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Tmub1沉默对大鼠肝部分切除术后肝细胞增殖的影响 被引量:4
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作者 马德宾 沈雁兵 +1 位作者 王保林 陈平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期850-853,共4页
目的探讨Tmubl蛋白在肝再生过程中的作用及其在肝再生过程中对Securin蛋白的影响。方法54只大鼠随机分为3组即TmublRNAi慢病毒组、空载慢病毒组及正常对照组,其中TmublRNAi慢病毒组、空载慢病毒组注射相应病毒颗粒(3×10’TU),... 目的探讨Tmubl蛋白在肝再生过程中的作用及其在肝再生过程中对Securin蛋白的影响。方法54只大鼠随机分为3组即TmublRNAi慢病毒组、空载慢病毒组及正常对照组,其中TmublRNAi慢病毒组、空载慢病毒组注射相应病毒颗粒(3×10’TU),对照组未行注射,2d后行肝部分切除术(partialhepatectomy,PH),每组分为6个亚组:PH术后0、2、6、12、24、48h,每亚组3只大鼠,术后提取原代肝细胞、留取肝脏组织标本,利用Real—timePCR和Westernblot检测慢病毒干扰效果及Tmubl沉默后对Securin蛋白的影响。M1Tr实验、流式细胞仪检测原代肝细胞的增殖情况。结果Real.timePCR和Westernblot表明实验组TmublmRNA和蛋白被有效抑制;Tmubl沉默后securinmRNA表达无明显变化,而G2/M期securin蛋白量明显减少。MTT实验表明Tmubl沉默可明显上调PH术后6~24h肝细胞的增殖速率;流式细胞分析结果显示实验组处于G2/M期的肝细胞比例明显增高。结论Tmubl蛋白在肝再生过程中对肝细胞增殖进程发挥负向调控作用,而该作用可能与其在蛋白质水平影响了Securin的表达密切相关。 展开更多
关键词 Tmub1 肝再生 SECURIN 慢病毒 体内转染
滤泡性淋巴瘤3B级的细胞遗传学、免疫组织化学和临床特征 预览
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作者 莫秋荣 马韵 《广西医学》 CAS 2013年第6期781-784,共4页
滤泡性淋巴瘤(FL)3B级是高级别滤泡性淋巴瘤,完全由滤泡中心母细胞组成。纯粹的FL3B,即由中心母细胞单纯呈滤泡结构生长的肿瘤很少见。本文对FL3B级的细胞遗传学、免疫组织化学和临床特征作一综述。
关键词 滤泡性淋巴瘤 细胞遗传学 免疫组织化学 临床特征
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大鼠腹腔脂肪干细胞的分离培养及诱导成骨 预览 被引量:5
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作者 李玲慧 丁道芳 +4 位作者 龚浩 杜国庆 宋奕 邓真 詹红生 《中国组织工程研究》 CSCD 2013年第23期4232-4239,共8页
背景:脂肪干细胞取材方便、增殖旺盛、具有多向分化潜能,有望取代骨髓间充质干细胞而成为新一代组织工程的种子细胞。然而,脂肪干细胞的分离培养仍存在诸多困难与不足。目的:优化脂肪干细胞的分离培养方法,并鉴定其成骨分化潜能。... 背景:脂肪干细胞取材方便、增殖旺盛、具有多向分化潜能,有望取代骨髓间充质干细胞而成为新一代组织工程的种子细胞。然而,脂肪干细胞的分离培养仍存在诸多困难与不足。目的:优化脂肪干细胞的分离培养方法,并鉴定其成骨分化潜能。方法:选取200g成年雌性大鼠1只,无菌环境下切取大鼠肾脏、子宫周围及腹后外侧白色脂肪组织,多次胶原酶消化法分离消化,低糖培养基培养脂肪干细胞,倒置显微镜下观察脂肪干细胞的形态变化及增殖能力。采用成骨诱导培养液对第3代细胞进行成骨诱导,并采用碱性磷酸酶、茜素红染色方法进行鉴定。结果与结论:脂肪干细胞形态以长梭形为主,增殖活跃呈旋涡状生长。经成骨诱导10d后,碱性磷酸酶染色为阳性;成骨诱导28d后,茜素红染色阳性。提示采用多次酶消化法得到的大鼠腹腔源性脂肪干细胞在体外易于分离培养,可以稳定传代。在一定条件诱导下,可以向成骨细胞分化。采用以上方法进行脂肪干细胞的分离培养可以为组织工程提供大量、优质的种子细胞。 展开更多
关键词 干细胞 脂肪干细胞 种子细胞 分离培养 成骨分化 诱导 腹腔 矿化结节 碱性磷酸酶 矫形外 组织工程 国家自然科学基金 干细胞图片文章
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人参皂苷Rb1对体外培养人脂肪干细胞增殖与成骨分化的影响 预览 被引量:5
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作者 罗志军 黎洪棉 +2 位作者 王和庚 柳大烈 南华 《中国组织工程研究》 CSCD 2013年第32期5799-5805,共7页
