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CD64在危重疾病合并感染诊断中的应用进展 预览
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作者 李蕊 常亮 +4 位作者 李金洁 刁艳君 苏明 郝晓柯 杨柳 《临床检验杂志》 CAS 2019年第7期531-534,共4页
临床一些危重疾病(如重症胰腺炎、重度烧伤等)合并感染时具有病死率高和早期临床诊断难度大的特点,生物标记物的检测可提高其早期诊断准确性,降低死亡率。中性粒细胞CD64对于感染的诊断意义已经被广泛认可,其在感染早期诊断中的价值优... 临床一些危重疾病(如重症胰腺炎、重度烧伤等)合并感染时具有病死率高和早期临床诊断难度大的特点,生物标记物的检测可提高其早期诊断准确性,降低死亡率。中性粒细胞CD64对于感染的诊断意义已经被广泛认可,其在感染早期诊断中的价值优于其他生物学标志物,且有助于感染严重程度及预后评估。但CD64在一些危重疾病如重症胰腺炎、肿瘤、烧伤、术后是否合并感染的早期诊断以及在真菌和病毒感染诊断中的临床应用鲜有研究。CD64作为免疫系统的重要组成部分,受多种因素影响,在临床应用中需要连续监测,综合判断。该文就CD64作为感染性指标在判断一些重症疾病是否发生感染中的临床应用进行总结,明确CD64在其中的诊断意义。 展开更多
关键词 CD64 感染 危重疾病
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血清外泌体中HBV标志物检测的临床意义 预览
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作者 朱琳 辛毅娟 +3 位作者 马越云 苏明 郝晓柯 杨柳 《国际检验医学杂志》 CAS 2019年第A01期112-115,共4页
目的检测HBV感染者血清外泌体中HBV成分,比较其与常规检测方法的差异,评价其对检验结果的影响。方法提取HBV感染者血清外泌体,与血清样本一起,用荧光定量PCR法检测HBVDNA,以电化学发光方法检测HBVHBsAg和HBeAg。T检验比较其间差异,分析... 目的检测HBV感染者血清外泌体中HBV成分,比较其与常规检测方法的差异,评价其对检验结果的影响。方法提取HBV感染者血清外泌体,与血清样本一起,用荧光定量PCR法检测HBVDNA,以电化学发光方法检测HBVHBsAg和HBeAg。T检验比较其间差异,分析相关系数。结果血清外泌体中含有大量HBVDNA、HBsAg和HBeAg。其中HBVDNA在血清和外泌体之间差异不显著,但HBsAg和HBeAg在低浓度血清样本中高度聚集于外泌体,最高差异分别可达100倍和25倍。结论血清外泌体中含有大量HBVDNA、HBsAg和HBeAg;HBVDNA在血清和外泌体中接近等量;血清外泌体中HBsAg和HBeAg检测对于HBV感染有重要提示意义。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 E抗原 表面抗原 核酸 外泌体
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尿液外泌体提取优化及冷冻对外泌体RNA含量的影响 预览
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作者 南阿妮 刁艳君 +3 位作者 杨柳 马越云 苏明 郝晓柯 《临床检验杂志》 CAS 2019年第5期325-330,共6页
目的对现有沉淀法提取尿液外泌体进行优化,并探讨不同的储存条件对尿液外泌体RNA含量的影响。方法分别用先浓缩后沉淀法和直接沉淀法提取人尿液标本中的外泌体,比较两种方法的分离效率和成本;采用ExoQuick-TCTM沉淀试剂盒提取外泌体;纳... 目的对现有沉淀法提取尿液外泌体进行优化,并探讨不同的储存条件对尿液外泌体RNA含量的影响。方法分别用先浓缩后沉淀法和直接沉淀法提取人尿液标本中的外泌体,比较两种方法的分离效率和成本;采用ExoQuick-TCTM沉淀试剂盒提取外泌体;纳米粒子跟踪分析技术(NTA)检测外泌体浓度及粒径分布;动态光散射技术(DLS)检测外泌体电位;透射电镜(TEM)观察外泌体形态;western blot检测外泌体标记分子CD63及Alix蛋白的表达;另取10例临床尿液标本验证先浓缩后沉淀的提取方法,以证实优化方法的可靠性。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测20例前列腺癌患者尿液外泌体经过反复冻融(新鲜、1、3、5次)及9例前列腺癌患者尿液外泌体在-80℃冷冻不同时间(新鲜、1周、2周、1个月)时外泌体RNA标志物let-7c和PSA mRNA的表达量,并采用Wilcoxon秩和检验进行统计学分析。结果 NTA检测两种方法提取的外泌体粒径分布为30~150 nm,均为单峰;DLS结果显示,两种方法提取的外泌体电位均呈负值;透射电镜观察两种方法提取的外泌体大小较为一致,直径分布为30~150 nm;western blot检测证实优化方法存在外泌体标记分子CD63及Alix蛋白;10例尿液标本提取的外泌体浓度约为109~1011 particles/mL。外泌体经过5次冻融后let-7c和PSA mRNA含量明显下降,Z值分别为-1.69、-1.73(P均<0.05)。而外泌体在-80℃冷冻1个月后其RNA含量保持稳定。结论优化后的外泌体提取方法在保证外泌体浓度和质量的前提下极大地降低成本,分离得到的外泌体在-80℃短时间冷冻后其RNA含量保持稳定,但不能反复冻融超过5次。 展开更多
