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利用双杂交系统对SeNPV泛素与抗细胞凋亡蛋白相互作用的研究 预览 被引量:4
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作者 牛国栋 张忠信 《中国病毒学》 CSCD 2004年第1期 49-53,共5页
本文报道利用酵母双杂交系统研究甜菜夜蛾核多角体病毒(SeNPV)的泛素(Ubiqutin)与抗细胞凋亡蛋白(IAP2, IAP3)相互作用的结果.使用Clontech 公司的MACHMAKER GAL4 Two-hybrid system 3,以病毒ubiquitin基因与酵母GAL4的DNA结合域重组表... 本文报道利用酵母双杂交系统研究甜菜夜蛾核多角体病毒(SeNPV)的泛素(Ubiqutin)与抗细胞凋亡蛋白(IAP2, IAP3)相互作用的结果.使用Clontech 公司的MACHMAKER GAL4 Two-hybrid system 3,以病毒ubiquitin基因与酵母GAL4的DNA结合域重组表达"诱饵"蛋白,以病毒iap2或iap3基因与DNA活化域重组表达"猎物"蛋白,在低严谨型筛选培养基上均得到阳性克隆.这一结果表明,甜菜夜蛾核多角体病毒泛素与IAP2或IAP3在体外能进行相互作用,这种作用利用了酵母内源性E1和E2.SeNPV的抗细胞凋亡蛋白(IAPs)可能是泛素-蛋白酶水解途径(UPP)中的泛素连接酶(E3),或者是泛素依赖性蛋白水解酶的靶底物. 展开更多
关键词 甜菜夜蛾核多角体病毒 泛素 酵母双杂交系统 抗细胞凋亡蛋白 泛素连接酶
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影响λ噬菌体包装蛋白抽提物效价的因素
2
作者 罗瑞柏 易清明 《生物化学杂志》 CSCD 1993年第2期 250-251,共2页
<正> 以λ噬菌体DNA作载体构建基因文库时,λ噬菌体包装蛋白抽提物是实验成败的关键之一,市场上虽有此商品出售,但由于价格昂贵加上运输和保藏方面的问题,使用时往往不够理想。所以,不少实验室自己制备噬菌体包装蛋白抽提物。任... <正> 以λ噬菌体DNA作载体构建基因文库时,λ噬菌体包装蛋白抽提物是实验成败的关键之一,市场上虽有此商品出售,但由于价格昂贵加上运输和保藏方面的问题,使用时往往不够理想。所以,不少实验室自己制备噬菌体包装蛋白抽提物。任兆韵等报导:快速诱导可以提高包装效价,在这里我们报导包装反应时间等其他因素对λ噬菌体包装蛋白抽提物效价的影响。 展开更多
关键词 噬菌体 包装蛋白 效价
利用Tn5转座子构建杆状病毒AcMNPV随机突变体的初步研究 预览 被引量:5
3
作者 李惠 赵明磊 +1 位作者 尹隽 钟江 《复旦学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期 498-502,共5页
以杆状病毒模式种AcMNPV为研究对象,应用基于Tn5转座子的随机转座的方法,构建杆状病毒突变体库.将果蝇hsp70启动子后接绿色荧光蛋白基因后插入Tn5转座子,构建了可以在昆虫细胞中表达,易于跟踪的转座载体.利用体外转座系统将转座子随机插... 以杆状病毒模式种AcMNPV为研究对象,应用基于Tn5转座子的随机转座的方法,构建杆状病毒突变体库.将果蝇hsp70启动子后接绿色荧光蛋白基因后插入Tn5转座子,构建了可以在昆虫细胞中表达,易于跟踪的转座载体.利用体外转座系统将转座子随机插入AcMNPV基因组,并用转座反应液转染Sf21细胞,得到了表达绿色荧光蛋白的病毒突变体库.进一步纯化了两株病毒B9F和Li6A,进行了转座子插入位点的分析,确定两株病毒中,转座子分别插入了94K基因和p10基因.该方法将为杆状病毒功能基因组研究提供重要的手段. 展开更多
关键词 ACMNPV Tn5转座子 转座酶 突变体
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霍乱弧菌ToxS蛋白间的互作增强ToxR蛋白诱导毒力基因的表达
4
作者 王相洪 张婷 +3 位作者 涂飞 史梦婷 王卉 杨梦华 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期832-840,共9页
