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"细胞生物学"教学中培养创新创业型人才的思考与实践 预览
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作者 李军林 崔继红 +4 位作者 黄萱 赵宇 郝亚琦 付爱根 陈富林 《科技与创新》 2019年第5期12-14,共3页
培养创新创业型人才是高等教育常抓不懈的目标和任务。"细胞生物学"讲授细胞是生命结构与功能基本单位,是一门理论性和实践性强的专业基础课程,学习难度较大。同时,又是一门非常适合培养学生创新创业思维和能力的一门课程。从... 培养创新创业型人才是高等教育常抓不懈的目标和任务。"细胞生物学"讲授细胞是生命结构与功能基本单位,是一门理论性和实践性强的专业基础课程,学习难度较大。同时,又是一门非常适合培养学生创新创业思维和能力的一门课程。从"细胞生物学"理论课、实验课和课堂拓展3个方面,归纳总结了教学团队为培养学生创新思想和能力所做的尝试,期望通过交流,促进"细胞生物学"课程教学,培养学生创新性思想和能力。 展开更多
关键词 细胞生物学 创新创业型人才 教学目标 教学模式
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细胞生物学实验教学的改革及创新 预览 被引量:5
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作者 黄 萱 付爱根 +3 位作者 赵宇 李军林 严兴荣 黄萱 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期121-124,共4页
大学本科生物相关专业课程中,细胞生物学属于重要的专业基础课。该课程的相关实验教学内容对培养高素质综合型人才具有举足轻重的作用。针对综合大学生命科学细胞生物学传统实验教学的不足,通过改进实验教学内容,引入创新性实验,改变教... 大学本科生物相关专业课程中,细胞生物学属于重要的专业基础课。该课程的相关实验教学内容对培养高素质综合型人才具有举足轻重的作用。针对综合大学生命科学细胞生物学传统实验教学的不足,通过改进实验教学内容,引入创新性实验,改变教学模式,加强教学梯队建设,提高实验教学条件等方面进行了实验教学改革探讨,以期培养学生的创新意识及基本的科学素养,在实践中摸索出提高大学本科细胞生物学实验教学的方法措施。 展开更多
关键词 细胞生物学 实验教学 教学改革 人才培养
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apoaequorin-egfp融合基因对烟草的遗传转化及其分子检测
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作者 李鹏飞 蔡静 +7 位作者 罗笑 姜雅雯 常天亮 张芮娟 黄珂 张婧 赵宇 许耀 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2017年第12期5250-5259,共10页
用钙离子报告基因非侵入式监测细胞内源钙离子实时变化是目前比较常用的钙离子监测方法。而基于传统荧光共振能量转移原理(FRET)的荧光探针具有较高的量子产率,则是目前应用于细胞或亚细胞水平钙离子检测的重要备选实验方案之一。然而... 用钙离子报告基因非侵入式监测细胞内源钙离子实时变化是目前比较常用的钙离子监测方法。而基于传统荧光共振能量转移原理(FRET)的荧光探针具有较高的量子产率,则是目前应用于细胞或亚细胞水平钙离子检测的重要备选实验方案之一。然而,供体荧光基团的激发过程却经常给最终成像过程带来强的背景和荧光信号光漂白等干扰。水母发光蛋白(Aequorin)能够在底物存在的情况下和3个Ca2+结合,通过氧化还原反应产生一个波长为469 nm的蓝光光量子,借助这一反应中蓝光光量子的产率与细胞中游离Ca2+浓度间存在精确定量关系,研究者可以准确测量细胞内的钙离子浓度动态变化情况。但是由于蓝光的波长短,存在易于被散射而难于被检测等问题,造成了目前直接使用水母发光蛋白检测细胞内Ca2+动态时,实验效率较低。为了解决上述这些问题,我们构建了一种将apoaequorin-egfp基因融合表达的植物双元表达载体,然后通过农杆菌介导的遗传转化法将这个融合基因整合到烟草的基因组中,建立了一个基于生物发光共振能量转移技术(BRET)技术,较为高效的植物细胞内源钙离子动态检测系统。 展开更多
关键词 生物发光共振能量转移(BRET) 水母发光蛋白 遗传转化 钙离子 烟草
蓝藻Synechococcus elongatus PCC7 942荧光实时定量RT-PCR实验体系的优化
