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合成生物学与代谢工程在谷氨酸棒杆菌产氨基酸中的应用
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作者 梦飞 徐美娟 +4 位作者 张显 杨套伟 许正宏 饶志 《中国科学:生命科学》 CSCD 北大核心 2019年第5期541-552,共12页
氨基酸是重要的化合物,在食品、医药、化工等领域具有广泛用途.多种氨基酸可以通过蛋白质水解提取法、化学合成法以及微生物法生产,现如今大部分的氨基酸都开始尝试微生物发酵法实现工业生产.谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)... 氨基酸是重要的化合物,在食品、医药、化工等领域具有广泛用途.多种氨基酸可以通过蛋白质水解提取法、化学合成法以及微生物法生产,现如今大部分的氨基酸都开始尝试微生物发酵法实现工业生产.谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)作为发酵生产氨基酸的先驱者,其生产的氨基酸产量已达年产数百万吨.随着合成生物学技术以及新一代基因编辑技术的兴起,谷氨酸棒杆菌能生产的氨基酸种类从传统的几种氨基酸扩大到了几乎所有氨基酸及其衍生物.本文综述了近年来利用代谢工程及合成生物学工具对谷氨酸棒杆菌的改造技术,并介绍了一些利用谷氨酸棒杆菌生产传统氨基酸以及非天然氨基酸的典型案例,为谷氨酸棒杆菌突破所有氨基酸生产瓶颈提供参考. 展开更多
关键词 谷氨酸棒杆菌 代谢工程 合成生物学 氨基酸
偶联羟化反应和辅酶再生体系产9α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮
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作者 沙宗焱 张显 +3 位作者 杨套伟 徐美娟 饶志 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期3074-3081,共8页
9α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮(9-OH-AD)是一种重要的甾体药物中间体,可以用来制备β-甾酮,地塞米松和其他类固醇化合物。3-甾酮9α-羟基化酶(KSH)是由两个亚基即末端氧化亚基(KshA)和铁氧还蛋白还原亚基(KshB)构成的。在本研究中,人工... 9α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮(9-OH-AD)是一种重要的甾体药物中间体,可以用来制备β-甾酮,地塞米松和其他类固醇化合物。3-甾酮9α-羟基化酶(KSH)是由两个亚基即末端氧化亚基(KshA)和铁氧还蛋白还原亚基(KshB)构成的。在本研究中,人工合成了来源于分枝杆菌Mycobacterium sp.Strain VKM Ac-1817D的kshA和kshB基因,通过优化表达载体促进了KshA和KshB在E.coli BL21(DE3)中的可溶性表达,并探究了催化体系中KSH还原亚基和氧化亚基的最适添加比例。此外,KSH转化雄甾-4-烯-3,17-二酮(AD)为9-OH-AD的过程中需要辅酶NADH。本研究构建了羟基化反应与利用葡萄糖脱氢酶(GDH)的NADH辅酶再生反应的偶联体系。为了进一步提高转化效率,本研究进行了转化条件的优化,并采取了分批补料的策略,最终9-OH-AD产量为4.78 g/L,转化率为96.7%。此种酶介导的转化生产9-OH-AD的方法为甾体药物生产提供了一种环境友好和经济实用型的新策略。 展开更多
关键词 羟化反应 辅酶再生 3-甾酮9α-羟基化酶 葡萄糖脱氢酶
建立人α突触核蛋白A30P突变的帕金森病大鼠模型 预览
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作者 宋娜 王海军 +9 位作者 李宏彬 张伟 谷腾腾 胡庆 余建 张景航 苏蔚 赵铁锁 李雨姗 《中国实验动物学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期567-573,共7页
