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常见乙型肝炎病毒表面抗原突变体的抗原性分析 预览 被引量:14
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作者 白玉 夏国良 +4 位作者 贾志远 丛郁 王晓黎 敏卓 詹美云 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期 31-34,共4页
目的研究乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原突变株和野毒株对表面抗体结合能力的差异,探讨免疫漏检基因变异株的机制及对策.方法应用基因重组技术构建HBsAg常见基因突变株和野毒株表达质粒,分别在COS-7细胞中瞬时表达,定量后用常规HBsAg免疫诊... 目的研究乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原突变株和野毒株对表面抗体结合能力的差异,探讨免疫漏检基因变异株的机制及对策.方法应用基因重组技术构建HBsAg常见基因突变株和野毒株表达质粒,分别在COS-7细胞中瞬时表达,定量后用常规HBsAg免疫诊断试剂盒检测,观察重组抗原与不同抗-HBs的结合能力.结果 T 126 S变异与单克隆抗体的结合力增高,G 145 R,K 141 E和2株三位点同时变异株则明显下降,对M 133 T变异与单克隆抗体的结合力影响不大.变异株与多克隆抗体的结合力也有变化,但仍能检测到大部分变异株抗原.结论 "a"抗原决定簇氨基酸的置换影响了HBsAg与抗-HBs的结合能力,并且氨基酸的置换位置和特性对抗原性的影响各有不同.因此,建议应用HBsAg多克隆抗体或开发研制"免疫逃逸突变株"的特异性抗体,以完善HBsAg免疫诊断试剂的抗体组成,减少免疫诊断对常见基因变异株的漏检. 展开更多
关键词 乙型肝炎 乙型肝炎表面抗原 基因 结构 病毒 免疫学试验
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乙型肝炎病毒基因分型及其应用的研究进展 预览 被引量:9
2
作者 敏卓 张明程 张勇 《国外医学:遗传学分册》 2004年第1期 31-33,57,共4页
乙型肝炎病毒(HBV)基因分型作为HBV感染的分子流行病学调查,鉴定传染源,确定传播关系及发病机制和临床流行病学研究的一种有力工具,日益受到广泛重视。随着HBV基因分型方法的日趋完善及新基因型的发现,人们对HBV基因型有了进一步认... 乙型肝炎病毒(HBV)基因分型作为HBV感染的分子流行病学调查,鉴定传染源,确定传播关系及发病机制和临床流行病学研究的一种有力工具,日益受到广泛重视。随着HBV基因分型方法的日趋完善及新基因型的发现,人们对HBV基因型有了进一步认识。本文就HBV基因型的分型和地理分布,HBV基因型与血清亚型的关系,HBV基因型和变异的关系及与临床治疗和转归的关系等相关研究进展作一综述。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 基因分型 临床应用 基因变异 抗病毒治疗
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首次从入境旅客耳内发现病媒生物——血红扇头蜱 被引量:3
3
作者 天宇 任彤 +6 位作者 敏卓 刘韦华 李宝明 汪涛 刘艳华 曾召鹏 王文正 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2009年第3期196-198,共3页
2009年2月15日,1名中国籍旅客从首都国际机场入境后出现头痛耳鸣等身体不适症状,自行前往航天中心医院就诊,该院医生从其耳内取出1只活体小虫。2月16日经北京出入境检验检疫局医学媒介检测实验室鉴定,该虫为蜱类。后经军事医学科学... 2009年2月15日,1名中国籍旅客从首都国际机场入境后出现头痛耳鸣等身体不适症状,自行前往航天中心医院就诊,该院医生从其耳内取出1只活体小虫。2月16日经北京出入境检验检疫局医学媒介检测实验室鉴定,该虫为蜱类。后经军事医学科学院微生物流行病研究所请许荣满教授鉴定,结果为血红扇头蜱若蜱。流行病学调查结果显示,该旅客是由马来西亚旅游回国,而血红扇头蜱是马来西亚常见蜱种。这是一起典型的有害生物入侵案,如未及时发现,极有可能造成病原体的输入和外来生物的扩散,口岸检验检疫部门应引起高度重视。 展开更多