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作者 来盼 李鹏飞 +6 位作者 蔡若淼 蔡静 卞乾笑 姜雅雯 常天亮 赵宇 许耀 《云南大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期307-316,共10页
蓝藻(Synechococcu elongatus PCC 7942)是最简单的原核生物钟模式生物,研究其生物钟基因表达模式具有重要的科学意义.然而由于该蓝藻高质量RNA提取困难,目前应用荧光实时定量RT-PCR(qPCR)实验方案对其特定基因表达模式进行研究的... 蓝藻(Synechococcu elongatus PCC 7942)是最简单的原核生物钟模式生物,研究其生物钟基因表达模式具有重要的科学意义.然而由于该蓝藻高质量RNA提取困难,目前应用荧光实时定量RT-PCR(qPCR)实验方案对其特定基因表达模式进行研究的报道较少.研究尝试通过对影响RNA提取质量的溶菌酶作用时间、起始细胞数量等因素,以及对影响qPCR反应特异性和重现性的c DNA模板浓度、引物浓度、引物退火温度等条件进行优化,初步建立了一套适用于S.elongatus PCC 7942的qPCR实验体系.结果表明震荡培养至OD750≈0.4时,取10 m L蓝藻细胞起始提取实验,使用3 mg/m L溶菌酶处理10 min后,再经试剂盒法提取总RNA的策略,RNA得率最高且质量最好.蓝藻的qPCR优化结果显示c DNA终质量浓度0.1μg/μL,引物终浓度4 pmol/L,并根据引物对Tm值调整退火温度是最佳反应条件. 展开更多
关键词 蓝藻 RNA提取 实时定量PCR 生物钟基因 表达模式
差异NaCl处理时间对青稞和大麦生理影响的比较 预览 被引量:1
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作者 庞羽彤 来盼 +4 位作者 李青雁 李小龙 周飞飞 霍宇鹏 赵宇 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第B12期223-228,共6页
为了确定在较长期Na Cl胁迫条件下,青稞和大麦2种抗逆性较强的禾本科作物的耐盐性表型差异,并为应用比较基因组学技术进一步开发利用禾本科作物抗逆遗传资源打下基础。以1.0%及0.5%Na Cl溶液(w/V)处理的大麦和青稞种子苗为材料,检测... 为了确定在较长期Na Cl胁迫条件下,青稞和大麦2种抗逆性较强的禾本科作物的耐盐性表型差异,并为应用比较基因组学技术进一步开发利用禾本科作物抗逆遗传资源打下基础。以1.0%及0.5%Na Cl溶液(w/V)处理的大麦和青稞种子苗为材料,检测分析了这2种植物在Na Cl胁迫1~5 d(4 d)条件下的营养生长状况及其对外界胁迫条件的生理响应表型。结果表明,相同Na Cl胁迫条件下,青稞种子的萌发率显著高于大麦,而且在较长期的Na Cl胁迫条件下青稞种子苗根和叶的生长状况均好于同期大麦。种子苗耐盐生理指标测定结果显示,在相同Na Cl胁迫条件下青稞组织内的丙二醛(Malonyldialdehyde,MDA)含量极显著低于大麦,而脯氨酸、可溶性糖含量以及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)比活力则高于大麦,上述结果显示:青稞幼苗比大麦有更好的耐盐性。 展开更多
关键词 大麦 青稞 萌发抑制率 相对生长量
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蓝藻生物节律性分子调控机制的研究进展 预览 被引量:5
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作者 李青雁 庞羽彤 +4 位作者 李小龙 周飞飞 张芳 霍宇鹏 赵宇 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期677-684,共8页