目的 建立人α-突触核蛋白(α-synuclein,α-SYN)A30P突变型转基因大鼠的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型。方法 利用慢病毒系统构建过表达野生型α-SYN载体pLKO-CMV-α-SYN-WT-P2A-GFP及α-SYN A30P突变载体pLKO-CMV-α-SYN-A30... 目的 建立人α-突触核蛋白(α-synuclein,α-SYN)A30P突变型转基因大鼠的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型。方法 利用慢病毒系统构建过表达野生型α-SYN载体pLKO-CMV-α-SYN-WT-P2A-GFP及α-SYN A30P突变载体pLKO-CMV-α-SYN-A30P-P2A-GFP,分别转染293FT细胞,瞬时转染24 h后WB检测α-SYN的表达水平。之后经慢病毒包装、浓缩,利用立体定位技术分别对大鼠中脑黑质致密部注射病毒稀释液,过表达α-SYN野生型和A30P突变型的慢病毒颗粒。免疫荧光染色检测α-SYN和酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的分布情况,并观察中脑黑质致密部多巴胺能神经元数量的变化。Rotating rod实验评价注射A30P慢病毒大鼠的行为改变情况。结果 野生型和突变型A30P的基因表达载体在293FT细胞内能够高表达α-SYN蛋白。TH免疫荧光结果显示:与病毒稀释液组相比,过表达α-SYN野生型和A30P突变型大鼠均能导致中脑黑质致密部多巴胺能神经元数量的减少,而α-SYN A30P慢病毒注射组的中脑黑质神经元缺失的更多,具有显著性差异。对A30P转基因大鼠脑部神经元缺失部位进行免疫荧光发现,该区域TH染色几乎呈阴性,α-SYN蛋白出现大量聚集,该结果表明脑部神经元的消失同时伴随着α-SYN蛋白的聚集及TH表达的剧烈减少,进一步揭示过表达α-SYN A30P可以导致多巴胺能神经元数量的减少和退化。此外,rotating rod实验结果显示过表达α-SYN A30P大鼠表现出明显的进行性运动能力障碍。结论 通过慢病毒系统建立了人α-SYN A30P突变型转基因大鼠的PD模型,为PD发病机制的研究及药物开发奠定基础。 展开更多
关键词 Α-突触核蛋白 A30P 慢病毒表达载体 帕金森病 大鼠
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羟丙基-β-环糊精对新金色分枝杆菌合成ADD蛋白质组的影响
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作者 吴丹 张显 +4 位作者 饶志 陈亚玲 徐美娟 杨套伟 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1117-1121,共5页
新金色分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum JC-12)可降解植物甾醇合成药物中间体雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮(ADD),由于植物甾醇的溶解度较低,因此在转化体系中添加羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)作为助溶剂.本次研究在HP-β-CD存在与否... 新金色分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum JC-12)可降解植物甾醇合成药物中间体雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮(ADD),由于植物甾醇的溶解度较低,因此在转化体系中添加羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)作为助溶剂.本次研究在HP-β-CD存在与否条件下利用二维凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱技术(MALDI-TOFMS)分离和鉴定新金色分枝杆菌蛋白质表达量的差异;再使用反转录实时荧光定量PCR(RT-q PCR)对挑选出的5个与ADD合成相关的蛋白质编码基因进行转录水平分析.结果表明,2-DE图谱及质谱结果共鉴定到12个具有显著差异表达量的蛋白质点.其中,参与植物甾醇降解合成ADD途径的乙醇脱氢酶、烯酰-Co A水合酶、乙酰-Co A乙酰基转移酶、3α,7α,12α-三羟基-5β-胆甾-24-烯酰-Co A水合酶和4,5-9,10-双断裂-3-羟基-5,9,17三氧雄甾-1(10),2-二烯-4-酸酯水解酶的蛋白质表达量在羟丙基-β-环糊精存在条件下显著提高;参与糖、脂、氨基酸和核酸类物质代谢的乙二醛酶、3-氧代酰基-ACP合酶、3-酮脂酰-ACP还原酶、分支酸合酶、氮调节蛋白P-II和DNA结合蛋白的蛋白质表达量也有一定的提高,但磷酸甘油酸变位酶的蛋白质表达量有所下降.通过RT-q PCR分析的转录水平的变化情况与2-DE得到的蛋白水平的结果相符.综上所述,羟丙基-β-环糊精可促进降解植物甾醇合成ADD代谢途径及糖、脂、氨基酸和核酸类物质代谢途径相关酶的表达量. 展开更多