关键词 病媒生物 入境旅客 耳内
模拟表位型EB病毒感染诊断抗原的制备
4
作者 苏秋东 敏卓 +7 位作者 邱丰 贾志远 范雪亭 孟庆玲 田瑞光 毕胜利 伊瑶 杨俊梅 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2018年第5期538-542,共5页
目的利用大肠埃希菌表达系统获取模拟表位型诊断抗原用于EB病毒(epstein—Barr virus,EBV)感染的早期诊断,并初步评价其抗原性。方法将EB病毒模拟表位GP125、F1、A2、A3C2多肽序列用特定连接臂串联,密码子优化后全基因合成;将目... 目的利用大肠埃希菌表达系统获取模拟表位型诊断抗原用于EB病毒(epstein—Barr virus,EBV)感染的早期诊断,并初步评价其抗原性。方法将EB病毒模拟表位GP125、F1、A2、A3C2多肽序列用特定连接臂串联,密码子优化后全基因合成;将目的片段插入带有Trx标签的表达质粒中,在大肠埃希菌中进行表达,并利用亲和层析和离子交换层析纯化目的蛋白;利用Western blot技术对目的蛋白抗原性进行鉴定,并建立EBV—IgM抗体检测捕获法ELISA技术,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力。结果所获取EBV模拟表位诊断抗原浓度为2.8mg/ml,纯度为99.01%;Western blot实验发现,以anti-Trx单克隆抗体或EBV—IgM阳性血清作为第一抗体,在NC膜约26×10^3处都可以发现特异条带(与预期一致);对50份EBV急性感染阳性血清和50份阴性血清进行检测得出,阳性血清样本OD值1.352(95%CI:1.233~1.489)与阴性血清样本OD值0.135(95%CI:0.113~0.159)分布区组明显(P〈0.05),其中灵敏度为98.0%,特异性为96.0%,一致性检验kappa值为0.940,一致性优异。结论原核表达与亲和及离子交换层析纯化可以获取抗原性良好的EBV感染诊断抗原,偶联HRP后可以作为检测抗原应用于EBV-IgM捕获法ELISA血清学检测中。 展开更多
关键词 模拟表位 EB病毒 原核表达 层析纯化
乙型肝炎表面抗原不同突变体对细胞免疫的影响 预览 被引量:1
5
作者 白玉 夏国良 +5 位作者 丛郁 贾志远 敏卓 赵洪兰 詹美云 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期 124-127,共4页
目的研究乙型肝炎表面抗原(HBsAg)不同突变体对细胞免疫的影响.方法将野生型和变异型HBsAg基因重组质粒NS2Swt、NS2S126、NS2S133、NS2S141、NS2S145分别转染CHO细胞,72h收获细胞上清.采用ELISA法检测各组细胞上清preS2蛋白的表达量.将... 目的研究乙型肝炎表面抗原(HBsAg)不同突变体对细胞免疫的影响.方法将野生型和变异型HBsAg基因重组质粒NS2Swt、NS2S126、NS2S133、NS2S141、NS2S145分别转染CHO细胞,72h收获细胞上清.采用ELISA法检测各组细胞上清preS2蛋白的表达量.将这些细胞上清刺激PHA活化的人淋巴细胞,MTS法检测不同变异株抗原对淋巴细胞增殖活性以及淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-10和IL-2的影响.结果变异和野毒株(wt)各组细胞上清preS2蛋白的表达量基本一致.变异和wt重组HBsAg刺激T细胞后,其上清MTS显色后的A490值均高于空白组和pCI-neo组,说明HBsAg中的蛋白可以促进T细胞增殖;T126S氨基酸变异HBsAg能够刺激IFN-γ分泌增加;M133T氨基酸变异刺激IL-10分泌增加.结论这4种乙型肝炎病毒(HBV)变异株感染人体后,机体对它们的细胞免疫反应可能不会有明显的增强或减弱,但也不能忽视T126S和M133T变异抗原改变了某些细胞因子的表达,可能对机体细胞免疫造成的潜在影响. 展开更多