背景:脂肪干细胞成骨分化受多种因素的影响,中药成骨诱导活性因子在脂肪干细胞研究中有重要意义。目的:观察人参皂苷Rb1在体外培养条件下对人脂肪干细胞增殖和成骨分化的影响。方法:体外分离培养人脂肪干细胞,传至第3代后,按2×1... 背景:脂肪干细胞成骨分化受多种因素的影响,中药成骨诱导活性因子在脂肪干细胞研究中有重要意义。目的:观察人参皂苷Rb1在体外培养条件下对人脂肪干细胞增殖和成骨分化的影响。方法:体外分离培养人脂肪干细胞,传至第3代后,按2×103/孔接种至96孔板,分别加入0.5,1.0,2.0,4.0,6.0μmol/L人参皂苷Rb1培养基200μL进行培养;设立对照组,仅加入等量普通DMEM培养基。采用XTT比色法测定大鼠脂肪干细胞的生长增殖曲线。通过碱性磷酸酶试剂盒测定细胞碱性磷酸酶活性,放射免疫法检测骨钙素含量,茜素红染色观察钙化结节形成能力。结果与结论:0.5μmol/L人参皂苷Rb1可明显促进人脂肪干细胞增殖;随着人参皂苷Rb1浓度的增加,促细胞增殖活性降低,6.0μmol/L人参皂苷Rb1表现为明显的抑制细胞增殖作用。人参皂苷Rb1呈剂量依赖性促进人脂肪干细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素表达。4.0,6.0μmol/L人参皂苷Rb1诱导钙化结节形成能力优于0.5,1.0和2.0μmol/L人参皂苷Rb1,对照组人脂肪干细胞未见钙化结节形成。提示人参皂苷Rb1在一定浓度范围内对体外培养条件下的人脂肪干细胞具有促生长增殖作用,但在高浓度时,人参皂苷Rb1对人脂肪干细胞的成骨分化具有促进作用,因此可作为一种良好的成骨诱导活性因子。 展开更多
关键词 干细胞 脂肪干细胞 人参皂苷 肝细胞 细胞增殖 成骨分化 中药 碱性磷酸酶 骨钙素 钙化结节 省级基金 干细胞图片文章
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应用胎鼠脑源性神经干细胞条件培养液诱导胚胎干细胞的分化 预览 被引量:2
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作者 张嘉晴 吴昊 项鹏 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第28期 5489-5493,共5页
目的:为克服类胚体和视黄酸诱导体系的不足,实验使用胎鼠脑源性神经干细胞条件培养液定向诱导分化胚胎干细胞,观察是否可以获得大量具有高度增殖和进一步分化能力的神经干,祖细胞。方法:实验于2005-06/2006-09在中山大学干细胞与... 目的:为克服类胚体和视黄酸诱导体系的不足,实验使用胎鼠脑源性神经干细胞条件培养液定向诱导分化胚胎干细胞,观察是否可以获得大量具有高度增殖和进一步分化能力的神经干,祖细胞。方法:实验于2005-06/2006-09在中山大学干细胞与组织工程中心实验室完成。①取孕12.5d的C57BL/6J小鼠胚胎脑组织,放人含有神经干细胞培养液(含B27、肝素5mg/L、碱性成纤维细胞生长因子20μg/L、表皮生长因子20μg/L、100U,mL青霉素、0.1g/L链霉素的DMEM/F12)的离心管内,接种后37℃、体积分数为0.05的C02培养箱中饱和湿度培养。3~5d后可见团状细胞球出现。即为原代的神经干细胞。取P5~10代神经干细胞消化成单细胞悬液,以5×10^4/cm。密度接种于神经干细胞培养液中,4~5d离心后收集上清液,即为胎鼠脑源性神经干细胞条件培养液。②P30代SC1002鼠胚胎干细胞消化成单个细胞后,移人上述制备的条件培养液中,5d后消化细胞,再重新接种于条件培养液中培养5d。常规消化后接种于神经干细胞培养液中,培养4~5d,即得到胚胎干细胞来源的神经干,祖细胞。对照组用神经干细胞培养液代替条件培养液。③所得细胞进行特异性抗原免疫细胞化学染色,并计数免疫染色阳性细胞率。RT-PCR检测标志性基因的表达。结果:①胚胎干细胞分化为神经干,祖细胞的比例:当消化成单个细胞的胚胎干细胞接种到神经干细胞条件培养液后,24h内聚集成细胞球并悬浮生长。免疫细胞化学检测少部分细胞表达nestin,在随后的培养过程中nestin阳性细胞逐渐增多。第4天细胞球周围的细胞几乎全部呈nestin阳性。当消化后重新接种于神经干细胞条件培养液中,可见部分细胞贴壁生长,10d后再常规消化接种于神经干细胞培养液中,呈典型的双极外形,nestin及RC2检测均呈阳� 展开更多
关键词 胚胎干细胞 条件培养液 分化 神经干细胞
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肌电图评价肌萎缩侧索硬化389例嗅鞘细胞脑内移植的效果 预览 被引量:4
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作者 陈琳 黄红云 +5 位作者 江昭 王援朝 王庆苗 郗海涛 包建玲 王洪美 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第43期 8422-8425,共4页
背景:肌萎缩侧索硬化尚缺乏有效治疗手段,细胞学治疗是研究的重要方向之一。目前研究表明,嗅鞘细胞、骨髓基质细胞、脐血间质干细胞等具有一定临床疗效。目的:观察嗅鞘细胞脑内移植治疗肌萎缩侧索硬化的肌电图改变,分析肌电图检查... 背景:肌萎缩侧索硬化尚缺乏有效治疗手段,细胞学治疗是研究的重要方向之一。目前研究表明,嗅鞘细胞、骨髓基质细胞、脐血间质干细胞等具有一定临床疗效。目的:观察嗅鞘细胞脑内移植治疗肌萎缩侧索硬化的肌电图改变,分析肌电图检查对肌萎缩侧索硬化疗效的评定价值。设计、时间及地点:病例自身对照观察,于2003-09/2007—12在北京市虹天济神经科学研究院及北京康复中心神经外科完成。对象:选择389例接受胚胎嗅鞘细胞脑内移植治疗的肌萎缩侧索硬化患者。方法:局麻下作双额发际内2.0~3.0cm,旁开中线2.5~2.9cm,长约0.5cm小切口2个,两侧共缓慢注射细胞数2×10^4/μL嗅鞘细胞悬液100μL。