关键词 尿液 外泌体 外泌体RNA 反复冻融
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全国首例子宫移植者术后他克莫司浓度和淋巴细胞亚群监测及临床意义 预览 被引量:1
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作者 李蕊 杨柳 +6 位作者 李金洁 常亮 杨静 苏明 陈必良 马越云 郝晓柯 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2017年第1期53-56,共4页
目的探讨子宫移植后受者他克莫司血药浓度及外周血淋巴细胞亚群的变化规律,为子宫移植后免疫状态的监测提供依据。方法采用微粒子酶免疫分析法连续检测子宫移植受者术后1年内他克莫司全血药物浓度的变化情况。全血样本同时用血液分析仪... 目的探讨子宫移植后受者他克莫司血药浓度及外周血淋巴细胞亚群的变化规律,为子宫移植后免疫状态的监测提供依据。方法采用微粒子酶免疫分析法连续检测子宫移植受者术后1年内他克莫司全血药物浓度的变化情况。全血样本同时用血液分析仪测定血液常规指标,流式细胞仪检测外周血淋巴细胞亚群。结果子宫移植受者术后第1个月他克莫司药物血药浓度为(13.51±3.92)ng/m L,第2个月为(15.58±1.19)ng/m L。术前淋巴细胞绝对计数处于正常水平;术后5 d外周血CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、CD4/CD8、NK细胞均显著减少;术后1周后淋巴细胞趋向于正常范围并维持,CD4+T淋巴细胞恢复正常时间晚于CD8+T淋巴细胞;CD4/CD8在术后10 d内,比值在0.4-0.8之间,10 d后比值上升,基本维持在0.8至1.1之间,始终低于术前水平;NK细胞在术后10 d逐渐上升,但直至术后20 d仍未恢复至术前水平;B淋巴细胞计数和百分比在术后5 d不但没有下降反而处于增高趋势,并于术后10 d之后计数和百分比逐渐恢复正常。CD3+T淋巴细胞计数与他克莫司血药浓度之间并未见明显相关性。结论子宫移植患者淋巴细胞亚群和他克莫司药物浓度呈动态变化,但还需积累大量临床数据。 展开更多
关键词 子宫移植 他克莫司 淋巴细胞亚群
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尿液exosomal miR-375在前列腺癌诊断中的价值初探 被引量:2
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作者 李腊秀 马越云 +2 位作者 李卓 苏明 郝晓柯 《中华检验医学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第4期273-277,共5页
目的研究尿液exosomal miR-375在前列腺癌中的表达及临床应用价值。方法收集45例前列腺癌患者、24例前列腺增生患者、24名健康对照者的尿液,提取尿液中的exosomal RNA。应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测尿液exosomal miR-... 目的研究尿液exosomal miR-375在前列腺癌中的表达及临床应用价值。方法收集45例前列腺癌患者、24例前列腺增生患者、24名健康对照者的尿液,提取尿液中的exosomal RNA。应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测尿液exosomal miR-375的表达量,并采用全面的统计方法探讨miR-375对前列腺癌的临床价值。结果前列腺癌尿液exosomal miR-375的表达量较BPH和健康对照组明显下调,差异有统计学意义(P〈0.01)。但miR-375在BPH组和对照组中的表达差异无统计学意义(P〉0.05)。尿液exosomal miR-375的表达与临床分期和骨转移相关(P〈0.05),随着临床分期的增加,miR-375的表达水平降低;但miR-375的表达量与患者年龄、Gleason评分和血清前列腺特异性抗原水平相关性不强(P〉0.05)。ROC曲线显示尿液exosomal miR-375较PSA能够更好地区分前列腺癌与BPH,曲线下面积分别为0.715(95% CI:0.589~0.842)、0.632(95% CI:0.492~0.771)。结论尿液exosomal miR-375可作为前列腺癌非侵入性的分子诊断标志物。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 前列腺增生 微RNAS 尿 肿瘤标记 生物学
