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黑龙江省猪繁殖与呼吸综合征血清流行病学调查与风险因素分析 被引量:1
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作者 王世达 孙伟 +1 位作者 文辉强 王靖飞 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第6期107-109,共3页
为了研究黑龙江省部分地区猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)血清学流行情况,采用ELISA方法对采集于72个猪场共计1237份血清样品(仔猪653份,母猪584份)中的猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(PRRSV)抗体进行了检测,并通过调查问卷对猪场感染P... 为了研究黑龙江省部分地区猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)血清学流行情况,采用ELISA方法对采集于72个猪场共计1237份血清样品(仔猪653份,母猪584份)中的猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(PRRSV)抗体进行了检测,并通过调查问卷对猪场感染PRRSV的潜在风险因素进行识别。结果表明:免疫猪群中仔猪PRRSV抗体流行率为61.5%i95%置信区间(CI):58.6,64.41,母猪为81.7%(95%CI:79.3,84.1);未免疫猪群中仔猪PRRSV抗体流行率为52.3%(95%CI:49.8,54.8),母猪为63.6%(95%CI:61.0,66.2);猪群PRRSV抗体流行率为92.9%(95%CI:89.0,96.8)。没有发现与该地区猪场感染PRRSV相关联的风险因素。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸系统综合征(PRRS) 血清学 风险因素
葡萄VvBAP1基因的克隆及表达特性分析 被引量:8
2
作者 张广科 肖培连 +3 位作者 侯丽霞 王文杰 马倩 刘新 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期829-834,共6页
以抗性葡萄品种‘F-242’组培苗为材料, 利用同源克隆法克隆了葡萄VvBAP1基因。测序结果显示, VvBAP1扩增片段大小为531 bp, 可编码176个氨基酸序列。利用生物信息学分析VvBAP1基因编码的蛋白序列显示, 该蛋白分子量为19.43 kDa, 含有... 以抗性葡萄品种‘F-242’组培苗为材料, 利用同源克隆法克隆了葡萄VvBAP1基因。测序结果显示, VvBAP1扩增片段大小为531 bp, 可编码176个氨基酸序列。利用生物信息学分析VvBAP1基因编码的蛋白序列显示, 该蛋白分子量为19.43 kDa, 含有保守的钙离子依赖性的C2结构域; 等电点pI为9.42; 不稳定系数为37.09, 推测为稳定的亲水性蛋白; 含有多个丝氨酸/苏氨酸磷酸化位点。实时荧光定量PCR表明, 该基因在根茎叶中均有表达, 其中在叶片中表达量较高; 盐胁迫、低温等逆境因子及逆境相关的信号物质, 如水杨酸和一氧化氮均可诱导VvBAP1的表达, 其中低温对其表达量影响更为显著, 推测该基因参与了葡萄抵御逆境胁迫的过程, 尤其是与低温相关的过程。 展开更多
关键词 葡萄 VvBAP1 基因克隆 表达特性分析
一例仔猪传染性胃肠炎的诊治 预览
3
作者 王云连 《畜牧兽医科技信息》 2017年第11期66-66,共1页
猪传染性胃肠炎是存在于现代养猪生产中较为严重的高度接触性的传染性疾病,引发该病的病原为冠状病毒科猪传染性胃肠炎病毒。病猪主要临床表现呕吐、腹泻、极度脱水等症状。每年12月至次年3月间呈现季节性流行趋势,对2周龄以下仔猪产... 猪传染性胃肠炎是存在于现代养猪生产中较为严重的高度接触性的传染性疾病,引发该病的病原为冠状病毒科猪传染性胃肠炎病毒。病猪主要临床表现呕吐、腹泻、极度脱水等症状。每年12月至次年3月间呈现季节性流行趋势,对2周龄以下仔猪产生重大影响,有较高的传染性和死亡率,一旦发生疫情会给养猪产业造成直接或间接的重大经济损失。 展开更多
关键词 仔猪 传染性胃肠炎 诊断 治疗 建议
