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猪圆环病毒病免疫防控关键技术的创建与应用
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作者 姜平 王先炜 +8 位作者 白娟 蒋伟弼 董彦鹏 张书霞 李玉峰 曹瑞兵 缪芬芳 何海蓉 《中国科技成果》 2019年第12期19-19,21共2页
猪圆环病毒病是因猪圆环病毒2型(PCV2)感染引起的一种全球性重要猪传染病。该病1997年在加拿大暴发,快速传播至欧美亚等国家或地区,发病率达40%~50%,死淘率在20%以上。由于存在病毒培养滴度低、疫苗抗原规模化制备技术瓶颈及诊断技术准... 猪圆环病毒病是因猪圆环病毒2型(PCV2)感染引起的一种全球性重要猪传染病。该病1997年在加拿大暴发,快速传播至欧美亚等国家或地区,发病率达40%~50%,死淘率在20%以上。由于存在病毒培养滴度低、疫苗抗原规模化制备技术瓶颈及诊断技术准确性低等世界性关键技术难题,加上该病毒感染和免疫机制不清,国内外长期缺乏有效的防控措施,成为制约我国养猪业持续健康发展的重要疾病。 展开更多
关键词 猪圆环病毒病 诊断技术 免疫机制 防控 猪圆环病毒2型 应用 持续健康发展 病毒感染
不同激活状态的巨噬细胞对流行性乙型脑炎病毒感染的影响 预览
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作者 徐晓伟 魏建超 +7 位作者 刘珂 邵东华 李蓓蓓 曹瑞兵 马志永 胡敬东 邱亚峰 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第2期1-5,共5页
为了研究不同激活状态的巨噬细胞对流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染的影响,并明确NO的产生在此过程中的作用,利用细胞因子将小鼠巨噬细胞系RAW264.7诱导成不同激活状态的巨噬细细胞,通过TCID50、免疫荧光技术... 为了研究不同激活状态的巨噬细胞对流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染的影响,并明确NO的产生在此过程中的作用,利用细胞因子将小鼠巨噬细胞系RAW264.7诱导成不同激活状态的巨噬细细胞,通过TCID50、免疫荧光技术和实时荧光定量PCR方法比较JEV强毒株NJ2008在不同激活状态的巨噬细胞上的感染情况,并利用实时荧光定量PCR方法分析了调控NO产生的关键分子(iNOS和Agr1)的变化。结果显示,相对于PBS处理组,M1型巨噬细胞显著地抑制JEV的感染并伴随明显增加的iNOS/Arg1比值;而M2型巨噬细胞虽伴随有显著降低的iNOS/Arg1比值,但JEV在M2型巨噬细胞上的感染与PBS组差异无显著统计学意义。结果表明NO的上调表达在M1型巨噬细胞抑制JEV感染中起着主导作用。本研究为进一步揭示巨噬细胞在JEV感染中作用奠定基础。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎病毒 巨噬细胞 M1型巨噬细胞 M2型巨噬细胞
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法氏囊新分离活性肽种类及生物学功能研究进展 预览 被引量:1
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作者 张聪 王臣 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第12期1888-1890,1895共4页
法氏囊( Bursa of fabricius ,BF)是禽类特有的体液免疫的中枢淋巴器,是B淋巴细胞增殖分化的场所. 其中,三肽囊素( BS) Lys-His-Gly-NH2 是法氏囊组织中提取的第一个活性肽,是法氏囊的重要活性组成成分,能提高机体免疫系统功能,而... 法氏囊( Bursa of fabricius ,BF)是禽类特有的体液免疫的中枢淋巴器,是B淋巴细胞增殖分化的场所. 其中,三肽囊素( BS) Lys-His-Gly-NH2 是法氏囊组织中提取的第一个活性肽,是法氏囊的重要活性组成成分,能提高机体免疫系统功能,而且对哺乳动物也具有重要的免疫学活性及生理作用[1-4]. 以往的研究主要集中在囊素的研究,近年来,随着质谱技术在蛋白质分离鉴定方面的广泛应用,法氏囊组织中陆续分离鉴定出多条生物活性肽,在免疫学活性功能及作用机制方面均有重大突破. 本文旨在对新分离法氏囊活性肽的种类及免疫学功能做一个综述,并对应用前景进行展望. 展开更多
