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小鼠巨噬细胞Ipr1基因真核表达载体的构建及表达 认领
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作者 李娜 朱道银 +1 位作者 何永林 张黎 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期,共4页
目的构建小鼠Ipr1(intracellular pathogen resistance 1)基因真核表达载体。方法从C57BL/6J小鼠胸腺组织提取总RNA,以RT-PCR法调取Ipr1基因编码序列,克隆至pMD19-Tsimple载体中,转化大肠杆菌JM109,筛选的阳性克隆作PCR及酶切鉴定后测... 目的构建小鼠Ipr1(intracellular pathogen resistance 1)基因真核表达载体。方法从C57BL/6J小鼠胸腺组织提取总RNA,以RT-PCR法调取Ipr1基因编码序列,克隆至pMD19-Tsimple载体中,转化大肠杆菌JM109,筛选的阳性克隆作PCR及酶切鉴定后测序分析。其中的突变碱基经点突变修复后将Ipr1基因亚克隆于原核真核双系统表达质粒pQE-TriSystem中得到pQE-TriSystem-Ipr1,用脂质体瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞,RT-PCR鉴定Ipr1基因的表达。结果从C57BL/6J小鼠胸腺组织内扩增出大小为1338bp片段。阳性克隆测序鉴定发现一个点突变,经点突变修复后与GenBank报道的Ipr1基因序列一致。亚克隆获得重组质粒pQE-TriSystem-Ipr1,转染RAW264.7细胞经RT-PCR扩增出Ipr1基因相应大小的DNA片段。结论成功调取小鼠Ipr1基因并成功构建含Ipr1基因的真核表达载体,为进一步研究Ipr1基因的功能奠定基础。 展开更多
关键词 Ipr1 结核病 真核表达载体 pQE-TriSystem
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Lactococcus lactis subsp.lactisIL1403谷氨酸脱羧酶的克隆表达、分离纯化及活性研究 认领 被引量:1
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作者 张天萌 沐万孟 +2 位作者 江波 张涛 倪靓霞 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期共5页
谷氨酸脱羧酶(gad)是功能因子γ-氨基丁酸(gaba)生物合成过程中的重要酶.为了得到一种有高效活性的gad基因工程菌,克隆到一种gad基因,来源于微生物lactococcus lactis subsp.lactis il1403.以pet-22b(+)为载体质粒,escherichia coli bl2... 谷氨酸脱羧酶(gad)是功能因子γ-氨基丁酸(gaba)生物合成过程中的重要酶.为了得到一种有高效活性的gad基因工程菌,克隆到一种gad基因,来源于微生物lactococcus lactis subsp.lactis il1403.以pet-22b(+)为载体质粒,escherichia coli bl21 (de3)为宿主细胞,构建了基因重组菌,iptg可诱导目的重组gad过量表达;经亲和层析纯化的重组蛋白质样品进行sds-page分析,在约54 000处出现显著的特征蛋白质条带;活性检测结果表明,该重组gad的转化活性比野生菌株有明显提高,野生菌株经5h细胞转化,反应底物转化率为55.8%,而工程菌20 min后转化率达到82.1%,30 min后转化可达到98.3%. 展开更多
关键词 谷氨酸脱羧酶 Γ-氨基丁酸 克隆表达 亲和层析 细胞转化
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表达犬瘟热病毒H基因的重组犬2型腺病毒的构建与鉴定 认领 被引量:6
3
作者 闫芳 夏咸柱 +3 位作者 扈荣良 谢之景 赵忠鹏 黄耕 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期 425-428,共4页
将犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)H基因表达盒克隆入转移质粒pVAXΔE3,构建含CDV H基因表达盒的转移质粒pVAXΔE3LPH,用NruⅠ和SalⅠ分别酶切转移质粒pVAXΔE3LPH和犬2型腺病毒全基因组质粒pPoly2-CAV-2,将CDV H基因表达盒定... 将犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)H基因表达盒克隆入转移质粒pVAXΔE3,构建含CDV H基因表达盒的转移质粒pVAXΔE3LPH,用NruⅠ和SalⅠ分别酶切转移质粒pVAXΔE3LPH和犬2型腺病毒全基因组质粒pPoly2-CAV-2,将CDV H基因表达盒定向克隆入pPoly2-CAV-2质粒中,构建E3区部分缺失的包含CDV H基因表达盒的犬2型腺病毒重组质粒pCAV-2/CDVLPH.AscⅠ和ClaⅠ对pCAV-2/CDVLPH进行双酶切,释放CAV-2/CDVLPH重组基因组,利用脂质体将CAV-2/CDVLPH重组基因组与去除SalⅠ和NruⅠ片段的CAV-2基因组两端片段共转染DK细胞,盲传和重复转染3次,4 d后出现典型CAV-2病变,获得重组病毒CAV-2/CDVLPH.用CDV H基因特异性引物经RT-PCR扩增重组病毒DK细胞培养物,能够扩增出相应的核酸片段,表明CAV-2/CDVLPH在DK细胞繁殖的过程中能够转录CDVLP H的mRNA,重组病毒免疫犬,可以诱导犬产生特异的抗CAV-2 HI抗体和抗CDV中和抗体. 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 H基因 重组 犬2型腺病毒 表达
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牛分支杆菌热休克蛋白65基因的分子克隆和表达 认领 被引量:8
4
作者 刘思国 王春来 +2 位作者 彭永刚 宫强 王牟平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期 336-339,共4页
以牛型分枝杆菌Vallee菌株基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增热休克蛋白65(Hsp65)基因,PCR产物经纯化与EcoRⅠ/SaⅠ双酶切后与经同样处理的原核表达载体pGEX-6P-1进行连接,转化感受态细胞BL21中,筛选和构建了原核重组表达质粒pGEX-H65,... 以牛型分枝杆菌Vallee菌株基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增热休克蛋白65(Hsp65)基因,PCR产物经纯化与EcoRⅠ/SaⅠ双酶切后与经同样处理的原核表达载体pGEX-6P-1进行连接,转化感受态细胞BL21中,筛选和构建了原核重组表达质粒pGEX-H65,核苷酸序列测定验证其正确性.以1 Mol/LIPTG诱导,进行SDS-PAGE电泳.结果表明,Hsp65基因表达的融合蛋白GST-H65裂解为两部分;即64 kD和22 kD,两个蛋白分子量相加与预测的86 kD(HsP60 kD+GST26 kD)相符.牛分支杆菌热休克蛋白HSP65的成功表达为其功能的研究打下基础. 展开更多
关键词 牛分杆杆菌 HSP65基因 分子克隆 原核表达
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酵母穿梭表达质粒pGBKT7-hCK2α'的构建 认领 被引量:3
5
作者 梁景耀 黄功华 +1 位作者 刘新光 梁念慈 《广东医学院学报》 2004年第4期 319-322,共4页