移植前及移植后三四周分别采用丹麦Keypoint-4型肌电/诱发电位仪检查患者肌电图。主要观察指标:每例患者检查8~12块肌肉,包括四肢近、远端肌肉以及舌肌、胸锁乳突肌。移植前后肌电图主要列比自发电位、运动单位电位以及大力收缩时募集波型的改变。结果:①389例患者中332例(853%)肌电图检查显示不同程度改善,主要有3类:a.自发电位减少:122例出现不同程度此项改变。b.300例出现数量不等的肌肉募集波型由低级向高级转变,电位密度明显增加,如单纯相转变为混合相;混合相转变为干扰相。c.移植前未能测到运动单位电位而术后新出现者51例。②51例(13.2%)肌电图无变化,移植前后肌电图大致相同。③6例(1.5%)比移植前差,主要变化为自发电位增多或肌肉大力收缩时募集波型减弱。结论:嗅鞘细胞移植近期能改善肌萎缩侧索硬化患者的神经功能,延缓病情的进行性恶化。肌电图检测用于胚胎嗅鞘细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化疗效评定具有较好的应用价值,通过移植前后肌电图改变可以较客观反映治疗� 展开更多
关键词 嗅鞘细胞 细胞移植 肌萎缩侧索硬化 肌电描记术
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组织块培养的人脐带源性间充质干细胞的生物学特性 预览 被引量:4
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作者 杨立明 毕黎琦 姜文华 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第47期 9221-9225,共5页
背景:间充质干细胞主要来源于骨髓,但骨髓源性间充质干细胞存在病毒污染的可能,且随年龄增长其细胞数量和扩增分化能力会出现明显下降,因此需要寻找新的间充质干细胞来源。目的:拟采用组织块培养法从人脐带中分离间充质干细胞,并... 背景:间充质干细胞主要来源于骨髓,但骨髓源性间充质干细胞存在病毒污染的可能,且随年龄增长其细胞数量和扩增分化能力会出现明显下降,因此需要寻找新的间充质干细胞来源。目的:拟采用组织块培养法从人脐带中分离间充质干细胞,并观察其生物学特性。设计、时间及地点:观察性实验,于2007—03/2008—05在吉林大学白求恩医学院组胚教研室完成。材料:脐带来自正常足月产健康婴儿,产妇及家属均知情同意。方法:采用组织块法分离培养和扩增间充质干细胞:将脐带剪碎至1mm×1mm×1mm大小组织块,置于培养瓶中,并在组织块表面覆盖载玻片防止其漂浮,加入含体积分数为0.10胎牛血清的DMEM/F12培养液培养。细胞贴壁后,每隔三四天更换培养基,待细胞出现集落生长达60%以上汇合后,弃组织块,消化后,按1:2-1:3的比例传代。取第7代细胞在含地塞米松、抗坏血酸、β-磷酸甘油、含体积分数为0.10胎牛血清的DMEM/F12培养液与含体积分数为0.10胎牛血清、地塞米松、胰岛素、吲哚美辛、1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤、抗坏血酸、青霉素和链霉索的DMEM/F12培养液中诱导其成骨及成脂分化。主要观察指标:光、电镜观察获得的人脐带源性间充质干细胞形态,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期、免疫表型,碱性磷酸酶染色及油红O染色鉴定细胞分化能力。结果:组织块贴壁后1周可见多数呈长梭形或扁平形的成纤维样细胞,2周后,细胞形态变为均一的纺锤形。透射电镜观察第5代和第7代细胞均为幼稚形态的细胞,细胞膜表面不光滑,核大,不规则,核仁明显,常染色质多,异染色质少,胞浆少,胞浆内可见较多游离核糖体,此外还可见粗面内质网和线粒体。流式细胞术分析细胞周期显示,第3,5,7代70%以上的细胞� 展开更多
关键词 间充质干细胞 人脐带 诱导分化
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兔骨髓间充质干细胞培养及向成软骨细胞的诱导分化 预览 被引量:4
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作者 郭璇 霍然 +1 位作者 吕仁荣 林莉 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期 963-966,共4页
背景:骨髓间充质干细胞没有理想的特异性表面标志物,对其鉴定尚无统一标准,大多数鉴定依赖于其形态水平、功能特征及培养过程中出现的分化表型来协助鉴定。目的:体外培养扩增、鉴定兔骨髓间充质干细胞,观察其诱导分化为成软骨细胞的... 背景:骨髓间充质干细胞没有理想的特异性表面标志物,对其鉴定尚无统一标准,大多数鉴定依赖于其形态水平、功能特征及培养过程中出现的分化表型来协助鉴定。目的:体外培养扩增、鉴定兔骨髓间充质干细胞,观察其诱导分化为成软骨细胞的可行性。方法:密度梯度离心法提取兔骨髓间充质干细胞,采用倒置显微镜进行形态学观察;用含体积分数为10%胎牛血清的α-MEM培养液培养细胞,每日定时进行细胞计数,观察细胞生长速度;采用流式细胞学方法分别检测原代及第3代细胞CD44、CD45、CD29的表达情况;取第3代生长良好的兔骨髓间充质干细胞,以特定培养液诱导(含体积分数为10%胎牛血清、转化生长因子110μg/L、胰岛素样生长因子Ⅰ110μg/L、转铁蛋白6.25mg/L、地塞米松10mmol/L、维生素C0.05mmol/L),倒置显微镜下观察形态变化,免疫组织化学检测软骨特异性Ⅱ型胶原的表达。结果与结论:培养的细胞长梭形,呈成纤维细胞样生长,传代细胞生长迅速。流式结果表明,原代细胞有62.4%的细胞表达CD29,有60.3%的细胞表达CD44,有2.79%的细胞表达CD45,第3代有99.9%的细胞表达CD29,有99.6%的细胞表达CD44,有2.62%的细胞表达CD45。骨髓间充质干细胞诱导后体外扩增能力明显降低,诱导21d后形态变化比较显著,Ⅱ型胶原阳性细胞较多。结果显示应用密度梯度离心法可成功分离并扩增骨髓间充质干细胞,第3代细胞纯度较高,在适当的条件下,具有分化为成软骨细胞的潜能。 展开更多