关键词 突变体 乙型肝炎表面抗原(HBsAg) 乙型肝炎病毒(HBV) PRES2蛋白 ELISA法检测 淋巴细胞增殖活性 转染CHO细胞 重组HBsAg IFN-γ IL-10 氨基酸变异 细胞上清 基因重组质粒 细胞免疫反应 机体细胞免疫 分泌增加 人淋巴细胞
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抗肠道病毒EV71型外壳蛋白VP1单克隆抗体的制备和鉴定 被引量:2
6
作者 伊瑶 敏卓 +5 位作者 沈心亮 余陶 贾志远 毕胜利 李秀玲 陈斯勇 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期62-64,共3页
目的制备具有中和活性的抗肠道病毒EV71型外壳蛋白VP1的单克隆抗体。方法人工合成SP55和SP70(分别包含VP1的第163~177,208—222位氨基酸)两段VP1的多肽,分别免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术进行细胞融合,用间接酶联免疫吸附试验... 目的制备具有中和活性的抗肠道病毒EV71型外壳蛋白VP1的单克隆抗体。方法人工合成SP55和SP70(分别包含VP1的第163~177,208—222位氨基酸)两段VP1的多肽,分别免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术进行细胞融合,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选阳性杂交瘤细胞并测定效价。用分泌的单抗和EV71病毒在RD细胞上进行中和试验以检验其中和活性。结果得到2株能稳定分泌抗肠道病毒EV71型VP1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,2株单抗的中和效价分别为1:8和1:16。结论成功制备出2株具有中和活性的抗肠道病毒EV71型VP1蛋白单克隆抗体,为其下一步应用打下基础。 展开更多
关键词 肠道病毒属 抗体 单克隆 酶联免疫吸附测定
肝病毒表面抗原“a”决定簇病毒样颗粒的构建和鉴定 被引量:1
7
作者 陈斯勇 敏卓 +6 位作者 邱丰 费永亮 伊瑶 贾志远 余陶 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期30-32,共3页
目的 构建一个以乙肝核心抗原为骨架的病毒样颗粒,乙肝表面抗原"a"决定簇呈现在该病毒样颗粒的表面.方法 乙肝adr血清型的HBsAg蛋白"a"抗原决定簇(aa139~148,CSKPTDGNCT)插入到HBcAg的第78位天冬氨酸和第79位脯氨酸之间,密码子... 目的 构建一个以乙肝核心抗原为骨架的病毒样颗粒,乙肝表面抗原"a"决定簇呈现在该病毒样颗粒的表面.方法 乙肝adr血清型的HBsAg蛋白"a"抗原决定簇(aa139~148,CSKPTDGNCT)插入到HBcAg的第78位天冬氨酸和第79位脯氨酸之间,密码子优化之后基因合成,酶切后连接到表达载体上,在大肠埃希菌中进行表达,纯化后对蛋白进行电镜观察、ELISA检测抗原性、免疫兔后检测免疫原性.结果 构建得到预期的原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达,纯化后电镜观察为病毒样颗粒,ELISA检测证实具有良好的抗原性和免疫原性.结论 成功获得预期的带乙肝表面抗原"a"决定簇的病毒样颗粒,为其应用奠定基础. 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 表位 病毒粒子
程序死亡蛋白1基因的克隆及原核表达 被引量:1
8