目的:用人蛋白激酶CK2α'(hCK2α')cDNA片段构建酵母双杂交体系中"诱饵"载体.方法: 通过PCR扩增已构建成功的重组质粒pThCKA'获得人CK2α'亚基编码区cDNA,将PstⅠ/NdeⅠ双酶切的PCR产物连接到同样酶切的"... 目的:用人蛋白激酶CK2α'(hCK2α')cDNA片段构建酵母双杂交体系中"诱饵"载体.方法: 通过PCR扩增已构建成功的重组质粒pThCKA'获得人CK2α'亚基编码区cDNA,将PstⅠ/NdeⅠ双酶切的PCR产物连接到同样酶切的"诱饵"载体pGBKT7,转化感受态细胞DH5α获得转化子,琼脂糖凝胶电泳初步筛选转化子,将阳性克隆进行限制性内切酶酶切与DNA测序的方法鉴定.将DNA测序验证的pGBKT7-hCK2α' 转染感受态酵母株AH109,Western blot鉴定hCK2α'蛋白表达,检测表达产物对报道基因的激活作用及对酵母株AH109的毒性.结果: 限制性酶切结果表明,插入片段和重组质粒的大小与理论值推测值相符.重组质粒pGBKT7-hCK2α'转染的酵母株AH109中能够表达hCK2α'蛋白,pGBKT7-hCK2α'无自主激活报道基因的能力及对酵母的生长无毒性.结论: pGBKT7-hCK2α'酵母双杂"诱饵"载体构建获得成功,可应用于酵母双杂交体系. 展开更多
关键词 蛋白激酶CK2 酵母双杂交 PCR
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人Collectrin同源基因的分离克隆及其在人肾集合管和远曲小管的特异表达 认领 被引量:2
6
作者 张宏 和田淳 +3 位作者 李寒 张艳玲 桢野博史 王海燕 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期 630-636,共7页
为探讨collectrin在人类疾病中的作用,利用人类collectrin同源性引物,经末端cDNA快速扩增法分离获得人collectrin基因全长序列并对collectrin进行生物信息学分析及定位表达研究.结果发现,人类collectrin(GenBank登录号为AF229179)... 为探讨collectrin在人类疾病中的作用,利用人类collectrin同源性引物,经末端cDNA快速扩增法分离获得人collectrin基因全长序列并对collectrin进行生物信息学分析及定位表达研究.结果发现,人类collectrin(GenBank登录号为AF229179)基因全长含1345bp,开放阅读框架编码222个氨基酸.在核苷酸和氨基酸水平,与小鼠collectrin序列分别有86.9%和87.4%同源性.生物信息学分析结果提示,collectrin为一个25kD的具有一个信号肽和一个跨膜区的跨膜糖蛋白.人类collectrin与人类血管紧张素转换酶相关的羧基肽酶(ACE2)具有47.8%高度同源性.人多组织Northern杂交结果显示:collectrin基因为人类肾脏特异性表达基因.原位杂交及免疫组化证实,与小鼠collectrin特异表达于集合管细胞不同,人collectrin基因mRNA及其蛋白产物除位于肾脏集合管细胞外,远曲肾小管细胞也有表达.由此推论,人类collectrin基因为肾脏特异性表达基因,与人类血管紧张素转换酶相关的羧基肽酶具有高度同源性,可能为血管紧张素转换酶(ACE)基因家族的新成员. 展开更多
关键词 血管紧张素转换酶 肾脏 人类 生物信息学分析 小鼠 特异性表达 细胞外 特异表达 羧基肽酶 同源性
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结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在pET原核表达系统中的表达与纯化 认领 被引量:3
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作者 温见翔 吴少庭 +8 位作者 陈群 秦莉 袁仕善 林绮萍 雷明军 潘晖榕 张仁利 高世同 黄达娜 《中国热带医学》 CAS 2004年第6期 897-899,925,共4页
目的构建能在pET原核表达系统中表达结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的重组表达质粒,并对其表达产物进行纯化.方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出ESAT-6基因片段,克隆至pMD18-T载体,PCR筛选阳性克隆并测序;用限制性内切酶消化后,... 目的构建能在pET原核表达系统中表达结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的重组表达质粒,并对其表达产物进行纯化.