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猪传染性胃肠炎病毒重组N蛋白抗原间接ELISA抗体检测方法的建立 预览 被引量:19
4
作者 孙东波 冯力 +7 位作者 时洪艳 刘胜旺 陈洪岩 佟有恩 李伟杰 王明 马思奇 陈建飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期 572-576,580,共6页
本研究以纯化的原核表达猪传染性胃肠炎病毒N蛋白为诊断抗原,建立了猪传染性胃肠炎病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法,将其命名为mTGE-ELISA。该抗原不与其他常见10种猪病的阳性血清发生交叉反应。批内和批间重复性试验的变异系数均小... 本研究以纯化的原核表达猪传染性胃肠炎病毒N蛋白为诊断抗原,建立了猪传染性胃肠炎病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法,将其命名为mTGE-ELISA。该抗原不与其他常见10种猪病的阳性血清发生交叉反应。批内和批间重复性试验的变异系数均小于15%;对仔猪免疫后不同时间的血清检测结果表明mTGE-ELISA与纯化病毒ELISA符合率达95.0%;mTGE-ELISA相对于VN试验的敏感性为96.3%、特异性为92.2%:现地试验中,mTGE-ELISA与Svanova TGEV/PRCV antibody diagnosis Kit的符合率达87.0%,通过中和试验复核结果表明,mTGE-ELISA的假阳性低于Svanova TGEV/PRCV antibody diagnosis Kit。本试验建立的mTGE-ELISA诊断方法具有良好的敏感性和特异性,为免疫猪群抗体监测和TGE流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。 展开更多
关键词 TGEV 重组N蛋白 间接ELISA 诊断
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猪生殖与呼吸综合征病毒NX/ZhW/07株的分离鉴定及其ORF5、Nsp2基因特性分析 预览
5
作者 满自萍 田宏 +5 位作者 吴锦艳 赵娜 尚佑军 杨春生 何生虎 刘湘涛 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期 498-502,共5页
将2007年宁夏送检的疑似猪高热病病料处理后接种于Marc—145细胞,结果Marc-145细胞出现典型的细胞病变,应用猪生殖与呼吸综合征(PRRS)病原检测试剂盒从细胞培养物中检测到PRRSV,将其命名为NX/ZhW/07。采用RT—PCR方法扩增该分离... 将2007年宁夏送检的疑似猪高热病病料处理后接种于Marc—145细胞,结果Marc-145细胞出现典型的细胞病变,应用猪生殖与呼吸综合征(PRRS)病原检测试剂盒从细胞培养物中检测到PRRSV,将其命名为NX/ZhW/07。采用RT—PCR方法扩增该分离株的ORF5和Nsp2基因,并进行序列分析。结果表明,NX/ZhW/07株的ORF5基因与GXHP-5、Hainan-1、HUB1、Hunan-1、JIANGSU、Jiangxi-1、LN-5和SHH-5株的核苷酸序列的同源性分别为92%~94%,其中与CH—1a株的核苷酸序列的同源性最高,达99.2%。Nsp2基因序列分析显示,出现30个氨基酸的不连续缺失,与国内高热病分离株JXA1的缺失位置完全一致。由此推测NX/ZhW/07株属于PRRSV美洲型变异株。 展开更多
关键词 猪生殖与呼吸综合征病毒 NX/Zhw/07株 ORF5基因 NSP2基因 序列分析
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鸡干扰素-γ基因的克隆及其重组表达载体的构建 预览
6
作者 李娜 张保平 王京仁 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第9期 73-74,共2页
鸡干扰素-(ChIFN-γ)是由鸡体或培养的鸡体细胞在于扰素诱生剂作用下所产生的一类非特异性的功能调节蛋白,具有明显的抗病毒、抗肿瘤、调节机体免疫功能等多种活性。为了拓展ChIFN-γ的抗病毒图谱,探讨基因工程干扰素在家禽养殖业... 鸡干扰素-(ChIFN-γ)是由鸡体或培养的鸡体细胞在于扰素诱生剂作用下所产生的一类非特异性的功能调节蛋白,具有明显的抗病毒、抗肿瘤、调节机体免疫功能等多种活性。为了拓展ChIFN-γ的抗病毒图谱,探讨基因工程干扰素在家禽养殖业中的应用前景,研究采用可以同时进行原核和真核表达的pQE trisystem系统进行ChIFN-γ的表达, 展开更多
