期刊文献+
共找到73篇文章
< 1 2 4 >
每页显示 20 50 100
滑液支原体WVU1853株pdhA、pdhB的原核共表达及表达产物酶活性分析
1
作者 包世俊 丁小琴 +4 位作者 邢小勇 伏小平 武小椿 温峰琴 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1673-1680,共8页
滑液支原体(Mycoplasma synoviae, MS)是禽类重要的致病性支原体,MS感染可引起鸡(Gallus gallus)和火鸡(Meleagris gallopavo)的呼吸道病症以及关节炎和关节滑膜炎,导致蛋鸡产蛋量及鸡蛋品质下降、种蛋孵化率降低、肉鸡生长发育迟缓、... 滑液支原体(Mycoplasma synoviae, MS)是禽类重要的致病性支原体,MS感染可引起鸡(Gallus gallus)和火鸡(Meleagris gallopavo)的呼吸道病症以及关节炎和关节滑膜炎,导致蛋鸡产蛋量及鸡蛋品质下降、种蛋孵化率降低、肉鸡生长发育迟缓、饲料转化率低、胴体废弃率高等,给养鸡业造成重大经济损失。对滑液支原体的快速检测方法及良好免疫制剂的研究,可为其感染的快速诊断和有效预防提供支持。基于此,本研究参照GenBank中MS WVU1853株(GenBank No. CP011096.1)丙酮酸脱氢酶E1α亚基基因(pyruvate dehydrogenase E1αsubunit gene, pdhA)和β亚基基因(pdhB)序列及结构设计引物,应用PCR技术分别扩增获得二者及其以单碱基重叠方式连接的自然序列AB,采用overlap-PCR技术完成基因优化,将pdhA与pdhB以及AB分别克隆入原核表达载体pETduet-1和pET-28a(+),成功构建原核共表达质粒pETDuet-AB和pET-AB;并在分别转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)后经异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside, IPTG)诱导表达,表达产物纯化后应用SDS-PAGE分析,进而检测其酶促活性。SDS-PAGE结果表明,MS WVU1853株pdhA和pdhB基因在两种质粒转化的大肠杆菌中均获表达,且表达产物相对分子量分别为43和36 kD,但pET-AB转化菌中两种蛋白均高效表达,而pETDuet-AB转化菌中α亚基表达效率明显较低;酶活性检测结果表明,两种转化菌诱导表达产物均具有酶促活性。本研究基于单核苷酸重叠构建了MSpdhA和pdhB基因的共表达载体并在大肠杆菌中获得高效表达,为pdhA和pdhB生物学功能的研究提供了良好的材料,为MS诊断方法的建立提供了可能的标识物,也为MS感染相关免疫制剂的研发提供了可能的疫苗候选,为两个基因的共表达提供了新的思路。 展开更多
关键词 滑液支原体(MS) 丙酮酸脱氢酶 共表达
玉门市2014-2018年羊布鲁氏菌病血清学调查分析 预览
2
作者 杨东玲 《甘肃畜牧兽医》 2019年第5期66-71,共6页
目的:为了解甘肃省玉门市羊布鲁氏菌病的感染及分布状况,掌握玉门市布鲁氏菌病的流行规律,为综合防控提供参考依据。方法:自2014年至2018年,随机采集甘肃省玉门市69 804只未经免疫羊只和1 250只经布鲁氏菌疫苗免疫羊只血清样品,采用虎... 目的:为了解甘肃省玉门市羊布鲁氏菌病的感染及分布状况,掌握玉门市布鲁氏菌病的流行规律,为综合防控提供参考依据。方法:自2014年至2018年,随机采集甘肃省玉门市69 804只未经免疫羊只和1 250只经布鲁氏菌疫苗免疫羊只血清样品,采用虎红平板凝集试验和试管凝集试验进行血清布鲁氏菌抗体检测。结果:未经免疫情况下,2014年全市检测数为25 330只,阳性数为1 387只,阳性率为5.48%;2015年检测数为24 393只,阳性数为1 273只,阳性率为5.22%;2016年检测数为20 081只,阳性数为1 644只,阳性率为8.19%。2014-2016年全市阳性数为4 304只,疫情涉及全市12个乡镇和2个农垦团场,阳性率最高的是城郊乡镇和农垦团场的散养户,阳性率较低的是沿山和偏远乡镇,呈点状爆发流行。异地调引和活畜流通是玉门市布病再次爆发的主要原因,散养户的阳性率明显高于规模场的母畜多是通过交配感染了病原菌,春末夏初是高发病季节。经S2株布鲁氏菌弱毒活疫苗强制免疫后,2017年全市检测数为900只,阳性3只,阳性率为0.33%;2018年全市检测350只,阳性1只,阳性率为0.29%。经免疫后,全市布病阳性率明显下降,疫苗免疫取得了控制疫情的较好效果。 展开更多
