更多
关键词 PEDV PoRV 基因序列 亲缘关系
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疫苗不同免疫程序对细胞因子分泌的影响
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作者 丁尊俄 胡兴义 +9 位作者 张双翔 周碧君 王开功 赵双成 欧伟业 肖焕星 秦文学 文明 李如举 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期2283-2288,共6页
为分析仔猪首次免疫猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)弱毒疫苗对血清细胞因子分泌水平的影响,本试验筛选PRRSV抗原与抗体均为阴性的7日龄仔猪40头,平均分为4组,其中试验A、B、C组均为14日龄首次免疫经典弱毒疫苗,试验A组35日龄二免用高致... 为分析仔猪首次免疫猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)弱毒疫苗对血清细胞因子分泌水平的影响,本试验筛选PRRSV抗原与抗体均为阴性的7日龄仔猪40头,平均分为4组,其中试验A、B、C组均为14日龄首次免疫经典弱毒疫苗,试验A组35日龄二免用高致病性灭活疫苗,试验B组35日龄二免用经典弱毒疫苗,试验C组35日龄注射生理盐水,对照组均注射生理盐水。分别于首免后1,2,3周和二免后1,2,3,4,5,6周前腔静脉采血分离血清,采用细胞因子ELISA方法检测IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-10和IL-12细胞免疫水平。结果显示,仔猪14日龄首次免疫弱毒疫苗后能迅速分泌细胞因子,首免3周以内,试验组IFN-γ分泌量均高于对照组,差异极显著(P<0.01);试验组TNF-α分泌量高于对照组,差异极显著(P<0.01),且试验A组>试验B组>试验C组,其差异不显著(P>0.05);试验组IL-2分泌量高于对照组,试验A组最高,其差异显著(P<0.05);试验组IL-10分泌量高于对照组,试验C组最高,其差异显著(P<0.05);试验组IL-12分泌量高于对照组,试验A组最高,其差异显著(P<0.05)。35日龄二免弱毒疫苗或灭活疫苗3周后,除IFN-γ外,试验A组的TNF-α、IL-2、IL-10和IL-12分泌水平均高于试验B组和试验C组。结果表明,14日龄首免PRRSV弱毒疫苗和35日龄二免PRRSV灭活疫苗的免疫效果优于仅单独2次免疫PRRSV弱毒疫苗或1次免疫PRRSV弱毒疫苗。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 弱毒疫苗 灭活疫苗 细胞因子
鸭源H6N6亚型禽流感病毒贵州株NA基因序列分析 预览
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作者 万润 华敏 +6 位作者 龙立书 贺欣薇 张明洋 周碧君 王开功 文明 《动物医学进展》 北大核心 2018年第12期61-65,共5页
为了解H6N6亚型禽流感病毒贵州株N6基因生物学特性,根据GenBank上禽流感病毒N6基因序列设计特异性引物,对贵州地区分离的H6N6亚型禽流感病毒贵州株进行N6基因RT-PCR扩增与克隆测序分析,结果显示,4株H6N6亚型禽流感病毒贵州株N6基因编码... 为了解H6N6亚型禽流感病毒贵州株N6基因生物学特性,根据GenBank上禽流感病毒N6基因序列设计特异性引物,对贵州地区分离的H6N6亚型禽流感病毒贵州株进行N6基因RT-PCR扩增与克隆测序分析,结果显示,4株H6N6亚型禽流感病毒贵州株N6基因编码区均为1380bp,可编码459个氨基酸,其中从第175-207位缺失33个核苷酸,即编码蛋白颈部存在11个氨基酸缺失(TNSTTTIINNN);4株H6N6亚型禽流感病毒贵州株N6基因核苷酸同源性为96.0%~99.1%,其中A/duck/Guizhou/01/2017(H6N6)与A/duck/Guizhou/02/2017(H6N6)为同一支,A/duck/Guizhou/03/2017(H6N6)和A/duck/Guizhou/04/2017(H6N6)为另一同支;N6亚型毒株与其他非N6亚型毒株明显位于2个分支上。这些结果为贵州省禽流感分子流行病学研究提供了基础资料。 展开更多
关键词 禽流感病毒 N6亚型 基因克隆 序列分析
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复合益生菌对早期断奶仔猪生长性能和免疫水平的影响 预览 被引量:1
