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环状RNA在肿瘤转移中的研究现状 预览
1
作者 王丹 《临床肿瘤学杂志》 CAS 北大核心 2019年第5期474-478,共5页
环状RNA(circular RNA,circRNA)是一种具有共价闭合环状结构的非编码RNA,具有稳定、保守和特异等特点,其在肿瘤的诊断、治疗以及预后等方面具有重要的作用。肿瘤转移是肿瘤患者治疗失败、预后不良的主要原因。近年来circRNA在肿瘤领域... 环状RNA(circular RNA,circRNA)是一种具有共价闭合环状结构的非编码RNA,具有稳定、保守和特异等特点,其在肿瘤的诊断、治疗以及预后等方面具有重要的作用。肿瘤转移是肿瘤患者治疗失败、预后不良的主要原因。近年来circRNA在肿瘤领域的研究为肿瘤转移的机制研究提供了新的思路。本文就circRNA的特征、机制和功能以及其在肿瘤转移中的作用作一综述。 展开更多
关键词 环状RNA 肿瘤 转移
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壳聚糖支架负载SHH和CM-Dil标记的脂肪干细胞移植后存活分化研究 预览
2
作者 罗鸣骜 伍尚敏 +4 位作者 高嘉 于璐 王翼寅 甘凤山 《中国美容医学》 CAS 2018年第10期129-132,共4页
目的观察壳聚糖支架负载音猬因子(Sonic hedgehog,SHH)和脂肪干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)移植后,ADSCs存活分化的效果.方法:将健康C57BL/6小鼠随机分为A组(PBS+ADSCs)、B组(SHH+ADSCs)、C组(壳聚糖+ADSCs)... 目的观察壳聚糖支架负载音猬因子(Sonic hedgehog,SHH)和脂肪干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)移植后,ADSCs存活分化的效果.方法:将健康C57BL/6小鼠随机分为A组(PBS+ADSCs)、B组(SHH+ADSCs)、C组(壳聚糖+ADSCs)、D组(壳聚糖+SHH+ADSCs).将各组混合物分别注射到小鼠背部皮下.术后1、2、4、8周处死小鼠,通过对移植组织一般观察、荧光显微镜观察、HE染色、免疫组化染色来评价移植细胞存活分化的情况.结果:术后8周,壳聚糖支架完全降解,大体观察、HE染色、免疫组化染色均说明壳聚糖支架同时搭载SHH和ADSCs脂肪干细胞存活率较高,新生血管增加,效果均优于A、B、C三组.结论:壳聚糖支架同时负载SHH和ADSCs可有效促进干细胞存活,显著增加血管组织数量. 展开更多
关键词 可注射性 壳聚糖 音猬因子 脂肪干细胞 干细胞移植
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肺癌围手术期髓系抑制细胞与调节性T细胞的相关性
3
作者 汪珺 杨柳 +3 位作者 王翼寅 陈睿 洪志鹏 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第7期1345-1347,共3页
目的检测肺癌患者围手术期外周血CD11b^+CD33^+人类自细胞抗原DR基因(HLA-DR)^-髓系抑制细胞(MDSCs)和CD4^+CD25^+又状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)^+调节性T细胞(Treg)的变化并探罚两者的相关性。方法选择择期开胸肺癌... 目的检测肺癌患者围手术期外周血CD11b^+CD33^+人类自细胞抗原DR基因(HLA-DR)^-髓系抑制细胞(MDSCs)和CD4^+CD25^+又状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)^+调节性T细胞(Treg)的变化并探罚两者的相关性。方法选择择期开胸肺癌根治术患者98例,年龄42-77岁,体重49~73k。分别于术前(T1)、术中(T2)、术后第1天(T3)、术后第3天(T4)和第7天(T5)采集外周血,采用流式细胞术(FCM)和血细胞分析测定MDSCs和Treg浓度并分析T1-T5时两者的相关性,FCM和免疫磁珠法分别分选T1~T5时MDSCs与T1时CD4^+细胞,将MDSCs与CD4^+细胞混合培养(未加Transwell小室组)或采用Transwell小室将MDSCs与CD4^+细胞相隔共培养(加入Transwell小室组),体外培养至第5天时FCM检测Treg。