生物钟现象是一种普遍存在于生物界细胞的内源节律性保持机制。生物钟机制的存在可以使生物体的代谢行为产生并维持以24h为周期的昼夜节律,从而更好地适应于地球自转所产生的环境条件昼夜间节律性变化。蓝藻是目前生物钟分子机制研究... 生物钟现象是一种普遍存在于生物界细胞的内源节律性保持机制。生物钟机制的存在可以使生物体的代谢行为产生并维持以24h为周期的昼夜节律,从而更好地适应于地球自转所产生的环境条件昼夜间节律性变化。蓝藻是目前生物钟分子机制研究中的模式生物,其依赖于kai基因家族成员的核心生物钟调控模式已经被众多研究者详细阐明。蓝藻生物钟的核心振荡器是由蓝藻kaiA/B/C的编码产物来调控的,Kai蛋白的表达模式具有节律性。KaiC蛋白磷酸化状态的节律性循环及输入、输出途径相关组成蛋白的翻译后修饰状态节律性循环共同组成其反馈回路,负责维持生物钟节律性振荡的持续进行并与环境周期保持同步。传统的蓝藻生物钟分子机制模型认为,节律性表达基因翻译产物的转录/翻译负反馈抑制环是生物节律性维持和输出的关键。遗憾的是,在其它物种生物钟分子机制研究中未发现由ka/基因家族成员同源基因组成的节律性标签,这表明以kaiA/B/C为核心振荡器的生物钟系统并不是一种跨物种保守的生物钟系统。近期,人们发现非转录/翻译依赖的振荡器(NTO)也具有成为生物节律性产生和维持的“源动力”的可能。过氧化物氧化还原酶(Pax)氧化还原状态节律性是第一种被报道的跨物种保守的NTO节律性标签,这也日渐成为蓝藻生物钟分子机制研究新的热点。 展开更多
关键词 蓝藻 节律性 钟基因 非转录依赖的振荡器 转录-翻译负反馈回路
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青稞和大麦对NaCl胁迫的差异生理响应 预览 被引量:2
7
作者 陈浩 冯蕾 +3 位作者 陈菲 李青雁 庞羽彤 赵宇 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期609-616,共8页
本研究以大麦和青稞为材料,研究了这两种植物在0~2.0%梯度 NaCl 胁迫条件下的种子萌发率、种子苗根和叶相对生长量及耐盐性相关关键内源生理指标的表型特征,为寻找和开发禾本科作物天然强抗逆种质遗传资源建立了必要的实验基础.研究结... 本研究以大麦和青稞为材料,研究了这两种植物在0~2.0%梯度 NaCl 胁迫条件下的种子萌发率、种子苗根和叶相对生长量及耐盐性相关关键内源生理指标的表型特征,为寻找和开发禾本科作物天然强抗逆种质遗传资源建立了必要的实验基础.研究结果表明,NaCl 胁迫条件下,青稞种子的的萌发抑制率显著小于大麦,当 NaCl 浓度为1.0%时,大麦种子萌发抑制率为青稞的2.45倍.在2.0% NaCl 胁迫条件下,青稞幼苗叶片相对生长量可以达到大麦的3.88倍,而种子苗在盐胁迫下根的相对生长量测定结果则显示:青稞根的相对生长量显著高于大麦.植物内源抗逆性相关生理和生化指标测定结果显示:青稞种子苗在 NaCl 胁迫5 d后,叶片组织内源丙二醛含量显著低于大麦,而相同胁迫条件下的细胞内游离脯氨酸(MDA)含量、可溶性糖含量以及超氧化物歧化酶(SOD)比活力等指标则显著高于大麦.这些实验结果证实青稞能够通过增加自身内源通用抗逆途径的效率而表现出比普通大麦显著增强的耐盐性. 展开更多
关键词 大麦 青稞 盐胁迫 生理响应
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青稞胆碱单加氧酶基因cDNA全长开放阅读框克隆及序列分析 预览 被引量:4
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作者 黑蕾 王玉婧 +3 位作者 陈浩 赵宇 郝建国 贾敬芬 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期,共7页
甜菜碱是一种存在于多种生物体内的季胺类高效渗透调节剂,是由甜菜碱合成酶系催化的。为了研究甜菜碱合成酶系基因的表达和青稞高抗逆性之间的关系,我们以经200mmol/L NaCl预处理72h的青稞幼苗叶片及根中提取的总RNA为模板,采用RT-PCR技... 甜菜碱是一种存在于多种生物体内的季胺类高效渗透调节剂,是由甜菜碱合成酶系催化的。为了研究甜菜碱合成酶系基因的表达和青稞高抗逆性之间的关系,我们以经200mmol/L NaCl预处理72h的青稞幼苗叶片及根中提取的总RNA为模板,采用RT-PCR技术,扩增得到全长1224bp,推测编码407个氨基酸残基的青稞胆碱单加氧酶(choline monooxygenase,cmo)基因cDNA全长开放阅读框(open reading frame,ORF),将其命名为hvcmo1并在GenBank中注册,获得登录号为GU810840。生物信息学分析表明,推定的氨基酸序列中含有与已报道高等植物胆碱单加氧酶氨基酸序列中的Rieske型铁硫簇结合区和单核铁结合基序等特征性结构域具有高度保守性的特征性结构域。与多种高等植物cmo基因进行序列同源性比对分析结果显示:hvcmo1的核苷酸序列与甜菜、盐角草、菠菜、辽宁碱蓬、拟南芥、玉米、水稻、高粱、羊草和大麦等植物的cmo mRNA编码区相似性分别为55.3%、55.4%、55.6%、5.9%、61.3%、82.6%、83.3%、83.4%、95.5%和99.5%。实验过程中,我们发... 展开更多