关键词 生物活性肽 分离鉴定 生物学功能 种类 机体免疫系统功能 免疫学活性 细胞增殖分化 免疫学功能
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流行性乙型脑炎病毒E蛋白多表位肽在毕赤酵母中分泌表达及其免疫原性研究 预览 被引量:1
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作者 钟登科 黄艺珠 +4 位作者 魏建超 康乐 曾瑞兵 周斌 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期485-489,507共6页
为构建流行性乙型脑炎病毒(JEV) E蛋白多表位疫苗,本研究将人工合成的优化后的E蛋白多表位肽(MP)序列克隆入酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达质粒pPICZ-MP,经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母X-33,阳性重组子... 为构建流行性乙型脑炎病毒(JEV) E蛋白多表位疫苗,本研究将人工合成的优化后的E蛋白多表位肽(MP)序列克隆入酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达质粒pPICZ-MP,经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母X-33,阳性重组子经甲醇诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白(rMP)。通过测定rMP免疫小鼠的抗体水平、抗体亚型、中和抗体和CTL,以评价该多表位疫苗在小鼠模型上的免疫原性。结果表明:成功构建了表达JEV E蛋白多表位抗原的重组酵母菌株X33 (pPICZ-MP),能分泌表达多表位肽rMP。纯化后的rMP免疫小鼠产生了较强的体液免疫和细胞免疫反应,其中和抗体水平、CTL活性均与活病毒疫苗组差异不显著(p〉0.05),且能保护小鼠免受致死量JEV的攻击。构建的JEV E蛋白多表位疫苗具有良好的免疫原性,能够刺激小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫应答反应,为流行性乙型脑炎多表位疫苗研制提供新的思路。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎病毒 多表位疫苗 毕赤酵母 免疫原性
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流行性乙型脑炎病毒E蛋白多表位肽在毕赤酵母中分泌表达及其免疫原性研究 预览 被引量:2
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作者 钟登科 黄艺珠 +4 位作者 魏建超 康乐 曹瑞兵 周斌 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期296-300,共5页
为构建流行性乙型脑炎病毒(JEV) E蛋白多表位疫苗,本研究将人工合成的优化后E蛋白多表位肽(MP)序列克隆于酵母表达载体pPICZα-A中,构建分泌型重组酵母表达质粒pPICZ-MP后电转化导于毕赤酵母X-33中,重组酵母菌组子经甲醇诱导表... 为构建流行性乙型脑炎病毒(JEV) E蛋白多表位疫苗,本研究将人工合成的优化后E蛋白多表位肽(MP)序列克隆于酵母表达载体pPICZα-A中,构建分泌型重组酵母表达质粒pPICZ-MP后电转化导于毕赤酵母X-33中,重组酵母菌组子经甲醇诱导表达重组蛋白(rMP)。将其免疫小鼠后,通过测定rMP免疫小鼠的抗体水平、抗体亚型、中和抗体和CTL,以评价该多表位疫苗在小鼠模型的免疫原性。结果显示正确构建了表达JEV E蛋白多表位抗原的重组酵母菌株X33 (pPICZ -MP),并分泌表达多表位肽rMP ;纯化后的rMP免疫小鼠产生了较强的体液免疫和细胞免疫反应,其中和抗体水平、CTL活性均与活病毒疫苗组无显著差异(p〉0.05),而且能保护小鼠免受致死量JEV的攻击。上述结果表明本研究以酵母菌表达的JEV E蛋白多表位疫苗具有良好的的免疫原性,能够刺激小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫应答反应,为流行性乙型脑炎多表位疫苗研制提供了新的思路。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎病毒 多表位疫苗 毕赤酵母 免疫原性