关键词 软骨细胞 骨髓间充质干细胞 流式细胞术 表面抗原 诱导分化
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乙醇诱导大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡机制 预览 被引量:1
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作者 马爱国 赵劲民 +3 位作者 苏伟 李晓峰 范锲 崔向荣 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第27期 4941-4945,共5页
背景:有研究表明乙醇可诱导骨髓间充质干细胞凋亡并引起成骨细胞和破骨细胞数量减少,但乙醇对骨髓间充质干细胞凋亡的影响以及作用机制目前尚不十分清楚。目的:观察乙醇对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡、线粒体功能的影响及bcl-2、Caspas... 背景:有研究表明乙醇可诱导骨髓间充质干细胞凋亡并引起成骨细胞和破骨细胞数量减少,但乙醇对骨髓间充质干细胞凋亡的影响以及作用机制目前尚不十分清楚。目的:观察乙醇对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡、线粒体功能的影响及bcl-2、Caspase-3表达的变化。方法:应用全骨髓培养法分离培养SD大鼠骨髓间质干细胞,置于0,100,200,300,400,500,600,700,800,900mmol/L乙醇中作用24h,MTT法进行细胞毒性药物实验;置于0,100,200,300,400,500mmol/L乙醇中作用6,12,24h,AnnexinV/PI双标记法流式细胞仪检测细胞凋亡和线粒体膜电位变化情况;置于0,427mmol/L乙醇中作用24h,RT-PCR法检测与凋亡有关的基因bcl-2和Caspase-3mRNA表达水平。结果与结论:MTT检测结果显示427mmol/L是乙醇对大鼠骨髓间充质干细胞生长的半数抑制浓度;AnnexinV/PI检测结果表明,与0mmol/L组比较,随作用时间的延长与乙醇浓度的增加,骨髓间充质干细胞凋亡率及线粒体跨膜电位的破坏水平明显升高(P〈0.05)。与0mmol/L组比较,乙醇作用24h后427mmol/L组bcl-2mRNA表达水平下降,Caspase-3mRNA表达水平增加(P〈0.05)。说明乙醇能诱导大鼠骨髓间充质干细胞凋亡,凋亡的发生可能与线粒体膜电位破坏、线粒体功能障碍、bcl-2和Caspase-3激活有关。 展开更多
关键词 乙醇 骨髓间充质干细胞 凋亡 AnnexinV/PI双标记法 线粒体膜电位 大鼠 RT-PCR bcl-2 CASPASE-3
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去甲基化酶腺病毒载体构建及其在人颌下腺细胞中的表达 被引量:1
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作者 李莹 刘淑丹 +4 位作者 杨彦春 董世武 熊剑 李方 周继祥 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第22期 2349-2352,共4页
目的构建去甲基化酶(methyl-CpG binding domain 2,MBD2)基因腺病毒载体,并观测其在人颌下腺(human submandibular gland,HSG)细胞中的表达。方法以HSG细胞总RNA为模板,RT-PCR法扩增MBD2基因全长编码序列,克隆入载体pMD18-T后,亚克... 目的构建去甲基化酶(methyl-CpG binding domain 2,MBD2)基因腺病毒载体,并观测其在人颌下腺(human submandibular gland,HSG)细胞中的表达。方法以HSG细胞总RNA为模板,RT-PCR法扩增MBD2基因全长编码序列,克隆入载体pMD18-T后,亚克隆入pAdTrack-CMV腺病毒穿梭载体,构建pAdTrack-MBD2重组体。该重组体与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1于BJ5183菌中同源重组,产生重组腺病毒质粒Ad-MBD2,该质粒经293细胞包装,获得具有感染力的Ad/MBD2重组腺病毒颗粒,将该病毒颗粒感染HSG细胞,倒置显微镜检测转染后HSG细胞生长变化及MBD2在其中的表达等情况。图像分析法计算感染效率。RT-PCR法检测MBD2基因在该细胞中的表达变化。结果成功克隆到909 bp大小的MBD2基因,构建了其腺病毒载体Ad/MBD2,该腺病毒载体经293细胞成功包装,并获具感染力的Ad/MBD2重组腺病毒颗粒,其感染效率约70%。感染的HSG高表达MBD2。结论成功克隆到MBD2基因,构建了其重组腺病毒载体Ad/MBD2,并证实了其感染HSG细胞的有效表达。 展开更多