【目的】阐明霍乱弧菌ToxR蛋白功能调控的分子机制。【方法】利用巯基捕获(thiol-trapping)的方法分析DsbA蛋白对ToxR周质空间结构域半胱氨酸残基的氧化作用;采用定点突变的方法构建ToxR半胱氨酸突变株(ToxRC236/293S);利用荧光素酶基... 【目的】阐明霍乱弧菌ToxR蛋白功能调控的分子机制。【方法】利用巯基捕获(thiol-trapping)的方法分析DsbA蛋白对ToxR周质空间结构域半胱氨酸残基的氧化作用;采用定点突变的方法构建ToxR半胱氨酸突变株(ToxRC236/293S);利用荧光素酶基因作为报告基因分析ToxR野生型(ToxRwt)和半胱氨酸突变体(ToxRC236/293S)诱导下游基因表达的活性;通过细菌双杂交系统分析ToxRwt和ToxRC236/293S蛋白之间、ToxR与ToxS之间以及ToxS之间的相互作用。【结果】ToxR周质空间结构域半胱氨酸残基确实可以被DsbA蛋白氧化,且当ToxR与ToxS共表达时,ToxR诱导ctxAB转录表达的活性显著增强,且在dsbA基因缺失突变株中ToxR诱导ctxAB转录表达的活性更高;成功构建株霍乱弧菌ToxR半胱氨酸突变株(ToxRC236/293S),在没有ToxS存在的条件下,ToxRC236/293S诱导毒力基因表达的活性与ToxRwt相当;细菌双杂交系统分析发现当ToxR与ToxS共转录表达时,ToxS极大增强ToxR蛋白之间的互作;在dsbA基因缺失突变株中,ToxS之间的相互作用显著增强。【结论】ToxR蛋白本身的氧还状态对其诱导毒力基因表达的活性没有影响;ToxS通过增强ToxR形成二聚体的能力从而增强其诱导毒力基因的表达,而DsbA对ToxS蛋白之间的相互作用具有抑制作用,DsbA通过影响ToxS的蛋白互作从而影响ToxR蛋白的功能。本文为进一步阐明霍乱弧菌毒力基因表达调控的分子机制提供重要的理论依据。 展开更多
关键词 霍乱弧菌 表达调控 ToxRS 氧还状态 蛋白互作
Directly radiolabeled phage with spleen-targeting specificity 预览
5
作者 SUN Liyan LIANG Kun WANG Xiangyun CHU Taiwei 《核技术:英文版》 SCIE CAS CSCD 2011年第4期217-223,共7页
Phage display technique is a powerful approach for discovering new tumor-and organ-targeting ligands,and radiolabeled phage has a potential to analyze the phage-binding sensitivity and specific imaging.In this study,p... Phage display technique is a powerful approach for discovering new tumor-and organ-targeting ligands,and radiolabeled phage has a potential to analyze the phage-binding sensitivity and specific imaging.In this study,phage Ⅱ (the spleen-targeting phage) in mice was isolated after three rounds biopanning,and labeled by 99mTc using mercaptoacetyltriglycine (MAG3) as chelator to evaluate their binding properties in vivo.The amount of phage Ⅱ eluted from spleen was enriched by plague assay each round.99mTc-MAG3-phage Ⅱ showed the less retention in blood at any time point than half that of 99mTc-MAG3-phage Ⅰ (the radiolabeled original Ph.D-12 phage as control).The accumulation in spleen between 99mTc-MAG3-phage Ⅰ and Ⅱ was of different tendency.The highest uptake of 99mTc-MAG3-phage Ⅱ in spleen was 24.80 %ID/g at 30 min;and of 99mTc-MAG3-phage I,30.93% ID/g at 5 min.After circulating 99mTc-MAG3-phage Ⅱ for 120 min,its accumulation in spleen decreased though higher than that of 99mTc-MAG3-phage Ⅰ.In other organs,the 99mTc-MAG3-phage Ⅱ showed low retention and high spleen-to-organ or tissue ratios.In conclusion,the radiolabeled phage Ⅱ is convenient for studying the binding and specificity of spleen-targeting peptides found via phage display in vivo. 展开更多