方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出ESAT-6基因片段,克隆至pMD18-T载体,PCR筛选阳性克隆并测序;用限制性内切酶消化后,目的片段亚克隆至表达载体pET-23a(+),构建pET-ESAT-6重组质粒,将其转化入大肠杆菌BL21(DE3);PCR和双酶切鉴定转化菌落;将阳性菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达;用His·BindTM柱亲和层析法纯化融合蛋白.结果从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出ESAT-6基因片段,成功构建重组表达质粒pET-ESAT-6,SDS-PAGE显示表达产物分子量约为6kD,经亲和纯化后的ESAT-6重组蛋白纯度高,且能被结核病人血清所识别.结论利用pET原核表达系统成功表达和纯化了结核分枝杆菌ESAT-6重组蛋白,为结核病诊断抗原和疫苗研究奠定了基础. 展开更多
关键词 ESAT-6 ET 结核分枝杆菌 原核表达系统 结核病 蛋白 纯化 重组表达质粒 阳性克隆 IPTG
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正交法整体优化差异显示反应体系 认领 被引量:7
8
作者 柳淑芳 杜立新 +2 位作者 朱靖 王爱华 李宏滨 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期 836-840,共5页
mRNA 差异显示PCR( mRNA differential display PCR,DDRT-PCR)是分离差异表达基因的有效方法,但该方法的准确性极易受到外部因素和内部因素的影响.采用正交法优化DDRT-PCR反应条件,充分考虑到模板浓度、锚定引物浓度、随机引物浓度、dN... mRNA 差异显示PCR( mRNA differential display PCR,DDRT-PCR)是分离差异表达基因的有效方法,但该方法的准确性极易受到外部因素和内部因素的影响.采用正交法优化DDRT-PCR反应条件,充分考虑到模板浓度、锚定引物浓度、随机引物浓度、dNTPs浓度、镁离子浓度以及Taq酶用量等因素在差异显示反应过程中的交互作用,一次PCR反应即可确定最佳反应组合.将筛选出的条件用于DDRT-PCR,得到差显结果假阳性率低,重复性和稳定性好,而且简化了反应条件的优选程序,这表明正交法是优化差异显示反应条件的理想方法.为了进一步简化整个差异显示反应系统的操作程序,降低假阳性率,研究采用了非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)和银染显示差异带的方法,并用反向Northern法来验证回收条带,从而更加优化了差异显示反应体系. 展开更多
关键词 DDRT-PCR 正交优化 非变性PAGE 银染 反向Northern
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用一对错配引物进行的PCR/酶解法检测β-地中海贫血-28(A→G)突变 认领 被引量:2
9
作者 李洪义 曾瑞萍 杜传书 《中山大学学报:医学科学版》 CAS CSCD 1993年第4期 F002,F004,共2页
1989年Haliassos等首先报道用误配碱基引物PCR检测点突变。其基本原理是,一个引物3’末端紧邻突变点,3’末端或近3’末端引入一个错配碱基,介导突变产物在此产生某内切酶酶切序列,而正常模板的PCR产物无该酶切序列,另一引物不含错... 1989年Haliassos等首先报道用误配碱基引物PCR检测点突变。其基本原理是,一个引物3’末端紧邻突变点,3’末端或近3’末端引入一个错配碱基,介导突变产物在此产生某内切酶酶切序列,而正常模板的PCR产物无该酶切序列,另一引物不含错配碱基。问题是当内切酶用量太少或失活时, 展开更多
关键词 错配 Β-地中海贫血 点突变 引物 正常 PCR产物 介导 碱基 酶切 末端
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基因工程制药研究进展 认领 被引量:1
10
作者 阚劲松 吴克 《合肥联合大学学报》 2000年第4期 107-110,共4页