罗氏cobase602与modular e170电化学发光分析仪检测血清HBsAg阳性低值结果的对比分析 预览 被引量:2
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作者 李娅 章迪 +2 位作者 张贇 皇海 苏明 《现代检验医学杂志》 CAS 2017年第3期123-125,共3页
目的探讨乙肝表面抗原(HBsAg)阳性低值结果在不同检测系统间结果的相关性,为临床检验结果分析及报告的准确发布提供参考。方法选取经罗氏电化学发光检测仪Cobase602检测的HBsAg结果在1~80c0I的标本243份,同时将标本在罗氏电化学发... 目的探讨乙肝表面抗原(HBsAg)阳性低值结果在不同检测系统间结果的相关性,为临床检验结果分析及报告的准确发布提供参考。方法选取经罗氏电化学发光检测仪Cobase602检测的HBsAg结果在1~80c0I的标本243份,同时将标本在罗氏电化学发光检测仪Modulare170上进行检测,计算两组测定值的直线回归相关系数R。值,计算各组别的阳性符合率。结果两个检测系统比对实验结果为R^2=-0.933。根据测定值高低分为A,B,C,D和E组的阳性符合率分别为60.60%,92.72%,96.66%,96.66%和100%;男性组阳性符合率为87.66%,女性组阳性符合率为70.96%,男性患者阳性符合率大于女性患者(P〈0.05)。结论两检测系统对于范围在1~80COI的标本检测结果有相关性:其中测量值在10COI以上标本的阳性符合率完全-致;测量值在1~10c0I的标本阳性符合率不一致,且随结果的减小而降低,在临床上可能导致有争议的结果,建议做进一步复查。 展开更多
关键词 乙肝表面抗原 罗氏Cobas e602 罗氏MODULAR e170 阳性低值
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基于PCR-RDB法对陕西地区HCV基因型别的研究 预览 被引量:1
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作者 杨柳 李金洁 +4 位作者 苏明 常亮 李蕊 马越云 郝晓柯 《分子诊断与治疗杂志》 2017年第3期160-164,共5页
目的探讨聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)-反向点杂交法(reverse dot blot,RDB)在陕西地区丙型肝炎病毒基因分型中的应用。方法选取陕西地区610例丙型肝炎患者,利用PCR-RDB法进行丙肝病毒基因型检测,并使用SPSS对检测结... 目的探讨聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)-反向点杂交法(reverse dot blot,RDB)在陕西地区丙型肝炎病毒基因分型中的应用。方法选取陕西地区610例丙型肝炎患者,利用PCR-RDB法进行丙肝病毒基因型检测,并使用SPSS对检测结果进行统计学分析。结果 610例丙肝患者检出1b型273例(44.75%),2a型286例(46.89%),3a型30例(4.92%),3b型11例(1.80%),6a型10例(1.64%);各基因型间的患者性别比例的差异具有统计学意义(P<0.05);与其他基因型别相比,HCV 3a型患者年龄水平最低,差异显著(P<0.05)。结论陕西地区丙肝病毒以2a、1b型为主,患者性别及年龄与所感染HCV型别有关联性;PCR-RDB技术在丙型肝炎病毒基因分型中的应用有利于HCV分型在临床上的推广。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 基因分型 PCR-反向点杂交
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Beclin1进化保守区-SA融合蛋白偶联生物素-A10适配子制备PSMA靶向系统及其对前列腺癌细胞的抑制 被引量:2
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作者 高萌 刘家云 +5 位作者 马越云 李蕊 李卓 苏明 唐海斌 郝晓柯 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期161-167,共7页