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作者 祝永才 胡兴义 +9 位作者 张双翔 周碧君 陈国权 陈广 王开功 文明 温贵兰 张海 冯旭芳 《中国畜牧兽医》 北大核心 2018年第6期1518-1525,共8页
为研究酿酒酵母菌和枯草芽孢杆菌组成的复合益生菌对早期断奶仔猪免疫水平的影响,试验选取(杜×长×大)三元杂交断奶仔猪80头,分为试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及对照组,每组20头,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在基础日粮中分别添加0.10%、0.20%、0.30%... 为研究酿酒酵母菌和枯草芽孢杆菌组成的复合益生菌对早期断奶仔猪免疫水平的影响,试验选取(杜×长×大)三元杂交断奶仔猪80头,分为试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及对照组,每组20头,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在基础日粮中分别添加0.10%、0.20%、0.30%复合益生菌,对照组饲喂基础日粮,以期评价其生长性能、血液生化、血清细胞因子和肠道黏膜分泌性球蛋白A(SIgA)水平。结果表明,试验Ⅱ、Ⅲ组末重极显著高于试验Ⅰ组和对照组(P〈0.01);试验Ⅲ组平均日增重极显著高于试验Ⅰ、Ⅱ组及对照组(P〈0.01),试验Ⅲ组平均日采食量显著高于试验Ⅰ、Ⅱ组及对照组(P〈0.05),对照组、试验Ⅱ组腹泻率均极显著高于试验Ⅰ、Ⅲ组(P〈0.01);试验组中的乳酸脱氢酶(LDH)、谷丙转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)含量均高于对照组,总蛋白(TP)含量低于对照组,差异均不显著(P〉0.05);试验组中尿素氮(BUN)含量均显著高于对照组(P〈0.05),试验Ⅱ、Ⅲ组谷草转氨酶(AST)含量显著高于试验Ⅰ组和对照组(P〈0.05)。试验0d,试验组白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平与对照组相比差异不显著(P〉0.05);试验20d,试验Ⅱ、Ⅲ组中IL-6水平极显著高于试验Ⅰ组及对照组(P〈0.01),IL-1β和TNF-α水平与对照组相比差异不显著(P〉0.05);试验40d,试验组IL-1β水平均高于对照组(P〉0.05),IL-6和TNF-α水平均极显著高于对照组(P〈0.01)。试验组中空肠黏膜SIgA水平极显著高于对照组(P〈0.01);十二指肠和回肠黏膜SIgA水平均显著高于对照组(P〈0.05),盲肠黏膜SIgA水平低于对照组,差异不显著(P〉0.05)。说明不同含量酿酒酵母菌-枯草芽孢杆菌复合益生菌均可有效提高断奶仔猪的生长性能,缓解早期断奶仔猪应激反应,增强断奶仔猪的免疫功能。 展开更多
关键词 复合益生菌 生长性能 免疫水平 断奶仔猪
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H6N6亚型禽流感病毒N 6基因的原核表达与多克隆抗体制备 预览
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作者 万润 华敏 +6 位作者 龙立书 贺欣薇 罗引幸 周碧君 王开功 文明 《中国畜牧兽医》 北大核心 2018年第11期2989-2995,共7页
为表达H6N6亚型禽流感病毒(avianinfluenzavirus,AIV)神经氨酸酶(NA)蛋白,并制备多克隆抗体,本试验根据GenBank中AIVN6基因序列(登录号:MG434500)设计特异性引物,对贵州地区分离的H6N6亚型AIV贵州株进行N6基因PCR扩增,将其克隆到原核表... 为表达H6N6亚型禽流感病毒(avianinfluenzavirus,AIV)神经氨酸酶(NA)蛋白,并制备多克隆抗体,本试验根据GenBank中AIVN6基因序列(登录号:MG434500)设计特异性引物,对贵州地区分离的H6N6亚型AIV贵州株进行N6基因PCR扩增,将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组原核表达载体pET-32a-N6,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达His-N6重组蛋白,将诱导产物超声破碎离心后,利用镍柱对重组蛋白进行纯化,并利用SDS-PAGE和Westernblotting对表达蛋白进行双重鉴定,将纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并通过间接ELISA检测其效价。