关键词 基因工程干扰素 重组表达载体 干扰素-Γ 鸡体 SYSTEM系统 IFN-γ 克隆 机体免疫功能
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广西猪瘟流行毒株全基因组的克隆与序列分析 预览 被引量:5
7
作者 吴显实 罗廷荣 +6 位作者 廖素环 刘芳 陆芹章 黄伟坚 温荣辉 秦爱珍 余克伦 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期 125-128,共4页
参考已发表的猪瘟病毒(CSFV)Shimen株、HCLV株、Paderborn株的核苷酸序列,设计并合成11对引物,应用RT-PCR技术,成功地分11个片段扩增了CSFV广西流行毒株GXWZ02的全基因组.将这11个基因片段克隆,并测定了其核苷酸序列.应用计算机生物软件... 参考已发表的猪瘟病毒(CSFV)Shimen株、HCLV株、Paderborn株的核苷酸序列,设计并合成11对引物,应用RT-PCR技术,成功地分11个片段扩增了CSFV广西流行毒株GXWZ02的全基因组.将这11个基因片段克隆,并测定了其核苷酸序列.应用计算机生物软件Vector NTI将11个基因片段进行拼接,确认CSFV GXWZ02株全基因组序列的长度为12 296个核苷酸(GenBank收录号AY367767).将GXWZ02株与国内外已发表的Shimen、HCLV、39、Brescia、Eystrup、Glentorf、Alfort187、Paderborn、CS、ALD、GPE-、P97、LPC毒株进行全基因组核苷酸序列和推定的氨基酸序列比较,核苷酸同源性分别为85.4%、84.6%、88.7%、85.7%、85.7%、85.3%、85.6%、95.3%、85.7%、85.7%85.4%、83.4%、84.3%,推定的氨基酸同源性分别为92.6%、91.7%、94.2%、93.1%、92.9%、92.3%、93.0%、97.7%、92.6%、93.0%、92.6%、90.5%、90.6%.GXWZ02与Shimen、HCLV的全基因组序列及推定的氨基酸序列有明显差异,表明GXWZ02株在遗传性和抗原性上发生了较明显的变化.系统发育树分析,所比较的14株CSFV被分为2个群:GXWZ02、Paderborn和39这3个毒株被归为群1,其余的11个毒株被归为群Ⅱ,GXWZ02与Paderborn的亲缘关系最接近.将GXWZ02与Shimen、HCLV基因组中单个基因分别进行核苷酸及推定的氨基酸序列同源性比较,结果显示,基因Ems、E2、P7、NS2、NS5A的遗传变异程度大,而NS3、NS4A、NS4B的遗传性则相对保守. 展开更多
关键词 猪瘟病毒 基因组克隆 序列分析 GXWZ02株 猪瘟
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猪传染性胃肠炎的病理介绍与诊治报告 预览 被引量:1
8
作者 范增锋 《中国畜牧兽医文摘》 2013年第4期83-83,94共2页
猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒引起的一种高度接触性肠道传染病,此疫病对不同生长阶段的猪群都有易感性,一旦染病仔猪常出现呕吐、腹泻、脱水等症状。同时,对于5周龄以上的猪很少会出现死亡症状。猪传染性胃肠炎最早见于美国,... 猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒引起的一种高度接触性肠道传染病,此疫病对不同生长阶段的猪群都有易感性,一旦染病仔猪常出现呕吐、腹泻、脱水等症状。同时,对于5周龄以上的猪很少会出现死亡症状。猪传染性胃肠炎最早见于美国,到目前为止,已经是呈现出全世界蔓延的态势,是一种对猪养殖业造成危害较大的传染性疾病。笔者从事基层畜牧兽医工作多年,现将猪传染性胃肠炎的病理及诊断与防治介绍如下,供同行参考。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 诊治报告 病理 基层畜牧兽医工作 死亡症状 肠道传染病 传染性疾病 生长阶段