作者 陈斯勇 关坤萍 +5 位作者 敏卓 伊瑶 贾志远 余陶 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期33-35,共3页
目的克隆人程序死亡蛋白(PD-1)基因并构建PD-1蛋白的原核表达质粒,在大肠埃希菌中进行表达。方法用RT-PCR的方法从慢性乙肝患者外周血淋巴细胞总RNA中逆转录得到PD-1基因的eDNA,构建PD-1基因的原核表达质粒,在大肠埃希菌BL21(DE3... 目的克隆人程序死亡蛋白(PD-1)基因并构建PD-1蛋白的原核表达质粒,在大肠埃希菌中进行表达。方法用RT-PCR的方法从慢性乙肝患者外周血淋巴细胞总RNA中逆转录得到PD-1基因的eDNA,构建PD-1基因的原核表达质粒,在大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达并纯化。用SDS-PAGE、DNA测序、氨基酸测序等方法对表达蛋白进行鉴定。结果克隆到PD-1基因编码区全长序列eDNA,经DNA测序与已报道的序列同源性达99.8%。构建得到PD-1的原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达,纯化获得纯度较高的PD-1蛋白。氨基酸测序证明表达蛋白的正确性。结论成功克隆人PD-1基因,在大肠埃希菌中获得表达,得到纯化的PD-1蛋白,为进一步研究PD-1蛋白的功能及应用打下基础。 展开更多
关键词 程序死亡蛋白1 逆转录聚合酶链反应 基因 克隆 分子
人白细胞介素12在哺乳动物细胞中的稳定表达及其生物活性的研究 预览 被引量:2
9
作者 焦宏远 詹美云 +5 位作者 敏卓 伊瑶 丛郁 田瑞光 张文英 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期 235-237,共3页
目的采用遗传基因工程方法获得具有生物活性的人白细胞介素12,探索其治疗肿瘤和慢性肝炎的可行性。方法采用已克隆的国人IL-12基因序列,利用内部核糖体切人位点(IRES)完成IL-12P35、P40双亚基共表达载体的构建,通过转染CHODHFR缺... 目的采用遗传基因工程方法获得具有生物活性的人白细胞介素12,探索其治疗肿瘤和慢性肝炎的可行性。方法采用已克隆的国人IL-12基因序列,利用内部核糖体切人位点(IRES)完成IL-12P35、P40双亚基共表达载体的构建,通过转染CHODHFR缺陷细胞,双抗夹心ELISA法筛选阳性克隆,MTX加压扩增,PCR检测其基因整合,T淋巴细胞增殖和诱生γ干扰素实验检测其生物活性。结果获得了稳定高效表达人IL-12的工程细胞系,表达产物为70×10^3左右的糖蛋白。结论本研究得到的基因重组人IL-12具有良好的生物活性,有强的诱导产生γ干扰素的能力和诱导活化T淋巴细胞增殖能力。 展开更多
关键词 白细胞介素12 细胞系 哺乳动物 重组蛋白质类
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表位依赖型急性期戊型肝炎诊断抗原的制备与抗原性分析 被引量:1
10
作者 苏秋东 敏卓 +4 位作者 伊瑶 邱丰 田瑞光 毕胜利 贾志远 《国际病毒学杂志》 2017年第1期9-12,共4页
目的原核表达制备表位依赖型戊型肝炎诊断抗原,并对其抗原性及其在急性戊肝诊断的性能进行评价。方法以包含密码子优化的GST、HEV优势表位的H15质粒为模板,PCR获取GST-HEV优势表位片段,将其插人表达质粒pET43.1a中,在大肠杆菌中进... 目的原核表达制备表位依赖型戊型肝炎诊断抗原,并对其抗原性及其在急性戊肝诊断的性能进行评价。方法以包含密码子优化的GST、HEV优势表位的H15质粒为模板,PCR获取GST-HEV优势表位片段,将其插人表达质粒pET43.1a中,在大肠杆菌中进行表达;利用亲和层析和阴离子交换层析纯化目的蛋白;利用Western Blotting技术对目的蛋白抗原性进行鉴定;建立HEV-IgM抗体检测ELISA方法,初步评价其对阴、阳血清样本的鉴别能力。结果获取高度均质的表位依赖型急性戊肝诊断抗原;WB实验表明目的蛋白不但可以被anti-GST单克隆抗体识别,还可以被戊肝急性期血清相应抗体所识别;分别对60份戊肝急性期血清、阴性血清进行检测,发现其与临床和实验室诊断结果一致性较高。结论原核表达与层析纯化可以获取抗原性优异的表位依赖型急性戊肝诊断抗原,偶联HRP后可应用于HEV-IgM ELISA血清学检测。 展开更多