结果显示,AIV贵州株N6基因编码区长1380bp,可编码459个氨基酸,其中175-207bp缺失33个核苷酸;重组质粒pET-32a-N6经双酶切鉴定分别获得大小为5900bp左右的载体条带和1380bp左右的目的基因条带,成功构建了pET-32a-N6重组质粒;蛋白超声破碎后经SDS-PAGE发现,重组蛋白主要存在于沉淀中,以包涵体形式存在,蛋白分子质量约为70ku,与预期结果一致;纯化后的重组蛋白经SDS-PAGE和Westernblotting双重鉴定,均在70ku处出现条带,说明纯化的蛋白为重组蛋白pET-32a-N6,表达产物具有免疫学活性,包涵体经变性、复性处理,重组表达蛋白分别被His抗体和兔源抗N6多克隆抗体所识别。间接ELISA检测其效价高于1∶3200。以上结果表明,试验成功克隆、表达了H6N6亚型AIV的N6基因,所制备的N6蛋白多克隆抗体具有良好的免疫活性,能被His抗体和兔源抗N6多克隆抗体所识别。 展开更多
关键词 禽流感病毒(AIV) N6亚型 原核表达 多克隆抗体
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仔猪免疫PRRSV疫苗后病毒血症的荧光定量RT-PCR检测方法的建立
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作者 丁尊俄 周碧君 +9 位作者 赵双成 欧伟业 秦文学 李如举 罗引幸 刘丽娟 张旭 文明 王开功 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第12期1522-1528,共7页
为建立一种快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)疫苗免疫后在猪体内病毒血症持续时间的方法。根据GenBank中PRRSV基因序列,设计1对针对N基因扩增的特异性引物,经RT-PCR扩增后连接到pMD19-T载体上,构建含有N基因片段的重组质粒。采... 为建立一种快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)疫苗免疫后在猪体内病毒血症持续时间的方法。根据GenBank中PRRSV基因序列,设计1对针对N基因扩增的特异性引物,经RT-PCR扩增后连接到pMD19-T载体上,构建含有N基因片段的重组质粒。采用SYBR GreenⅠ染料法进行荧光定量RT-PCR扩增,建立标准曲线并进行特异性、敏感性及重复性试验,比较分析该方法与商品化试剂盒检测结果的阳性符合率。结果显示,所构建方法的扩增效率为1.063,标准品各稀释度质粒拷贝数与Ct值之间相关系数为0.999,引物特异性强,可检测的最低核酸模板浓度为1.0×10~2copies/L,比常规PCR敏感性高10倍,重复性试验的变异系数均小于1%,与商品化试剂盒检测的阳性符合率达100%。两种方法检测结果均表明,在猪体内PRRSV疫苗病毒血症可持续3周。本研究建立的猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量RT-PCR具有快速、特异、敏感和重复性好等优点,可为PRRSV感染(包括疫苗毒)的调查、监测和防控提供可行性和操作性强的技术支持。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 疫苗 N基因 荧光定量RT-PCR 病毒血症
猪流行性腹泻病毒ORF3基因云南株的克隆及序列分析
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作者 刘丽娟 马光强 +6 位作者 杨丽彥 张双翔 胡兴义 周碧君 王开功 文明 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2018年第3期158-161,共4页
为了解云南省与贵州省猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)ORF3基因变异情况,试验采用PCR技术、分子克隆及序列分析方法对云南省昆明市某规模化养猪场发生腹泻的6头病猪的粪便病料样本进行了研究。结果表明:1株PEDV... 为了解云南省与贵州省猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)ORF3基因变异情况,试验采用PCR技术、分子克隆及序列分析方法对云南省昆明市某规模化养猪场发生腹泻的6头病猪的粪便病料样本进行了研究。结果表明:1株PEDV ORF3基因均含有964个碱基,编码320个氨基酸;ORF3基因均无碱基缺失或插入,存在部分碱基变异;与GenBank中登录的部分PEDV核苷酸序列的同源性为95.1%~99.9%,推导氨基酸序列的同源性为94.2%~98.7%;与经典毒株CV777及贵州毒株GZZY、GZMR、GZZAI1亲缘关系较近,与贵州(GZTW3、GZRRH)毒株亲缘关系较远。说明云南省与贵州省主要流行的毒株同源性较高且存在一定相关性。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) ORF3基因 PCR 克隆 序列分析 同源性 亲缘关系