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温州地区鸡肠道大肠埃希菌耐药性分析及血清型鉴定 预览 被引量:1
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作者 侯凤香 李培德 +2 位作者 金俊杰 金大春 《动物医学进展》 北大核心 2017年第10期114-117,共4页
为研究温州地区鸡肠道大肠埃希菌的耐药性和血清型,从27家养鸡场采集泄殖腔拭子355份,分离并鉴定出346株鸡大肠埃希菌,分离率为97.46%。在346株分离株中,对3种以上抗菌药物耐药的菌株占84.39%(292/346),呈现多重耐药性。O... 为研究温州地区鸡肠道大肠埃希菌的耐药性和血清型,从27家养鸡场采集泄殖腔拭子355份,分离并鉴定出346株鸡大肠埃希菌,分离率为97.46%。在346株分离株中,对3种以上抗菌药物耐药的菌株占84.39%(292/346),呈现多重耐药性。O血清型鉴定结果显示,分离菌株分别属于13个血清型,其中O138、O146、O136、O45占分离菌株的39.02%(135/346),为优势血清型。 展开更多
关键词 大肠埃希菌 耐药性 血清型
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法氏囊活性肽前体蛋白CBL N端片段的克隆及抗原表位分析 被引量:2
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作者 宗嫚嫚 梁静泊 +5 位作者 谢金峰 周川杰 周广防 冯秀丽 杨梅 《畜牧与兽医》 北大核心 2017年第3期99-103,共5页
Casitas B-lineage lymphoma(CBL)是一种广泛存在于法氏囊组织的细胞内蛋白。为探究禽源CBL基因结构及特征,本研究以Gen Bank公布的CBL基因序列为参考,设计合成引物,扩增CBL基因N端片段420 bp。同源性分析发现,CBL-N基因未发生明显变... Casitas B-lineage lymphoma(CBL)是一种广泛存在于法氏囊组织的细胞内蛋白。为探究禽源CBL基因结构及特征,本研究以Gen Bank公布的CBL基因序列为参考,设计合成引物,扩增CBL基因N端片段420 bp。同源性分析发现,CBL-N基因未发生明显变异,且CBL蛋白具有高度的保守性。Protean软件分析发现,CBL-N蛋白的二级结构比较复杂,含有较多的α和β结构,而且含有一定比例的无规则卷曲及β转角结构,多个区段有较高比例的抗原指数、表面可及性和亲水性,并推测CBL-N中119-136区域氨基酸序列可能是B细胞优势表位。本研究为探讨CBL蛋白功能奠定了基础。 展开更多
关键词 CBL 基因克隆 同源性分析 二级结构 B细胞抗原表位
T7cDNA噬菌体展示文库筛选法氏囊活性肽BPP-Ⅱ结合蛋白及鉴定
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作者 周川杰 宗嫚嫚 +4 位作者 梁静泊 周广防 冯秀丽 徐生亮 《畜牧与兽医》 北大核心 2017年第1期71-74,共4页
法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ是近期发现的具有免疫调节功能的活性多肽。为了研究法氏囊活性肽对B细胞的作用机制,采用鸡B淋巴细胞cDNA T7噬菌体文库筛选法氏囊五肽BPP-Ⅱ与鸡B相互作用的受体蛋白。三轮筛选后,富集的噬菌体滴度达1010pfu以上... 法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ是近期发现的具有免疫调节功能的活性多肽。为了研究法氏囊活性肽对B细胞的作用机制,采用鸡B淋巴细胞cDNA T7噬菌体文库筛选法氏囊五肽BPP-Ⅱ与鸡B相互作用的受体蛋白。三轮筛选后,富集的噬菌体滴度达1010pfu以上。富集噬菌体克隆的序列分析结果表明,与BPP-Ⅱ相互作用的鸡B淋巴细胞cDNA文库中序列与核受体辅阻遏物2同源。结果说明,法氏囊活性肽BPP-Ⅱ可能参与多种细胞过程,从而产生多种生物学效应。 展开更多