关键词 多表位抗原 戊型肝炎病毒 原核表达 层析纯化 偶联反应
李斯特菌属荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:2
11
作者 杨秀娟 张文玲 +6 位作者 徐惠芳 田茵 赵嘉珩 李勐伟 吴燕 汪琳 敏卓 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2015年第1期6-12,共7页
目的采用荧光定量PCR技术,建立可以同步检测李斯特菌属与单增李斯特菌的快速检测方法。方法选取单增李斯特菌hlyM基因和李斯特菌属23Sr DNA基因为靶基因,分别设计引物和探针,在构建二者的阳性重组质粒基础上,对李斯特菌属和单增李斯特... 目的采用荧光定量PCR技术,建立可以同步检测李斯特菌属与单增李斯特菌的快速检测方法。方法选取单增李斯特菌hlyM基因和李斯特菌属23Sr DNA基因为靶基因,分别设计引物和探针,在构建二者的阳性重组质粒基础上,对李斯特菌属和单增李斯特菌进行荧光定量PCR的检测。结果建立的李斯特菌属和单增李斯特菌单重荧光定量PCR检测方法与双重荧光定量PCR的检测方法敏感度一致,分别为18.6拷贝/μl和23.2拷贝/μl。结论建立的双重荧光定量PCR方法可以同步检测李斯特菌属与单增李斯特菌。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 李斯特菌 双重荧光PCR
自发生物素化风疹病毒重组诊断抗原的制备 被引量:2
12
作者 苏秋东 敏卓 +7 位作者 邱丰 贾志远 卢学新 孟庆玲 田瑞光 高燕 毕胜利 伊瑶 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2016年第2期236-240,共5页
目的 获取原核表达过程中自发生物素化的风疹病毒(Rubella Virus,RV)重组抗原E1(RV-E1),并初步评价其抗原性.方法 将2×BirA酶底物(BSP)插入到RV-E1抗原优势表位区域aa 148-295的羧基端,硫氧还蛋白(Thioredoxin,TRX)插入到R... 目的 获取原核表达过程中自发生物素化的风疹病毒(Rubella Virus,RV)重组抗原E1(RV-E1),并初步评价其抗原性.方法 将2×BirA酶底物(BSP)插入到RV-E1抗原优势表位区域aa 148-295的羧基端,硫氧还蛋白(Thioredoxin,TRX)插入到RV-E1的氨基端,密码子优化后全基因合成;在大肠埃希进行表达,并利用亲和层析和离子交换层析纯化获取生物素化的RV-E1抗原;利用Western Blotting技术对目的蛋白进行鉴定,并建立风疹病毒IgM抗体检测方法,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力.结果 获取高度均质的生物素化的可溶性RV-E1抗原,WB实验表明目的蛋白不但可以被RV-E1抗原和TRX抗原单克隆抗体识别,而且可以被标记HRP的链霉亲和素所识别.分别对50份风疹病毒感染阳性血清、阴性血清和健康人血清进行检测,发现一致性优异.结论 RV-E1诊断抗原携带BSP,可以在大肠埃希菌表达过程中自发共价结合生物素分子,并可以作为新型诊断抗原应用于生物素-亲和素ELISA血清学检测中. 展开更多
关键词 BirA酶底物 风疹病毒E1抗原 原核表达 生物素化抗原
重组风疹病毒外膜蛋白E1的表达及其在血清学中的初步应用 被引量:1
13
作者 伊瑶 敏卓 +3 位作者 余陶 许文波 杨进业 陈斯勇 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期382-384,共3页