关键词 去甲基化酶基因 重组腺病毒颗粒 人颌下腺细胞
骨髓间充质干细胞SCA-~1+/CD45~+/CD31~+亚群的归巢能力 预览 被引量:1
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作者 贺继刚 李洪荣 +3 位作者 桂龙升 李永武 严丹 王平 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2015年第41期6572-6578,共7页
背景:自2003年,美国FDA率先批准自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死性疾病以来,已有大量临床及基础研究报道,但报道结果却不尽相同,其中很重要的一点就是干细胞无法有效到达心肌损伤部位(即干细胞归巢)。目的:探讨小鼠骨髓间充质干细... 背景:自2003年,美国FDA率先批准自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死性疾病以来,已有大量临床及基础研究报道,但报道结果却不尽相同,其中很重要的一点就是干细胞无法有效到达心肌损伤部位(即干细胞归巢)。目的:探讨小鼠骨髓间充质干细胞各亚群在心肌修复中的归巢能力。方法:以小鼠心肌干细胞表面分化抗原筛查小鼠骨髓间充质干细胞,再以CD45、CD31为标准分选得到小鼠骨髓间充质干细胞4个亚群。采用Transwell小室检测各亚群组细胞的归巢能力。将各亚群细胞注入心肌梗死48 h小鼠体内,注射后48,96 h及7 d处死小鼠取其心脏完成小动物活体成像并检测其荧光强度。结果与结论:小鼠骨髓间充质干细胞SCA-1+/CD45+/CD31+亚群归巢能力优于其他亚群。小动物活体成像提示干细胞注射48 h,96 h及7 d时SCA-1+/CD45+/CD31+亚群平均荧光强度优于其他亚群,SCA-1+/CD45+/CD31+亚群迁移率最高,说明SCA-1+/CD45-/CD31-群体有向受损心肌归巢的趋势。 展开更多
关键词 心肌梗塞 骨髓 间质干细胞 细胞运动 组织工程 干细胞 骨髓干细胞 归巢 骨髓间充质干细胞 亚群 SCA-1 CD45 CD31 小鼠 心肌梗死 荧光强度 国家自然科学基金
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神经生长因子经鼻脑靶向联合骨髓干细胞自体动员治疗重型颅脑损伤 预览
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作者 王君毅 步星耀 +3 位作者 顾建军 胡森 王帮庆 高玉帅 《中国组织工程研究》 北大核心 2018年第21期3281-3285,共5页
背景:经鼻脑靶向给药是一种新型给药方法,可以绕开血脑屏障,直接作用于中枢神经系统,不仅具有良好的脑靶向性,还具有无创、快捷的优点.研究表明神经生长因子联合骨髓干细胞动员治疗脑损伤有协同作用.目的:观察神经生长因子经鼻脑靶向... 背景:经鼻脑靶向给药是一种新型给药方法,可以绕开血脑屏障,直接作用于中枢神经系统,不仅具有良好的脑靶向性,还具有无创、快捷的优点.研究表明神经生长因子联合骨髓干细胞动员治疗脑损伤有协同作用.目的:观察神经生长因子经鼻脑靶向联合自体骨髓干细胞动员及综合康复治疗重型颅脑损伤的疗效.方法:①选择河南省人民医院神经外科收治的资料完整的创伤性脑损伤患者78例,根据治疗方案不同分为2组:对照组39例采用神经生长因子肌肉注射,1次/d,持续28d,联合自体骨髓干细胞动员治疗;观察组39例采用神经生长因子经鼻脑靶向滴入,1次/d,连续给药28d,联合自体骨髓干细胞动员治疗;②自体骨髓干细胞动员治疗方案:在脑损伤1周后皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子或重组人巨噬细胞集落刺激因子,每3d1次,2种交替,同时配合辛伐他汀片10mg/d口服,连续28d;③出院后2组患者继续行神经生长因子治疗3个月.结果与结论:①患者治疗28d时,观察组神经功能缺损评分略低于对照组,差异无显著性意义(t=0.429,P〉0.05);②治疗3个月后NIHSS评分,观察组显著优于对照组(t=7.176,P〈0.05);③格拉斯哥评分(GOS)观察组明显高于对照组(P〈0.05);④两组患者治疗与随访期间均未出现明显不良反应.⑤结果说明,神经生长因子经鼻脑靶向联合自体骨髓干细胞动员及康复治疗能有效促进重型颅脑损伤的修复,显著改善患者神经功能。 展开更多
关键词 神经生长因子 经鼻脑靶向 骨髓干细胞 康复治疗 干细胞 颅脑损伤 分子靶向治疗 间质干细胞 组织工程
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原发性肝癌细胞核和线粒体DNA微卫星不稳定性研究 预览
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作者 方丽 房殿春 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期 346-348,共3页