结果T3~T5时MDSCs浓度较T1显著升高[分别为(0.684±0.326)×10^9/L、(0.545±0.307)×10^9/L、(0.496±0.302)×10^9/L和(0.219±0.133)×10^9/L,P值分别为0.000、0.000和0.004];T5时Treg浓度较T1显著升高[分别为(0.051±0.033)×10^9/L和(0.034±0.020)×10^9/L,P=0.006]。T3-T5时MDSCs和Treg浓度呈正相关(Pearson相关系数r分别为0.2998、0.4342和0.4773,P值分别为0.004、0.000和0.000);T3-T5时MDSCs体外诱导Treg细胞数较T1时明显增多[Treg细胞数分别为(11.24±2.85)×10^4、(10.80±3.10)×10^4和(14.94±4.22)×10^4和(6.71±2.56)×10^4个,P值分别为0.003、0.000和0.000],与未加Transwell小室组比较,加入Transwell小室组T1-T5时MDSCs诱导Treg细胞数显著下降(P值分别为0.008、0.004、0.000、0.000和0.000)。结论肺癌患者术后MDSCs与Treg呈正相关,术后MDSCs诱导Treg能力较术前增强且MDSCs诱导Treg依赖细胞间相互接触。 展开更多
关键词 肺癌 围手术期 髓系抑制细胞 调节性T细胞
肿瘤细胞来源的外泌体在肿瘤转移中的作用及其机制
4
作者 汪熠 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2018年第11期681-684,共4页
外泌体是直径40~150nm的微囊泡,通过释放蛋白质、核酸等介导细胞间的信息交流。肿瘤细胞来源的外泌体(TEX)可在远端器官形成肿瘤转移前微环境,可调节肿瘤微环境中免疫细胞及免疫相关因子,促进肿瘤的免疫逃逸,其可通过促进肿瘤新生血管... 外泌体是直径40~150nm的微囊泡,通过释放蛋白质、核酸等介导细胞间的信息交流。肿瘤细胞来源的外泌体(TEX)可在远端器官形成肿瘤转移前微环境,可调节肿瘤微环境中免疫细胞及免疫相关因子,促进肿瘤的免疫逃逸,其可通过促进肿瘤新生血管形成、增加血管通透性、促进肿瘤细胞发生上皮间质转化等机制促进肿瘤转移。了解TEX在肿瘤转移方面的机制可为有效预防和治疗肿瘤转移提供新的思路。 展开更多
关键词 肿瘤转移 新生血管化 病理性 肿瘤细胞来源的外泌体 上皮间质转化
骨髓间充质干细胞预防手术后肿瘤肺转移动物模型研究 预览
5
作者 汪珺 +3 位作者 杨柳 乔飞 王翼寅 陈睿 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期89-94,共6页
背景与目的:近年来研究发现,肿瘤患者术后髓系抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)较术前升高,且其促肿瘤血管生成和肿瘤生长作用增强,骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem celis,BMSCs)可抑制MDSC... 背景与目的:近年来研究发现,肿瘤患者术后髓系抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)较术前升高,且其促肿瘤血管生成和肿瘤生长作用增强,骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem celis,BMSCs)可抑制MDSCs活化与增殖。但围手术期MDSCs的变化与肿瘤术后转移的关系及BMSCs能否通过抑制MDSCs预防手术后肿瘤转移尚不清楚。该研究拟探讨围手术期MDSCs变化与手术后肿瘤转移的相关性及BMSCs对围手术期MDSCs和手术后肿瘤转移的影响。方法:C57BL/6小鼠经尾静脉注射LLC细胞后分为4组:对照组(C组)、麻醉组(A组)、麻醉后开腹组(AL组)及麻醉后开腹并肝叶切除组(ALH组)。AL组小鼠手术后分为2组:术后无治疗组(ALl组)和术后给予同系BMSCs治疗组(ALB组)。流式细胞术检测小鼠外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中Gr-1^+CDllb^|细胞的含量;第14天计数小鼠肺表面转移灶。小鼠骨髓细胞体外诱导MDSCs体系中加入BMSCs共培养的方法探讨BMSCs对MDSCs生成的影响。结果:与C、A组相比,AL和ALH组小鼠肺转移灶显著增多(P〈O.01);且ALH组较AL组显著增多(P〈O.05)。手术后AL和ALH组小鼠PBMCs中Gr-1^+CDllb^+细胞与C、A组相比显著升高;与AIJ组比较,ALH组Gr-1^+CDllb^+细胞显著升高。第14天,AL及ALB组小鼠肺表面转移灶数量分别为38.00±9.57和16.54±1.49,差异有统计学意义(P〈O.01)。ALB组小鼠PBMCs中Gr-1^+CDllb^+细胞与ALl组相比明显降低。小鼠骨髓细胞体外诱导MDSCs体系中加入BMSCs可显著抑制MDSCs的活化和增殖。结论:手术应激诱导MDSCs并促肿瘤肺转移形成,BMSCs可以抑制MDSCs的生成进而抑制手术后肺转移形成。 展开更多