目的在大肠埃希菌中表达重组风疹病毒外膜蛋白E1,用其作为包被抗原,建立一种用于诊断风疹病毒感染的ELISA检测方法。方法通过基因重组的方式构建表达质粒并在大肠埃希菌中表达风疹病毒外膜蛋白E1,蛋白纯化后作为包被抗原,用ELISA的... 目的在大肠埃希菌中表达重组风疹病毒外膜蛋白E1,用其作为包被抗原,建立一种用于诊断风疹病毒感染的ELISA检测方法。方法通过基因重组的方式构建表达质粒并在大肠埃希菌中表达风疹病毒外膜蛋白E1,蛋白纯化后作为包被抗原,用ELISA的方法检测世界卫生组织(WHO)的风疹检测质控血清以及来自广西桂林的未知血清样本。结果采用WHO用于风疹检测的质控血清对所表达的重组抗原的抗原性进行鉴定,通过试验,特异性、敏感性均为100%。用表达的抗原对来自我国广西的200份未知血清样本进行风疹病毒外膜蛋白抗体的检测,阳性率为93%,与文献报道的我国其他地区风疹病毒抗体阳性率基本一致。结论通过实验我们表达了具有良好抗原性的风疹病毒外膜蛋白E1,为进一步研究风疹病毒感染的实验室诊断技术奠定了基础。 展开更多
关键词 风疹病毒 基因表达 酶联免疫吸附测定 流行病学
丙型肝炎病毒亚单位融合蛋白的表达及免疫原性测定
14
作者 邱丰 贾志远 +7 位作者 敏卓 陈斯勇 伊瑶 沈立萍 余陶 费永亮 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期113-115,共3页
目的获得高纯度的丙型肝炎亚单位融合蛋白并评价其免疫原性。方法利用原核表达系统,以pET—11d作为载体,在大肠埃希菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达获得融合蛋白,之后采用DEAE阴离子交换和镍离子柱亲和层析进行纯化。通过Western Blo... 目的获得高纯度的丙型肝炎亚单位融合蛋白并评价其免疫原性。方法利用原核表达系统,以pET—11d作为载体,在大肠埃希菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达获得融合蛋白,之后采用DEAE阴离子交换和镍离子柱亲和层析进行纯化。通过Western Blot验证融合蛋白的抗原活性。同时以该蛋白免疫实验动物后测定血清中的抗体滴度。结果成功获得很高纯度的丙型肝炎亚单位融合蛋白,EIA显示融合蛋白能够诱生出高滴度的抗体。结论原核表达系统表达的丙型肝炎病毒亚单位融合蛋白具有较强的免疫原性,为丙型肝炎病毒治疗性和预防性疫苗的研制提供了一条新的途径。 展开更多
关键词 肝炎病毒 病毒融合蛋白质类 疫苗 免疫测定
乙型肝炎病毒表面抗原基因点突变对HBsAg抗原性的影响 被引量:1
15
作者 敏卓 伊瑶 +3 位作者 陈斯勇 白玉 贾志远 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期48-50,共3页
目的研究乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)常见基因点突变对HBsAg抗原性的影响,了解我国目前常用的HBsAg检测试剂对HBVS基因突变株的检测灵敏性,减少漏检,有效控制乙肝病毒(HBV)感染的传播。方法构建HBsAg重组野毒株和重组变异株表... 目的研究乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)常见基因点突变对HBsAg抗原性的影响,了解我国目前常用的HBsAg检测试剂对HBVS基因突变株的检测灵敏性,减少漏检,有效控制乙肝病毒(HBV)感染的传播。方法构建HBsAg重组野毒株和重组变异株表达质粒,分别将重组野毒株HBsAg表达质粒pSS1adw2及pSS1adr和重组变异株HBsAg表达质粒pSS1adw2-145Arg、pSS1ad-126Ser和pSS1adr-126Asn转染COS-7细胞,进行瞬时转染。采用市售HBsAg ELISA检测试剂盒对细胞上清进行抗原性检测。结果野毒株HBsAg和两种126位变异株HBsAg具有较好的抗原性;145位点突变后导致HBsAg的抗原性下降。结论推测是由于145位点变异影响了“a”抗原决定簇的空间结构,从而降低了其与抗-HBs的结合能力。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 肝炎表面抗原 乙型 变异(遗传学) 抗原