关键词 噬菌体展示技术 放射性标记 脾脏 异性 MAG3 噬菌体显示 灵敏度 器官
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人工操纵病毒的原子力显微镜研究 预览 被引量:6
6
作者 胡钧 张志鸿 +2 位作者 欧阳振乾 陈圣福 李民乾 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第2期 175-177,共3页
人工操纵生物大分子是目前科学研究的一个前沿领域,我们利用改进的“分子梳”方法,首次实现了复杂的体系--种线性噬菌体病毒的人工拉直与定向,这种操纵是在大面积平整的固体表面实现的,并利用原子力显微镜对拉直前后的病毒进行了... 人工操纵生物大分子是目前科学研究的一个前沿领域,我们利用改进的“分子梳”方法,首次实现了复杂的体系--种线性噬菌体病毒的人工拉直与定向,这种操纵是在大面积平整的固体表面实现的,并利用原子力显微镜对拉直前后的病毒进行了与观察与测量。 展开更多
关键词 分子操纵 病毒 原子力显微镜
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噬菌体表面展示技术 预览 被引量:1
7
作者 王小平 刘彦仿 《生物学杂志》 CAS CSCD 1999年第5期 7-8,共2页
噬菌体表面展示技术是将编码外源肽或抗体的可变区DNA片段插入噬菌体或噬菌粒的基因组中,以融全形成与噬菌体的表面蛋白共同表达于噬菌体表面,经过“吸附-洗脱-扩增”过程筛选并富集外源肽或特异性抗体。其中噬菌体抗体库技术可... 噬菌体表面展示技术是将编码外源肽或抗体的可变区DNA片段插入噬菌体或噬菌粒的基因组中,以融全形成与噬菌体的表面蛋白共同表达于噬菌体表面,经过“吸附-洗脱-扩增”过程筛选并富集外源肽或特异性抗体。其中噬菌体抗体库技术可以模拟体内抗体产生和成熟过程,不经细胞杂交,甚至不经免疫制备针对任何抗原的单克隆抗体。 展开更多
关键词 丝状噬菌体 抗体库 表面展示
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两种核多角体病毒感染甜菜夜蛾血细胞系的电镜观察 预览
8
作者 余泽华 王家坤 《华中师范大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 1993年第3期 382-385,共4页
用苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(AcMNPV)和芹菜夜蛾核多角体病毒(SfaMNPV)感染甜菜夜蛾(Laphgma exigua)血细胞系Le-H-HNPU_7,通过光镜和电镜技术证实,该细胞系对这两种NPV都很敏感,病毒在细胞中的发生呈现出典型的NPV病理发展过程。电镜... 用苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(AcMNPV)和芹菜夜蛾核多角体病毒(SfaMNPV)感染甜菜夜蛾(Laphgma exigua)血细胞系Le-H-HNPU_7,通过光镜和电镜技术证实,该细胞系对这两种NPV都很敏感,病毒在细胞中的发生呈现出典型的NPV病理发展过程。电镜下可以见到受染细胞核中病毒发生基质、病毒粒子和多角体。其病毒形态大小分别是:AcMNPV病毒粒子为27.8±1.83×214.4±33.5nm,多角体为1.82±0.35μm,多角体蛋白质晶格为60.7A;SfaMNPV病毒粒子为38.1±2.09×306±14.5nm,多角体为1.45+0.1μ,多角体蛋白质晶格为70A。 展开更多
关键词 甜菜夜蛾 血细胞系 核多角体病毒
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镇江地区诺如病毒分子流行病学特点及基因型分析 预览 被引量:1
9
作者 许金凤 徐虹 +3 位作者 宋寅生 薛渊 邵世和 申红星 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2017年第11期857-861,共5页