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CD44受体分子对口蹄疫病毒感染的影响 被引量:2
9
作者 谷玲军 郭慧琛 +3 位作者 郜原 韩世充 孙世琪 杨玉莹 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1482-1488,共7页
为探索CD44分子在口蹄疫病毒(FMDV)感染中的作用,揭示FMDV的感染机制,为开发阻断FMDV入侵的药物和高效疫苗提供新靶点。采用Western-blot、TCID50检测、激光共聚焦显微镜检测等方法,检测FMDV感染BHK21细胞后CD44的表达水平,以及用抑制... 为探索CD44分子在口蹄疫病毒(FMDV)感染中的作用,揭示FMDV的感染机制,为开发阻断FMDV入侵的药物和高效疫苗提供新靶点。采用Western-blot、TCID50检测、激光共聚焦显微镜检测等方法,检测FMDV感染BHK21细胞后CD44的表达水平,以及用抑制剂MβCD抑制CD44表达后对FMDV增殖的影响。Western-blot结果显示,FMDV感染BHK21细胞后,CD44的表达量显著上升(P〈0.05);用MβCD抑制内源性CD44表达后,FMDV的增殖水平显著降低(P〈0.05)。TCID50检测结果显示,用MβCD抑制CD44表达后,FMDV的表达显著降低(P〈0.05)。激光共聚焦结果显示,FMDV感染BHK21细胞后CD44的表达量上升。表明,CD44分子参与FMDV的感染过程,可能作为调控分子直接或间接参与FMDV的入侵过程,仍需要进一步研究。 展开更多
关键词 CD44 口蹄疫病毒 感染 TCID50 WESTERN-BLOT 激光共聚焦显微镜检测
猪瘟病毒E2基因的克隆及其重组腺病毒表达载体的构建 预览
10
作者 韩向敏 程小磊 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期 782-786,共5页
采用RT—PCR技术对猪瘟病毒(CSFV)E2基因进行了克隆、测序和特征分析。结果,得到了长度为1100bp、编码367个氨基酸残基的目的基因片段。将克隆到的E2基因插入到pAdTrack—CMV穿梭质粒中,再将重组穿梭质粒pAdTrack—CMV—E2用PineⅠ... 采用RT—PCR技术对猪瘟病毒(CSFV)E2基因进行了克隆、测序和特征分析。结果,得到了长度为1100bp、编码367个氨基酸残基的目的基因片段。将克隆到的E2基因插入到pAdTrack—CMV穿梭质粒中,再将重组穿梭质粒pAdTrack—CMV—E2用PineⅠ线性化后电转化携带有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞,经细菌内同源重组成功获得了含有CSFVE2基因的重组腺病毒表达载体。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2基因 腺病毒 表达载体
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水稻(Oryza sativa L.)α-淀粉酶基因的进化及组织表达模式 预览 被引量:5
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作者 廖登群 张洪亮 +1 位作者 李自超 John BENNETT 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期 17-27,共11页
α-淀粉酶在植物特别是谷类萌发种子淀粉降解中具有重要作用。水稻α-淀粉酶基因的结构、进化和表达研究已有报道,但多集中于OsAmy1和OsAmy3这两个亚族内基因间以及发芽种子中。不同亚族间的基因结构、进化及更多组织和时期的表达特点... α-淀粉酶在植物特别是谷类萌发种子淀粉降解中具有重要作用。水稻α-淀粉酶基因的结构、进化和表达研究已有报道,但多集中于OsAmy1和OsAmy3这两个亚族内基因间以及发芽种子中。不同亚族间的基因结构、进化及更多组织和时期的表达特点尚缺乏细致研究。本研究通过TblastN同源性比对及保守结构域分析揭示水稻基因组含有11个α-淀粉酶基因。生物信息学分析、系统进化树构建及半定量RT-PCR分析表明,该家族基因在结构上发生了明显的分化,具有清晰的进化层次,OsAmy5A和OsAmy4A是家族中较原始状态的基因;在表达和功能上也发生了明显分化,进化水平较高的基因发生了明显的时空表达特异性分化。OsAmy1A、OsAmy3A及OsAmy3D和OsAmy3E分别在保证种子植物世代传递、维持种子休眠过程中胚的微弱生命活动及保证种子萌发过程中能量的稳定持续供应上具有重要作用。 展开更多