以DNA重组技术为核心的现代生物技术是一个正在不断发展的高技术综合体系.也是国际上优先发展的高技术领域之一。自20世纪70年代基因工程诞生以来,最先应用基因工程且目前最为活跃的研究领域便是医药科学。DNA重组技术不仅直接提供干... 以DNA重组技术为核心的现代生物技术是一个正在不断发展的高技术综合体系.也是国际上优先发展的高技术领域之一。自20世纪70年代基因工程诞生以来,最先应用基因工程且目前最为活跃的研究领域便是医药科学。DNA重组技术不仅直接提供干扰素、红细胞生成素(EPO)等基因工程药物,供临床治疗使用,提高对恶性肿肿瘤、心脑血管病、重要传染病和遗传病的防治水平.而且也广泛应用于改造已有的抗生素和生物制品等传统医药工业。基因工程药物已形成一个巨大的高新技术产业。本文就基因工程制药的现状和研究进展作一概述。 展开更多
关键词 基因工程制药 医药科学 干扰素 红细胞生成素 药物
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胃癌相关新基因GDDR的研究 认领 被引量:9
11
作者 杜建军 窦科峰 +5 位作者 彭淑牖 李江涛 刘颖斌 王为忠 管文贤 高志清 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期 10-13,共4页
目的明确胃癌下调全长新基因GDDR cDNA的特性、GDDR染色体DNA的结构及其基因调控区,判断其转录因子及结合部位,探讨GDDR的功能作用. 方法地高辛标记行GDDR mRNA的胃黏膜原位杂交定位,多种组织cDNA文库中扩增GDDR的表达;分析GDDR基因结... 目的明确胃癌下调全长新基因GDDR cDNA的特性、GDDR染色体DNA的结构及其基因调控区,判断其转录因子及结合部位,探讨GDDR的功能作用. 方法地高辛标记行GDDR mRNA的胃黏膜原位杂交定位,多种组织cDNA文库中扩增GDDR的表达;分析GDDR基因结构、染色体定位;研究GDDR基因DNA 5′侧翼区调控GDDR cDNA的启动子区和转录因子及其结合部位.观察GDDR对胃癌7901细胞系的影响.结果 GDDR位于正常胃黏膜上皮细胞胞内,GDDR仅在胃组织中表达;GDDR的基因组DNA总长7739 bp,启动子在转录起始位点的+96 bp,和-419 bp;GDDR与胃组织特异、胃癌相关基因CA11在染色体DNA相差仅仅21701 bp,即均位于2p1 3.3,其基因组DNA结构与cDNA结构极为相似,但其调控区序列不同,转录因子及其结合部位区别较大.编码蛋白前有一跨膜肽区结构的GDDR,与分泌蛋白CA11为同源蛋白,均为新的BRICHOS家族成员.生长曲线及MTT检测均表明,GDDR显著抑制胃癌7901细胞的生长.结论具有胃组织特异性的胃癌下调全长新基因GDDR位于正常胃黏膜细胞,能显著抑制胃癌细胞的生长,是人类除CA11外又一与胃癌相关的新基因. 展开更多
关键词 胃癌 CA11 胃组织 新基因 转录因子 正常 结合部位 染色体DNA 基因组DNA DNA结构
用重组PCR技术缺失突变人单核细胞趋化蛋白-1基因 认领 被引量:1
12
作者 仲琳 张运 +6 位作者 张梅 季晓平 李大庆 张岩 张冰 杨军 刘少荣 《山东大学学报:医学版》 CAS 2004年第6期 698-701,共4页
目的:用重组PCR技术对人单核细胞趋化蛋白-1(hμMCP-1)基因cDNA进行缺失突变,构建其突变体-7 ND cDNA.方法:根据hμMCP-1基因缺失突变前后的两段基因分别设计两对含有酶切位点的引物,以pBlueScript-hμMCP-1为模板,进行重组PCR反应,将PC... 目的:用重组PCR技术对人单核细胞趋化蛋白-1(hμMCP-1)基因cDNA进行缺失突变,构建其突变体-7 ND cDNA.方法:根据hμMCP-1基因缺失突变前后的两段基因分别设计两对含有酶切位点的引物,以pBlueScript-hμMCP-1为模板,进行重组PCR反应,将PCR产物与T载体连接进行TA克隆,酶切鉴定并测序确定其长度为342 bp,继之将目的基因克隆入pcDNA3.1真核表达载体.结果:成功构建hμMCP-1cDNA突变体-7ND的真核细胞表达载体,测序结果表明,该突变体N端第2至8位氨基酸缺失.结论:重组PCR技术是十分有效、可靠的基因缺失突变方法. 展开更多
关键词 单核细胞化学吸引蛋白质1 基因缺失 克隆 分子 重组聚合酶链反应