关键词 法氏囊活性肽 BPP-Ⅱ T7噬菌体文库展示 亲和结合
法氏囊活性肽BP5免疫生物学功能研究进展 预览
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作者 张聪 王臣 +1 位作者 李德元 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第12期1039-1042,共4页
法氏囊(Bursa of fabricius,BF)是禽类特有的中枢体液免疫器官,相当于哺乳动物的骨髓。B淋巴细胞在此发育分化成熟并且参与机体体液免疫应答。三肽囊素(Bursin,BS)是从BF组织中分离的第一个活性肽。作为BF的重要活性组成成分,不仅... 法氏囊(Bursa of fabricius,BF)是禽类特有的中枢体液免疫器官,相当于哺乳动物的骨髓。B淋巴细胞在此发育分化成熟并且参与机体体液免疫应答。三肽囊素(Bursin,BS)是从BF组织中分离的第一个活性肽。作为BF的重要活性组成成分,不仅可以提高禽类免疫功能, 展开更多
关键词 BP5 生物学功能 法氏囊活性肽 研究进展
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法氏囊多肽BSP-Ⅰ和BPP-Ⅰ的免疫调节活性及其B细胞结合蛋白的鉴定
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作者 谢盛达 沈艳玲 +6 位作者 余远楠 郑阳 宗嫚嫚 周传杰 冯秀丽 杨梅 《畜牧与兽医》 北大核心 2017年第5期83-88,共6页
为了研究法氏囊多肽的免疫调节作用,本试验用BSP-Ⅰ和BPP-Ⅰ分别与禽流感灭活疫苗或抗原混匀后免疫鸡。结果显示,BSP-Ⅰ和BPP-Ⅰ均明显提高免疫鸡体内禽流感抗体水平,且两者均促进Th1和Th2型细胞因子产生。采用鸡B淋巴细胞cDNA T7噬菌... 为了研究法氏囊多肽的免疫调节作用,本试验用BSP-Ⅰ和BPP-Ⅰ分别与禽流感灭活疫苗或抗原混匀后免疫鸡。结果显示,BSP-Ⅰ和BPP-Ⅰ均明显提高免疫鸡体内禽流感抗体水平,且两者均促进Th1和Th2型细胞因子产生。采用鸡B淋巴细胞cDNA T7噬菌体文库筛选法氏囊活性肽相互作用的受体蛋白,PCR扩增富集噬菌体克隆的插入片段。序列分析结果表明,BSP-Ⅰ相互作用的蛋白受体有3种,分别为VSTM2、N-钙黏蛋白和v-myc。BPP-Ⅰ相互作用的蛋白分子主要是Ryanodine受体、MGC83917蛋白和BTB/POZ1。这些结果表明,法氏囊活性肽参与机体中多种生物学过程,为深入研究法氏囊活性肽的功能提供了理论基础。 展开更多
关键词 法氏囊活性肽 鸡免疫模型 免疫反应 鸡B细胞c DNA T7噬菌体展示 作用受体
重组免疫融合肽Tα1-BP5的表达及其免疫佐剂特性研究 预览 被引量:2
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作者 王臣 张巫凡 +3 位作者 杨静 郭香玲 李德元 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期326-330,共5页
胸腺素α1(Tα1)和法氏囊活性五肽(BP5)均具有重要的免疫学功能,但二者在蛋白水平上的联合应用尚未见报道。为探究重组表达融合肽Tα1-BP5(r Tα1-BP5)是否具有免疫佐剂特性,本实验设计合成融合肽Tα1-BP5基因,将其克隆至p ET-32... 胸腺素α1(Tα1)和法氏囊活性五肽(BP5)均具有重要的免疫学功能,但二者在蛋白水平上的联合应用尚未见报道。为探究重组表达融合肽Tα1-BP5(r Tα1-BP5)是否具有免疫佐剂特性,本实验设计合成融合肽Tα1-BP5基因,将其克隆至p ET-32a中进行原核表达,并采用MTT法检测其体外活性。同时以rTα1-BP5联合H9N2型禽流感病毒(AIV)灭活疫苗免疫小鼠,检测免疫后小鼠的HI抗体、IgG抗体亚型和细胞因子(IL-4和IFN-γ)的分泌水平,并通过攻毒试验评价其对小鼠的免疫保护作用。结果显示,rTα1-BP5在大肠杆菌中获得可溶性表达;rTα1-BP5能够增强机体免疫后HI抗体、平衡IgG1和IgG2a抗体、提高Th2型(IFN-γ)和Th1(IL-4)型细胞因子的分泌水平,表明rTα1-BP5能够同时增强机体体液和细胞免疫应答。动物免疫保护试验结果显示rTα1-BP5有助于鼠肺脏中H9N2型AIV的清除。以上结果提示,rTα1-BP5具有良好的免疫佐剂的潜能。本研究为新型疫苗佐剂的研究开发奠定了基础。 展开更多