关键词 水稻 Α-淀粉酶 基因结构 进化 表达
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PRRSV感染后猪TAP1基因定位表达改变及相关分析 预览
12
《中国猪业》 2012年第2期 72,共1页
抗原处理相关转运蛋白(TAP)将抗原肽从细胞质转移到内质网管腔.并且在组织相容性复合物1分子介导的抗原递呈路径中具有重要的作用。这个研究猪TAP1基因被映射到猪染色体7(SSC7)并且与标记SSC2802紧密相连(存留率=43%,LOD=15.1... 抗原处理相关转运蛋白(TAP)将抗原肽从细胞质转移到内质网管腔.并且在组织相容性复合物1分子介导的抗原递呈路径中具有重要的作用。这个研究猪TAP1基因被映射到猪染色体7(SSC7)并且与标记SSC2802紧密相连(存留率=43%,LOD=15.18)。 展开更多
关键词 P1基因 PRRSV感染 相关分析 定位表达 TA 抗原递呈 组织相容性
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口蹄疫病毒非结构蛋白单克隆抗体阻断ELISA的建立与效果评价 被引量:5
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作者 厍大亮 卢曾军 +4 位作者 曹轶梅 付元芳 孙普 李冬 刘在新 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1144-1151,共8页
使用组氨酸单克隆抗体作为捕获抗体,口蹄疫病毒非结构蛋白(NSP)3B单克隆抗体作为检测抗体,原核表达的口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC作为抗原,建立了一种以区分疫苗免疫动物与康复带毒动物或持续感染动物为目的,检测口蹄疫病毒非结构蛋白3... 使用组氨酸单克隆抗体作为捕获抗体,口蹄疫病毒非结构蛋白(NSP)3B单克隆抗体作为检测抗体,原核表达的口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC作为抗原,建立了一种以区分疫苗免疫动物与康复带毒动物或持续感染动物为目的,检测口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体的阻断ELISA(FMDV NSP B-ELISA)。使用本研究建立的ELISA检测了大量牛、羊及猪的血清,并用公式(1-样品D450nm/阴性对照D450nm)来计算血清阻断率,最终确定:血清阴断率≥0.46判为阳性,血清阻断率〈0.46判为阴性。根据此标准检测试验感染牛、羊及猪血清,敏感性≥85.4%;检测免疫健康牛、羊及猪血清,特异性≥99.2%。通过比较发现本研究建立的ELISA与Ceditest NS ELISA试剂盒有很高的符合率,对感染动物血清与疫区田间牛血清的阳性检出率均高于同类试剂盒。表明,本研究建立的ELISA可以作为田间疫情监测方法,在口蹄疫灭活疫苗免疫动物群体中使用。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白3ABC 3B单克隆抗体 阻断ELISA 免疫动物 感染动物 血清鉴别
猪流行性腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒猪Delta冠状病毒和猪轮状病毒多重RT-PCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 王睿敏 施开创 +5 位作者 黎宗强 尹彦文 谢守玉 莫胜兰 陆文俊 屈素洁 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期190-198,共9页