关键词 青稞 胆碱单加氧酶 基因克隆 RT-PCR 序列分析
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滇黄芩毛状根的诱导及其黄芩苷含量测定 预览 被引量:4
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作者 步怀宇 岑举人 +3 位作者 王英娟 赵宇 李娜 毕彦博 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期 179-184,共6页
本文利用发根农杆菌A grobacterizum rhizogenes1.2556感染滇黄芩再生苗的茎段和叶片,建立了毛状根培养及其植株再生体系。毛状根可直接从受伤的茎、叶外植体表面产生,在无外源激素的MS固体和液体培养基上自主生长,表现出典型的发根特... 本文利用发根农杆菌A grobacterizum rhizogenes1.2556感染滇黄芩再生苗的茎段和叶片,建立了毛状根培养及其植株再生体系。毛状根可直接从受伤的茎、叶外植体表面产生,在无外源激素的MS固体和液体培养基上自主生长,表现出典型的发根特征。毛状根茎段的诱导率较叶片高,最高可达到14.44%;经rolB基因PCR分析和甘露碱纸电泳检测,证明Ri质粒T-DNA已整合到滇黄芩基因组中并表达;毛状根在附加6-BA2mg/L和NAA0.2mg/L的MS固体培养基上直接诱导不定芽,并在MS培养基上生根,形成再生植株。获得的毛状根系经MS液体培养基培养30d后通过HPLC都能检测到黄芩苷,其中1个转化系黄芩苷含量为2.59%,是药材黄芩的0.20倍,而从3年单位时间黄芩苷生成量计算,毛状根是药材黄芩的7.18倍。本研究建立的毛状根培养体系,将对滇黄芩转基因技术的完善和利用毛状根生产黄芩苷的生物转化提供了实验基础。 展开更多
关键词 滇黄芩 毛状根 黄芩苷 发根农杆菌
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陕西产秦艽质量变异与遗传多样性研究 被引量:6
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作者 石张燕 陈千良 +2 位作者 赵宇 孙文基 赵桂仿 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1705-1709,共5页
目的研究陕西省不同产地秦艽的质量差异,对其遗传多样性进行检测,探讨药材质量和其遗传基础的关系。方法采用HPLC法测定不同产区秦艽药材中的指标成分,进行HPLC指纹图谱分析,计算并比较相似度。依据指纹图谱中的共有峰特征,对不同药材... 目的研究陕西省不同产地秦艽的质量差异,对其遗传多样性进行检测,探讨药材质量和其遗传基础的关系。方法采用HPLC法测定不同产区秦艽药材中的指标成分,进行HPLC指纹图谱分析,计算并比较相似度。依据指纹图谱中的共有峰特征,对不同药材样品进行聚类分析。对药材中提取的总DNA进行RAPD分析,计算遗传距离并聚类。结果陕西省不同产区秦艽药材的质量具有一定的差异,不同产区秦艽药材也表现出一定的遗传多样性。陕西省不同产区的秦艽药材质量变异与遗传多样性之间不具有明显的相关性,而表现出与产地的相关性。结论产地对陕西秦艽药材质量的影响更为重要,提示道地秦艽质量的形成可能属于生境主导型。 展开更多
关键词 秦艽 质量变异 遗传多样性
RP—HPLC法测定转基因贯叶连翘植株中褪黑素 被引量:2
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作者 王英娟 郝建国 +2 位作者 贾敬芬 岑举人 赵宇 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1651-1653,共3页
目的建立测定褪黑素的反相高效液相色谱紫外分析方法,分析并测定通过组培获得的贯叶连翘不同转基因株系及其亲本植株的褪黑素。方法以SymmetryC18(150mm×4.6mm,5.0μm)为色谱柱;100mmol乙酸铵-甲醇(80:20)为流动相,体... 目的建立测定褪黑素的反相高效液相色谱紫外分析方法,分析并测定通过组培获得的贯叶连翘不同转基因株系及其亲本植株的褪黑素。方法以SymmetryC18(150mm×4.6mm,5.0μm)为色谱柱;100mmol乙酸铵-甲醇(80:20)为流动相,体积流量为0.8mL/min;检测波长为265.8nm,灵敏度为2.00AUFS。结果褪黑素浓度在20~500ng/mL线性关系良好(R^2=0.9992),平均加样回收率为98.09%(n=6),RSD为2.21%,最小检出量为1.0ng/mL。褪黑素峰保留时间约为8.8min。结论该方法可以简便准确分析不同株系贯叶连翘中的褪黑激素的量;贯叶连翘YXu55(含庆大霉素抗性标记和AANAT—HIOMT基因)转基因株系的褪黑素的量均高于pZP122(仅含庆大霉素抗性标记,不含AANAT-HIOMT基因的空白质粒)转基因株系和未转基因的对照植株;而pZP122转基因株系褪黑素的量跟未转基因的对照植株的量几乎相等。 展开更多