目的:构建链霉亲和素(streptavidin,SA)与Beclin1进化保守区(evolutionary conserved district,ECD)融合蛋白原核表达载体,将融合蛋白与生物素-前列腺特异性膜抗原(prostate specific membrane antigen,PSMA)特异性适配子A10偶... 目的:构建链霉亲和素(streptavidin,SA)与Beclin1进化保守区(evolutionary conserved district,ECD)融合蛋白原核表达载体,将融合蛋白与生物素-前列腺特异性膜抗原(prostate specific membrane antigen,PSMA)特异性适配子A10偶联制备PSMA靶向系统,鉴定其促进PSMA+前列腺癌细胞凋亡及自噬的功能。方法:采用基因合成技术获得融合基因SA-ECD,克隆至PUC57载体鉴定无误后,再将其定向插入原核表达载体PET30a,IPTG诱导融合蛋白表达,镍亲和凝胶层析柱纯化融合蛋白,Western blotting鉴定。按照生物素-A10∶SA-ECD摩尔比为4∶1的比例制备PSMA特异性的偶联物即靶向系统,凝胶迁移阻滞实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证SA-ECD与生物素的结合,流式细胞术、Western blotting、锥虫蓝染色分别检测靶向系统对前列腺癌细胞凋亡、自噬相关蛋白表达和细胞活力的影响。结果:双酶切及基因测序证实重组质粒PET30a-SA-ECD构建成功,IPTG诱导SA-ECD融合蛋白在大肠杆菌中获得高效表达并经亲和凝胶层析成功纯化。EMSA实验证明SA-ECD能有效结合生物素-A10。靶向系统可促进PSMA+前列腺癌细胞凋亡和自噬,同时抑制癌细胞活力。结论:成功表达并纯化融合蛋白SA-ECD,构建的生物素-A10∶SA-ECD靶向系统能够杀伤PSMA^+前列腺癌细胞。 展开更多
关键词 链霉亲和素 Beclin1蛋白 进化保守区 融合蛋白 适配子A10 前列腺癌 凋亡 自噬
HCV-RNA与 HCV-Ab,HCV-cAg相关性分析研究 预览 被引量:4
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作者 李娅 张赟 +3 位作者 皇海 章迪 苏明 郭旭昌 《现代检验医学杂志》 CAS 2016年第5期120-122,共3页
目的:探讨丙型肝炎患者中 HCV-RNA与 HCV-Ab,HCV-cAg三种检测指标的相关性和临床应用效果。方法采用酶联免疫法分别检测实时荧光定量 PCR法检测阳性的140例 HCV患者血清中的 HCV-Ab和 HCV-cAg,以了解检测结果及符合率。结果在140例 H... 目的:探讨丙型肝炎患者中 HCV-RNA与 HCV-Ab,HCV-cAg三种检测指标的相关性和临床应用效果。方法采用酶联免疫法分别检测实时荧光定量 PCR法检测阳性的140例 HCV患者血清中的 HCV-Ab和 HCV-cAg,以了解检测结果及符合率。结果在140例 HCV-RNA阳性血清中,HCV-cAg 阳性127例,符合率90.71%;HCV-Ab 阳性110例,符合率78.57%;对不同 HCV-RNA浓度的血清进行 HCV-cAg检测结果其阳性检出率随着 HCV病毒含量的升高而增高;不同 HCV-RNA浓度的血清进行 HCV-Ab检测结果无明显变化。结论通过对 HCV-RNA阳性患者中 HCV-Ag和 HCV-Ab的检测观察分析,HCV-cAg检测与 HCV-RNA的检测结果具有较高的符合率。因此 HCV-cAg检测可作为HCV-Ab的补充检测,为 HCV“窗口期”感染以及免疫低下人群感染的筛查提供简便、廉价方法;同时为不具备 HCV-RNA检测条件的基层医疗单位,作为 HCV感染的快速筛查提供诊断依据。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 丙型肝炎核酸 丙型肝炎病毒核心抗原 丙型肝炎病毒抗体
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阴道感染三种病原菌多重PCR检测方法的建立及其应用研究 预览
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作者 李娅 章迪 +2 位作者 张赟 苏明 郭旭昌 《现代检验医学杂志》 CAS 2016年第2期42-45,共4页
目的探讨阴道感染病原体多重PCR快速检测白念珠菌、加德纳菌和阴道滴虫的方法建立及其临床应用。方法根据白念珠菌E03基因、加德纳菌ITS-23srRNA基因及阴道滴虫TVK3~TVK7基因设计特异性PCR引物,采用加热煮沸裂解法制备DNA模板,进行多... 目的探讨阴道感染病原体多重PCR快速检测白念珠菌、加德纳菌和阴道滴虫的方法建立及其临床应用。方法根据白念珠菌E03基因、加德纳菌ITS-23srRNA基因及阴道滴虫TVK3~TVK7基因设计特异性PCR引物,采用加热煮沸裂解法制备DNA模板,进行多重PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳检测分析,在同一体系内完成三种阴道常见病原体的快速检测。结果经特异性试验证明所建立的方法能特异地检测出白念珠菌125bp,加德纳菌433bp和阴道滴虫300bp的目的片段,而其它非目的菌株均不能扩增出相应片段;敏感性试验证实白念珠菌为10cfu/ml,加德纳菌为10cfu/ml,阴道滴虫为20cfu/ml;对30份已知临床标本和10份模拟混合标本进行检测均可检测出相应的病原体。结论实验证明该研究所建立的白念珠菌、加德纳菌和阴道滴虫的多重PCR体系,具有灵敏度高、特异度强,可一步同时检测阴道分泌物中三种病原体,用于阴道感染的早期快速诊断。 展开更多