针对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪Delta冠状病毒(PDCoV)和猪轮状病毒(PRoV)基因序列,分别设计特异性引物,扩增PEDV N基因(750 bp)、TGEV M基因(544 bp)、PDCoV N基因(183 bp)和PRoV VP6基因(329 bp)。经过对... 针对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪Delta冠状病毒(PDCoV)和猪轮状病毒(PRoV)基因序列,分别设计特异性引物,扩增PEDV N基因(750 bp)、TGEV M基因(544 bp)、PDCoV N基因(183 bp)和PRoV VP6基因(329 bp)。经过对引物浓度、退火温度等反应条件的优化及特异性、敏感性、重复性试验,成功建立了快速鉴别检测PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV的多重RT-PCR方法。该方法仅对PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV检测为阳性,对口蹄疫病毒(FMDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪细小病毒(PPV)等主要病毒的扩增均为阴性。PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV重组质粒标准品的检出下限分别为1.57×10^2、1.57×10^3、1.57×10^2、1.57×10^2 copies/L。相同条件下的重复性试验获得均匀一致的结果。应用所建立的方法检测2017-2018年采集自广西各地的270份腹泻病料,结果显示,PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV的阳性率分别为15.56%、11.48%、10.74%、1.85%,并且存在混合感染现象。上述结果表明,所建立的多重RT-PCR方法可用于PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV的快速鉴别检测及流行病学调查。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪Delta冠状病毒 猪轮状病毒 多重RT-PCR 检测方法
野鸭源H3N8亚型禽流感病毒的系统进化和分子遗传特征分析
15
作者 王聪 费荣梅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1489-1496,共8页
为了解在江苏某湿地野生水禽中分离到的1株禽流感病毒的来源、流行特点、进化和分子遗传特征,将采集的野生水禽粪便经处理后,使用A型禽流感通用荧光RT-PCR检测,阳性样品接种10日龄SPF鸡胚,收取接种后第24~96小时的尿囊液,进行血凝试验,... 为了解在江苏某湿地野生水禽中分离到的1株禽流感病毒的来源、流行特点、进化和分子遗传特征,将采集的野生水禽粪便经处理后,使用A型禽流感通用荧光RT-PCR检测,阳性样品接种10日龄SPF鸡胚,收取接种后第24~96小时的尿囊液,进行血凝试验,随后对其进行全基因测序和遗传进化分析。结果显示,该毒株为H3N8亚型禽流感病毒,命名为A/Mallard/Xuyi/14/2015(H3N8)。HA蛋白的裂解位点氨基酸序列为PEKQTR↓GLF,无连续碱性氨基酸插入,符合典型低致病性禽流感病毒的特征;HA与NA的糖基化位点没有发生突变;NA耐药性氨基酸位点出现突变位点;PB2蛋白第627和701位氨基酸分别为谷氨酸(Glu)和天冬氨酸(Asn),是禽源流感病毒的特征性氨基酸。在Gen Bank中对该毒株进行序列比对分析,结果显示,与所测基因片段同源性最高的10株毒株基本位于我国东部候鸟迁徙路线上。结果表明,A/Mallard/Xuyi/14/2015(H3N8)株为从江苏分离的低致病性禽流感病毒,基因主要来源于我国东部候鸟迁徙路线上的禽流感病毒。 展开更多
关键词 禽流感病毒 A/Mallard/Xuyi/14/2015(H3N8) 迁徙候鸟 湿地
牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E0蛋白原核表达及间接ELISA方法的建立 预览 被引量:1
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作者 丁金花 马旭升 +4 位作者 蔡卓轩 肖盛中 吴鹏 盛金良 陈创夫 《石河子大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2018年第1期51-56,共6页