目的分析2015-2016年镇江地区诺如病毒(No V)的分子流行病学特点及基因型分布。方法收集镇江地区腹泻患者粪便标本,逆转录PCR(RT-PCR)检测No V衣壳蛋白基因的表达水平,并对PCR产物行基因测序验证;Mega软件构建系统进化树,并进行序... 目的分析2015-2016年镇江地区诺如病毒(No V)的分子流行病学特点及基因型分布。方法收集镇江地区腹泻患者粪便标本,逆转录PCR(RT-PCR)检测No V衣壳蛋白基因的表达水平,并对PCR产物行基因测序验证;Mega软件构建系统进化树,并进行序列进化和基因型分析。结果 No V总阳性率为5.30%(85/1 605),GⅠ组检出率为0.87%(14/1 605),GⅡ组检出率为4.55%(73/1 605),其中2份样本同时检出感染GⅠ/GⅡ。GⅡ组在10-20岁组中的阳性率最高(17.80%)。2015年No V的检出率以1月最高,11月、2月次之;2016年以12月最高,3月、4月次之。2015年No V的基因型以新GII.17型变异株为主(63.89%),2016年以GII.4 Sydney_2012株为主(35%)。结论镇江地区的No V以GII组为主,青少年患者阳性率高,主要流行季节为11月至次年4月,主要流行基因型为GII.17型变异株和GII.4 Sydney_2012株。 展开更多
关键词 诺如病毒 分子流行病 基因型
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EB病毒潜伏膜蛋白2A在小鼠B细胞淋巴瘤模型中增强Myc诱导的细胞周期进程 预览
10
《微生物与感染》 2014年第3期138-138,共1页
myc基因表达升高是许多人类癌症的共同特性。Epstein-Barr病毒(EBV)与淋巴系统恶性肿瘤有关,但在淋巴瘤中Myc与EB病毒之间的相互作用尚不清楚。EBV潜伏膜蛋白2A(LMP2A)可充当B细胞受体(BCR)的类似物,给受感染的B细胞提供存活信号。
关键词 B细胞淋巴瘤 EB病毒 MYC 膜蛋白 EPSTEIN-BARR病毒 周期进程 诱导 模型
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抗生殖器疱疹病毒卵黄免疫球蛋白(IgY)的研究 预览
11
作者 陈伟强 林元藻 《氨基酸和生物资源》 CAS 2008年第1期 57-60,共4页
检测了鸡卵黄中抗生殖器疱疹病毒(HSV-2)抗体的产量、纯度、来源及稳定性。采用生殖器疱疹病毒(HSV-2)作为抗原免疫广州黄村鸡。通过改良水稀释法提取卵黄中的IgY。双紫外光波长测定抗体含量,SDS—PAGE电泳检测抗体纯度。Western b... 检测了鸡卵黄中抗生殖器疱疹病毒(HSV-2)抗体的产量、纯度、来源及稳定性。采用生殖器疱疹病毒(HSV-2)作为抗原免疫广州黄村鸡。通过改良水稀释法提取卵黄中的IgY。双紫外光波长测定抗体含量,SDS—PAGE电泳检测抗体纯度。Western blot免疫印迹法测定该抗体来源。ELISA检测IgY对温度、酸碱度的稳定性。结果,蛋黄液中抗体质量浓度13.6g·L^-1,抗体纯度达96.2%。免疫印迹证明IgY与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性。IgY具有良好的热稳定性,对酸碱具有一定的耐受力。WD水稀释法能得到高产量、高纯度的特异性IgY,而且有良好的生物学活性。 展开更多
关键词 生殖器疱疹病毒(HSV-2) 卵黄免疫球蛋白(IgY) 多克隆抗体
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放线菌噬菌体φHAU_3中噬菌斑形成必需功能区的克隆和定位 预览 被引量:1
12
作者 周秀芬 邓子新 +1 位作者 David A. Hopwood Tobias kieser 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第4期 367-373,共7页
放线菌噬菌体φHAU3是以吸水链霉菌应城变种10-22为指示菌,筛选获得的一个广谱性噬菌体,其基因组大小约为53kb,具有粘性末端。已成功地将44.7kb的φHAU3 DNA克隆到pIJ255上,构建成噬粒(Phasmid)pIJ8300;46.8kb的φHAU3 DNA克隆到pIJ285... 放线菌噬菌体φHAU3是以吸水链霉菌应城变种10-22为指示菌,筛选获得的一个广谱性噬菌体,其基因组大小约为53kb,具有粘性末端。已成功地将44.7kb的φHAU3 DNA克隆到pIJ255上,构建成噬粒(Phasmid)pIJ8300;46.8kb的φHAU3 DNA克隆到pIJ285上,构建成pIJ8301。采用部分酶解和Southern杂交的方法,制作了pIJ8300和pIJ8301被Asp718和Bgl Ⅱ酶切的限制酶图谱,又综合单,双和多酶切分析的结果,定位了单一的Pvu Ⅱ和NcoI切点。综合噬粒pIJ8300和pIJ8301的特性,已将φHAU3中噬菌体功能的必需区定位在41kb的范围内。这些结果为以φHAU3为母体发展新的放线菌噬菌体奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 放线菌 噬菌体 噬菌斑 基因克隆