关键词 白念珠菌 加德纳菌 阴道滴虫 多重PCR
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CREB及p-CREB在前列腺癌细胞增殖中的作用 被引量:3
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作者 唐海斌 马越云 +6 位作者 苏明 李蕊 常亮 高萌 付晓蕊 杨玉琪 郝晓柯 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期223-229,共7页
目的:探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白(c AMP-response element binding protein,CREB)及磷酸化CREB(p-CREB)在前列腺癌细胞增殖中的作用。方法:采用组织芯片技术检测人正常前列腺、前列腺增生、不同分级前列腺癌组织中CREB及p-CRE... 目的:探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白(c AMP-response element binding protein,CREB)及磷酸化CREB(p-CREB)在前列腺癌细胞增殖中的作用。方法:采用组织芯片技术检测人正常前列腺、前列腺增生、不同分级前列腺癌组织中CREB及p-CREB的表达水平;免疫荧光及Western blotting检测人正常前列腺基质永生化细胞WPMY-1、前列腺癌细胞PC3及LNCap中CREB及p-CREB的表达水平;构建重组人源CREB质粒,并转染PC3及LNCap细胞,Western blotting及CCK-8试剂盒检测转染效率及细胞增殖水平的变化。结果:CREB及p-CREB在前列腺癌组织中表达率明显高于正常前列腺(96%vs 50%,88%vs 40%,P〈0.05)和前列腺增生组织(96%vs 80%,88%vs 60%,P〈0.05);CREB及p-CREB蛋白水平在前列腺癌PC3及LNCap细胞中表达量显著高于正常前列腺基质永生化细胞WPMY-1[PC3细胞:(5.10±0.62)vs(2.31±0.40)、(4.31±0.54)vs(2.02±0.38);LNCap细胞:(7.5±0.83)vs(2.31±0.40)、(6.15±0.69)vs(2.02±0.38),均P〈0.05)];转染重组质粒CREB可上调前列腺癌细胞PC3及LNCap中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达(均P〈0.05),且转染后的PC3及LNCap细胞增殖水平明显增加(P〈0.05)。结论:CREB及p-CREB在前列腺癌组织、体外培养前列腺癌细胞PC3及LNCap中高表达,并可上调PC3及LNCap中增殖相关基因PCNA的表达,提高细胞增殖水平。 展开更多
关键词 环磷腺苷效应元件结合蛋白 磷酸化CREB 前列腺癌 增殖
MTHFR基因多态性及血浆同型半胱氨酸水平与心脑血管疾病的相关性分析 预览 被引量:9
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作者 李蕊 杨柳 +2 位作者 苏明 郝晓柯 马越云 《检验医学》 CAS 2016年第10期922-924,共3页
亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetra hydrofolate reductase,MTHFR)在叶酸代谢中发挥了重要作用,MTHFR可以催化5,10-亚甲基四氢叶酸转化还原为5-甲基四氢叶酸,该转化过程也为同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)的甲基化提供甲基,从... 亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetra hydrofolate reductase,MTHFR)在叶酸代谢中发挥了重要作用,MTHFR可以催化5,10-亚甲基四氢叶酸转化还原为5-甲基四氢叶酸,该转化过程也为同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)的甲基化提供甲基,从而可以快速调节血浆Hcy浓度。1995年,FROSST等[2]确定了MTHFR基因在677位点C→T的变异会导致肽链上222位的缬氨酸(Val)被丙氨酸(Ala)替代,并且这个变异会导致MTHFR活性降低. 展开更多
关键词 亚甲基四氢叶酸还原酶 同型半胱氨酸 基因多态性 心脑血管疾病
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结核分枝杆菌体外休眠模型的建立
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作者 付晓蕊 郑青 +4 位作者 周磊 旦正尖措 苏明 郝晓柯 马越云 《现代生物医学进展》 CAS 2016年第11期2032-2036,共5页