关键词 玉门市 布鲁氏菌病 血清学调查
在线阅读 免费下载
PPRV武威分离株N基因的原核表达及免疫原性分析
3
作者 王雯 包世俊 +4 位作者 邢小勇 胡荣斌 丁小琴 伏小平 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1478-1484,共7页
小反刍兽疫(Peste des petits ruminants, PPR)是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)引起的一种急性传染病,严重危害世界养羊业的健康发展。2013年以来,国内多地出现小反刍兽疫疫情,给我国养羊业造成了重大经济... 小反刍兽疫(Peste des petits ruminants, PPR)是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)引起的一种急性传染病,严重危害世界养羊业的健康发展。2013年以来,国内多地出现小反刍兽疫疫情,给我国养羊业造成了重大经济损失。本研究根据小反刍兽疫病毒Nigeria 75/1株N基因核苷酸序列(GenBank No. HQ197753)设计特异性引物,扩增获得PPRV武威分离株N基因全序列(GenBank No. KY429031),在序列分析的基础上,构建该基因的原核表达载体pET-PPRV-N,并将其转化大肠杆菌(Escherichia coli) Rosetta (DE3)后诱导表达。纯化表达产物,免疫Balb/C小鼠(Mus musculus)制备多克隆抗体,进而应用ELISA、Western blot和免疫荧光检测(immunological fluorescence assay, IFA)对PPRV N蛋白的免疫原性进行分析。结果表明,PPRV武威分离株属于Ⅳ系,且其N基因全序列与国内24株PPRV分离株及2016蒙古株的同源性高达99.0%;重组蛋白His-PPRV-N在大肠杆菌Rosetta (DE3)中成功获得表达,其相对分子质量约为57.8 kD,且主要以可溶性形式存在;ELISA、Western blot及IFA结果显示,重组蛋白小鼠多抗ELISA效价可达1∶64 000,可与PPRV疫苗株或武威分离株的N蛋白特异性结合,且制备的多抗显示出对PPRV明显的中和作用,表明了重组蛋白良好的免疫原性。本研究结果为PPRV检测方法的建立和N蛋白生物学功能的进一步研究提供了基础资料。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒(PPRV) N基因 原核表达 免疫原性
蓝舌病毒NS2蛋白的抗体制备及鉴定 预览
4
作者 张国芮 独军政 +6 位作者 高闪电 田占成 Darien Kheder Ali Mohamed 康棣 郭艳妮 殷宏 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第2期12-18,共7页
本研究参考GenBank中蓝舌病毒16型(Bluetongue virus serotype16,BTV-16)标准株RSAvvvv的序列,人工合成编码BTV-16NS2蛋白的S8基因,将其亚克隆至原核表达载体pPRoEx-HTb中,构建重组表达质粒pPro-NS2,并转化大肠杆菌BL21进行IPTG诱导表达... 本研究参考GenBank中蓝舌病毒16型(Bluetongue virus serotype16,BTV-16)标准株RSAvvvv的序列,人工合成编码BTV-16NS2蛋白的S8基因,将其亚克隆至原核表达载体pPRoEx-HTb中,构建重组表达质粒pPro-NS2,并转化大肠杆菌BL21进行IPTG诱导表达,并进行可溶性分析。SDS-PAGE结果显示,表达的rNS2蛋白主要以包涵体的形式存在于菌体中。利用组氨酸标签纯化树脂获得了高纯度的NS2蛋白,免疫新西兰白兔制备抗NS2蛋白的多克隆抗体。Westernblot结果显示,制备的抗NS2蛋白多克隆抗体不仅可与重组表达的rNS2蛋白反应,而且可与BTV感染细胞后的天然NS2蛋白反应。间接免疫荧光结果显示,该抗体也可与BTV感染C6/36细胞中的天然NS2蛋白反应,且发现NS2大量分布于C6/36细胞的胞质中。本研究所制备的NS2蛋白的多克隆抗体具有很好的反应性和特异性,为进一步研究NS2蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 蓝舌病毒 NS2蛋白 多克隆抗体 鉴定