关键词 间质干细胞 髓系细胞 手术后期间 肿瘤转移
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睡美人转座子介导AEG1基因修饰的树突状细胞可治疗小鼠肝癌 被引量:1
6
作者 杨柳 王翼寅 +5 位作者 陈睿 吕莎 尹燕锋 李源 张蕾 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期723-731,共9页
目的 :探讨睡美人(Sleeping Bbeauty,SB)转座子系统转染树突状细胞(dendritic cells,DCs)的效率,以及星形胶质细胞上调基因1(astrocyte elevated gene 1,AEG 1)重组转座子系统转染DCs对小鼠肝癌的抑制作用。方法 :从pEGFP-N1质... 目的 :探讨睡美人(Sleeping Bbeauty,SB)转座子系统转染树突状细胞(dendritic cells,DCs)的效率,以及星形胶质细胞上调基因1(astrocyte elevated gene 1,AEG 1)重组转座子系统转染DCs对小鼠肝癌的抑制作用。方法 :从pEGFP-N1质粒中获取巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)启动子和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因,从小鼠肝癌细胞H22中克隆AEG1基因,将上述基因分别插入质粒pT/HB后获得重组转座子载体pT-CMV-EGFP和pT-CMV-AEG1。将重组转座子载体分别与转座酶p CMV-SB11按一定比例混合后获得双质粒转座子系统pT-CMV-EGFP/SB11和pT-CMV-AEG1/SB11。将pT-CMVEGFP/SB11转染DCs,荧光显微镜和FCM法观察EGFP表达率;将pT-CMV-AEG1/SB11转染DCs后,RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测AEG1 mRNA和蛋白的表达。用pT-CMV-AEG1/SB11转染后的DCs治疗肝癌H22细胞荷瘤小鼠,观察小鼠体内肿瘤体积的变化,并采用乳酸脱氢酶释放法检测治疗19 d后小鼠脾细胞对肝癌H22细胞的杀伤活性。结果 :经质粒酶切和基因测序证实,重组转座子载体pT-CMV-EGFP和pT-CMV-AEG1均构建成功。pT-CMV-EGFP/SB11转染DCs后24和48 h,细胞内EGFP的表达率分别为46.5%和27.8%,均明显高于空载体pTCMV/SB11转染组(P值均〈0.001)。pT-CMV-AEG1/SB11转染DCs后24 h,细胞内AEG1 mRNA和蛋白表达水平均高于空载体pT-CMV/SB11转染组(P值均〈0.001)。用pT-CMV-AEG1/SB11转染的DCs治疗H22荷瘤小鼠后,小鼠体内肿瘤生长被明显抑制(P〈0.01),小鼠脾细胞对肝癌H22细胞的杀伤活性明显增强(P〈0.01)。结论:SB转座子系统可高效转染DCs。pT-CMV-AEG1/SB11转染的DCs可通过诱导特异性细胞免疫,抑制H22细胞荷瘤小鼠的肿瘤生长。 展开更多
关键词 肝肿瘤 实验性 DNA转座子 基因治疗 树突细胞 小鼠 近交BALB/c
肺癌围手术期髓系抑制细胞的变化及对肿瘤生长和血管生成的影响 被引量:2
7
作者 汪珺 +4 位作者 乔飞 杨柳 王益寅 尹燕锋 洪志鹏 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期452-458,473共8页