目的:模拟结核分枝杆菌体内缺氧和微营养的生长环境建立其休眠模型。方法:将牛分枝杆菌卡介苗野生株BCG菌株在"微需氧+pH5.0+10%Dubos"的条件下培养,以菌株生长停滞,菌体表面脂质体增厚为休眠标准进行鉴定。取不同时间菌株测定600... 目的:模拟结核分枝杆菌体内缺氧和微营养的生长环境建立其休眠模型。方法:将牛分枝杆菌卡介苗野生株BCG菌株在"微需氧+pH5.0+10%Dubos"的条件下培养,以菌株生长停滞,菌体表面脂质体增厚为休眠标准进行鉴定。取不同时间菌株测定600 nm下的吸光度(A)值绘制生长曲线,同时进行金胺O-尼罗红(Auramin-O,Nile Red)双荧光染色和实时荧光定量PCR(Quantitative Realtime-PCR,qRT-PCR)检测休眠相关基因的表达量,确定菌株进入休眠状态。结果:在休眠条件培养过程中,BCG菌株的生长速度与常规条件培养菌株相比明显减慢(P〈0.01),并且在休眠条件培养中第10、14和18天细菌生长基本接近停滞状态(P〈0.01);同时金胺O荧光染色显示绿色荧光减弱,尼罗红红色荧光增强;休眠相关基因hspX、devR表达量逐渐上调,且培养第18天菌株明显高于第0天培养菌株(P〈0.05)。结论:应用"微需氧+p H5.0+10%Dubos"条件培养,以金胺O-尼罗红染色和devR表达为标准,可以成功建立结核分枝杆菌休眠模型。 展开更多
关键词 休眠 金胺O 尼罗红 hspX基因 devR基因
ICU鲍氏不动杆菌分子流行特点研究 被引量:2
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作者 杨玉琪 郝晓柯 +5 位作者 马越云 苏明 徐修礼 刘家云 周珊 唐海斌 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1694-1696,共3页
目的了解医院ICU鲍氏不动杆菌的分子流行特点,分析其基因同源相关性,为有效控制医院感染的发生提供实验室依据。方法收集医院2013年3-8月ICU分离的68株鲍氏不动杆菌,采用多位点序列分型技术,PCR扩增7个管家基因片段,并进行测序分析,结果... 目的了解医院ICU鲍氏不动杆菌的分子流行特点,分析其基因同源相关性,为有效控制医院感染的发生提供实验室依据。方法收集医院2013年3-8月ICU分离的68株鲍氏不动杆菌,采用多位点序列分型技术,PCR扩增7个管家基因片段,并进行测序分析,结果与PubMLST数据库进行比对分析,使用eBURST软件对ST数据进行亲缘关系分析。结果 68株鲍氏不动杆菌被分为13个ST基因型,其中新发现2个ST基因型,其他11个ST基因型均属于克隆复合体92,具有同源相关性。结论医院ICU的鲍氏不动杆菌具有基因同源相关性,并呈现出水平传播的趋势。 展开更多
关键词 重症监护病房 鲍氏不动杆菌 多位点序列分型 基因同源相关性
SA-hirudin-RGD融合蛋白的原核表达及其抗凝血酶与抗血小板聚集功能的研究 被引量:1
15
作者 王珊 刁艳君 +3 位作者 马越云 苏明 郝晓柯 刘家云 《现代生物医学进展》 CAS 2015年第35期6804-6807,共4页
目的:构建SA-hirudin-RGD重组载体,表达和纯化融合蛋白,并对其抗凝血酶、抗血小板聚集功能进行初步验证。方法:利用基因重组技术将链霉亲和素(SA)核心区与hirudin-RGD序列连接,并克隆到原核表达载体PET-44b中,Westernblotting鉴定经... 目的:构建SA-hirudin-RGD重组载体,表达和纯化融合蛋白,并对其抗凝血酶、抗血小板聚集功能进行初步验证。方法:利用基因重组技术将链霉亲和素(SA)核心区与hirudin-RGD序列连接,并克隆到原核表达载体PET-44b中,Westernblotting鉴定经IPTG诱导后纯化的融合蛋白。抗凝血酶和抗血小板聚集作用分析证明该融合蛋白既有抗凝血酶又有抗血小板聚集的功能。结果:重组载体p ET44b-SA-hirudin-RGD经限制性酶切鉴定和基因测序证实构建成功;经IPTG诱导后SA-hirudin-RGD融合蛋白在大肠杆菌中高效表达;纯化得到该目的蛋白,相对分子质量经Westernblotting鉴定约为70000。抗凝血酶和抗血小板聚集的实验证明,融合蛋白SA-hirudin-RGD既有抗凝血酶又有抗血小板聚集的功能。结论:具有抗凝血酶和抗血小板聚集双重功能的SA-hirudin-RGD融合蛋白被成功表达和纯化,为下一步SA-hirudin-RGD的功能研究及临床应用确立了基础。 展开更多
关键词 水蛭素 RGD 融合蛋白 抗凝血酶 抗血小板聚集
devR基因调控的结核分枝杆菌细胞毒性的研究 预览
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作者 旦正尖措 马越云 +3 位作者 周磊 付晓蕊 苏明 郝晓柯 《检验医学》 CAS 2015年第6期607-612,共6页