关键词 胸腺素Tα1 法氏囊活性五肽BP5 融合表达 免疫佐剂
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天蚕素类抗菌肽CLP的设计及其活性测定 预览 被引量:2
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作者 王臣 张巫凡 +3 位作者 牛明福 郭香玲 李德元 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期600-604,共5页
为设计研发新型天蚕素类抗菌肽(Cecropin-like antibacterial peptide,CLP),本研究参照抗菌肽Cecropin P1的作用机理和氨基酸组成,通过人工方法设计合成CLP,并分别测定其体外和体内抗菌活性。体外抑菌试验结果显示,新型CLP对金黄色葡... 为设计研发新型天蚕素类抗菌肽(Cecropin-like antibacterial peptide,CLP),本研究参照抗菌肽Cecropin P1的作用机理和氨基酸组成,通过人工方法设计合成CLP,并分别测定其体外和体内抗菌活性。体外抑菌试验结果显示,新型CLP对金黄色葡萄球菌(ATCC29213)、禽多杀性巴氏杆菌(CVCC474)、鸡白痢沙门氏菌(ATCC10398)、鸡致病性大肠杆菌O1均具有良好的抑菌活性,对这4种细菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为6.25μg/mL、1.56μg/mL、3.12μg/mL和6.25μg/mL。酸稳定性试验显示,新型CLP在pH值为6-8时活性最高,热稳定性试验显示新型CLP于100℃加热2 h后仍具有抑菌活性。在对鸡白痢沙门氏菌感染雏鸡的体内疗效试验中,新型CLP显示了良好的治疗效果。本研究为临床上设计有效的天蚕素类抗菌肽提供了参考数据。 展开更多
关键词 抗菌肽 CECROPIN P1 抑菌活性 热酸稳定性 体内疗效
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日本脑炎病毒囊膜蛋白单克隆抗体的制备及特性分析 被引量:2
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作者 倪慧 王钰 +3 位作者 毛岩 杨梅 曹瑞兵 《畜牧与兽医》 北大核心 2016年第7期1-9,共9页
将日本脑炎病毒(JEV)囊膜蛋白Cap-ED3重组蛋白免疫BALB/c雌鼠,应用细胞融合技术制备单克隆抗体,经ELISA筛选获得4株稳定分泌识别JEV ED3蛋白单抗的杂交瘤细胞,命名为1B10、3F5、4H1和5F9。这4株单抗在Western blot和间接免疫荧光试验... 将日本脑炎病毒(JEV)囊膜蛋白Cap-ED3重组蛋白免疫BALB/c雌鼠,应用细胞融合技术制备单克隆抗体,经ELISA筛选获得4株稳定分泌识别JEV ED3蛋白单抗的杂交瘤细胞,命名为1B10、3F5、4H1和5F9。这4株单抗在Western blot和间接免疫荧光试验中均能特异识别JEV NJ2008株。制备4株单抗的小鼠腹水,5F9效价最高,为1∶409 600。空斑减少中和试验结果表明:4株单抗均没有中和活性。相加ELISA试验表明:4株单抗中3F5和4H1识别相同抗原表位,1B10、5F9分别识别其他的抗原表位,且差异较大。应用鸭坦布苏病毒(DTMUV)特异性抗原进行ELISA检测的结果表明:5F9识别的表位与DTMUV有交叉,其他3株识别的抗原表位与DTMUV无交叉。本研究获得了3株JEV囊膜蛋白特异性的单抗和1株识别JEV和DTMUV交叉抗原表位的单抗,为JEV抗原和抗体检测试剂盒的研制提供了良好的物质基础。 展开更多
关键词 日本脑炎病毒 囊膜蛋白 单克隆抗体 鸭坦布苏病毒 交叉反应
重组人α干扰素抑制日本脑炎病毒的研究