关键词 贯叶连翘 褪黑素 转基因 RP—HPLC
褪黑素合成酶基因转化烟草及转化植株抗氧化系统变化 被引量:2
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作者 王英娟 贾敬芬 +4 位作者 步怀宇 赵宇 许耀 Carl Hirschie Johnson Jan Kolár 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1014-1021,共8页
通过根癌农杆菌(含植物表达载体YXu55)介导的转化技术,将褪黑素生物合成酶-芳烷基胺N-乙酰转移酶(Arylalkylamine N-acetyltransferase,AANAT)与羟基吲哚O-甲基转移酶(Hydroxyindole O-methyltransferase,HIOMT)基因导入到烟草(... 通过根癌农杆菌(含植物表达载体YXu55)介导的转化技术,将褪黑素生物合成酶-芳烷基胺N-乙酰转移酶(Arylalkylamine N-acetyltransferase,AANAT)与羟基吲哚O-甲基转移酶(Hydroxyindole O-methyltransferase,HIOMT)基因导入到烟草(秦烟95)中。对所获得的庆大霉素抗性烟草株系进行Southern blotting和RT-PCR分子生物学检测,结果表明,AANAT-HIOMT基因已成功地整合到烟草基因组中,并且可以在mRNA水平上进行转录。用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定转化株系的褪黑素含量表明,转AANAT-HIOMT基因烟草株系的褪黑素含量均明显高于pZP122(不含AANAT和HIOMT基因的空白质粒)转基因株系和未转基因的对照植株,证明AANAT-HIOMT基因在转基因植株中的表达增强了褪黑素的合成能力。对不同株系抗氧化系统的部分指标进行了测定,并与其亲本对照植株比较,发现AANAT-HIOMT基因在转基因植物中的表达引起超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性增加,谷胱甘肽(GSH)浓度以及总抗氧化能力升高,且没有引起膜脂质过氧化物丙二醛(MDA)的变化,说明转基因烟草抗氧化潜能得到提高。 展开更多
关键词 烟草 褪黑素 褪黑素合成酶基因 遗传转化 抗氧化
滇黄芩器官发生与不同继代次数遗传稳定性的RAPD分析 预览 被引量:5
13
作者 岑举人 步怀宇 +2 位作者 王英娟 赵宇 贾敬芬 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期 289-292,共4页
本研究以滇黄芩不带腋芽茎段为外植体,采用不同配比激素的MS培养基建立了滇黄芩器官发生,植株再生体系。结果表明,茎段在MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.5mg/L培养基上培养时,愈伤组织诱导率达到100%;以相同培养基进行分化,并在MS+6-B... 本研究以滇黄芩不带腋芽茎段为外植体,采用不同配比激素的MS培养基建立了滇黄芩器官发生,植株再生体系。结果表明,茎段在MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.5mg/L培养基上培养时,愈伤组织诱导率达到100%;以相同培养基进行分化,并在MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L培养基上扩繁丛生芽。在1/2MS+IBA 0.2mg/L培养基诱导生根,扦插继代。利用RAPD分析不同继代次数再生植株,所用的39条随机引物中只有1条引物带型发生变化。说明经组织培养获得的再生植株遗传稳定,可多次继代培养,为滇黄芩进一步遗传操作和扩大药材资源奠定基础。 展开更多
关键词 滇黄芩 植物再生 继代次数 遗传稳定 RAPD
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AtNHX1基因对菊苣的转化和耐盐性研究 预览 被引量:16
14