贵阳市散养奶牛牛奶中沙门氏菌的分离鉴定与耐药性分析 预览
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作者 杨德凤 吴小慧 +5 位作者 黄梦夏 李德华 蒙利洁 王开功 杨琦 《贵州畜牧兽医》 2018年第2期15-19,共5页
为了解贵阳市散养奶牛牛奶中沙门氏菌的污染及耐药情况,采集散养奶牛牛奶样本26份,运用细菌分离培养技术对样本进行细菌分离;PCR鉴定后测序;细菌药敏试验。结果:共分离鉴定沙门氏菌3株,分离率为11.5%(3/26);3株沙门氏菌对庆大霉素(GEN)... 为了解贵阳市散养奶牛牛奶中沙门氏菌的污染及耐药情况,采集散养奶牛牛奶样本26份,运用细菌分离培养技术对样本进行细菌分离;PCR鉴定后测序;细菌药敏试验。结果:共分离鉴定沙门氏菌3株,分离率为11.5%(3/26);3株沙门氏菌对庆大霉素(GEN)、卡那霉素(KAN)、阿莫西林(AMC)等耐药,对四环素(TET)、环丙沙星(CIP)、恩诺沙星(ENR)等较为敏感。 展开更多
关键词 贵阳 牛奶 沙门氏菌 分离鉴定 耐药性
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日本起酥饼干及糕点制作工艺探讨 预览
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作者 《食品安全导刊》 2018年第18期121-121,123共2页
日本起酥饼干和糕点属于高档消费食品类型,这类食品的油脂含量较高,水分含量较少,加上其酥松可口,一直受到人们的广泛喜爱。我国的起酥饼干和糕点生产,起步时间较短,加上面团包油和面皮延伸等工艺的缺乏,使得我国的起酥饼干和糕点产品... 日本起酥饼干和糕点属于高档消费食品类型,这类食品的油脂含量较高,水分含量较少,加上其酥松可口,一直受到人们的广泛喜爱。我国的起酥饼干和糕点生产,起步时间较短,加上面团包油和面皮延伸等工艺的缺乏,使得我国的起酥饼干和糕点产品质量一直饱受争议。日本起酥饼干和糕点一般只有我国的几个大城市的食品厂能够进行生产。但随着我国的经济发展和人民生活水平的提高,起酥饼干和糕点的需求量也在逐渐增加,传统的生产模式已经无法满足市场需求,为此,我国的一些城市逐渐引进日本起酥饼干和糕点的生产线。这些生产线能够为我国的食品市场提供高质量的起酥饼干和糕点,满足人们的生活需求。 展开更多
关键词 起酥饼干 糕点 制作工艺
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猪圆环病毒感染的PCR鉴别诊断 预览
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作者 杨美 周怡 +2 位作者 王柏林 何玲 《贵州畜牧兽医》 2018年第4期13-16,共4页
为了确诊临床疑似猪圆环病毒感染病例,为猪场疫病的防控与净化明确目标,采集病例组织样本运用RT-PCR和PCR方法进行猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪支原体、猪圆环病毒检测.结果:猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪支原体检测... 为了确诊临床疑似猪圆环病毒感染病例,为猪场疫病的防控与净化明确目标,采集病例组织样本运用RT-PCR和PCR方法进行猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪支原体、猪圆环病毒检测.结果:猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪支原体检测为阴性,猪圆环病毒检测为阳性,确诊为猪圆环病毒感染. 展开更多
关键词 猪圆环病毒 PCR检测 鉴别诊断
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贵州省某野生动物园动物肠道寄生虫调查及其形态学观察 预览
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作者 蒲翠敏 罗引幸 +5 位作者 胡兴义 张海 王开功 周碧君 文明 《野生动物学报》 北大核心 2018年第4期943-947,共5页