在线阅读 免费下载
双价猪流行性腹泻病毒特异性双峰驼源单域抗体的重组表达和特征分析 预览
5
作者 李丽 杨顺利 +3 位作者 张辛铭 蔡建平 尹双辉 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1052-1060,共9页
旨在构建抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)膜蛋白(M)双峰驼源sdAb(sdAb-Mc19/29/30/37)的二价抗体,并比较研究单价和二价sdAb-Mc对温度的敏感性、pH耐受性、血清抗体竞争活性及抗原捕获活性等技术指标。研究结果证实,单价和二价sdAb-Mc在30~70... 旨在构建抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)膜蛋白(M)双峰驼源sdAb(sdAb-Mc19/29/30/37)的二价抗体,并比较研究单价和二价sdAb-Mc对温度的敏感性、pH耐受性、血清抗体竞争活性及抗原捕获活性等技术指标。研究结果证实,单价和二价sdAb-Mc在30~70 ℃和pH 2~10条件下,均可以结合M蛋白,当温度高于80 ℃和pH大于11时,其与M蛋白的结合活性显著下降。此外,研究发现,重组二价抗体的血清抗体竞争活性和抗原捕获活性强于单价的抗体。研究结果说明,重组表达的二价sdAb-Mc抗体对温度和pH耐受性没有改变,但其与靶抗原结合活性得到显著提高,为研制敏感和特异的PEDV病原学快速检测方法奠定基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 双峰驼 二价单域抗体
在线阅读 下载PDF
中药保护心肌的活性成分(部位)及作用机制研究进展
6
作者 胡超群 +2 位作者 郑书臣 傅旎旎 赵启韬 《药物评价研究》 CAS 2019年第8期1685-1688,共4页
近10年来,新发现了36种中药活性成分(部位)能够有效保护损伤心肌,分别通过调控凋亡基因的表达、调节氧化应激、抑制炎症反应等发挥对损伤心肌的保护作用。对此做系统论述及整理,为心血管领域的新药研发提供参考。
关键词 中药成分 心肌细胞 氧化应激 炎症反应
羊场环境中绵羊腐蹄病病原的检测 被引量:3
7
作者 李稳欣 +2 位作者 张学勇 王光华 马利青 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期662-664,699共4页
以近年来国内外最新研究资料为基础,采用PCR方法对采集于绵羊腐蹄病发病地区水样和土样环境中坏死杆菌和节瘤拟杆菌的存在情况进行检测。结果显示:34份样品中有1份水样为坏死杆菌阳性,其余为阴性,节瘤拟杆菌检测全为阴性。将扩增所... 以近年来国内外最新研究资料为基础,采用PCR方法对采集于绵羊腐蹄病发病地区水样和土样环境中坏死杆菌和节瘤拟杆菌的存在情况进行检测。结果显示:34份样品中有1份水样为坏死杆菌阳性,其余为阴性,节瘤拟杆菌检测全为阴性。将扩增所得基因KY130428通过BLAST序列比对,发现该基因片段与FJ230831序列同源性为99%,表明样品中存在坏死杆菌。从羊圈周围动物饮水中检测到坏死杆菌的存在,国内尚未见相关报道,本研究旨在摸清羊场环境中腐蹄病病原的分布情况,为该病的防制提供参考依据。 展开更多
关键词 坏死杆菌 节瘤拟杆菌 羊场环境水样 土样
牛支原体生物被膜形成优势菌株的筛选及培养条件的优化
8
作者 高翔 邢小勇 +4 位作者 伏小平 温峰琴 魏彦明 包世俊 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2018年第8期1449-1456,共8页