关键词 植物甾醇 羟丙基-Β-环糊精 新金色分枝杆菌 双向电泳 实时荧光定量PCR
表达3-甾酮-△^1-脱氢酶降解植物甾醇合成雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮 被引量:4
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作者 张乐乐 张显 +4 位作者 陈榕榕 饶志 李会 许正宏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1589-1600,共12页
构建分枝杆菌表达载体pMTac并在分枝杆菌Mycobacterium neoaurum JC-12中加强表达甾醇降解过程中的关键酶3-甾酮-△^1-脱氢酶(KSDD)以提高雄甾-1,4-二烯-3,17-二铜(ADD)的产量。将p MF41的启动子pACE替换成tac启动子构建载体pMTac,... 构建分枝杆菌表达载体pMTac并在分枝杆菌Mycobacterium neoaurum JC-12中加强表达甾醇降解过程中的关键酶3-甾酮-△^1-脱氢酶(KSDD)以提高雄甾-1,4-二烯-3,17-二铜(ADD)的产量。将p MF41的启动子pACE替换成tac启动子构建载体pMTac,在分枝杆菌中分别表达报告基因绿色荧光蛋白(GFP)和关键酶KSDD,通过GFP亮度和KSDD酶活验证tac启动子在M.neoaurum JC-12中的效果,并发酵验证加强表达KSDD对产物ADD的影响。荧光显微照片表明两个载体均能在M.neoaurum JC-12表达GFP,但tac启动子的效果比pACE强。酶活测定结果为重组菌M.neoaurum JC-12/pMTac-ksdd破碎细胞上清液中KSDD酶活比原始菌提高了6.53倍,比M.neoaurum JC-12/pMF41-ksdd提高了4.36倍。摇瓶发酵显示重组菌M.neoaurum JC-12/pMTac-ksdd ADD的产量比原始菌提高了22.2%,由4.86 g/L提高到5.94 g/L,而AD的产量由0.92 g/L减少到0.17 g/L,降低了81.5%;与M.neoaurum JC-12/p MF41-ksdd比,ADD产量提高了12.7%,AD降低了71.2%。以20 g/L植物甾醇为底物,5 L发酵罐中重组菌M.neoaurum JC-12/pMTac-ksdd的ADD产量达到10.28 g/L。结果表明,构建的新型表达载体pMTac适用于在M.neoaurum JC-12中加强表达关键酶KSDD,而且在M.neoaurum JC-12中过量表达KSDD有助于ADD产量的提高,为目前报道的发酵法利用新金色分枝杆菌降解植物甾醇合成ADD的最高水平。 展开更多
关键词 MYCOBACTERIUM neoaurum JC-12 3-甾酮-△1-脱氢酶 tac启动子 雄甾-4-烯-3 17-二酮 雄甾-1 4-二烯-3
土家丝弦锣鼓的传承与保护——以湖北省建始县为中心
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作者 《大舞台》 2015年第11期226-227,共2页
建始县作为丝弦锣鼓的发源地,见证着丝弦锣鼓的发展历程,笔者深入建始县进行实地田野调查,了解丝弦锣鼓传承保护现状,并分析了土家丝弦锣鼓的发展困境及解决对策,本文将作具体阐述。
关键词 丝弦锣鼓 保护 传承
电离辐射对小鼠脾脏ICOS/ICOSL及相关信号通路的影响 被引量:2
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作者 史涛 董娟聪 +7 位作者 张婉泽 武宁 卢良杰 张聪 张海芹 单玉兴 金顺子 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期18-21,共4页