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4月病毒播报 预览
13
《电子制作.电脑维护与应用》 2005年第4期 39,共1页
WORM_BAGLE.BE通过其他病毒获得最大的潜在传播能力,恶意病毒一前一后形成传播循环,其中群发邮件病毒复制木马。而木马会从特定网站轮流下载并复制病毒。
关键词 病毒复制 群发邮件 传播 木马 下载 网站
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百合病毒的DNA芯片检测技术研究 预览 被引量:15
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作者 王进忠 贾慧 +4 位作者 文思远 王升启 张民照 赵祥云 董金皋 《中国病毒学》 CSCD 2005年第4期 429-433,共5页
根据已知的黄瓜花叶病毒,百合无症病毒、百合斑驳病毒基因核苷酸序列,设计引物和探针,制备寡核苷酸芯片.用Cy3标记核苷酸引物,不对称RT-PCR扩增产物与芯片上的寡核苷酸探针杂交,荧光扫描仪检测并分析信号.研究制备的基因芯片能够检测侵... 根据已知的黄瓜花叶病毒,百合无症病毒、百合斑驳病毒基因核苷酸序列,设计引物和探针,制备寡核苷酸芯片.用Cy3标记核苷酸引物,不对称RT-PCR扩增产物与芯片上的寡核苷酸探针杂交,荧光扫描仪检测并分析信号.研究制备的基因芯片能够检测侵染百合的3种重要病毒核酸的特异性荧光信号,该项技术具有特异、灵敏、快速的优点. 展开更多
关键词 黄瓜花叶病毒 百合无症病毒 百合斑驳病毒 基因芯片 检测
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悬壶济世造福社会——第二届噬菌体国际学术研讨会在武汉成功召开 预览 被引量:1
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作者 刘芳男 《中国高新区》 2016年第11期60-63,共4页
在如今这个谈病色变的时代,一提到“超级细菌”,人们不禁闻之色变.目前,“超级细菌”在临床上几乎找不到有效的抗菌药物,一旦感染,死亡率极高.因此,抗生素耐药问题已经成为全球公共卫生面临的严峻挑战之一.而这种战斗力强大的“超级细菌”,
关键词 国际学术研讨会 噬菌体 成功 武汉 社会 济世 抗菌药物 公共卫生
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紫外光和日光对噬藻体PP活性的影响 预览 被引量:4
16
作者 邱彤 徐丽 +3 位作者 程凯 夏燕华 赵以军 石正丽 《中国病毒学》 CSCD 2004年第1期 58-61,共4页
分别研究了实验室条件下紫外灯照射及不同季节中日光照射对噬藻体PP活性的影响.结果表明紫外光(UV-A和UV-B)对噬藻体PP有较强的致失活作用,并且其致失活作用强弱与波长有关.日光的作用下,夏季时噬藻体PP的日失活率为88.60%,冬季时为58.8... 分别研究了实验室条件下紫外灯照射及不同季节中日光照射对噬藻体PP活性的影响.结果表明紫外光(UV-A和UV-B)对噬藻体PP有较强的致失活作用,并且其致失活作用强弱与波长有关.日光的作用下,夏季时噬藻体PP的日失活率为88.60%,冬季时为58.86%.同时发现不同季节中,尽管在某些时段的日光强度相似,但噬藻体PP失活率的差别却较大,这一现象可能是由于光质不同引起的.上述结果有助于解释淡水环境中噬藻体种群大小的季节性波动. 展开更多
关键词 紫外光 日光:噬藻体PP 失活率 浮游藻类
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朊病毒 预览
17
作者 李镇桐 《生物学通报》 北大核心 1991年第8期 14,13,共2页
<正> 朊病毒(Prion,亦作Virino)是一种比类病毒(Viroid)还小得多的、很可能不存在核酸的侵染性蛋白质,是迄今所知最奇特的分子生物,属亚病毒(subvirus)范畴。它的发现使生物学家感到震惊,因为它与现行分子生物学中的“中心法则”(... <正> 朊病毒(Prion,亦作Virino)是一种比类病毒(Viroid)还小得多的、很可能不存在核酸的侵染性蛋白质,是迄今所知最奇特的分子生物,属亚病毒(subvirus)范畴。它的发现使生物学家感到震惊,因为它与现行分子生物学中的“中心法则”(DNA→RNA→蛋白质)背道而驰。对它的研究,无论在生物学的基本理论上,还是在实践上都有非常重要的意义。 展开更多
关键词 朊病毒 亚病毒 分子生物 羊瘙痒病
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禽流感病毒宿主范围限制的分子机制研究进展 预览