牛支原体(Mycoplasma bovis, Mb)是牛(Bos taurus)的重要致病性支原体,其生物被膜的形成在宿主细胞中产生持续性感染,使养牛业造成重大的经济损失。因此,本研究旨在通过对Mb不同菌株生物被膜形成能力的鉴定,筛选出1株生物被膜... 牛支原体(Mycoplasma bovis, Mb)是牛(Bos taurus)的重要致病性支原体,其生物被膜的形成在宿主细胞中产生持续性感染,使养牛业造成重大的经济损失。因此,本研究旨在通过对Mb不同菌株生物被膜形成能力的鉴定,筛选出1株生物被膜形成优势菌株,并对其培养条件进行优化,以期为Mb生物被膜相关的研究提供生物材料。首先应用微孔板定量检测法鉴定Mb PG45株、湖北株(HB株)、武威株(WW株)、定西株(DX株)和临洮株(LT株)生物被膜的形成能力;进而以生物被膜形成能力强的菌株作为模式菌株,完成对Mb生物被膜形成培养条件的优化。结果显示,Mb不同菌株形成生物被膜的能力不同,其中临洮株生物被膜形成能力最强,湖北株生物被膜形成能力次之,PG45株、武威株和定西株生物被膜形成能力最弱。取浓度为1.7E+08 CFU/mL的Mb液体培养物,按1∶10转接种于含0.01 mg/mL DNA、20%马血清和1%葡萄糖的Eaton培养基(pH 8.5),于37 ℃、5% CO2条件下培养72 h,Mb生物被膜的形成最佳。本研究筛选获得1株生物被膜形成能力强的Mb,并通过培养条件的优化,使之形成稳定且明显的生物被膜,从而为Mb生物被膜相关研究提供了良好的生物材料。 展开更多
关键词 牛支原体(Mb) 生物被膜 优势菌株 影响因素 优化
瓜蒌皮对高血脂合并心肌缺血大鼠氧化应激状态动态调节作用研究 被引量:4
9
作者 杨震 傅旎旎 +1 位作者 赵启韬 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2018年第1期39-43,共5页
目的 :研究瓜蒌皮对高血脂合并急性心肌缺血(HL-AMI)大鼠氧化应激状态的动态调节作用,从调整异常氧化应激状态的角度揭示该药材干预冠心病(CHD)痰浊壅塞证的机制。方法 :雄性Wistar大鼠随机分为对照组(Ctrl)、HL-AMI组、瓜蒌皮... 目的 :研究瓜蒌皮对高血脂合并急性心肌缺血(HL-AMI)大鼠氧化应激状态的动态调节作用,从调整异常氧化应激状态的角度揭示该药材干预冠心病(CHD)痰浊壅塞证的机制。方法 :雄性Wistar大鼠随机分为对照组(Ctrl)、HL-AMI组、瓜蒌皮干预组(Trich)。首先采用高脂乳剂灌胃,造成高脂血症(HL)大鼠模型,再结扎冠状动脉左前降支制造急性心肌缺血(AMI)模型。瓜蒌皮水煎液(20 g/kg)灌胃给药。上述每组大鼠再分为7个亚组。各亚组分别于冠脉结扎手术后的1-7 d分批处死,腹主动脉取血。生化试剂盒检测血浆中超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化物(LPO)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的活性或含量。绘制AMI后7 d内上述指标动态变化曲线。结果 :AMI手术后,HL-AMI组大鼠血浆的SOD、T-AOC及CAT水平显著低于对照组大鼠;而LPO及ox-LDL含量明显升高。灌服瓜蒌皮水煎液的大鼠,其血浆上述氧化应激指标水平的异常变化得到了显著逆转(P〈0.05或P〈0.01)。结论 :对于HL-AMI大鼠,瓜蒌皮可显著改善其AMI后异常的氧化应激状态,较强的抗氧化活性可能是该药材防治CHD痰浊壅塞证的机制之一。 展开更多
关键词 瓜蒌皮 高血脂 心肌缺血 氧化应激 氧化型低密度脂蛋白 总抗氧化能力
瓜蒌薤白半夏汤不同提取部位对心肌细胞保护作用比较研究 被引量:1
10
作者 李建锋 +1 位作者 傅旎旎 赵启韬 《药物评价研究》 CAS 2018年第1期67-72,共6页
目的比较瓜蒌薤白半夏汤(GXB)不同提取部位对缺血缺氧心肌细胞的保护作用,初步探寻该经典方剂干预胸痹、心痛的物质基础。方法称取瓜蒌240 g、薤白90 g、半夏120 g,50%乙醇回流提取,分别用石油醚、氯仿、醋酸乙酯、水饱和正丁醇、水5... 目的比较瓜蒌薤白半夏汤(GXB)不同提取部位对缺血缺氧心肌细胞的保护作用,初步探寻该经典方剂干预胸痹、心痛的物质基础。方法称取瓜蒌240 g、薤白90 g、半夏120 g,50%乙醇回流提取,分别用石油醚、氯仿、醋酸乙酯、水饱和正丁醇、水5种不同极性溶剂萃取,得到相应提取部位,及药渣水煎液部位。培养大鼠原代心肌细胞,制备缺血缺氧模型,给予系列浓度(100、10、1、0.1、0.01 mg/m L)的GXB 6种提取部位及瓜蒌皮注射液(阳性对照,100、50、25、5、1 mg/m L)。