作者 赵宇 王英娟 +2 位作者 步怀宇 郝建国 贾敬芬 《草业学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期 103-109,共7页
用农杆菌介导法将AtNHX1基因导入菊苣中,共获得42株卡那霉素(Kan)抗性再生植株。经过PCR检测、Southern杂交和RT-PCR检测表明,AtNHX1基因已成功整合到菊苣基因组中,并且能够正常转录。野生型和转基因植株诱发的愈伤组织进行耐盐生长试... 用农杆菌介导法将AtNHX1基因导入菊苣中,共获得42株卡那霉素(Kan)抗性再生植株。经过PCR检测、Southern杂交和RT-PCR检测表明,AtNHX1基因已成功整合到菊苣基因组中,并且能够正常转录。野生型和转基因植株诱发的愈伤组织进行耐盐生长试验,结果显示,相同盐胁迫条件下,转基因愈伤组织的相对生长率显著高于野生型愈伤组织。施加梯度NaCl胁迫后,植株叶片K^+和Na^+含量测定结果显示,转基因植株叶片比野生型积累更多的Na+和K+,维持较高的K^+/Na^+;叶片相对电导率测定结果表明,转基因株系叶片相对电导率显著低于野生型。上述结果表明,AtNHX1基因的导入和表达在提高菊苣耐盐性的同时减轻了盐胁迫对植物细胞膜的伤害。 展开更多
关键词 ATNHX1 菊苣 农杆菌 遗传转化 耐盐性
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小麦耐甘露醇变异系生理特性分析 预览
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作者 赵宇 郝建国 +1 位作者 步怀宇 贾敬芬 《西北大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期 956-962,共7页
目的 对二次离体筛选获得的小麦耐甘露醇变异细胞系进行生理生化及分子生物学鉴定。方法 检测该变异细胞系在甘露醇,NaCl和聚乙二醇(PEG-6000)模拟的渗透胁迫环境中的耐受生长能力,并测定变异系在甘露醇胁迫下游离脯氨酸含量、可溶... 目的 对二次离体筛选获得的小麦耐甘露醇变异细胞系进行生理生化及分子生物学鉴定。方法 检测该变异细胞系在甘露醇,NaCl和聚乙二醇(PEG-6000)模拟的渗透胁迫环境中的耐受生长能力,并测定变异系在甘露醇胁迫下游离脯氨酸含量、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、Na^+/K^+含量等生理生化特性及可溶性蛋白质组成和基因组DNA多态性等分子特征。结果 通过愈伤组织在甘露醇,NaCl和聚乙二醇(PEG-6000)模拟的渗透胁迫条件下的生长实验,发现变异系细胞系可以在对照细胞系不能生长的20%甘露醇,1.5%NaCl和20%PEG-6000胁迫条件下,分别表现出14.5%(见图1),12.8%(见图2),41.8%(见图3)的相对生长量;在20%甘露醇胁迫条件下变异系细胞系游离脯氨酸积累量为对照系的80%(见图4),可溶性糖积累量为对照系的1.2倍(见图5),可溶性蛋白含量为对照系的1.3倍(见表1)。在相同浓度的甘露醇模拟的渗透胁迫环境中变异系再生植株比对照植株相能维持较高的K^+/Na^+比值(见表2)。与对照相比,耐甘露醇变异细胞系再生植株可溶性蛋白SDS-PAGE发生显著变化:6条新可溶性蛋白谱带出现在变异系再生植株中,同时对照系中的1条可溶性蛋白谱带在突变株中缺失(见图6)。变异系植株与对照株RAPD带型呈现一定的多态性(见图7),表明变异系基因组DNA与对照相比发生了突变。结论所研究的小麦耐甘露醇变异细胞系是一个具有较强渗透胁迫耐受能力,可用于进一步育种工作的良好突变体材料。 展开更多
关键词 小麦 耐甘露醇变异细胞系 游离脯氨酸 可溶性糖 可溶性蛋白 SDS-PAGE NA^+ K^+ RAPD
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青稞HvBADH1基因的克隆及其转化烟草的初步研究 预览 被引量:7
16
作者 赵宇 郝建国 +2 位作者 步怀宇 王英娟 贾敬芬 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期 1153-1159,共7页