目的阐明devR基因表达对分枝杆菌生长及感染能力的影响。方法确认野生型牛分支杆菌卡介苗(M.bovis BCG,简称BCG)、devR基因敲除的BCG菌株(简称ΔdevR)和devR基因回补的BCG菌株(简称devR.com)的devR序列正确;在不同时间点测定600 n... 目的阐明devR基因表达对分枝杆菌生长及感染能力的影响。方法确认野生型牛分支杆菌卡介苗(M.bovis BCG,简称BCG)、devR基因敲除的BCG菌株(简称ΔdevR)和devR基因回补的BCG菌株(简称devR.com)的devR序列正确;在不同时间点测定600 nm下的吸光度(A)值,绘制3种细菌的生长曲线;以感染复数(MOI)=10感染人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549(简称A549细胞)和小鼠巨噬细胞Raw264.7(简称Raw264.7细胞),分别采用流式细胞仪和酶联免疫吸附试验于0、24、48、72 h测定细胞凋亡率和乳酸脱氢酶(LDH)释放水平;采用实时定量PCR(RT-PCR)测定凋亡相关基因bcl-2和bad的表达水平。结果ΔdevR菌株在早期(培养2-10 d)生长较BCG菌株和devR.com菌株明显加快(P〈0.01)。ΔdevR菌株感染A549细胞和Raw264.7细胞后,细胞的凋亡和坏死效应明显增加,与BCG菌株和devR.com菌株比较差异有统计学意义(P〈0.05)。3种菌株感染A549细胞均导致凋亡相关基因bcl-2表达上调,且ΔdevR菌株感染组bcl-2基因表达明显高于BCG和devR.com菌株感染组;3种菌株感染Raw264.7细胞均导致凋亡相关基因bad表达上调,且ΔdevR菌株感染组bad基因表达明显高于BCG和devR.com菌株感染组。结论 devR基因敲除的BCG菌株毒力明显增强。 展开更多
关键词 devR基因 卡介苗 感染 凋亡 乳酸脱氢酶
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实时荧光定量聚合酶链反应技术对结核性脑膜炎的诊断价值 预览 被引量:8
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作者 杨柳 苏明 +5 位作者 马越云 辛毅娟 韩若冰 张荣 文静 郝晓柯 《中国实验诊断学》 2015年第1期35-38,共4页
目的:探讨实时荧光定量聚合酶链反应技术(RT-PCR)对结核性脑膜炎的诊断价值。方法分别采用涂片法、RT-PCR法对结核性脑膜炎、疑似结核性脑膜炎以及非结核性脑膜炎患者的脑脊液标本进行检测,并对检测结果进行比较分析。结果涂片法共... 目的:探讨实时荧光定量聚合酶链反应技术(RT-PCR)对结核性脑膜炎的诊断价值。方法分别采用涂片法、RT-PCR法对结核性脑膜炎、疑似结核性脑膜炎以及非结核性脑膜炎患者的脑脊液标本进行检测,并对检测结果进行比较分析。结果涂片法共检出10例阳性,其中结核性脑膜炎7例(70.00%),疑似结核性脑膜炎3例(30.00%);RT-PCR法共检出46例阳性,其中结核性脑膜炎31例(67.39%),疑似结核性脑膜炎15例(32.61%)。对结核性脑膜炎患者检测,涂片法阳性率(12.28%)低于 RT-PCR 法阳性率(54.39%),差异有统计学意义(P<0.05);对疑似结核性脑膜炎患者检测,涂片法阳性率(2.91%)低于 RT-PCR法阳性率(14.56%),差异有统计学意义(P<0.05);脑脊液涂片法检测结核性脑膜炎的灵敏度为12.28%,漏诊率为87.72%,RT-PCR法检测的灵敏度为54.39%,漏诊率为45.61%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RT-PCR法诊断结核性脑膜炎具有灵敏度好,准确度高等特点,临床有重要的指导意义。 展开更多
关键词 结核性脑膜炎 脑脊液 实时荧光定量聚合酶链反应技术 诊断价值
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链霉亲和素-自噬相关基因融合蛋白的原核表达及纯化 预览 被引量:1
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作者 张志平 刘家云 +3 位作者 刁艳君 马越云 苏明 郝晓柯 《标记免疫分析与临床》 CAS 2014年第2期180-183,共4页
目的 构建链霉亲和素(streptavidin,SA)和自噬相关基因(Beclin 1)重组质粒,并对融合蛋白SA-Beclin 1进行表达和纯化.方法 利用基因重组技术将核心SA与Beclin 1序列连接,克隆人pQE80形成pQE80-SA-Beclin 1重组载体,IPTG诱导融合蛋白... 目的 构建链霉亲和素(streptavidin,SA)和自噬相关基因(Beclin 1)重组质粒,并对融合蛋白SA-Beclin 1进行表达和纯化.方法 利用基因重组技术将核心SA与Beclin 1序列连接,克隆人pQE80形成pQE80-SA-Beclin 1重组载体,IPTG诱导融合蛋白原核表达,镍亲和凝胶层析柱纯化融合蛋白,Western blot鉴定.结果 PCR成功扩增核心SA活性中心,酶切鉴定和测序均证实重组载体pQE80-SA-Beclin 1构建成功;IPTG诱导后SA-Beclin 1融合蛋白(含His标签)在大肠杆菌中高效表达,SDS-PAGE分析表达的融合蛋白以包涵体为主,经镍亲和凝胶层析柱纯化得到融合蛋白,Western blot鉴定其相对分子量约为72000kD,与预期相符.结论 本文成功构建了重组质粒并表达纯化了SA-Beclin 1融合蛋白,为进一步研究SA-Beclin 1的功能及临床应用奠定了基础. 展开更多