目的探讨细胞核和线粒体DNA微卫星不稳在原发肝癌发生中的作用及两者的关系.方法采用限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction, single strand conformational polymorphism, PCR-SSCP)方法检测原发性肝癌线粒体DNA微卫星不稳(m... 目的探讨细胞核和线粒体DNA微卫星不稳在原发肝癌发生中的作用及两者的关系.方法采用限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction, single strand conformational polymorphism, PCR-SSCP)方法检测原发性肝癌线粒体DNA微卫星不稳(mitochondrial microsatellite instability, mtMSI);采用PCR方法检测细胞核BAT26微卫星位点不稳定性(nuclear microsatellite instability, nMSI).结果 52份肝癌组织检出mtMSI 11例(21.2%),其中仅1个微卫星位点mtMSI阳性者7份(13.5%),有2个微卫星位点mtMSI阳性者4例(7.7%).有4份于BAT26位点检出nMSI,阳性率为7.7%.肝癌mtMSI发生率在患者同性别、年龄、是否合并乙型肝炎病毒感染和肝硬化、AFP是否阳性组无显著性差异(P>0.05),亦未发现mtMSI与nMSI有显著相关.结论 mtMSI在部分原发性肝癌的发生中起重要作用,肝癌mtMSI与nMSI无关. 展开更多
关键词 肝癌 线粒体微卫星不稳 BAT26
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活体生物发光成像追踪大鼠跟腱内移植干细胞 预览 被引量:4
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作者 黄德清 Gary Balian 《中国组织工程研究》 CSCD 2013年第23期4240-4247,共8页
背景:移植脂肪源干细胞在活体内的归巢、迁移、增殖和分化的机制仍未得到充分阐明。活体生物发光活体成像技术是近来发展起来的一种可以直接检测活细胞在动物体内生物学行为的新的技术方法。目的:探讨用活体生物发光成像技术检测大鼠... 背景:移植脂肪源干细胞在活体内的归巢、迁移、增殖和分化的机制仍未得到充分阐明。活体生物发光活体成像技术是近来发展起来的一种可以直接检测活细胞在动物体内生物学行为的新的技术方法。目的:探讨用活体生物发光成像技术检测大鼠跟腱内移植的经荧光基因修饰的脂肪源干细胞可行性。方法:分离培养大鼠腹腔来源的脂肪源干细胞,用浓度为3×10^10L^-1携带虫荧光素酶的腺病毒载体对其进行转染,观察转染对脂肪源干细胞的影响;将转染的脂肪源干细胞移植到大鼠跟腱缺损处,移植后1,4,7,14d用活体生物发光成像技术检测移植脂肪源干细胞荧光素酶的表达,移植后28d跟腱标本冰冻切片在荧光显微镜下观察。结果与结论:在体外,腺病毒转染对脂肪源干细胞的生长和增殖无明显影响(P〉0.05)。细胞移植后1,4,7,14d,活体生物发光成像技术在实验侧修复段跟腱检测到的荧光表达强度分别为(1.22±0.43)×10^6、(1.81±0.76)×10^6、(1.88±0.69)×10^6和(0.89±0.26)×10^5光子/s(n=6)。而对照侧跟腱修复段未检测到荧光表达;移植后28d,实验侧跟腱冰冻切片在荧光显微镜下见到大量表达荧光的细胞。表明活体生物发光成像技术可成功追踪大鼠跟腱内移植的经荧光基因修饰的脂肪源干细胞。脂肪源干细胞有望成为肌腱组织工程的种子细胞。 展开更多
关键词 干细胞 干细胞移植 缺陷型腺病毒 脂肪源干细胞 腺病毒 细胞转染 荧光素酶 肌腱 生物发光 成像 荧光表达 组织工程 种子细胞 省级基金 干细胞图片文章
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男性不育患者中Y染色体AZF微缺失与细胞遗传学分析 被引量:2
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作者 张露 明蕾 +1 位作者 潘颖 李春燕 《中国男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期26-30,44共6页
目的探讨男性生精功能障碍的遗传学因素,为染色体核型异常和AZF微缺失患者在辅助生殖技术之前提供遗传咨询。方法回顾性分析2010年7月至2012年11月来我院生殖中心行辅助生殖技术的夫妇,根据WHO最新精液标准将男性不育患者566例分为3... 目的探讨男性生精功能障碍的遗传学因素,为染色体核型异常和AZF微缺失患者在辅助生殖技术之前提供遗传咨询。方法回顾性分析2010年7月至2012年11月来我院生殖中心行辅助生殖技术的夫妇,根据WHO最新精液标准将男性不育患者566例分为3组:少弱精子症组(336例)、严重少弱精子症组(116例)和无精子症组(114例),运用G显带及聚合酶链反应(PCR)技术对男性不育患者的外周血染色体及Y染色体AZF区域的6个序列标签位点(STSs)进行检测,并对核型为46,XX男性进行SRY基因检测。结果少弱精子症组染色体异常发生率为15.18%(51/336),AZF微缺失2例,发生率为0.60%(2/336);严重少弱精子症组染色体异常发生率为18.97%(22/116),AZF微缺失5例,发生率为4.31%(5/116);无精子症组染色体异常发生率为14.91%(17/114),AZF微缺失12例,发生率为10.53%(12/114)。结论男性不育患者IVF/ICSI术前需进行细胞遗传学检查及AZF微缺失的检测,胚胎植入前诊断有助于筛选正常核型胚胎,减少异常核型后代出生。 展开更多