目的观察不同剂量X射线照射后小鼠脾细胞可诱导共刺激分子及其配体(ICOS/ICOSL)与核因子NF—KB、细胞因子IL-10表达量的变化。方法健康ICR小鼠按随机数字表法分为低剂量照射组(0.05、0.075和0.2Gy)、高剂量照射组(1、2、4和6G... 目的观察不同剂量X射线照射后小鼠脾细胞可诱导共刺激分子及其配体(ICOS/ICOSL)与核因子NF—KB、细胞因子IL-10表达量的变化。方法健康ICR小鼠按随机数字表法分为低剂量照射组(0.05、0.075和0.2Gy)、高剂量照射组(1、2、4和6Gy)和假照组。假照组于假照后16h处死,高、低剂量照射组分别于照后0、4、8、16、24、48、72h处死小鼠,分离小鼠脾脏制成单细胞悬液,提取脾组织总蛋白,采用流式细胞术检测ICOS/ICOSL,Westernblot法检测NF—KB蛋白水平,采用ELISA法检测IL-10分泌量的变化。结果在0.05、0.075Gy低剂量照射后,ICOS/ICOSL双阳性细胞百分比显著低于假照组(t=4.743、4.120,P〈0.01);在4、6Gy高剂量照射后,则上调其表达(t=-4.950、-7.310,P〈0.01)。核因子NF-KB变化趋势与ICOS/ICOSL表达变化相似。IL-10在0.075、0.2Gy低剂量照射后明显低于假照组(t=5.277、2.854,P〈0.05),但在6Gy照射后明显高于假照组(t=7.196,P〈0.01)。结论低剂量电离辐射抑制ICOS/ICOSL、NF—KB和IL-10的表达,而高剂量辐射上调ICOS/ICOSL表达,并激活核因子NF-KB,进而导致IL-10分泌量升高。 展开更多
关键词 电离辐射 ICOS ICOSL NF-KB IL-10 信号通路
基于模糊数学和AHP法的B2B平台服务链研究 预览
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作者 武忠 《科技与经济》 2014年第5期59-64,共6页
在知识流理论的基础之上,明确了B2B平台服务链上的各节点企业,进而创造性地构建了B2B平台服务链模型.在专家访谈的数据支持下,利用模糊数学思想形成了一种B2B平台服务链上的节点企业知识合作伙伴优化选择方法,最后,利用AHP法对B2B平台... 在知识流理论的基础之上,明确了B2B平台服务链上的各节点企业,进而创造性地构建了B2B平台服务链模型.在专家访谈的数据支持下,利用模糊数学思想形成了一种B2B平台服务链上的节点企业知识合作伙伴优化选择方法,最后,利用AHP法对B2B平台服务链服务水平的影响因素进行层次分析,结果表明:资源强度、权威性、操作性对服务水平的影响作用最为显著,设计性、响应速度的影响作用较为明显. 展开更多
关键词 B2B平台 服务链 模糊数学 AHP法
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PLC/PIP2信号通路在辐射诱导NRP1+Treg细胞中的作用机制
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作者 董娟聪 单玉兴 +3 位作者 张聪 卢良杰 金顺子 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期561-564,共4页
目的观察X射线照射后小鼠胸腺细胞中CD4+CD25+NRP1+Treg细胞数量及TGF—β1分泌量的变化,并探索PLC/PIP2信号通路在其中的作用机制。方法36只ICR小鼠按随机数字表法分为假照组、0.5、1.0、2.0、4.0和6.0Gy的不同剂量组,x射... 目的观察X射线照射后小鼠胸腺细胞中CD4+CD25+NRP1+Treg细胞数量及TGF—β1分泌量的变化,并探索PLC/PIP2信号通路在其中的作用机制。方法36只ICR小鼠按随机数字表法分为假照组、0.5、1.0、2.0、4.0和6.0Gy的不同剂量组,x射线深部治疗机进行全身照射,于照射后16h应用流式细胞仪分析小鼠胸腺细胞中CD4+CD25+NRP1+Treg细胞的变化,ELISA法检测胸腺细胞TGF—β1含量的变化。EL-4细胞株经PKC激动剂(PMA)、Ca2+阻断剂(TMB-8)作用2h后并经4Gyx射线照射,于照射后48h应用流式细胞术及ELISA法分别检测CD4+CD25+NRP1+Treg细胞及TGF-β1含量的变化。