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作者 王世旗 周静 +4 位作者 柳春春 高志参 师保浚 周斌 《畜牧与兽医》 北大核心 2016年第9期7-10,共4页
为了研究重组人α干扰素(hu IFNα)在仓鼠肾细胞(BHK-21)上对日本脑炎病毒(JEV)增殖的影响,将商品化的重组人干扰素作用感染了JEV的BHK-21细胞后,通过Western blot、噬斑减少试验和间接免疫荧光试验鉴定了hu IFNα对JEV作用的量... 为了研究重组人α干扰素(hu IFNα)在仓鼠肾细胞(BHK-21)上对日本脑炎病毒(JEV)增殖的影响,将商品化的重组人干扰素作用感染了JEV的BHK-21细胞后,通过Western blot、噬斑减少试验和间接免疫荧光试验鉴定了hu IFNα对JEV作用的量效关系和时效关系。结果表明,仅在10 ng/m L hu IFNα处理细胞后,JEV的增殖能力下降了92倍,Western blot结果也显示JEV非结构蛋白NS5含量显著下降,说明低浓度的hu IFNα能明显抑制JEV的增殖;200 ng/m L的hu IFNα处理细胞,在接毒24 h和48 h后,与对照组相比JEV含量分别下降了821倍和15倍,这表明hu IFNα在BHK-21上抑制JEV的增殖具有时间依赖性。本研究为重组干扰素在JEV感染的治疗和预防方面提供理论基础。 展开更多
关键词 日本脑炎病毒(JEV) 人干扰素α(huIFN-α) 抗病毒
Metalnikowin类抗菌肽MLP的设计及其抗菌活性的测定 被引量:2
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作者 王臣 廖成水 +2 位作者 牛明福 郭香玲 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期841-846,共6页
为设计新型Metalnikowin类抗菌肽并评价其抗菌活性,依据抗菌肽Metalnikowin的作用机理和氨基酸组成,通过人工方法设计合成Metalnikowin类抗菌肽(Metalnikowin-like antibacterial peptide,MLP)并测定其体外和体内抗菌活性。体外抑菌... 为设计新型Metalnikowin类抗菌肽并评价其抗菌活性,依据抗菌肽Metalnikowin的作用机理和氨基酸组成,通过人工方法设计合成Metalnikowin类抗菌肽(Metalnikowin-like antibacterial peptide,MLP)并测定其体外和体内抗菌活性。体外抑菌试验结果显示,抗菌肽MLP对鸡致病性大肠杆菌O 1、猪致病性大肠杆菌K 99(A TCC39302)、鸡白痢沙门菌(ATCC10398)、猪霍乱沙门菌(ATCC13312)、禽多杀性巴氏杆菌(CVCC474)和金黄色葡萄球菌(ATCC29213)均具有很好的抑菌活性,其对这6种细菌的最小抑菌浓度分别为1.56、6.25、3.12、6.25、1.56和12.5 g/m L。酸稳定性试验结果显示,抗菌肽MLP在p H值为5~6时活性最高。热稳定性试验结果显示,抗菌肽MLP 100℃加热40 min后仍具有抑菌活性。在对雏鸡感染鸡大肠杆菌和小鼠感染金黄色葡萄球菌的体内疗效试验中,抗菌肽MLP显示了较好的治疗效果。本研究为临床上设计有效的Metalnikowin类抗菌肽提供了参考数据。 展开更多
关键词 抗菌肽 Metalnikowin 抗菌活性 热酸稳定性 体内疗效
Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆表达及结合肽的筛选 被引量:1
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作者 王臣 杨静 +3 位作者 张巫凡 郭香玲 吴庭才 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期473-478,共6页