b型流感嗜血杆菌D蛋白原核可溶性表达研究 被引量:1
16
作者 尹梦梦 苏秋东 +9 位作者 敏卓 寸怡娜 普元倩 贾志远 杨景然 汤洋 廖国阳 伊瑶 毕胜利 李卫东 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2013年第2期89-91,共3页
目的通过原核表达系统可溶性表达重组D蛋白,为多糖结合疫苗的制备提供蛋白载体。方法将HibCMCC株基因组DNA中去除信号肽的hpd基因片段插入pET43.1a表达质粒,转化人感受态大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白,经过... 目的通过原核表达系统可溶性表达重组D蛋白,为多糖结合疫苗的制备提供蛋白载体。方法将HibCMCC株基因组DNA中去除信号肽的hpd基因片段插入pET43.1a表达质粒,转化人感受态大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白,经过硫酸铵沉淀和DEAE阴离子交换柱层析纯化后,用WesternBlot的方法鉴定其免疫反应原性。结果表达的重组蛋白以可溶性形式存在,表达量约占菌株总蛋白的44%,经过初步纯化后的重组蛋白可以和Hib抗血清发生特异性反应。结论成功构建了D蛋白重组表达质粒,并在原核细胞中以可溶性形式表达出具有良好免疫反应原性的D蛋白。 展开更多
关键词 蛋白质 表达的序列标 嗜血菌 流感 b型
河北省某献血村村民丙型肝炎病毒流行状况调查及危险因素分析 被引量:3
17
作者 邱丰 黄昌红 +9 位作者 敏卓 伊瑶 沈立萍 王锋 贾志远 马景臣 赵玉良 张爽 张勇 毕胜利 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期203-204,共2页
丙型肝炎病毒(HCV)主要经血液传播。在我国《献血法》颁布之前的20世纪80—90年代初,农村地区非法卖血现象十分普遍,多地献血人群因此引起严重的血源性HCV感染。多项研究显示:献血人群HCV感染率为9.6%~72.8%。本研究通过横断... 丙型肝炎病毒(HCV)主要经血液传播。在我国《献血法》颁布之前的20世纪80—90年代初,农村地区非法卖血现象十分普遍,多地献血人群因此引起严重的血源性HCV感染。多项研究显示:献血人群HCV感染率为9.6%~72.8%。本研究通过横断面调查揭示河北省某献血村村民的HCV感染状况,并分析HCV感染相关危险因素。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 患病率 危险因素
一种改良的环介导恒温扩增技术在甲型肝炎病毒核酸检测上的应用
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作者 邱丰 敏卓 +4 位作者 丁军颖 伊瑶 贾志远 苏秋东 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2012年第6期483-485,共3页
目的建立一种更加快速简便的环介导恒温扩增技术(LAMP)检测甲型肝炎病毒(HAV)。方法本研究通过在传统LAMP的基础上加入加速引物建立了一种改进型的LAMP体系。结果精确性和可重复性实验证实改进后的HAVLAMP检测体系稳定可靠,重复性... 目的建立一种更加快速简便的环介导恒温扩增技术(LAMP)检测甲型肝炎病毒(HAV)。方法本研究通过在传统LAMP的基础上加入加速引物建立了一种改进型的LAMP体系。结果精确性和可重复性实验证实改进后的HAVLAMP检测体系稳定可靠,重复性强,并且较传统的LAMP灵敏度更高,检测极限可以达到5TCID50/ml。当该方法用于甲型肝炎患者急性期血清临床样本的检测时,实验结果与TaqMan实时荧光定量PCR的检测结果一致。结论改进型的LAMP技术有望应用于HAV临床样本检测,同时也适用于HAV流行地区的病原学监测和调查。 展开更多