目的:检测肺癌围手术期外周血髓系抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)的变化,并探讨其对肿瘤生长和肿瘤血管生成的影响。方法:采用FCM和血细胞分析技术检测98例肺癌患者围手术期外周血单个核细胞(peripheral blood ... 目的:检测肺癌围手术期外周血髓系抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)的变化,并探讨其对肿瘤生长和肿瘤血管生成的影响。方法:采用FCM和血细胞分析技术检测98例肺癌患者围手术期外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中CD11b^+CD33^+HLA-DR^-细胞百分比和浓度,蛋白芯片和ELISA检测血清中细胞因子的浓度。将围手术期CD11b^+CD33^+人类白细胞抗原DR(human leukocyte antigen-DR,HLA-DR)细胞和人肺腺癌细胞A549接种至裸鼠皮下,观察其对肿瘤生长和肿瘤血管生成的影响。结果:肺癌患者术后PBMCs中CD11b^+CD33^+HLA-DR-细胞百分比和浓度均较术前显著升高(P值均〈0.05);外周血清CXC趋化因子配体5(CXC chemokine ligand 5,CXCL5)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白1α(macrophage infl ammatory protein-1α,MIP-1α)/MIP-1β和MIP-3α等趋化因子以及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的浓度均较术前显著升高(P值均〈0.05)。裸鼠致瘤能力观察结果显示,术后MDSCs促肿瘤生长和肿瘤血管生成的能力较术前MDSCs显著增强(P值均〈0.05)。结论:肺癌患者术后PBMCs中MDSCs较术前增加,且其促肿瘤血管生成和肿瘤生长的作用增强,提示MDSCs可能成为预防肿瘤术后转移的新靶点。 展开更多
关键词 肺肿瘤 围手术期 细胞免疫 髓系细胞
建立转座子用于原代树突状细胞转染体系的研究
8
作者 杨柳 管峥 +2 位作者 吕莎 尹燕锋 《南开大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期8-13,共6页
应用PCR技术从pEGFP-N1载体扩增获取CMV启动子和EGFP基因,利用限制性内切酶BglⅡ/NotI以及NotI/EcoRI将其插入pT/HB,构成pT-CMV-EGFP重组转座子,pT-CMV-EGFP与SB11转座酶形成“睡美人”转座系统.采用脂质体与荧光表达载体pEGFP-N... 应用PCR技术从pEGFP-N1载体扩增获取CMV启动子和EGFP基因,利用限制性内切酶BglⅡ/NotI以及NotI/EcoRI将其插入pT/HB,构成pT-CMV-EGFP重组转座子,pT-CMV-EGFP与SB11转座酶形成“睡美人”转座系统.采用脂质体与荧光表达载体pEGFP-N1不同配比转染小鼠成纤维细胞系3T3,pT-CMV—EGFP与SB11梯度比例转染小鼠肝癌细胞系H22后,经流式细胞术比较阳性细胞率,当条件为脂质体与总DNA质量比为4:1;转座酶与转座子间质量比为1:4转染时,细胞阳性率最高(H22悬浮细胞可达42.23%),转染结果较稳定(SD=1.25).通过此优化体系转染小鼠骨髓来源的树突状细胞DCs,经激光共聚焦显微镜显示,能够获得被EGFP修饰的DCs,并通过流式细胞术检测被标记有EGFP的特异DCs阳性率可达20%以上.表明本研究已成功建立了一个可用于原代DCs转染的方法. 展开更多
关键词 转座子 树突细胞 转染 脂质体
VEGF-壳聚糖微囊复合缓释载体的制备 预览 被引量:2
9
作者 伍尚敏 +3 位作者 伍可 余璐 高扬 《中国美容医学》 CAS 2015年第22期29-32,共4页
目的:研究VEGF(vascular endothelial growth factor)-壳聚糖缓释微囊的制备工艺。方法:采用离子沉淀-凝聚法制备VEGF-壳聚糖缓释微囊,并检测其包封率和载药量。结果:实验制备的VEGF-壳聚糖缓释微囊包封率为87%,载药量为4.35... 目的:研究VEGF(vascular endothelial growth factor)-壳聚糖缓释微囊的制备工艺。方法:采用离子沉淀-凝聚法制备VEGF-壳聚糖缓释微囊,并检测其包封率和载药量。结果:实验制备的VEGF-壳聚糖缓释微囊包封率为87%,载药量为4.35%,微囊大小均匀,光洁度与成形度好。结论:本制备工艺方法简单易行,稳定,重现性好。说明利用天然高分子多糖类物质壳聚糖来包封VEGF是切实可行的,VEGF-壳聚糖缓释微囊具有进一步研究和应用价值。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 壳聚糖 微囊 载药量 包封率