为鉴定与I型鸭肝炎病毒(DHV-1)特异性结合的多肽,通过基因工程方法获得DHV-1 VP1蛋白,并以DHV-1 VP1蛋白作为靶标,利用噬菌体随机12肽库进行3轮亲和筛选。ELISA鉴定结果显示,10个噬菌体克隆与VP1蛋白有较强的体外结合特性;竞争抑制试... 为鉴定与I型鸭肝炎病毒(DHV-1)特异性结合的多肽,通过基因工程方法获得DHV-1 VP1蛋白,并以DHV-1 VP1蛋白作为靶标,利用噬菌体随机12肽库进行3轮亲和筛选。ELISA鉴定结果显示,10个噬菌体克隆与VP1蛋白有较强的体外结合特性;竞争抑制试验结果表明,VP1蛋白对噬菌体克隆P4与P6结合具有阻断作用。对P4和P6克隆的序列测定结果显示,插入的12肽序列分别为P4-12:LLSPGTHHSPWP;P6-12:LLADTTHHRPWT,其保守序列为THHXPW。体外试验结果显示,多肽P4-12和P6-12本身对鸭胚成纤维细胞的增殖无明显影响,多肽P4-12和P6-12在0.02、0.2、2、20 g/m L浓度时均能显著降低DHV-1在鸭胚成纤维细胞中的病毒效价和病毒拷贝数。以上结果表明,多肽P4-12和P6-12均能抑制DHV-1在鸭胚成纤维细胞中的增殖,这一研究结果为进一步探明DHV-1与宿主细胞的相互作用及抗病毒制剂的开发提供了试验线索。 展开更多
关键词 I型鸭肝炎病毒 VP1蛋白 鸭胚成纤维细胞 噬菌体展示 结合肽
胸腺五肽和法氏囊活性五肽的融合表达及其对禽流感灭活疫苗的佐剂效应 被引量:1
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作者 王臣 郭香玲 +3 位作者 李小康 吴庭才 李德元 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期648-658,共11页
胸腺五肽(Thymopentin,TP5)和法氏囊活性五肽(Bursopentin,BP5)均具有重要的免疫学功能,但二者在基因水平上的联合应用尚未见报道。为研究TP5和BP5形成的重组融合肽TP5-BP5(TBP5)是否具有免疫佐剂活性,根据大肠杆菌偏嗜密码子设... 胸腺五肽(Thymopentin,TP5)和法氏囊活性五肽(Bursopentin,BP5)均具有重要的免疫学功能,但二者在基因水平上的联合应用尚未见报道。为研究TP5和BP5形成的重组融合肽TP5-BP5(TBP5)是否具有免疫佐剂活性,根据大肠杆菌偏嗜密码子设计并合成重组融合肽TBP5编码序列,将其克隆至p ET-32a表达载体中,重组表达载体在大肠杆菌BL21中诱导表达,并采用MTT法检测其表达产物的体外活性。同时以TBP5联合H9N2型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)灭活疫苗免疫小鼠,检测免疫后小鼠的HI抗体、HA抗体效价和细胞因子(IL-4和IFN-γ)的分泌水平,并通过动物免疫保护试验来评价其对小鼠的免疫保护作用。结果显示,TBP5在大肠杆菌中获得表达;TBP5能显著促进小鼠胸腺T淋巴细胞和脾脏B淋巴细胞的增殖,并能增强机体免疫后HI抗体和HA抗体效价、提高细胞因子IL-4和IFN-γ的分泌水平,表明TBP5既能增强机体体液免疫应答,又能增强细胞免疫应答。动物免疫保护试验结果显示TBP5有助于小鼠肺脏中H9N2型AIV病毒的清除。结果表明,重组融合肽TBP5具有良好的免疫佐剂的潜能,为进一步研究开发新型疫苗佐剂奠定了基础。 展开更多
关键词 胸腺五肽 法氏囊活性五肽 融合表达 免疫佐剂
热休克蛋白70促进猪瘟病毒囊膜糖蛋白E0的小鼠免疫效果 被引量:2
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作者 徐倩倩 张小敏 +4 位作者 景娇 师保浚 王世旗 周斌 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期363-369,共7页
为了初步探索热休克蛋白70(Hsp70)作为分子佐剂增强猪瘟病毒亚单位疫苗的免疫效果,本研究根据猪瘟病毒兔化弱毒株囊膜糖蛋白E0的基因序列,设计一对特异性引物,RT-PCR扩增得到完整的E0基因,将其分别插入到原核表达质粒pColdI和含有副... 为了初步探索热休克蛋白70(Hsp70)作为分子佐剂增强猪瘟病毒亚单位疫苗的免疫效果,本研究根据猪瘟病毒兔化弱毒株囊膜糖蛋白E0的基因序列,设计一对特异性引物,RT-PCR扩增得到完整的E0基因,将其分别插入到原核表达质粒pColdI和含有副猪嗜血杆菌Hsp70的pColdI-Hsp70中,构建了pColdI-E0和pColdI-E0-Hsp70重组质粒,经IPTG诱导表达后,获得了E0、Hsp70和E0-Hsp70融合蛋白。将以上三种蛋白纯化后分组免疫Balb/c小鼠,通过ELISA和流式细胞术测定了小鼠针对E0蛋白的体液免疫和细胞免疫效果。结果显示:E0-Hsp70融合蛋白和E0+Hsp70混合物免疫后均能显著提高抗E0的抗体效价、CD4+和CD8+T细胞水平,并促进IFN-γ的释放。研究结果表明Hsp70能显著增强猪瘟病毒囊膜糖蛋白E0在小鼠上的免疫效果,为在猪体上的进一步应用奠定了基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E0 HSP70 佐剂 免疫效果