MTT法检测细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态变化,生化试剂盒检测培养液中肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性。结果与对照组比较,模型组细胞凋亡、坏死明显,细胞存活率显著降低,细胞培养液中CK、CK-MB的活性显著升高(P〈0.05);质量浓度均为0.1 mg/m L的GXB水饱和正丁醇部位、水溶性部位及药渣水煎部位可以显著逆转缺血缺氧心肌细胞的生长状态、存活率以及培养液中CK、CK-MB活性(P〈0.05);石油醚、氯仿及醋酸乙酯部位处理的细胞,与模型组无明显差异。结论 GXB的水饱和正丁醇、水溶性及药渣水煎部位对缺血缺氧损伤的心肌细胞具有显著的保护作用。 展开更多
关键词 瓜蒌薤白半夏汤 心肌细胞 缺血缺氧 提取部位 肌酸激酶(CK) 肌酸激酶同工酶(CK-MB)
核糖体内部进入位点介导的翻译起始机制研究进展
11
作者 白艳丽 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2017年第11期67-72,共6页
真核生物mRNA翻译起始是依赖于帽状结构的。但是一些病毒的自身蛋白合成的起始依赖非帽状结构,这一特点有利于病毒摆脱宿主细胞翻译起始机制对其在细胞内复制的限制。它们利用一种末端为核糖体内部进入位点(IRES)的结构RNA来招募40S... 真核生物mRNA翻译起始是依赖于帽状结构的。但是一些病毒的自身蛋白合成的起始依赖非帽状结构,这一特点有利于病毒摆脱宿主细胞翻译起始机制对其在细胞内复制的限制。它们利用一种末端为核糖体内部进入位点(IRES)的结构RNA来招募40S和60S核糖亚基组装成不同于帽状结构介导的成熟的核糖体来进行相关病毒蛋白的翻译。IRES元件由一些可以招募翻译因子并作用于mRNA末端的顺式作用元件构成。IRES早在20年前已被发现,但是仅在近几年研究者利用Ⅲ型和Ⅳ型IRES的模型对其进行了相关研究,使人们了解了RNA的二级结构如何控制并操纵核糖体对翻译的起始。 展开更多
关键词 翻译起始 病毒 核糖体内部进入位点(IRES) RNA 元件
羊腐蹄病诊断及防治方法研究进展 预览 被引量:1
12
作者 李稳欣 马利青 +1 位作者 王光华 《动物医学进展》 北大核心 2017年第3期97-101,共5页
腐蹄病又称蹄间腐烂或趾间腐烂,是一类引起反刍动物蹄部感染的传染病,以跛行、指(趾)间皮肤肿胀和炎症为主要特征。随着集约化养殖业的快速发展,羊腐蹄病发病率日益增加,给养羊业带来巨大的经济损失,严重制约着养羊业的健康快速发展... 腐蹄病又称蹄间腐烂或趾间腐烂,是一类引起反刍动物蹄部感染的传染病,以跛行、指(趾)间皮肤肿胀和炎症为主要特征。随着集约化养殖业的快速发展,羊腐蹄病发病率日益增加,给养羊业带来巨大的经济损失,严重制约着养羊业的健康快速发展。但到目前为止,国内学者对羊腐蹄病的诊断与防治方面总结性的报道较少。因此,根据实际情况制定出快速诊断和防治方法显得非常重要。论文以近年来国内外最新的研究资料为基础,从羊腐蹄病病原、临床症状、诊断和防治方法等方面进行综述,以期为羊腐蹄病诊断和防治提供参考。 展开更多
关键词 腐蹄病 临床症状 诊断 防治方法
在线阅读 下载PDF
小反刍兽疫病毒甘肃株F基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备 被引量:3
13
作者 肖敏 包世俊 +2 位作者 邢小勇 常惠芸 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期477-484,共8页
小反刍兽疫(peste des petits ruminants, PPR)是由副黏病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbillivirus)的小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus, PPRV)引起绵羊(Ovis aries)和山羊(Capra hircus)等小反刍... 