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地塞米松、平阳霉素对血管瘤内皮细胞的作用 预览 被引量:2
10
作者 伍尚敏 +2 位作者 左万昌 王惠 《中国美容医学》 CAS 2015年第1期30-34,共5页
目的:观察地塞米松(Dexamethason,DX)、平阳霉素(Pingyangmycin,PYM)对体外培养的人血管瘤内皮细胞(Hemangioma endothelial cell,HEC)生长的抑制作用。方法:以MTT法检测PYM、DX作用于HEC细胞活性并筛选有效浓度。以有效浓度的PYM、DX... 目的:观察地塞米松(Dexamethason,DX)、平阳霉素(Pingyangmycin,PYM)对体外培养的人血管瘤内皮细胞(Hemangioma endothelial cell,HEC)生长的抑制作用。方法:以MTT法检测PYM、DX作用于HEC细胞活性并筛选有效浓度。以有效浓度的PYM、DX作用于HEC,光镜下观察HEC形态,MTT检测细胞活性,流式细胞术检测细胞周期并计算细胞增殖指数(PI)。结果:药物作用后,光镜下见HEC发生坏死改变。MTT检测显示吸光度降低(P<0.05)。流式细胞术检测示内皮细胞G1期细胞比例增多(P<0.05);S期细胞比例下降(P<0.05);G2期细胞比例下降(P<0.05)。两种细胞的PI均降低(P<0.05)。结论:PYM和DX可直接损伤DNA,阻滞细胞周期;PYM可直接杀伤HEC,DX使细胞皱缩成圆形,细胞连接中断,从而抑制血管生成和中断血管的连续性。相比较,PYM对HEC的抑制作用较强。 展开更多
关键词 血管瘤 平阳霉素 地塞米松
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他克莫司对人外周血树突状细胞成熟的影响及免疫调控机制的研究
11
作者 张升宁 李望 +8 位作者 冉江华 高杨 陈奕明 刘静 李来邦 任刚 李肖山 李立 《中华器官移植杂志》 CAS CSCD 2015年第5期285-289,共5页
目的研究他克莫司对体外人外周血树突状细胞(DC)成熟的影响及免疫调控机制。方法采集健康成人空腹外周血,分离出单个核细胞,经重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素4刺激诱导产生未成熟DC。将获取的DC分为4组培养... 目的研究他克莫司对体外人外周血树突状细胞(DC)成熟的影响及免疫调控机制。方法采集健康成人空腹外周血,分离出单个核细胞,经重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素4刺激诱导产生未成熟DC。将获取的DC分为4组培养和观察,(1)A组:DC培养第1天加入他克莫司;(2)B组:DC培养第1天加入他克莫司,并于细胞培养结束前24h加入脂多糖;(3)C组:DC培养结束前24h加入脂多糖;(4)D组:为空白对照组,不加他克莫司及脂多糖。培养7d后,对各组DC的生长形态、细胞表型、抗原吞噬能力进行观察和检测,并对DC分泌IL-12的水平及刺激同种T淋巴细胞增殖能力进行鉴定。结果DC培养第7天,各组DC形态并无显著差异,密集程度亦未见明显区别。C组细胞CD11c、CD80、CD86、HLA-DR表型表达阳性率分别为(66.1±2.4)%、(48.5±1.3)%、(63.1±2.3)%和(73.1±2.4)%,D组分另Ⅱ为(61.9±6.7)%、(6.7±0.47)%、(25.6±4.7)%和(35.5±1.0)%,两组间均有明显差异(P〈0.05);与C组比较,A组和B组CD11c和CDS0的表达阳性率存在显著差异(P〈0.05);与D组比较,A组和B组的CD11c和CDS0表达明显减弱(P〈0.05),CD86和HLA-DR表达明显增高(P〈0.05);而A组与B组间各表型的表达均无明显差异(P〉0.05)。A组、B组、C组、D组DC培养上清液中IL-12水平分别为(26.5±1.3)pg/ml、(28.1±1.23)pg/ml、(33.6±2.2)pg/ml和(26.1±3.4)pg/ml,C组均明显高于其他3组(P〈0.05);A组、B组和D组的IL-12水平均较低,且3组间无明显差异(P〉0.05)。在各组混合淋巴细胞反应中,A组与B组的增殖指数无显著差异(P〉0.05);与C组相比,A组和B组T淋巴细胞的增殖反应受到明显抑制。A组、B组、C组、D组DC的OVA抗原表达量分别 展开更多
关键词 他克莫司 树突状细胞 免疫耐受
树突状细胞的培养及成熟的鉴定 预览 被引量:6
12