关键词 肝炎病毒 甲型 核酸扩增技术 敏感性与特异性
两种嵌合乙型肝炎病毒preSl中和表位的乙肝核心病毒样颗粒的制备与抗原性分析
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作者 苏秋东 敏卓 +5 位作者 伊瑶 陈斯勇 贾志远 卢学新 邱丰 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2013年第5期336-339,共4页
目的构建嵌合preSl2147位氨基酸(aa)、以全长乙肝病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)为骨架的病毒样颗粒H2和嵌合preSlaa37-45、以截断HBcAg为骨架的病毒样颗粒H3,并对比其抗原性。方法将HBVadr血清型preSl中和表位aa2147和aa37-45分别插... 目的构建嵌合preSl2147位氨基酸(aa)、以全长乙肝病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)为骨架的病毒样颗粒H2和嵌合preSlaa37-45、以截断HBcAg为骨架的病毒样颗粒H3,并对比其抗原性。方法将HBVadr血清型preSl中和表位aa2147和aa37-45分别插入到全长HBc(aa1—183)和截断HBc(8a1—144)的第78位天冬氨酸和第79位脯氨酸之间,密码子优化之后全基因合成,目的片段经双酶切(NdeI和XhoI)回收后连接到同样处理的pET43.1a载体上,在大肠埃希菌E.coliBL21(DE3)中表达,精细纯化后通过电镜观察蛋白形态、ELISA以及WesternBlott检测其抗原性。结果成功构建表达质粒H2和H3,并在BL21(DE3)中高效表达和自发组装成病毒样颗粒。纯化后电镜观察H2和H3形态为二十面体立体对称样病毒样颗粒,H2为实心颗粒,直径为(31.61±1.27)nm,H3为空心颗粒,直径为(28.46±1.16)nm。统计分析可得H2直径要比H3直径大(P〈0.01)。ELISA和WesternBlott检测结果证实其插入表位preSl以及载体蛋白HBc的抗原性。结论成功获得两种嵌合HBVpreSl中和表位的病毒样颗粒,为其在疫苗研究中的应用探索奠定基础。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 表位 病毒核心蛋白质类 病毒样颗粒
诊断用丁肝抗原的基因优化及其蛋白表达、纯化和鉴定
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作者 丁军颖 敏卓 +4 位作者 伊瑶 苏秋东 卢学新 邱丰 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2012年第2期 87-89,共3页
目的获取有生物活性的丁肝抗原蛋白,探讨其作为诊断试剂的应用价值。方法经密码子优化,合成人工编码的丁肝抗原基因序列;以M48作为表达载体,构建带有硫氧还蛋白的重组表达质粒;在大肠埃希氏菌中经IPTG诱导表达;以亲和层析纯化并以... 目的获取有生物活性的丁肝抗原蛋白,探讨其作为诊断试剂的应用价值。方法经密码子优化,合成人工编码的丁肝抗原基因序列;以M48作为表达载体,构建带有硫氧还蛋白的重组表达质粒;在大肠埃希氏菌中经IPTG诱导表达;以亲和层析纯化并以ELISA鉴定该蛋白。结果酶切鉴定构建的质粒正确;SDS—PAGE结果显示表达和纯化的外源蛋白与预期相对分子质量大小一致;ELISA鉴定该蛋白有与丁肝抗体特异性结合的活性。结论成功获得有生物活性的可供诊断用的丁肝抗原蛋白,为丁肝诊断试剂的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 基因 硫氧还蛋白 色普法 肝炎 丁型
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