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人乳头瘤病毒16型L1 N-端主要抗原基因的原核表达 认领
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作者 陈蕤 穆士杰 +1 位作者 张菊 阎小君 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第1期 16-18,共3页
目的获得序列正确的人乳头瘤病毒(HPV)16型L1 N-端主要抗原基因,构建其原核表达载体,并进行诱导表达.方法采用PCR法从宫颈癌组织中获得HPV16型L1 N-端主要基因重组表达质粒,转化E.coli DH5α,42℃诱导表达,Western blot分析表达产物.结... 目的获得序列正确的人乳头瘤病毒(HPV)16型L1 N-端主要抗原基因,构建其原核表达载体,并进行诱导表达.方法采用PCR法从宫颈癌组织中获得HPV16型L1 N-端主要基因重组表达质粒,转化E.coli DH5α,42℃诱导表达,Western blot分析表达产物.结果获得了序列正确的人乳头瘤病毒HPV16型L1 N-端主要基因,相对分子质量约为51 000.表达蛋白能与乳头瘤病毒抗体及乳头瘤病毒感染患者的血清发生抗原抗体反应.结论已成功构建HPV16型L1 N-端主要基因表达载体,并获得有效表达. 展开更多
关键词 HPV16 抗原基因 人乳头瘤病毒16型 诱导表达 DH5Α 宫颈癌组织 患者 原核表达载体 序列 基因表达载体
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BALB/c和C57BL/6小鼠在基因功能检测中行为学的比较研究 认领 被引量:9
14
作者 金玫蕾 刘留 +5 位作者 郭宁 莫韫 谢青莲 李葆明 赵国屏 景乃禾 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2001年第1期 3-9,共7页
目的 探索BALB/c和C57BL/6两个品系在有关实验中的不同作用。方法 选取了结合随机测序与生物信息学分析设计合成的神经系统表达的一些基因的反义核酸(antisense)中的2个,用Hamilton微量注射器将其分别定量注射到BALB/c和C57BL/6小鼠的... 目的 探索BALB/c和C57BL/6两个品系在有关实验中的不同作用。方法 选取了结合随机测序与生物信息学分析设计合成的神经系统表达的一些基因的反义核酸(antisense)中的2个,用Hamilton微量注射器将其分别定量注射到BALB/c和C57BL/6小鼠的侧脑室,并分别设注射生理盐水和随机序列核酸(Scramble)的对照组。每一反义核酸实验组和对照组各注射10只小鼠,之后观察实验组与对照组在不同行为学实验中的差异。小鼠的行为学检测模型为:考察日常代谢能力的摄食量,考察Locomotionactivity(移动)的旷场行为,考察疼痛阈值的甩尾试验和考察记忆能力的步下法实验。结果 注射No.1基因的反义核酸后,两品系的实验组均在测试记忆力的步下法(Step-downTest)试验中表现出记忆力减弱,且与对照组差异明显,说明No.1基因的功能确与记忆相关。注射No.2基因的反义核酸后,在测试移动能力的旷场行为(OpenFieldBehavior)试验中,BALB/c实验组跨格、直立行为均比对照组明显减少,说明受此反义核酸影响显著,而C57BL/6实验组则与对照组无大的差异。此外,在生理盐水对照组和随机序列核酸对照组的实验中以及其他行为学模型的实验中,两品系也存在着一定的差异。结论 用遗传背景不同的多品系进行相关实验,可进一步建立新基因功能初筛中有显著结果的基因的复筛平台;同时,实验结果对于进一步研究什么样的品系适用于什么样的实验将具有较大的意义。 展开更多
关键词 对照组 反义核酸 注射 行为学 实验 C57BL/6小鼠 基因 品系 摄食量 试验
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人骨形成蛋白2基因的克隆及序列测定 认领 被引量:1
15
作者 华松 贾战生 +3 位作者 武浩 扈苯荃 杨瑞锋 张涌 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2005年第2期 9-13,共5页