关键词 Y染色体 遗传学 不育 男性
人类胚胎来源成肌细胞的培养和鉴定 预览 被引量:1
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作者 刘桂英 杨立业 +2 位作者 李文玉 郑佳坤 陈强 《中国组织工程研究》 CSCD 2013年第32期5806-5812,共7页
背景:人类胚胎骨骼肌含有成肌细胞,其在体外条件下的培养及在体外能否融合形成肌管,以及表达的相应的标志物,目前尚不明确。目的:验证源于人类胚胎骨骼肌的成肌细胞在体外条件下的培养条件,能否在体外融合形成肌管,能否表达神经细胞... 背景:人类胚胎骨骼肌含有成肌细胞,其在体外条件下的培养及在体外能否融合形成肌管,以及表达的相应的标志物,目前尚不明确。目的:验证源于人类胚胎骨骼肌的成肌细胞在体外条件下的培养条件,能否在体外融合形成肌管,能否表达神经细胞的标志物。方法:采用组织块培养法对人类胚胎肌肉来源的成肌细胞进行原代培养,以免疫细胞化学染色检测培养的细胞肌肉细胞标志物desmin、myogenin、平滑肌肌动蛋白、myosin和神经细胞标志物β-tubulinⅢ、nestin、neurofilament200(NF200)、胶质纤维酸性蛋白的表达。结果与结论:从人类胚胎肌肉组织中成功培养出成肌细胞,表达成肌细胞的标志物desmin和myogenin,同时也表达神经元特异性烯醇化酶、nestin和NF200,细胞能够在体外融合形成含有多个细胞核的肌管,融合的肌管可以表达NF200、β-tubulinⅢ和胶质纤维酸性蛋白等神经细胞的标志物。结果证实,人类胚胎肌肉来源的成肌细胞能够同时表达神经细胞和肌肉细胞的标志物,培养的成肌细胞和肌管细胞表达神经元特异性烯醇化酶、β-tubulinⅢ、nestin、NF200和胶质纤维酸性蛋白。说明这几种神经细胞标志物不能用于肌肉来源的细胞向神经细胞跨分化的鉴定研究。 展开更多
关键词 干细胞 胚胎干细胞 成肌细胞 胚胎 肌管 分化 细胞培养 胶质纤维酸性蛋白 神经元特异性烯醇化酶 省级基金 干细胞图片文章
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比较MLPA与细胞遗传学技术在流产绒毛染色体分析中的应用 预览 被引量:4
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作者 王玮 李海波 +6 位作者 刘敏娟 段程颖 毛君 孙健 丁杨 陈瑛 李红 《中国产前诊断杂志(电子版)》 2014年第1期5-8,共4页
目的对比多重连接探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)与染色体核型分析技术,明确两种技术在流产绒毛样本检测中的效能,以期建立最优化的实验室检测方案。方法采集189例稽留流产绒毛样本,同步行MLPA(SALS... 目的对比多重连接探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)与染色体核型分析技术,明确两种技术在流产绒毛样本检测中的效能,以期建立最优化的实验室检测方案。方法采集189例稽留流产绒毛样本,同步行MLPA(SALSA P290-B1)和常规染色体核型分析检测,并对检测结果进行统计分析。结果两种方法综合分析成功187例,占98.94%。其中核型分析成功117例,占61.90%;MLPA能够检测185例,占97.88%。核型分析与MLPA结论一致70例,占37.04%;42例多倍体或非探针目标区染色体异常,MLPA未能检出,占其独立检测样本的22.70%(42/185);72例因培养失败等因素未能成功核型分析,占38.10%。结论①独立采用核型分析或MLPA技术均不能有效实现流产绒毛染色体异常的检测分析。②综合考虑检测成本和效能,先行染色体核型分析并同时留取流产绒毛样本,应用MLPA作为核型分析失败的补充方案具有临床可行性。 展开更多
关键词 流产 绒毛 多重连接探针扩增技术 细胞遗传学
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带有不同亚型HPV L1基因片段的哺乳动物细胞克隆的建立 预览 被引量:1
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作者 卓勤强 刘昕 +2 位作者 钱春荣 刘丽莎 高玉梅 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期 469-471,共3页
目的构建携带HPV亚型L1基因片段的标准细胞株。方法根据HPV通用引物GP5^+/GP6^+,用重叠延伸PCR方法合成HPV亚型L1基因中约150bp片段;插入真核细胞表达载体EGFP—N1,用脂质体转染SPC细胞,筛选以获得带有不同HPV L1基因片段细胞克... 目的构建携带HPV亚型L1基因片段的标准细胞株。方法根据HPV通用引物GP5^+/GP6^+,用重叠延伸PCR方法合成HPV亚型L1基因中约150bp片段;插入真核细胞表达载体EGFP—N1,用脂质体转染SPC细胞,筛选以获得带有不同HPV L1基因片段细胞克隆,并用定量PCR方法确认。结果重叠延伸PCR后得到约150bp的基因片段,测序结果经BLAST比对,分别与相应HPV亚型公开报告序列一致;将所获片段与EGFP-N1载体连接后酶切及测序鉴定正确;经筛选获得了携带HPV6、11、16、18、31、35亚型L1基因片段的细胞株;并用定量PCR方法进行了确认。结论成功构建了带有不同HPV亚型L1基因片段的30个亚克隆和6个细胞株,为进一步的HPV分型检测研究提供了保证。 展开更多