作者 李望 张升宁 +3 位作者 冉江华 李来邦 陈奕明 《昆明医科大学学报》 2015年第3期34-37,44共5页
目的探讨人体外周血树突状细胞在体外培养诱导其成熟的方法,通过得到成熟的细胞培养技术,对树突状细胞功能的研究奠定实验基础.方法通过Ficoll-Hypaque梯度离心法得到单个核细胞,再诱导使其分化、扩增、纯化形成稳定的树突状细胞,通过... 目的探讨人体外周血树突状细胞在体外培养诱导其成熟的方法,通过得到成熟的细胞培养技术,对树突状细胞功能的研究奠定实验基础.方法通过Ficoll-Hypaque梯度离心法得到单个核细胞,再诱导使其分化、扩增、纯化形成稳定的树突状细胞,通过树突状细胞自身形态、特异性表型,抗原摄取能力,鉴别培养的细胞,从而得到具有典型特征的树突状细胞.结果树突状细胞培养第7天,加入LPS后,倒置显微镜及扫描电镜下观察,树突状细胞成熟中,细胞胞质增大,细胞膜表面能形成大量树突状突起,表面标志物CD80、CD86、CD11c、HLA-DR的表达增高(P〈0.05),共聚焦显微镜下,成熟的树突状细胞对抗原的吞噬能力减弱.结论Ficoll-Hypaque梯度离心法能够得到稳定的树突状细胞体外培养体系. 展开更多
关键词 Ficoll-Hypaque梯度离心法 树突状细胞 表型 抗原 吞噬
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体外诱导大鼠肝卵圆细胞定向分化为胆管上皮细胞 预览
13
作者 陈奕明 李立 +6 位作者 冉江华 张升宁 张蕾 张春平 高杨 任刚 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第16期10-14,共5页
目的通过对大鼠肝卵圆细胞进行体外培养,建立诱导大鼠肝卵圆细胞分化为胆管上皮细胞的诱导体系。方法通过2AAF/PH建立大鼠肝卵圆细胞活化模型,使用二步酶消化法获得原代肝卵圆细胞,应用20ng/mL干细胞生长因子及10ng/mL表皮生长因... 目的通过对大鼠肝卵圆细胞进行体外培养,建立诱导大鼠肝卵圆细胞分化为胆管上皮细胞的诱导体系。方法通过2AAF/PH建立大鼠肝卵圆细胞活化模型,使用二步酶消化法获得原代肝卵圆细胞,应用20ng/mL干细胞生长因子及10ng/mL表皮生长因子诱导肝卵圆细胞向胆管上皮细胞分化,并应用流式细胞及免疫荧光观察细胞分化过程中OV-6及CK-19标志的表达变化。结果原代肝卵圆细胞OV一6阳性细胞为(94.30±1.40)%,CK-19阳性细胞为(3.16±1.87)%,诱导后第7代细胞OV-6阳性细胞为(4.97±0.21)%,CK-19阳性细胞为(96.17±1.21)%,差异有显著性(P〈0.05)。免疫荧光结果证实CK-19广泛表达。结论成功诱导大鼠肝卵圆细胞分化为表达CK-19的胆管上皮细胞,细胞形态符合上皮细胞形态特点,表皮生长因子及干细胞生长因子可诱导肝卵圆细胞分化为胆管上皮细胞。 展开更多
关键词 大鼠 肝卵圆细胞 胆管上皮细胞 细胞分化
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经纤支镜取材肺癌细胞培养的研究 预览 被引量:2
14
作者 周开华 +2 位作者 金志贤 和煦 杜俊毅 《昆明医科大学学报》 2013年第10期125-128,共4页
目的:探讨经纤支镜活检取材并进行原代肺癌细胞培养的方法,以提高培养成功率.方法30例经纤支镜活检肺癌组织进行原代细胞培养,对肿瘤组织形态与原代细胞培养成功率相关性进行分析.结果30例经纤支镜取材肺癌细胞培养病例,原代培养... 目的:探讨经纤支镜活检取材并进行原代肺癌细胞培养的方法,以提高培养成功率.方法30例经纤支镜活检肺癌组织进行原代细胞培养,对肿瘤组织形态与原代细胞培养成功率相关性进行分析.结果30例经纤支镜取材肺癌细胞培养病例,原代培养成功17例,占总例数的56.67%.纤支镜下呈菜花样生长肺癌组织培养成功率84.62%(11/13);肿瘤沿管壁生长管腔狭窄表面有或无突起的培养成功率分别为66.67%(2/3)和37.5%(3/8);球状肿块质硬培养成功率16.67%(1/6),菜花状与其他采用确切概率法比较,差异有统计学意义(<0.05).结论经纤支镜活检肺癌组织体外原代细胞培养简单易行,阳性率可达56.67%,且原代培养成功率与纤支镜下肿瘤组织形态相关. 展开更多
关键词 肺肿瘤 肿瘤细胞 培养 支气管镜检查
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两种外周血单个核细胞采集方法体外诱导CIK细胞的比较 预览