为了获得人骨形成蛋白2(hBMP-2)基因,以GeneBank(NM001200)中的hBMP-2基因编码序列为依据设计引物,采用RT-PCR技术从人胎盘中获得hBMP-2基因cDNA,并将其重组到pMD18-T载体中,转化到大肠杆菌JM109后挑选阳性克隆,经双酶切鉴定并进行测序... 为了获得人骨形成蛋白2(hBMP-2)基因,以GeneBank(NM001200)中的hBMP-2基因编码序列为依据设计引物,采用RT-PCR技术从人胎盘中获得hBMP-2基因cDNA,并将其重组到pMD18-T载体中,转化到大肠杆菌JM109后挑选阳性克隆,经双酶切鉴定并进行测序.结果表明,获得的基因片断为hBMP-2全编码序列,同源性为99.9%. 展开更多
关键词 人骨形成蛋白2 RT-PCR 克隆
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Fgfr3基因374点突变致软骨发育不全小鼠模型的建立与分析 认领
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作者 王建民 杜晓兰 +9 位作者 李翠玲 尹良军 陈波 孙晶 苏楠 赵玲 宋瑞华 宋维威 陈林 邓初夏 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2004年第6期 537-541,共5页
目的建立模拟人成纤维细胞生长因子3型受体(fibroblast growth factor receptor 3, Fgfr3)374号甘氨酸至精氨酸点突变小鼠模型并进行初步表型分析.方法应用双重PCR法及分子克隆技术构建小鼠 Fgfr3-Gly374Arg点突变打靶载体,对胚胎干细胞... 目的建立模拟人成纤维细胞生长因子3型受体(fibroblast growth factor receptor 3, Fgfr3)374号甘氨酸至精氨酸点突变小鼠模型并进行初步表型分析.方法应用双重PCR法及分子克隆技术构建小鼠 Fgfr3-Gly374Arg点突变打靶载体,对胚胎干细胞(embryonic stem cells, ES细胞)进行打靶后,采用G418、Ganciclovir正负双向选择和Southern杂交对打靶ES细胞进行筛选,选发生正确同源重组的ES细胞进行胚泡显微注射,携带Neo基因的 Fgfr3-Gly374Arg点突变鼠与EIIa-Cre转基因鼠杂交后,得到只含 Fgfr3-Gly374Arg点突变鼠.用PCR法进行了基因型鉴定,并应用骨骼染色、组织学等技术对其表型进行了初步分析.结果 Fgfr3-Gly374Arg点突变小鼠体小尾短、头大,前额圆凸,骨骺生长板区明显缩短、结构紊乱,肥大软骨细胞区也有明显减少.同时伴有多数雌性小鼠不孕、子宫、卵巢变小、乳腺发育不良等变化.结论成功地建立了模拟人 Fgfr3-Gly374Arg点突变所致软骨发育不全的小鼠模型. 展开更多
关键词 点突变 FGFR3 小鼠模型 软骨发育不全 ES细胞 PCR法 转基因鼠 同源重组 打靶载体 显微注射
小分子干扰RNA特异性抑制胃癌SGC7901细胞人端粒酶催化亚单位基因表达的研究 认领 被引量:7
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作者 马晋平 詹文华 +3 位作者 汪建平 彭俊生 高劲松 殷勤伟 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第22期 1372-1376,共5页
目的构建针对人端粒酶催化亚单位(human telomerase catalytic subunit, hTERT)基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体pU6-hTERT-siRNAs,观察其对胃癌SGC7901细胞hTERT基因的特异性抑制作用.方法采用报告基因质粒pC... 目的构建针对人端粒酶催化亚单位(human telomerase catalytic subunit, hTERT)基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体pU6-hTERT-siRNAs,观察其对胃癌SGC7901细胞hTERT基因的特异性抑制作用.