结果小鼠胸腺细胞中NRP1+Treg在0.5GyX射线作用后稍有下降,于1.0Gy降至最低(t=6.96,P〈0.01),而后呈剂量依赖性升高,于6.0Gy升至最高(t=6.70,P〈0.01);胸腺细胞TGF—B1在0.5GyX射线照射后显著下降(t=12.53,P〈0.01),而1.0~4.0Gy照射后则呈剂量依赖性升高,于6.0Gy仍保持高水平(t=10.40-15.30,P〈0.01)。PMA作用后,与假照组相比,单独PMA组NRP1+Treg细胞表达显著降低(t=3.06,P〈0.01),而联合照射后表达则明显上调(t=8.27,P〈0.01),TGF-β1无论受照与否,其含量均明显降低(t=10.46—39.69,P〈0.01);而TMB-8作用后,无论受照与否CD4+CD25+NRP1+Treg的表达及TGF-β1的分泌量均显著上调(t=5.53~44.26,P〈0.01)。结论高剂量电离辐射可以诱导小鼠胸腺细胞中NRP1+Treg细胞表达并增加TGF—B1的含量,此现象可能与启动PLC/PIP2信号通路有关。 展开更多
关键词 电离辐射 NRP1 调节性T细胞 TGF-β1 PLC PIP2信号通路
柴油清净剂清净性研究 预览 被引量:4
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作者 刘浏 郭瑞莲 《清洗世界》 CAS 2012年第7期29-33,共5页
在XUD-9柴油发动机台架上,采用中国石油化工行业推荐标准SH/T—2005《柴油机喷嘴结焦试验方法》,研究清洁性不同的柴油对柴油机喷嘴结焦阻塞的影响。实验结果显示:加入有效的柴油清净剂,对柴油机喷嘴具有显著的清洁效果;我国车用柴油... 在XUD-9柴油发动机台架上,采用中国石油化工行业推荐标准SH/T—2005《柴油机喷嘴结焦试验方法》,研究清洁性不同的柴油对柴油机喷嘴结焦阻塞的影响。实验结果显示:加入有效的柴油清净剂,对柴油机喷嘴具有显著的清洁效果;我国车用柴油的清净性能与国外相比差距较大。 展开更多
关键词 柴油机 柴油清净剂 清净性 喷嘴结焦
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成纤维细胞生长因子-21[Arg~(59)]突变体基因的克隆及融合蛋白的表达与纯化 预览 被引量:2
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作者 万晓珊 赵宏鑫 +4 位作者 张耀方 张海淼 王会岩 李校堃 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期491-495,共5页
目的:对野生型成纤维细胞生长因子-21(FGF21)进行突变改造及表达与纯化,为后续蛋白质体外偶联(Pull-down)实验及建立人源肝癌裸鼠模型奠定基础。方法:采用PCR定点突变方法,将FGF21cDNA第59位赖氨酸密码子突变为精氨酸密码子,所得... 目的:对野生型成纤维细胞生长因子-21(FGF21)进行突变改造及表达与纯化,为后续蛋白质体外偶联(Pull-down)实验及建立人源肝癌裸鼠模型奠定基础。方法:采用PCR定点突变方法,将FGF21cDNA第59位赖氨酸密码子突变为精氨酸密码子,所得的突变体片段与SUMO分子伴侣相连后插入表达载体pET20b,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。对表达产物进行Ni-NTA柱亲和层析、酶切和除盐等纯化分析。结果:PCR扩增出约546bp的特异性片段,测序分析表明已成功引入突变;所构建的pET20b-SUMO-FGF21[Arg59]重组阳性克隆经PCR与双酶切鉴定及测序分析,与预期结果一致;SDS-PAGE显示表达产物相对分子质量约31500,且为可溶性;Western blotting分析证实:纯化后产物是成熟的FGF21[Arg59]突变体蛋白。结论:成功构建FGF21[Arg59]突变体基因,并经表达纯化得到成熟的FGF21[Arg59]突变体蛋白。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子-21 突变体 SUMO融合表达 纯化
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FGF21[Tyr~(20)]突变体的克隆、表达及纯化 预览 被引量:1