为了解贵州省某野生动物园内野生动物肠道寄生虫的感染情况,笔者采用饱和盐水漂浮法和沉淀法对该野生动物园的25种野生动物粪便进行了寄生虫卵的形态观察,并区分种类,统计了其感染率。结果显示,共检出4类寄生虫卵,分别为:线虫卵... 为了解贵州省某野生动物园内野生动物肠道寄生虫的感染情况,笔者采用饱和盐水漂浮法和沉淀法对该野生动物园的25种野生动物粪便进行了寄生虫卵的形态观察,并区分种类,统计了其感染率。结果显示,共检出4类寄生虫卵,分别为:线虫卵、球虫卵、绦虫卵和吸虫卵,总感染率为52%(13/25),以线虫、球虫感染较为突出。此次调查,为该野生动物园制定驱虫方案提供了科学依据,为贵州省野生动物寄生虫感染情况提供了基础数据。 展开更多
关键词 野生动物 线虫 球虫 绦虫 吸虫
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乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌组合对哺乳仔猪生长性能、免疫器官指数和血液生理生化指标的影响 被引量:1
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作者 张双翔 胡兴义 +7 位作者 冯旭芳 王燕 谢玲玲 李波 王开功 文明 周碧君 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2018年第5期171-173,共3页
为研究乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌对哺乳仔猪生长性能、免疫指标和血液生理生化指标的影响,试验将80头新生哺乳仔猪平均分为对照组和试验组,试验组仔猪灌服乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌组成的复合益生菌制剂,对照组不灌服,试验期为2... 为研究乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌对哺乳仔猪生长性能、免疫指标和血液生理生化指标的影响,试验将80头新生哺乳仔猪平均分为对照组和试验组,试验组仔猪灌服乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌组成的复合益生菌制剂,对照组不灌服,试验期为21 d。试验结束时,测定仔猪生长性能;每组随机选择20头仔猪前腔静脉采血,检测血液生理生化指标;同时每组选取4头体型中等的仔猪进行屠宰,钝性分离免疫器官,测定免疫器官重,计算免疫器官指数。结果表明:与对照组相比,试验组仔猪腹泻率极显著降低(P〈0.01),仔猪平均日增重显著提高(P〈0.05);试验组仔猪腹股沟淋巴结、脾脏、肾脏、肝脏、心脏和胸腺指数均高于对照组,其中肾脏和心脏指数差异极显著(P〈0.01),脾脏指数差异显著(P〈0.05);试验组仔猪血液中白细胞数、粒细胞比率、粒细胞数、红细胞数、血红蛋白、血细胞比容和血红蛋白含量均极显著高于对照组(P〈0.01),淋巴细胞数和血小板压积显著高于对照组(P〈0.05)。说明乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌组成的复合益生菌能够提高仔猪的生长性能和免疫水平。 展开更多
关键词 益生菌 哺乳仔猪 生长性能 免疫水平 生理指标
贵州省布鲁氏菌病血清学流行病学调查 预览
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作者 曾秀玲 李照伟 +3 位作者 刘霞 熊力 张霞 《兽医导刊》 2018年第18期78-79,122共3页
为了解贵州省布鲁氏菌病感染流行情况,本研究随机采集2013-2015年全省9个市(州)3435个场点165819份未免家畜血清样品,通过虎红平扳凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)方法进行筛选和确诊。调查结果显示,3年间我省布病总体感染率... 为了解贵州省布鲁氏菌病感染流行情况,本研究随机采集2013-2015年全省9个市(州)3435个场点165819份未免家畜血清样品,通过虎红平扳凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)方法进行筛选和确诊。调查结果显示,3年间我省布病总体感染率为1.93%(3201/165819),其中2013年布病感染率为0.71%(180/25467),2014年布病感染率为1.72%(1299/75630),2015年布病感染率为2.66%(1722/64722),呈现逐年增长且稳中有升的趋势;近三年以羊的布病感染情况最为严峻,感染率不断上升;散养户样品布病感染率高于种畜场和商品代饲养场,特别是散养羊的感染比重很大;我省9个市(州)均有家畜布病感染情况发生,呈现多区域、小范围的散发。 展开更多
关键词 布鲁氏菌病 血清学 流行病学调查 贵州省
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