小反刍兽疫(peste des petits ruminants, PPR)是由副黏病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbillivirus)的小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus, PPRV)引起绵羊(Ovis aries)和山羊(Capra hircus)等小反刍兽的一种急性和高度传染性病毒性疾病,由于其高死亡率常造成绵羊和山羊养殖业的重大经济损失。为研究小反刍兽疫病毒甘肃(GS)株融合蛋白(fusion protein)基因序列特征及其免疫原性,参照GenBank中PPRV Nigeria 75/1株F基因序列(GenBank登录号: HQ197753)设计引物,应用RT-PCR扩增PPRV GS株F基因,在测序及序列分析的基础上,设计引物扩增去信号肽和跨膜区的F基因片段Fa并将其亚克隆至原核表达载体pET-32a(+)。重组质粒pET-PPRV-Fa转化大肠杆菌表达菌(Escherichia coli)Transetta(DE3)后经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导表达,表达产物纯化后免疫新西兰兔(Oryctolagus cuniculus)制备多克隆抗体,进而应用间接酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)和Western blot对重组蛋白免疫原性进行分析。结果表明,PPRV GS株F基因(GenBank登录号: KX822738)完整CDS全长1 641 bp,编码546个氨基酸。去信号肽和跨膜区的F基因片段Fa在大肠杆菌中成功获得表达,重组蛋白大小约为59 kD,且主要以包涵体形式存在;间接ELISA和Western blot结果表明,纯化产物免疫原性良好。研究结果为F蛋白的相关功能研究及小反刍兽疫的快速诊断方法的建立提供了理论依据。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒(PPRV) F基因 克隆 原核表达 免疫原性
蓝舌病毒VP6蛋白的原核表达及抗体制备
14
作者 张国芮 独军政 +4 位作者 高闪电 田占成 常惠芸 殷宏 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2017年第5期603-609,共7页
本试验首先利用RT-PCR技术扩增获得了蓝舌病毒1型(BTV1)的VP6基因,然后将其克隆到表达载体pPRoEx-HTb上,构建重组表达质粒pPro-VP6,转化大肠杆菌BL21感受态细胞后用IPTG诱导表达,优化表达条件,纯化重组表达的VP6蛋白,免疫新西兰白兔... 本试验首先利用RT-PCR技术扩增获得了蓝舌病毒1型(BTV1)的VP6基因,然后将其克隆到表达载体pPRoEx-HTb上,构建重组表达质粒pPro-VP6,转化大肠杆菌BL21感受态细胞后用IPTG诱导表达,优化表达条件,纯化重组表达的VP6蛋白,免疫新西兰白兔制备抗VP6蛋白的多克隆抗体,利用Western-blot和细胞免疫荧光试验检测抗体的特异性及VP6蛋白在BTV1感染细胞中的分布。结果显示,重组VP6蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式表达,利用组氨酸标签纯化树脂获得了高纯度的VP6蛋白;制备的抗VP6多克隆抗体不仅可与重组表达的VP6蛋白反应,而且可与BTV1感染细胞中的天然VP6蛋白发生特异性反应;在BTV1感染的BHK21细胞中检测到了VP6蛋白的特异表达,且分布于整个细胞质中。本研究成功表达了BTV重组VP6蛋白并制备了相应的特异抗体,为进一步揭示VP6蛋白的特性和功能奠定了基础。 展开更多
关键词 蓝舌病毒 VP6基因 原核表达 多克隆抗体 免疫荧光
牛支原体武威株fba基因的克隆、表达及亚细胞定位 被引量:1
15
作者 高翔 邢小勇 +3 位作者 冯娜 温峰琴 包世俊 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期274-281,共8页