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作者 张耀方 万晓珊 +6 位作者 赵宏鑫 杨苹 孔祥鑫 刘敏 李校堃 王会岩 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1088-1093,共6页
目的:将成纤维细胞生长因子21(FGF21)第20位氨基酸进行突变后,在大肠杆菌中表达,并进行纯化和生物活性检测。方法:以野生型的FGF21为模板,将FGF21第20位氨基酸Tyr进行PCR定点突变成Phe后与小分子泛素样修饰物(SUMO)融合,克隆至pET... 目的:将成纤维细胞生长因子21(FGF21)第20位氨基酸进行突变后,在大肠杆菌中表达,并进行纯化和生物活性检测。方法:以野生型的FGF21为模板,将FGF21第20位氨基酸Tyr进行PCR定点突变成Phe后与小分子泛素样修饰物(SUMO)融合,克隆至pET22b表达载体中,构建重组原核表达质粒pET22b-SUMO-FGF21[Tyr20],克隆至BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳及Western blotting法进行鉴定,用Ni-NTA亲和层析柱纯化,SUMO蛋白酶将SUMO切除,SephadexG-50除盐。结果:通过PCR定点突变,成功地将FGF21第20位氨基酸进行了突变,重组质粒pET22b-SUMO-FGF21[Tyr20]经PCR和双酶切鉴定后测序与预期结果相符。经SDS-PAGE电泳分析,蛋白为可溶性,纯化后成功获得FGF21[Tyr20]突变体蛋白,Western blotting分析显示FGF21[Tyr20]突变体蛋白与FGF21抗体有特异性反应。结论:成功构建并高效可溶性表达SUMO-FGF21[Tyr20]的突变体基因,获得FGF21[Tyr20]蛋白。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子21[Tyr20]突变体基因 克隆 分子 原核表达 纯化
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人成纤维细胞生长因子-21基因的克隆表达及蛋白的纯化 预览 被引量:6
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作者 王会岩 田海山 +6 位作者 赵宏鑫 张耀方 万晓姗 杨苹 肖业臣 李校堃 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期81-85,共5页
目的:构建和表达人成纤维细胞生长因子21(FGF21)的基因工程菌,为治疗2型糖尿病的新药开发提供实验数据。方法:通过PCR方法,以质粒pET20b—FGF21为模板扩增FGF21全长,将其与分子伴侣SUMO相融合,再将该融合基因与原核表达载体pET... 目的:构建和表达人成纤维细胞生长因子21(FGF21)的基因工程菌,为治疗2型糖尿病的新药开发提供实验数据。方法:通过PCR方法,以质粒pET20b—FGF21为模板扩增FGF21全长,将其与分子伴侣SUMO相融合,再将该融合基因与原核表达载体pET20b连接后转化至BL21(Rosetta)宿主细胞中,通过IPTG诱导获得可溶性表达。将融合蛋白经Ni—NTA、分子筛等进行纯化,获得的蛋白纯度在95%以上。结果:经酶切和基因测序证实获得的FGF21基因序列与GenBank(登录号NM019113)报道的完全一致,构建的pET20b—SUMO—FGF21表达载体在BL21大肠杆菌中成功表达FGF21蛋白,蛋白表达量在15%以上,经SDS-PAGE证实其相对分子质量为19401,与理论预期值相符。Western blotting分析该表达产物与人FGF21多克隆抗体具有特异性结合能力,经SUMO酶酶切后获得纯度大于95%以上的纯蛋白。结论:成功构建表达人FGF21融合蛋白的基因工程菌,经IPTG诱导、Ni—NTA、分子筛等进行纯化后获得了FGF21纯蛋白。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子21 pET-20b 小泛素相关修饰蛋白质类
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燃油清净剂对发动机沉积物生成影响的试验研究 预览
14
作者 纪威 +1 位作者 郭瑞莲 鲍晓峰 《拖拉机与农用运输车》 2010年第1期16-17,共2页