关键词 自噬相关基因 链霉亲和素 融合蛋白 原核表达 前列腺癌 基因重组技术 蛋白质免疫印迹技术 PCR
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幽门螺杆菌过氧化氢酶的重组表达、纯化及免疫特性研究 预览
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作者 屈玲 黄萍 +3 位作者 苏明 郑善銮 马越云 郝晓柯 《现代检验医学杂志》 CAS 2013年第1期7-11,共5页
目的 对幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)的过氧化氢酶(catalase,KatA)进行重组表达和纯化,并进行免疫学特性研究.方法 采用PCR扩增幽门螺杆菌katA全长基因,构建重组表达载体pET-28a-katA,在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,通过包... 目的 对幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)的过氧化氢酶(catalase,KatA)进行重组表达和纯化,并进行免疫学特性研究.方法 采用PCR扩增幽门螺杆菌katA全长基因,构建重组表达载体pET-28a-katA,在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,通过包涵体洗涤和亲和层析纯化出重组蛋白,并采用Western blot和ELISA等方法对其进行免疫学特性研究.结果 克隆出幽门螺杆菌1 518 bp的全长katA基因,在大肠埃希菌中诱导表达出505个氨基酸组成、分子量约为58 000的重组KatA蛋白,其表达量约占细菌总蛋白的20%,且以包涵体形式表达.经亲和层析的重组蛋白纯度约为85%,并可与兔抗Hp抗血清发生特异性反应.通过重组蛋白的动物免疫可产生高效价抗血清,并特异性识别多种Hp菌株.结论 成功重组表达与纯化出幽门螺杆菌KatA蛋白,并具备良好的免疫学特性,为Hp致病机制、血清学诊断以及亚单位疫苗研究奠定重要的实验基础. 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 过氧化氢酶 重组表达 免疫学特性
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3TAT-DRBD融合蛋白的原核表达及其siRNA结合活性与穿膜功能的鉴定
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作者 刁艳君 刘家云 +2 位作者 马越云 苏明 郝晓柯 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期201-206,共6页
目的:构建3TAT—DRBD重组载体,表达和纯化融合蛋白,并对其siRNA结合活性和穿膜功能进行初步验证。方法:采用基因合成技术获取靶基因3TAT-DRBD,并克隆到原核表达载体pET-44b中;用IPTG诱导融合蛋白表达,镍亲和凝胶层析柱纯化融合... 目的:构建3TAT—DRBD重组载体,表达和纯化融合蛋白,并对其siRNA结合活性和穿膜功能进行初步验证。方法:采用基因合成技术获取靶基因3TAT-DRBD,并克隆到原核表达载体pET-44b中;用IPTG诱导融合蛋白表达,镍亲和凝胶层析柱纯化融合蛋白,凝血酶切除标签,Western blotting鉴定。凝胶迁移阻滞实验验证DRBD和siRNA的结合能力,激光共聚焦显微镜观察TAT的穿膜能力。结果:限制性酶切和基因测序表明重组质粒pET-44b-3TAT.DRBD构建成功;IPTG诱导后3TAT—DRBD融合蛋白(含Nus标签和s标签)在大肠杆菌中高效表达,可溶性蛋白占菌体总蛋白约80%;成功切除融合标签并纯化了无标签的融合蛋白,经Western blotting鉴定其相对分子质量约为17000;凝胶迁移阻滞实验证明,融合蛋白3TAT-DRBD能有效结合靶向survivin基因的siRNA(survivin—siRNA);激光共聚焦显微镜下可见,在TAT的介导下survivin—siRNA穿透胞膜进入前列腺癌PC3细胞的效率明显增高。结论:成功表达并纯化了具有siRNA结合活性与穿膜功能的3TAT—DRBD融合蛋白,为进一步3TAT—DRBD的功能研究及临床应用奠定了基础。 展开更多
关键词 TAT DRBD 融合蛋白 SIRNA 前列腺癌 结合活性 穿膜功能
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