应用RT-PCR结合RACE技术,从青稞总RNA中扩增得长度为1512bp的甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因cDNA全长编码序列。通过氨基酸同源性比对,发现该序列的推定表达产物与大麦BADH同工酶BBD2的同源性为98.4%,而与小麦、玉米和水稻等禾本科作物的B... 应用RT-PCR结合RACE技术,从青稞总RNA中扩增得长度为1512bp的甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因cDNA全长编码序列。通过氨基酸同源性比对,发现该序列的推定表达产物与大麦BADH同工酶BBD2的同源性为98.4%,而与小麦、玉米和水稻等禾本科作物的BADH同源性分别为97.0%、84.7%和85.1%。将克隆到的青稞cDNA序列命名为HvBADH1,投递到GenBank,获得收录号EF492983。HvBADH1可以在原核表达系统TB1-pMALc2x中正常表达出分子量为54.2kD的多肽链。将HvBADH1的编码ORF,插入到添加了植物表达CaMV35S启动子和NospolyA终止子调控元件的植物表达载体pCAMBIA1301质粒相应的克隆位点中,构建了HvBADH1基因的农杆菌植物转化系统LBA4404(pCAM-ba)。进而采用农杆菌介导法,将HvBADH1基因导入烟草中,对所获得的潮霉素抗性烟草株系进行PCR、Southernblot和RT-PCR等分子生物学检测,结果表明,在得到的2个转基因株系中,HvBADH1基因已整合到受体植物基因组中,并且可以在mRNA水平上进行转录。 展开更多
关键词 青稞 HvBADH1 基因克隆 遗传转化 耐盐性 RT-PCR RACE
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AtNHX1基因对草木樨状黄芪的转化和耐盐性表达研究 预览 被引量:8
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作者 赵宇 步怀宇 +2 位作者 郝建国 王英娟 贾敬芬 《分子细胞生物学报》 CSCD 北大核心 2008年第3期 213-221,共9页
应用RT—PCR技术从100mmol/LNaCl胁迫处理的拟南芥幼苗中克隆得到编码液泡膜Na+/H’逆向转运蛋白的AtNHXl基因cDNA编码ORF,并在该ORF上游分别插入CaMV35启动子和TMV RNA5’UTR的Ω片段,而在下游插入NOS polyrA构建真核表达盒,进... 应用RT—PCR技术从100mmol/LNaCl胁迫处理的拟南芥幼苗中克隆得到编码液泡膜Na+/H’逆向转运蛋白的AtNHXl基因cDNA编码ORF,并在该ORF上游分别插入CaMV35启动子和TMV RNA5’UTR的Ω片段,而在下游插入NOS polyrA构建真核表达盒,进而将该表达盒插入双元植物表达载体pNT质粒的T—DNA区构建了携带AtNHXl基因的植物表达载体质粒pNT-AtNHX1。将pNT-AtNHX1导入农杆菌LBA4404,用农杆菌介导法将AtNHX1基因导入豆科牧草草木樨状黄芪中,共获得103株Kan抗性再生植株。通过对农杆菌菌液浓度、侵染时间和乙酰丁香酮浓度等影响转化效率的因素进行优化,初步建立了稳定的草木樨状黄芪农杆菌转化体系。经过PCR检测、Southern杂交和RT—PCR检测表明,AtNHX1基因已被成功整合到草木樨状黄芪基因组中,并且能够正常转录。野生型和转基因株系诱发的愈伤组织进行耐盐生长实验,结果显示相同盐胁迫条件下,转基因愈伤组织的相对生长率显著高于野生型愈伤组织。施加梯度NaCl胁迫后,植株叶片K^+,Na^+含量和叶片相对电导率测定结果显示,转基因植物叶片比野生型积累更多的Na^+和K^+,维持较高的K^+/Na^+;而转基因株系叶片相对电导率显著低于野生型。上述结果表明,AtNHX1基因的导入和表达在提高草木樨状黄芪耐盐性的同时减轻了盐胁迫对植物细胞膜的伤害。 展开更多
关键词 ATNHX1 草木樨状黄芪 农杆菌 遗传转化 耐盐性
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小麦耐水分胁迫突变体生理及RAPD特性分析 预览
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作者 赵宇 郝建国 +1 位作者 步怀宇 贾敬芬 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第2期 95-100,共6页