牛支原体(Mycoplasma bovis,Mb)是牛(Bos taurus)的一种重要致病性支原体,其感染可引起牛的多种疾病。果糖二磷酸醛缩酶(fructose bisphosphate aldolase,FBA)是参与糖酵解过程中的关键酶,为3-磷酸甘油醛脱氢反应提供底物,... 牛支原体(Mycoplasma bovis,Mb)是牛(Bos taurus)的一种重要致病性支原体,其感染可引起牛的多种疾病。果糖二磷酸醛缩酶(fructose bisphosphate aldolase,FBA)是参与糖酵解过程中的关键酶,为3-磷酸甘油醛脱氢反应提供底物,并广泛存在于生物界中。为了研究FBA在Mb细胞内的分布,本研究参照GenBank中Mb PG45株加n基因序列设计特异性引物,应用PCR扩增获得Mb武威株加。基因并将其克隆至pMD19-T载体,在完成测序及基因优化的基础上,构建原核表达载体pET-fba并转化大肠杆菌(Escherichia coli)表达菌Transetta(DE3)后经异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl β—D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,表达产物纯化后免疫新西兰兔(Oryctolagus cuniculus)制备多克隆抗体,并采用间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbem assay,ELISA)测定抗体效价。进而应用Western blot对MbFBA在细胞内的分布进行了初步的定位。结果表明,Mb武威株fba基因编码框全长876bp(GenBank登录号:KX828563),编码292个氨基酸,优化后的基因在大肠杆菌中成功获得表达,重组蛋白rMbFBA大小约为34kD,主要以可溶性蛋白的形式存在;ELISA测定制备的多克隆抗体效价为1:25600,Western blot分析结果显示,该蛋白具有良好的免疫原性,且在Mb胞浆及膜表面均有分布。上述结果为进一步研究Mb FBA的生物学功能提供了理论依据。 展开更多
关键词 牛支原体 醛缩酶 原核表达 亚细胞定位
滑液支原体WVU1853株免疫相关膜蛋白的初步分析 预览 被引量:4
16
作者 包世俊 丁小琴 +3 位作者 邢小勇 伏小平 温峰琴 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期316-323,共8页
膜蛋白是病原菌膜结构的主要组分,其不仅在病原菌的生命活动中具有重要的生理功能,且部分膜蛋白还与病原菌的感染及免疫应答密切相关。因此,本研究旨在应用免疫蛋白质组学方法分离、筛选并鉴定出滑液支原体免疫相关膜蛋白,以期为滑液支... 膜蛋白是病原菌膜结构的主要组分,其不仅在病原菌的生命活动中具有重要的生理功能,且部分膜蛋白还与病原菌的感染及免疫应答密切相关。因此,本研究旨在应用免疫蛋白质组学方法分离、筛选并鉴定出滑液支原体免疫相关膜蛋白,以期为滑液支原体感染和免疫机制的研究及相关疾病诊断和防治方法措施的建立奠定基础。笔者应用培养至对数生长中后期的滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)WVU1853株全菌分别免疫鸡和新西兰兔,制备滑液支原体鸡多抗和兔多抗。提取滑液支原体WVU1853株的膜蛋白,应用二维电泳技术对其进行分离,继而应用所制多抗进行Western blot,筛选出免疫原性膜蛋白,并通过质谱分析进行鉴定。结果表明,在筛选的8个蛋白质点中,3个蛋白质点为延伸因子EF-Tu,其余蛋白质点分别是丙酮酸脱羧酶α亚基、β亚基、NADH氧化酶、组氨酰-tRNA合成酶和二氢硫辛酰胺脱氢酶。其中组氨酰-tRNA合成酶的质谱分析得分太低,尚需进一步验证,而丙酮酸脱羧酶α、β亚基与作为滑液支原体的免疫相关膜蛋白首次被证实。本研究筛选并初步鉴定出滑液支原体7种免疫相关膜蛋白,为深入研究目标蛋白质的生物学特性及新型亚单位疫苗和诊断试剂的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 滑液支原体 免疫蛋白质组学 膜蛋白 鉴定
在线阅读 免费下载
基于ITS和COⅠ基因对于我国璃眼蜱的分类研究 被引量:2
17
作者 苟惠天 +2 位作者 殷宏 孙晓林 罗建勋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期563-567,共5页