牛病毒性腹泻病毒 (BVDV) 能够引起牛羊的持续感染, 临床上很难对其根除, 建立该病有效检测方法对净化畜群具有重要意义.本研究构建 BVDV E0 蛋白基因重组表达载体在大肠杆菌中诱导表达, 用重组的 E0 蛋白为包被抗原, 确定抗原最佳包... 牛病毒性腹泻病毒 (BVDV) 能够引起牛羊的持续感染, 临床上很难对其根除, 建立该病有效检测方法对净化畜群具有重要意义.本研究构建 BVDV E0 蛋白基因重组表达载体在大肠杆菌中诱导表达, 用重组的 E0 蛋白为包被抗原, 确定抗原最佳包被浓度为 5 μg/mL, 最佳血清稀释比为 1∶10, 最佳封闭液为 5%脱脂奶粉, 最佳封闭条件为 37 ℃封闭 2h,酶标二抗稀释度为 1∶5000, 作用时间为 30 min, 样品临界值 +2 为 0.278. 该方法与 IDEXX 的 BVDV 间接 ELISA 试剂盒比较总符合率为 86%, 与口蹄疫病毒、 牛支原体、 牛传染性鼻气管炎病毒、 牛副结核、 牛布鲁氏菌病阳性血清无交叉反应.该检测方法能够用于 BVDV 抗体水平的临床检测,可为感染病畜的合理淘汰提供实验依据. 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 E0重组蛋白 间接ELISA
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HCV的Core-NS3嵌合抗原在大肠杆菌中的表达、纯化及初步应用 预览
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作者 彭祥兵 周志军 +3 位作者 桑爱军 余健 黄仕和 余模松 《微生物学免疫学进展》 2006年第4期 14-18,共5页
用已经构建的含有HCV的Core-NS3(C33e)嵌合基因的表达质粒pGEX TL1-2在大肠杆菌中进行了高效表达,表达产物纯化后通过SDS-PAGE、Western-blot、ELISA等一系列鉴定试验进行了分析,结果表明,该嵌合抗原具有高度特异性和良好的抗原活... 用已经构建的含有HCV的Core-NS3(C33e)嵌合基因的表达质粒pGEX TL1-2在大肠杆菌中进行了高效表达,表达产物纯化后通过SDS-PAGE、Western-blot、ELISA等一系列鉴定试验进行了分析,结果表明,该嵌合抗原具有高度特异性和良好的抗原活性,为研制诊断用HCV抗原奠定基础。 展开更多
关键词 HCV Core-NS3 嵌合抗原
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牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv的基因克隆及分子特征 预览 被引量:7
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作者 独军政 常惠芸 +6 位作者 丛国正 邵军军 林彤 高闪电 刘湘涛 才学鹏 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期 190-195,共6页
研究发现,4种整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8能够介导口蹄疫病毒感染自然宿主,其中αv是4种受体的共用亚基。本试验对牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv基因进行了克隆测序并对其编码蛋白的二级结构进行了预测。结果显示,牛αv... 研究发现,4种整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8能够介导口蹄疫病毒感染自然宿主,其中αv是4种受体的共用亚基。本试验对牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv基因进行了克隆测序并对其编码蛋白的二级结构进行了预测。结果显示,牛αv亚基基因的编码区含有3147个核苷酸,编码1048个氨基酸,其中信号肽由30个氨基酸组成,胞外域由957个氨基酸组成,跨膜区由29个氨基酸组成,胞浆域由32个氨基酸组成;在890和891位氨基酸之间有1个蛋白酶裂解位点(KR-D);胞外域含有13个潜在的糖基化位点(NXT/NXS)、2个Ca^2+结合位点[DX(D/N)XDGXXD]、18个半胱氨酸残基。该基因在GenBank中的登录号为DQ871215。牛αv基因与猕猴、家鼠、犬、人、鸡的αv基因的核苷酸序列同源性分别为91.0%、85.7%、90.1%、91.2%、73.1%,推导的氨基酸序列同源性分别为94.7%、91.6%、96.3%、95.0%、81.6%。牛αv亚基存在复杂多变的二级结构,这是其具有多种生物学功能的分子基础,其中1-30位、988-1017位氨基酸区段疏水性较强,形成表面蛋白结构的可能性较差,分别是该亚基的信号肽和跨膜区。本试验为进一步深入研究口蹄疫病毒与宿主细胞的相互关系奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 受体 牛αv基因 克隆 分子特征