关键词 HPV 重叠延伸 GP5^+/GP6^+ 定量PCR
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密度梯度离心并贴壁法分离成人骨髓间充质干细胞的成骨特性 预览 被引量:7
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作者 吴国平 滕利 +3 位作者 杨锴 户建建 高寿松 范新宇 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期 1209-1212,I0001,共5页
目的:观察密度梯度离心法结合贴壁法体外分离纯化培养人骨髓间充质干细胞的效果,以及诱导后的成人骨髓间充质干细胞的成骨特性。方法:实验于2005—05/09在中国协和医科大学中国医学科学院整形外科医院进行。用密度梯度离心法结合贴... 目的:观察密度梯度离心法结合贴壁法体外分离纯化培养人骨髓间充质干细胞的效果,以及诱导后的成人骨髓间充质干细胞的成骨特性。方法:实验于2005—05/09在中国协和医科大学中国医学科学院整形外科医院进行。用密度梯度离心法结合贴壁法分离纯化成人骨髓间充质干细胞。采用倒置显微镜观察,噻唑兰法测定细胞生长曲线,免疫细胞化学鉴定骨髓间充质干细胞膜抗原和细胞基质蛋白属性。取体外扩增的第3代骨髓间充质细胞,以3.0×10^3/cm^2的浓度接种于放置有无菌处理的盖玻片的六孔板中,每孔内加2mL含10%胎牛血清的低糖型DMEM培养基培养液。当细胞贴壁生长达到60%~70%汇合时,将培养基更换为含5%胎牛血清的低糖型DMEM培养液,其中含骨诱导剂地塞米松、抗坏血酸和β-磷酸甘油,浓度分别为:100nmol/L、0.25mmol/L、10mmol/L。间充质细胞在这样的诱导体系中进行诱导培养,对照只加培养基。在第4、8、12、16天分别观察各孔中细胞的形态学和组织化学变化。体外加成骨诱导剂后分别作碱性磷酸酶活性测定、茜素红染色和VonKossa染色,观察骨髓间充质干细胞的成骨分化结果。结果:①分离的骨髓间充质干细胞培养48h后贴壁,72h后出现纺锤状细胞,贴壁的骨髓间充质细胞平均约12d后形成克隆。②第2代骨髓间充质干细胞99%表现为CD44^+、Vim^+,CD34^-,CD29^-。细胞表型稳定。③加成骨诱导剂后碱性磷酸酶活性明显增高,钙沉积在第8d就开始出现,茜素红染色、VonKossa染色阳性。结论:密度梯度离心法结合贴壁法分离纯化的成人骨髓间充质干细胞纯度高,表型稳定,体外加成骨诱导剂培养后,符合成骨细胞的形态特征和生物学特性,具有成骨活性,可为骨组织工程和基因治疗提供比较理想的种子细胞。 展开更多
关键词 骨髓细胞 干细胞 生物学
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造血干细胞的表面标志和临床应用 预览
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作者 白旭华 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第15期 2952-2954,共3页
目的:探讨造血干细胞的来源、细胞表面标志及其临床应用前景。 资料来源:应用计算机检索Medline1989-01/2006-12和Embase1986-01/2006-12期间有关造血干细胞、干细胞移植的文献,检索词“hematopoietic stem cells,stem transplantat... 目的:探讨造血干细胞的来源、细胞表面标志及其临床应用前景。 资料来源:应用计算机检索Medline1989-01/2006-12和Embase1986-01/2006-12期间有关造血干细胞、干细胞移植的文献,检索词“hematopoietic stem cells,stem transplantation”,并限定文章语言种类为English。检索万方数据库1990-01/2006-04期间相关文献,限定文章语言种类为中文,检索词“造血干细胞,干细胞移植”。 资料选择:对资料进行初审,选取实验包括造血干细胞来源、细胞表面标志及造血干细胞的移植相关文献,删除明显不随机临床实验研究。 资料提炼:共检索32篇关于研究造血干细胞的来源、细胞表面标志及造血干细胞的移植的随机和未随机实验研究,27篇符合纳入标准。排除的5篇实验是重复的同一研究。 资料综合:干细胞是一类具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的原始细胞。造血干细胞是干细胞的一种。成年人血液造血干细胞主要存在于骨髓,约占骨髓细胞的0.05%。其主要功能是通过不断分化产生各系造血祖细胞,终生为造血系统提供新细胞来源。造血干细胞群体存在着不同发育阶段的细胞,但血液干/祖细胞与其后续阶段的血细胞相比缺乏直接的形态学特征,所以对造血干细胞表面抗原的表达规律的研究,将为造血干细胞的进一步研究打下重要的基础。造血干细胞的应用包括造血干细胞移植和作为基因治疗的靶细胞。 结论:人体内可能存在CD34^+和CD34^-两种造血干细胞,造血干细胞可以促进造血功能的重建,并可作为基因治疗的靶细胞。 展开更多
关键词 造血干细胞 干细胞移植 综述文献
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