检验小麦耐水分胁迫突变体对渗透胁迫环境的耐受能力并对其生理生化及分子特性进行研究。测定突变体愈伤组织在甘毒譬醇,NaCl和聚乙二醇(PEG6000)模拟的渗透胁迫下的相对生长量及其在20%甘露醇胁迫下游离脯氨酸含量、可溶性糖含量... 检验小麦耐水分胁迫突变体对渗透胁迫环境的耐受能力并对其生理生化及分子特性进行研究。测定突变体愈伤组织在甘毒譬醇,NaCl和聚乙二醇(PEG6000)模拟的渗透胁迫下的相对生长量及其在20%甘露醇胁迫下游离脯氨酸含量、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量等生理生化指标,并进一步检测了突变体再生苗的K^+/Na^+含量及可溶性蛋白贡组成和基因组DNARAPD多态性等生化和分子特征。突变细胞系可以在对照不能生长的20%甘露醇、1.5%№a和20%PEG-6000胁迫条件下。分别表现出14.5%,12.8%,41.8%的相对生长量;在20%甘露醇胁迫条件下突变细胞系游离脯氨酸积累量为对照的80%,可溶性糖积累量为对照的1.2倍,可溶性蛋白含量为对照的1.3倍。在相同浓度的甘露醇模拟的渗透胁迫环境中突变体再生植株比对照植株相能维持较高的K^+/Na^+比值。与对照相比,耐水分胁迫突变体再生植株可溶性蛋白SDS-PAGE发生显著变化:6条新可溶性蛋白谱带出现在突变体再生植株中,同时对照系中的1条可溶性蛋白谱带在突变株中缺失。突变体植株与对照株RAPD带型呈现一定的多态性。所研究的小麦耐水分胁迫突变体是一个具有较强渗透胁迫耐受能力,可用于进一步育种工作的良好中间材料。 展开更多
关键词 小麦 耐水分胁迫突变体 IK4PD
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超大型烟草突变株的生理生化特征和分子生物学鉴定 预览 被引量:2
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作者 陈刚 赵宇 +2 位作者 贾敬芬 王瑛华 郝建国 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期 24-30,共7页
超大型烟草突变株再生植株高度是野生型的2.2倍,叶片数是野生型的3.3倍,呈现晚花发育特征;叶片气孔保卫细胞中叶绿体数是野生型的1.3倍,叶绿素a、b和叶绿素总量均高于野生型,可溶性蛋白质含量是野生型的1.18倍,过氧化物酶、... 超大型烟草突变株再生植株高度是野生型的2.2倍,叶片数是野生型的3.3倍,呈现晚花发育特征;叶片气孔保卫细胞中叶绿体数是野生型的1.3倍,叶绿素a、b和叶绿素总量均高于野生型,可溶性蛋白质含量是野生型的1.18倍,过氧化物酶、细胞色素氧化酶同工酶电泳图谱上有一定差异;可溶性蛋白SDS-PAGE电泳图谱上比野生型少4条谱带;RAPD结果表明突变体在DNA水平上确实发生了变化,DDRT-PCR结果显示出两者在基因表达上有差异。突变株再生植株可以开花结实,植株高大、叶数多,晚花的特征可以稳定遗传。 展开更多
关键词 烟草 超大型突变株 晚花 随意扩增多态性DNA MRNA差异显示
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农杆菌转化的小冠花发状根的诱导及其植株再生 预览 被引量:7
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作者 韩晓玲 步怀宇 +2 位作者 郝建国 赵宇 贾敬芬 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期 107-113,共7页
用野生型发根农杆菌15834菌株感染小冠花15日龄无菌苗子叶和下胚轴切段,建立了高效的发状根培养及其体细胞胚胎发生再生体系。发状根可直接从受伤的外植体表面产生,也能在外植体诱导的愈伤组织上发生,在无外源激素的MS固体和液体培... 用野生型发根农杆菌15834菌株感染小冠花15日龄无菌苗子叶和下胚轴切段,建立了高效的发状根培养及其体细胞胚胎发生再生体系。发状根可直接从受伤的外植体表面产生,也能在外植体诱导的愈伤组织上发生,在无外源激素的MS固体和液体培养基上,转化根能自主生长,表现出典型的发根特征。用适宜浓度的乙酰丁香酮处理对数生长期的农杆菌菌液2h,感染预培养2d的子叶获得了最高的转化频率(87.4%)。在附加0,2mg/L2,4-D,0.5mg/LNAA和0.5mg,LKT的Ms培养基上,发状根能100%形成胚性愈伤组织,并于含0.5mg/LKT,0.2mg/LIBA和300mg/L脯氨酸的MS培养基上顺序经过体细胞胚胎发育的各个典型时期,转换成完整植株。再生植株除具有发达的侧根外,其它形态特征与未转化植株未见明显的差异,但在获得的5个转化克隆中,其中1个的发状根及其再生植株叶片中有毒物质3.硝基丙酸的含量显著下降,分别为未转化对照的57.68%和58.17%。冠瘿碱纸电泳检测和rolB基因PCR扩增检测均证明农杆菌Ri质粒上的T-DNA已经整合到小冠花转化细胞的基因组中。 展开更多
关键词 小冠花 发根农杆菌 发状根 体细胞胚胎发生 植株再生
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