在M111发动机台架上,采用GB/T19230.6-2003中所规定的试验方法,研究了不同油品对发动机进气阀、燃烧室等部位沉积物的影响。研究结果表明:使用清净性不同的车用汽油,所产生进气阀沉积物数量差别很大,平均每阀沉积物质量超过10倍... 在M111发动机台架上,采用GB/T19230.6-2003中所规定的试验方法,研究了不同油品对发动机进气阀、燃烧室等部位沉积物的影响。研究结果表明:使用清净性不同的车用汽油,所产生进气阀沉积物数量差别很大,平均每阀沉积物质量超过10倍;如果采用合适的汽油清净剂,可以有效控制进气阀沉积物的数量,能降低80%~90%以上;加清净剂的汽油在减少进气阀积炭的同时增加了燃烧室的积炭;我国车用汽油的清净性能与国外相比差距较大。 展开更多
关键词 燃油清净剂 进气阀沉积物 总燃烧室沉积物 发动机
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人成纤维细胞生长因子21基因的克隆及在毕赤酵母中的表达 预览
15
作者 赵宏鑫 +4 位作者 杨苹 万晓珊 孔祥鑫 王会岩 李校堃 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期644-650,F0002共8页
目的:以毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115和SMD1168为宿主菌表达人源成纤维细胞生长因子21(hFGF21),为开发治疗糖尿病药物提供一定的实验基础。方法:根据毕赤酵母基因偏爱密码子和hFGF21氨基酸序列,设计多条寡核苷酸引物。利用融合... 目的:以毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115和SMD1168为宿主菌表达人源成纤维细胞生长因子21(hFGF21),为开发治疗糖尿病药物提供一定的实验基础。方法:根据毕赤酵母基因偏爱密码子和hFGF21氨基酸序列,设计多条寡核苷酸引物。利用融合PCR方法获得人工合成的成纤维细胞生长因子21(FGF21)基因,定向克隆到质粒pPIC9K中,电转化Pichia pastorisGS115和SMD1168。MD、MM平板筛选表型Mut+,YPD/G418平板进一步筛选高拷贝转化子。甲醇诱导表达,硫酸铵沉淀、分子筛、离子交换方法纯化目的蛋白。结果:PCR扩增出约569bp的特异性片段,测序分析正确;诱导表达上清经SDS-PAGE和Western blotting分析表明:FGF21在宿主菌GS115中不表达,而在SMD1168表达上清中出现相对分子质量为20000的特异性条带,且与抗FGF21抗体产生特异性反应,阴性对照在该处无特异性带,证明hFGF21蛋白在SMD1168菌株中成功分泌表达。结论:成功克隆FGF21基因,并在Picha pastorisSMD1168中获得表达。 展开更多
关键词 人成纤维生长因子21 毕赤酵母 PPIC9K 基因克隆
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分子生物学技术在植物生物反应器领域的应用 预览 被引量:2
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作者 杨晶 李天航 +3 位作者 尹锐 刘秀 庞实峰 《河北农业科学》 2009年第1期 27-30,共4页
简述了分子生物学技术、植物生物反应器研究现状及利用植物生物反应器生产外源蛋白质的研究进展。重点阐述了应用植物表达系统生产疫苗、抗体和医用蛋白的情况。
关键词 分子生物学 植物生物反应器 药用蛋白
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市售汽油清净剂清净性能模拟评价分析 预览 被引量:1
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作者 郭瑞莲 鲍晓峰 《清洗世界》 CAS 2009年第2期 20-23,共4页
在汽油清净剂清净性模拟试验机上,采用国家标准GB19592--2004附录B中所规定的汽油机进气阀沉积物模拟试验方法,对常见的市售汽油清净剂进行了清净性模拟试验研究。实验结果表明:市售汽油清净剂质量良莠不齐,已做的100种清净剂中,... 在汽油清净剂清净性模拟试验机上,采用国家标准GB19592--2004附录B中所规定的汽油机进气阀沉积物模拟试验方法,对常见的市售汽油清净剂进行了清净性模拟试验研究。实验结果表明:市售汽油清净剂质量良莠不齐,已做的100种清净剂中,有效清净剂仅占26%左右。 展开更多