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作者 汪珺 +3 位作者 张蕾 金良昆 陈睿 王翼寅 《昆明医科大学学报》 2013年第6期107-112,共6页
目的比较两种外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)采集方法诱导的细胞因子诱导杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)扩增效率、细胞表型、杀伤肿瘤细胞的活性及其回输至肿瘤患者体内的免疫调节作用.方法... 目的比较两种外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)采集方法诱导的细胞因子诱导杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)扩增效率、细胞表型、杀伤肿瘤细胞的活性及其回输至肿瘤患者体内的免疫调节作用.方法 12例肿瘤患者共进行36次CIK细胞体外诱导、扩增,其中6例患者共18次扩增采用血细胞分离机采集PBMCs,另外6例患者共18次培养采用Ficoll密度梯度分离50 mL外周血方法采集PBMCs.结果采用血细胞分离机或Ficoll分离法采集PBMCs经体外诱导获得CIK(分别为A-CIK和F-CIK)细胞数分别为7.47×109(3.7-13.6×10)9和6.37×109(3.8-11.8×10)9.培养至14 d时,〉90%的A-CIK和F-CIK细胞表型为CD3+,其中CD3+CD56+,NKG2D+细胞及细胞内TH1细胞因子均显著升高.效靶比为60:1时,A-CIK和F-CIK细胞对Daudi、K562及293的杀伤活性分别为(49.1±17.8)%和(55.3±11.5)%、(67.6±24.1)%和(58.1±17.6)%、(36.4±11)%和(33.7±14.8)%.给肿瘤患者回输自体A-CIK或F-CIK细胞14 d后,外周血中CD3+、CD8+及CD3+、CD56+细胞以及PBMCs内IFN-γ均显著升高.结论采集肿瘤患者50 mL外周血分离的PBMCs足以制备临床治疗使用的CIK细胞. 展开更多
关键词 免疫疗法 过继 细胞分离 肿瘤 体外
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小鼠骨髓源树突状细胞的体外培养及鉴定 预览
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作者 王翼寅 陈睿 +2 位作者 汪珺 张蕾 《昆明医科大学学报》 2013年第11期5-8,共4页
目的建立小鼠骨髓源树突状细胞(bonetnarrowdendriticcell,BMDC)的培养方法并对其表型和功能进行鉴定.方法无菌取BALB/c小鼠股骨、胫骨中的骨髓细胞,以粒一巨噬细胞集落刺激因子体外诱导分化为BMDC,倒置显微镜动态观察BMDC增殖和... 目的建立小鼠骨髓源树突状细胞(bonetnarrowdendriticcell,BMDC)的培养方法并对其表型和功能进行鉴定.方法无菌取BALB/c小鼠股骨、胫骨中的骨髓细胞,以粒一巨噬细胞集落刺激因子体外诱导分化为BMDC,倒置显微镜动态观察BMDC增殖和形态变化情况,流式细胞术分析细胞表型,并检测其抗原吞噬功能.结果小鼠骨髓细胞体外诱导可获得大量未成熟和成熟BMDC,呈现典型的树突状形态.未成熟BMDC的细胞表型为CDllchighCD40lowcD86lowMHC—Illow,具有较强的抗原吞噬能力.未成熟BMDC经细菌脂多糖刺激后可分化为高表达CD11c、CD40、CD86及MHC—II类分子的成熟BMDC.结论体外诱导培养可获得小鼠骨髓来源的未成熟和成熟DC。 展开更多
关键词 树突状细胞 小鼠 近交系 骨髓细胞 吞噬作用
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细胞荷载溶瘤病毒治疗肿瘤的研究进展 被引量:2
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作者 张蕾 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期85-88,共4页
静脉注射的溶瘤病毒可被免疫系统完全排除而不能发挥其抗肿瘤作用。研究表明,溶瘤病毒用细胞包装后可以有效避免病毒被机体免疫系统清除,同时,病毒和载体细胞的生物学活性不受影响;另外采用具有肿瘤细胞、肿瘤基质或肿瘤解剖定位靶向性... 静脉注射的溶瘤病毒可被免疫系统完全排除而不能发挥其抗肿瘤作用。研究表明,溶瘤病毒用细胞包装后可以有效避免病毒被机体免疫系统清除,同时,病毒和载体细胞的生物学活性不受影响;另外采用具有肿瘤细胞、肿瘤基质或肿瘤解剖定位靶向性的细胞载体,可以将病毒准确地输送至肿瘤病灶,有效发挥溶瘤病毒的抗肿瘤效应。本文将对细胞荷载溶瘤病毒治疗肿瘤方面的研究进展做一综述。 展开更多