方法采用报告基因质粒pCX-GFP(5 510 bp)和含有鼠U6启动子pU6 (3 300 bp)质粒,设计合成针对绿色荧光蛋白(GFP)基因的发夹RNA(shRNA)序列,构建SHi-pU6-GFP质粒.应用LipofectamineTM2000将pCX-GFP质粒和SHi-pU6-GFP质粒转染K562细胞、SGC7901细胞,并用荧光显微镜观察转染效果.设计合成针对hTERT的siRNAs,构建重组pU6-hTERT-siRNAs质粒.LipofectamineTM2000介导pU6-hTERT-siRNAs质粒转染SGC7901细胞.分别应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)定性和定量检测hTERT基因表达情况.结果质粒pU6和SHi-pU6-GFP经EcoRⅤ和XbaⅠ酶切电泳后,前者出现3 300 bp和约300 bp条带,而后者出现3 300 bp和约350 bp条带,与实验设计的针对GFP的shRNA长度相符.说明本实验已成功构建了针对绿色荧光蛋白GFP基因的SHi-pU6-GFP质粒.K562细胞和SGC7901细胞中分别观察到转染pCX-GFP质粒和SHi-pU6-GFP质粒前后发绿色荧光的细胞数目明显减少.定性、定量检测SGC7901细胞转染pU6-hTERT-siRNAs组hTERT基因表达抑制.结论针对hTERT基因设计的siRNAs表达质粒可以特异性抑制SGC7901细胞hTERT基因表达. 展开更多
关键词 SGC7901细胞 RNA 质粒 SH HTERT基因 转染 胃癌 绿色荧光蛋白(GFP) 小分子 GFP基因
转基因食品的安全性与产业化展望 认领 被引量:10
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作者 刘京贞 《生物学教学》 北大核心 2001年第5期 1-2,共2页
转基因产品是建立在人类对遗传物质本质的深刻认识和现代生物技术高度综合的基础上,对物种进行定向遗传改良的高技术产品,它标志着人类驾驭自然能力的新跃进.经过人工修饰的转基因生物体,往往具有更优良的经济性状,更加符合人类的需要.... 转基因产品是建立在人类对遗传物质本质的深刻认识和现代生物技术高度综合的基础上,对物种进行定向遗传改良的高技术产品,它标志着人类驾驭自然能力的新跃进.经过人工修饰的转基因生物体,往往具有更优良的经济性状,更加符合人类的需要.近来,关于转基因食品的安全性和商品化的报道,经常见于报端,表明人们对转基因食品的认识正在逐步提高.随着生物工程技术水平的提高,转基因产品的种类越来越多.目前,就世界范围内的转基因产品而言,既有植物种类,也有动物种类,但进入产业化阶段的主要是植物. 展开更多
关键词 转基因食品 安全性 产业化 遗传物质 基因工程 生态环境 发展前景
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中国昆明小鼠(KM鼠)遗传背景资料调查 认领 被引量:24
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作者 章根木 姚甘火 《中国实验动物学杂志》 1997年第4期 246-251,共6页
昆明小鼠(KM鼠)是我国生产量、使用量最大的小鼠品种,被广泛应用于药理学、毒理学等领域的研究,生物制品的生产及药品生物制品的检定。作者对北京生物制品研究所(简称北京生研所)昆明小鼠的引进历史资料进行了分析,综合了目前国内学... 昆明小鼠(KM鼠)是我国生产量、使用量最大的小鼠品种,被广泛应用于药理学、毒理学等领域的研究,生物制品的生产及药品生物制品的检定。作者对北京生物制品研究所(简称北京生研所)昆明小鼠的引进历史资料进行了分析,综合了目前国内学者对其所做的实验分析,以调查KM鼠的遗传背景,供大家参考。 展开更多
关键词 昆明小鼠 KM鼠 遗传背景资料 小鼠 生物学特性
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克隆山羊“阳阳”顺产“龙凤胎” 认领
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作者 李梁摄 《中国动物保健》 2001年第9期 39,共1页
关键词 克隆山羊 克隆技术 “龙凤胎” 基因工程
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