为了重建我国璃眼蜱的分类地位,厘清一些分类争议,首次将ITS和COⅠ作为标记基因进行璃眼蜱的分类研究。从新疆、甘肃、内蒙古等地共收集到7种璃眼蜱样品,提取样品基因组后,以ITS和COⅠ为目的基因进行扩增,将测序结果与GenBank中其他相... 为了重建我国璃眼蜱的分类地位,厘清一些分类争议,首次将ITS和COⅠ作为标记基因进行璃眼蜱的分类研究。从新疆、甘肃、内蒙古等地共收集到7种璃眼蜱样品,提取样品基因组后,以ITS和COⅠ为目的基因进行扩增,将测序结果与GenBank中其他相关序列进行相似性比对及系统进化分析。结果,从样品中扩增到ITS基因序列长度为2 925-3 121 bp,COⅠ基因的长度为707 bp;基于ITS和COⅠ基因对我国璃眼蜱的分类结果显示,盾糙璃眼蜱与残缘璃眼蜱为同物异种,边缘璃眼蜱与麻点璃眼蜱为2个独立种,亚洲璃眼蜱与亚东璃眼蜱是否为亚种关系还需进一步研究证实。 展开更多
关键词 璃眼蜱 ITS COⅠ 分类
基于慕课的预防兽医学教学改革思考
18
作者 苟惠天 孙晓林 《内蒙古师范大学学报:教育科学版》 2016年第6期115-117,共3页
慕课是近年来教育界新出现的一种教育模式,具有规模大、在线、开放等特点,带来教育理念和教学方式的重大变革。慕课对预防兽医学传统课堂教学发起了新的挑战,同时也带来了更多机遇。文章在分析慕课特征、预防兽医学教学现状的基础上,探... 慕课是近年来教育界新出现的一种教育模式,具有规模大、在线、开放等特点,带来教育理念和教学方式的重大变革。慕课对预防兽医学传统课堂教学发起了新的挑战,同时也带来了更多机遇。文章在分析慕课特征、预防兽医学教学现状的基础上,探讨建立预防兽医学慕课的意义及具体措施,以达到提升授课质量和学生学习效率,从而更好地培养兽医专业人才的目的。 展开更多
关键词 慕课 预防兽医学 教学改革
我国与新西兰农业教育的比较与思考 预览 被引量:2
19
作者 苟惠天 孙晓林 《河北农业大学学报:农林教育版》 2016年第4期11-14,共4页
我国农业高等教育忽视理论与实践的完整结合,课程内容过于强调专业性,教学过程中学生的中心地位体现不足。梅西大学在新西兰大学中排名第五,农学专业是其传统的优势学科。其农学专业课程设置是将所有与农业相关的学科置于一个系统之中,... 我国农业高等教育忽视理论与实践的完整结合,课程内容过于强调专业性,教学过程中学生的中心地位体现不足。梅西大学在新西兰大学中排名第五,农学专业是其传统的优势学科。其农学专业课程设置是将所有与农业相关的学科置于一个系统之中,注重综合性。在教学方法方面,采用小组合作学习、实践教学、E-learning教学、案例教学和以问题为导向的PBL教学等先进的教学方法。借鉴梅西大学的农学专业课程体系和教学方法,中国农业教育应注重学生能力培养,充分认识并积极激发学生学习兴趣,激活学生的学习潜能;充分利用基于信息技术的先进教学手段;强调课程综合性和学生综合能力的培养。 展开更多
关键词 农业高等教育 新西兰 比较研究
在线阅读 下载PDF
基于COⅠ基因序列对我国泰勒虫分类的研究 预览 被引量:2
20
作者 苟惠天 +2 位作者 殷宏 孙晓林 罗建勋 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期661-663,共3页
为理清泰勒虫中国分离株的分类地位,本研究首次对我国报道的5种泰勒虫9个地方分离株的COⅠ基因序列进行测定;并与GenBank中其它泰勒虫COⅠ和相应18S rRNA基因序列分别构建系统发生树,比较基于不同基因的分类结果。结果显示:9株泰勒虫... 为理清泰勒虫中国分离株的分类地位,本研究首次对我国报道的5种泰勒虫9个地方分离株的COⅠ基因序列进行测定;并与GenBank中其它泰勒虫COⅠ和相应18S rRNA基因序列分别构建系统发生树,比较基于不同基因的分类结果。结果显示:9株泰勒虫的COⅠ基因大小在1214 bp-1459 bp,与18S rRNA基因比较,COⅠ基因序列含有较多的变异位点及简约信息位点;基于两个基因的系统发育树,其拓扑结构大体一致。但也存在如下差异:环形泰勒虫不同分离株的聚类分析在COⅠ树中更趋于合理;有关东方泰勒虫和瑟氏泰勒虫命名的争论,本研究给出新的解释。因此,COⅠ基因可以作为新的标记基因用于泰勒虫的分类研究。 展开更多
关键词 泰勒虫 分类 系统发育树 COⅠ基因
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 4 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