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Ⅰ型鸭肝炎病毒间接免疫酶染色检测方法的建立 预览 被引量:5
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作者 陈海军 程安春 +1 位作者 汪铭书 陈孝跃 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期 369-373,共5页
以蔗糖密度梯度离心提纯的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV—Ⅰ)免疫兔制备兔抗DHV—Ⅰ抗体,建立了检测石蜡组织切片中DHV—Ⅰ抗原的间接免疫酶染色(indirect immunoperoxidase staining,ⅡS)方法,并对DHV—Ⅰ强毒人工感染死亡或濒死雏鸭的... 以蔗糖密度梯度离心提纯的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV—Ⅰ)免疫兔制备兔抗DHV—Ⅰ抗体,建立了检测石蜡组织切片中DHV—Ⅰ抗原的间接免疫酶染色(indirect immunoperoxidase staining,ⅡS)方法,并对DHV—Ⅰ强毒人工感染死亡或濒死雏鸭的各个组织器官进行了检测。结果表明,ⅡS与DHV—Ⅰ感染死亡或濒死雏鸭的肝等呈现阳性反应,与鸭瘟病毒、鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌、沙门菌、多杀性巴氏杆菌感染发病和死亡雏鸭的肝以及健康雏鸭的肝呈现阴性反应。感染DHV—Ⅰ死亡或濒死雏鸭的肝、脾、肾、心、胸腺、腔上囊、胰腺、十二指肠、盲肠、空肠、回肠、直肠的免疫组织化学检测呈阳性或强阳性,DHV—Ⅰ抗原主要分布于感染细胞的细胞质。该ⅡS法具有良好的特异性,可用于DHV—Ⅰ在感染雏鸭组织细胞中的亚细胞定位、DHV—Ⅰ感染雏鸭的实验室诊断、甲醛固定组织的回顾性诊断。 展开更多
关键词 免疫组织化学 检测 鸭肝炎病毒 抗原定位
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一株Asia1型口蹄疫病毒的全基因组序列测定及比较分析 预览 被引量:2
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作者 李爽 李勐 +3 位作者 高明春 于力 周国辉 王君伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期 205-211,共7页
参考GenBank上已发表的口蹄疫病毒(FMDV)全长基因组序列,设计了覆盖基因组全长的数对引物,通过RT-PCR方法对1株Asia1型(简称As01)FMDV进行分段克隆及序列测定,将测序结果利用软件进行拼接。结果表明,该毒株的FMDV基因组[不合pol... 参考GenBank上已发表的口蹄疫病毒(FMDV)全长基因组序列,设计了覆盖基因组全长的数对引物,通过RT-PCR方法对1株Asia1型(简称As01)FMDV进行分段克隆及序列测定,将测序结果利用软件进行拼接。结果表明,该毒株的FMDV基因组[不合poly(C)]全长8180nt,其中编码区为6987nt,5’和3’非编码区(UTR)分别为1078nt和95nt,3'UTR之后为20nt的poly(A)尾巴。将As01株与其他FMDV参考毒株利用分子生物学软件进行多序列比对分析表明,As01株与Asia 1/Jiangsu/China/2005、Asia 1/Isr 1/3/63、ZB/CHA/58等Asia 1型FMDV遗传进化关系较为密切,而与O型和A型FMDV遗传关系较远。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 基因组 序列分析
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