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作者 夏玉坤(综述) 刘伯华 祝庆余(审校) 《微生物学免疫学进展》 2009年第3期 45-49,共5页
禽流感病毒感染人类已经成为全球性的社会公共问题。病毒通过禽类直接感染人的机制目前尚不清楚。本文主要综述了国内外近年来在禽流感病毒宿主范围限制性方面的研究进展,并藉此来探讨AIV跨种属感染人类的可能机制。
关键词 禽流感病毒 宿主范围限制 分子机制
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成人T细胞白血病细胞靶向型水泡性口炎病毒的构建及应用
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作者 方心葵 王欣 孙涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第3期218-226,共9页
目前肿瘤治疗主要使用放疗、药物化疗,具有很大的毒、副作用,研发肿瘤靶向性药物是未来发展趋势.成人T细胞白血病radult T cell leukemia,ATL)是一种由HTLV-1病毒引起的人恶性CD4T淋巴细胞白血病,目前尚无有效治疗方法.溶瘤性水... 目前肿瘤治疗主要使用放疗、药物化疗,具有很大的毒、副作用,研发肿瘤靶向性药物是未来发展趋势.成人T细胞白血病radult T cell leukemia,ATL)是一种由HTLV-1病毒引起的人恶性CD4T淋巴细胞白血病,目前尚无有效治疗方法.溶瘤性水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis vires,Vsv)是一种肿瘤治疗病毒载体,利用HIV-1囊膜蛋白gp160对野生型VSV病毒进行假型化改造,研制了具备人CD4受体靶向性的重组VSV病毒(VSV-AG—gp160G),在对ATL病人肿瘤细胞进行的体外杀伤实验(ex vivo)中,显示出良好的应用前景. 展开更多
关键词 水泡性口炎病毒 成人T细胞白血病 病毒治疗
Synthesis,Expression and Purification of S1 and S2 Fragments of SARS S Protein in E.coli 预览
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作者 ZHENG Shang-yong PAN Wei-qing 《动物与饲料科学:英文版》 CAS 2011年第4期18-21,33共5页
[Objective] To obtain pure recombinant S1 and S2 of SARS S protein. [Method] Using asymmetric PCR and ligation with endonuclease, S1 and S2 fragments of SARSV HK strain S gene were synthesized. Then, these two fragmen... [Objective] To obtain pure recombinant S1 and S2 of SARS S protein. [Method] Using asymmetric PCR and ligation with endonuclease, S1 and S2 fragments of SARSV HK strain S gene were synthesized. Then, these two fragments were inserted into plasmid pET28a to obtain recombinant vectors pET28a-S1 and pET28a-S2, respectively. These recombinant vectors were transformed into E. coli BL21, and expression of S1 and S2 fragments were induced by IPTG. The conditions of expression and purification were optimized. [Result] The S1 and S2 fragments were amplified and successfully expressed in E. coli. [Conclusion] This research provides detection antigens for follow-up development of SARS vaccine. 展开更多
关键词 大肠杆菌 SARS S蛋白 合成 纯化 不对称PCR 重组载体 质粒转化
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