重组囊素肽的构建表达及其对禽流感灭活苗免疫效果的影响 预览
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作者 姬向波 徐秋良 +1 位作者 冯秀丽 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期707-711,共5页
为重组表达不同拷贝串联囊素(BS)活性肽及评价其对禽流感灭活苗的免疫效果,本研究以囊素五肽和三肽的氨基酸序列为基本单元,设计了3种不同串联方式的囊素肽,按照大肠杆菌偏爱密码子设计其引物,利用SOE-PCR技术扩增了3种囊素肽编... 为重组表达不同拷贝串联囊素(BS)活性肽及评价其对禽流感灭活苗的免疫效果,本研究以囊素五肽和三肽的氨基酸序列为基本单元,设计了3种不同串联方式的囊素肽,按照大肠杆菌偏爱密码子设计其引物,利用SOE-PCR技术扩增了3种囊素肽编码基因,分别克隆至pET-32a中,构建重组质粒pET-BS1、pET-BS2和pET-BS3,并转化于大肠杆菌OrigamiTMB中诱导表达。SDS—PAGE和westernblot结果表明,3种重组囊素肽Bs1、BS2和BS3均以可溶形式表达,与天然囊素肽具有相似的免疫原性。将3种重组囊素肽分别与禽流感灭活病毒联合免疫雏鸡,免疫效果检测表明,与单独免疫灭活病毒组相比,3种重组囊素肽均能够明显促进鸡血清中抗体产生,提高外周血淋巴细胞增殖能力;但仅BS1能够同时提高血清中IL-4和IFN-γ的含量。本研究通过原核表达制备了3种具有良好免疫活性的重组囊素肽,为其作为免疫增强剂提供了实验依据。 展开更多
关键词 囊素肽 重组蛋白 原核表达 禽流感 免疫效果
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重组融合肽Tβ4-BP5基因的克隆、表达及其免疫佐剂特性 被引量:1
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作者 王臣 郭香玲 +2 位作者 李小康 李德元 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1476-1482,共7页
胸腺肽Tβ4和法氏囊活性五肽BP5均能够调节机体的免疫反应,为探讨重组融合肽Tβ4-BP5是否也与免疫功能相关,本试验按照大肠杆菌偏嗜密码子设计并合成重组融合肽Tβ4-BP5基因,将其克隆至pET-32α表达载体中,重组表达载体在大肠杆菌BL21... 胸腺肽Tβ4和法氏囊活性五肽BP5均能够调节机体的免疫反应,为探讨重组融合肽Tβ4-BP5是否也与免疫功能相关,本试验按照大肠杆菌偏嗜密码子设计并合成重组融合肽Tβ4-BP5基因,将其克隆至pET-32α表达载体中,重组表达载体在大肠杆菌BL21中诱导表达。为进一步评价重组融合肽Tβ4-BP5的免疫佐剂特性,以Tβ4-BP5联合灭活H9N2型AIV疫苗免疫鸡,检测免疫后鸡的HI抗体效价、抗原特异性IgG抗体、AIV中和抗体效价及Th1型(IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4)的分泌水平,并通过动物免疫保护试验来评价其对鸡的免疫保护作用。结果显示,重组融合肽Tβ4-BP5在大肠杆菌中获得表达;Tβ4-BP5能够增强机体免疫后HI抗体、特异性IgG抗体水平、促进AIV中和抗体的产生、提高Th1型(IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4)的分泌水平,表明Tβ4-BP5既能增强机体体液免疫应答,又能增强细胞免疫应答。动物免疫保护试验结果显示Tβ4-BP5有助于鸡肺脏中H9N2型AIV病毒的清除。以上结果提示,重组融合肽Tβ4-BP5具有良好的免疫佐剂的潜能。本研究为新型疫苗佐剂的研究开发奠定了基础。 展开更多
关键词 胸腺肽Tβ4 法氏囊活性五肽BP5 融合基因 克隆 表达 免疫佐剂特性
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