关键词 汽油清净剂 清净性 模拟评价 进气阀沉积物
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重组人成纤维细胞生长因子-21的表达及纯化工艺的优化 被引量:1
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作者 赵宏鑫 +5 位作者 杨萍 张耀方 万晓姗 孔祥鑫 王会岩 李校堃 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第11期1113-1116,共4页
目的优化重组人成纤维细胞生长因子-21(SUMO-rhFGF-21)融合表达工程菌的表达条件及目的蛋白纯化工艺。方法对工程菌的诱导温度、时间及诱导剂浓度进行优化,并进行罐发酵,对菌体裂解液进行离子交换层析、Ni离子亲和层析及分子筛层析等... 目的优化重组人成纤维细胞生长因子-21(SUMO-rhFGF-21)融合表达工程菌的表达条件及目的蛋白纯化工艺。方法对工程菌的诱导温度、时间及诱导剂浓度进行优化,并进行罐发酵,对菌体裂解液进行离子交换层析、Ni离子亲和层析及分子筛层析等。纯化产物经SDS-PAGE和HPLC鉴定纯度。结果在诱导温度为37℃,诱导时间为4h,IPTG浓度为0.5mmol/L时,目的蛋白的表达量最高,达20.5%;罐发酵收菌量可达66g/L,目的蛋白的表达量达20.2%;纯化后的rhFGF-21纯度达96%以上。结论优化了rhFGF-21的表达条件及纯化工艺,为rhFGF-21用于新药开发奠定了基础。 展开更多
关键词 重组人成纤维细胞生长因子-21 SUMO 融合表达 纯化
植物生物反应器与药物研发 预览 被引量:1
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作者 杨晶 曲勍 +1 位作者 李校堃 《科学》 北大核心 2009年第3期23-26,共4页
随着基因工程、细胞工程、酶工程的发展。生物技术不断影响着人类生活的方方面面,不仅体现出巨大的经济价值,也提供了不可替代的社会服务。其中。利用植物生物反应器表达生产具有临床应用价值的药用蛋白(包括疫苗、抗体)已成为生物... 随着基因工程、细胞工程、酶工程的发展。生物技术不断影响着人类生活的方方面面,不仅体现出巨大的经济价值,也提供了不可替代的社会服务。其中。利用植物生物反应器表达生产具有临床应用价值的药用蛋白(包括疫苗、抗体)已成为生物制药产业的热点领域,在抢占生物经济制高点、促进国民经济持续稳定发展进程中显示了越来越重要的作用。具有极大的市场前景和商业价值,日益引起人们的关注。 展开更多
关键词 转基因植物 植物生物反应器药 用蛋白质分子农业 高新生物制剂
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新疆红花组织培养与快速繁殖的研究 预览 被引量:11
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作者 杨晶 +1 位作者 李天航 李校堃 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第8期 3439-3440,共2页
[目的]筛选新疆红花组织培养的调控体系,以获得离体培养的再生植株。[方法]将无菌材料置于不同的培养基上培养构建愈伤组织无性系,进行继代培养,最终将生根的炼苗移栽至基质中使其生长。[结果]子叶是用于红花再生较理想的材料,愈伤... [目的]筛选新疆红花组织培养的调控体系,以获得离体培养的再生植株。[方法]将无菌材料置于不同的培养基上培养构建愈伤组织无性系,进行继代培养,最终将生根的炼苗移栽至基质中使其生长。[结果]子叶是用于红花再生较理想的材料,愈伤组织的分化能力在不同培养基上明显不同。筛选出的适合红花建立再生体系的最佳诱导培养基为MS+1.0mg/LNAA+2.0mg/LBA+3.O%蔗糖+0.7%琼脂,分化培养基为MS+0.2mg/LNAA+2.0mg/LBA+3.0%蔗糖+0.7%琼脂,生根培养基为1/2MS+2mg/LIBA+0.2mg/LBA。[结论]该研究为红花的资源保护、扩大繁殖和进一步推广应用及利用其作受体系统研究植物生物反应器奠定了基础。 展开更多
关键词 红花 组织培养 培养基
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