关键词 肿瘤 溶瘤病毒 治疗学
肿瘤术后免疫抑制与肿瘤转移 预览 被引量:1
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作者 张蕾 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1078-1081,共4页
0引言对大多数实体瘤来说,手术仍然是目前最有效的治疗方式。从长远着想,肿瘤必须切除以清除肿瘤转移的主要来源;但就短期来看,手术过程实际上可能会促进肿瘤的转移。手术可能促进肿瘤转移这一观点是数十年前被提出来的,当时一些外科医... 0引言对大多数实体瘤来说,手术仍然是目前最有效的治疗方式。从长远着想,肿瘤必须切除以清除肿瘤转移的主要来源;但就短期来看,手术过程实际上可能会促进肿瘤的转移。手术可能促进肿瘤转移这一观点是数十年前被提出来的,当时一些外科医师注意到某些肿瘤患者在手术后短期内会很快发生转移[1]。从那时开始这一假说便被反复修正但并未得到广泛认可[2-3]。 展开更多
关键词 手术 肿瘤 免疫抑制 转移 细胞免疫
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灭活同种异基因白细胞输注抗肿瘤转移的研究 被引量:3
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作者 张蕾 +3 位作者 伍尚敏 叶俊松 陈睿 管峥 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2010年第13期991-994,共4页
目的:探讨灭活MHC不相合同种异基因白细胞输注(ALI)的抗肿瘤转移效应及其相关机制。方法:MMC灭活的同种异基因白细胞输注治疗B16-F10及LLC荷瘤小鼠,细胞毒实验鉴定ALI抗肿瘤中效应细胞;小鼠血清细胞因子检测分析ALI治疗后在宿主体... 目的:探讨灭活MHC不相合同种异基因白细胞输注(ALI)的抗肿瘤转移效应及其相关机制。方法:MMC灭活的同种异基因白细胞输注治疗B16-F10及LLC荷瘤小鼠,细胞毒实验鉴定ALI抗肿瘤中效应细胞;小鼠血清细胞因子检测分析ALI治疗后在宿主体内产生的免疫效应。结果:新鲜制备或灭活ALI治疗B16-F10人工肺转移小鼠肺质量分别为0.26和0.35 g,PBS组为0.64 g(两治疗组分别与PBS组相比,P〈0.001);小鼠平均生存期分别较PBS组延长20.625和12.75 d。灭活ALI治疗LLC自发肺转移小鼠肺质量为0.18 g,PBS组为0.43 g,P=0.007;ALI治疗组62.5%小鼠长期生存(〉120 d);小鼠脾单个核细胞对LLC和YAC-1杀伤活性分别为20%和46.4%(效靶比为60∶1);ALI治疗后小鼠血清中IL-2和IFN-γ浓度分别是PBS组小鼠的3.2和10.6倍(分别与PBS组相比,P〈0.001),IL-4和IL-10浓度与PBS组相比差异无统计学意义。结论:灭活同种异基因白细胞输注可诱导抗肿瘤免疫反应,该方法有望成为一种新的抗肿瘤转移疗法。 展开更多
关键词 肿瘤 免疫治疗 转移 同种抗原
肺癌免疫治疗临床研究进展 预览 被引量:5
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作者 张俊萍 张叔人 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期 592-596,共5页
肺癌的恶性程度高、临床治疗效果差,因此迫切需要探索更为有效的治疗方法。免疫治疗作为一种极具发展前景的治疗方式有望为肺癌的治疗带来新的希望。近年来,越来越多的临床研究结果表明,免疫治疗应用于肺癌可以获得显著的临床疗效。... 肺癌的恶性程度高、临床治疗效果差,因此迫切需要探索更为有效的治疗方法。免疫治疗作为一种极具发展前景的治疗方式有望为肺癌的治疗带来新的希望。近年来,越来越多的临床研究结果表明,免疫治疗应用于肺癌可以获得显著的临床疗效。随着对肿瘤特异性免疫反应的了解、肿瘤相关抗原的鉴定以及对肿瘤微环境的调控,必将进一步提高免疫治疗的疗效。本文就肺癌的过继细胞治疗和疫苗治疗的进展进行综述。 展开更多
关键词 肺肿瘤 免疫疗法 癌症疫苗 免疫疗法 过继
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