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RBL-2H3细胞不适合用于类过敏模型的建立 认领
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作者 张小雨 齐睿娟 +5 位作者 李西蒙 韩宜芯 费巧玲 蔡润兰 齐云 高源 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期438-443,共6页
目的考察RBL-2H3细胞是否适用于建立类过敏反应模型。方法用荧光定量聚合酶链反应考察RBL-2H3细胞上Mas相关G蛋白偶联受体(Mas-related G protein cou-pled receptor,Mrgpr)B2的表达情况;用显微镜观察和MTS法考察Compound 48/80对RBL-2H... 目的考察RBL-2H3细胞是否适用于建立类过敏反应模型。方法用荧光定量聚合酶链反应考察RBL-2H3细胞上Mas相关G蛋白偶联受体(Mas-related G protein cou-pled receptor,Mrgpr)B2的表达情况;用显微镜观察和MTS法考察Compound 48/80对RBL-2H3细胞活力的影响;测定不同浓度Compound 48/80刺激RBL-2H3细胞脱颗粒释放的β-己糖胺酶含量,对比RBL-2H3细胞、人肥大细胞系LAD2和大鼠腹腔肥大细胞(rat peritoneal mast cells,RPMCs)对Compound 48/80响应性的差异。结果RBL-2H3细胞可表达MrgprB2受体。Compound 48/80能剂量依赖性地诱导RBL-2H3细胞释放β-己糖胺酶,但在高剂量(≥20 mg·L^-1)时对RBL-2H3的细胞活力产生明显影响,此时释放的β-己糖胺酶应当是由于其细胞毒作用引起细胞破裂所致。同在无毒剂量(10 mg·L^-1)的Compound 48/80刺激下,LAD2和RPMCs的响应性良好,β-己糖胺酶释放量分别为空白对照的15.02倍和16.05倍,而RBL-2H3细胞仅为空白对照的2.35倍。结论RBL-2H3细胞对Compound 48/80的响应性差,表明其并不适用于建立类过敏反应模型。 展开更多
关键词 RBL-2H3 类过敏反应 脱颗粒 COMPOUND 48/80 β-己糖胺酶 MrgprX2
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基于BN大鼠动物模型的注射用丹参多酚酸致敏性研究 认领
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作者 张瀛化 张家丰 +5 位作者 万梅绪 李智 张燕欣 李德坤 杨晓英 鞠爱春 《药物评价研究》 CAS 2020年第8期1565-1569,共5页
目的通过BN大鼠全身主动过敏实验考察注射用丹参多酚酸的过敏反应症状,检测致敏后BN大鼠血清中的IgE、组胺及β-氨基己糖苷酶含量,考察注射用丹参多酚酸是否产生速发型过敏反应。方法以卵白蛋白为阳性药物、生理盐水为对照,注射用丹参... 目的通过BN大鼠全身主动过敏实验考察注射用丹参多酚酸的过敏反应症状,检测致敏后BN大鼠血清中的IgE、组胺及β-氨基己糖苷酶含量,考察注射用丹参多酚酸是否产生速发型过敏反应。方法以卵白蛋白为阳性药物、生理盐水为对照,注射用丹参多酚酸分为低、中、高(13.43、26.86、134.30 mg/kg)3个剂量组分别直接对BN大鼠进行致敏和激发,观察过敏反应症状;酶联免疫吸附法(ELISA)法检测致敏后动物血清中的IgE、β-氨基己糖苷酶及组胺的含量变化;激发后的BN大鼠立即处死,取肺组织进行HE染色。结果 BN大鼠全身主动过敏实验中仅卵白蛋白组有明显过敏反应;与对照组比较,BN大鼠致敏血清IgE水平仅卵白蛋白组显著升高(P<0.05),组胺检测各组间均无显著性差异,注射用丹参多酚酸中、高剂量组β-氨基己糖苷酶释放量显著降低(P<0.05);BN大鼠激发后,肺部组织病理结果仅阳性药组肺泡壁凝固性坏死,肺间质有大量炎症因子浸润。结论注射用丹参多酚酸未产生由IgE介导的I型过敏反应。 展开更多
关键词 注射用丹参多酚酸 全身主动过敏 BN大鼠 IGE 组胺 β-氨基己糖苷
食物致敏性评价RBL-2H3细胞模型的研究 认领 被引量:1
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作者 陈晨 孙拿拿 +1 位作者 李永宁 贾旭东 《实用预防医学》 CAS 2018年第5期513-516,共4页
目的 研究大鼠嗜碱性白血病粒细胞(ra basophil leukemia cells,RBL-2H3细胞)用于食物致敏性评价的可行性。方法 实验组和对照组动物血清按照不同倍数稀释,包括1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256和1:512,将稀释后的... 目的 研究大鼠嗜碱性白血病粒细胞(ra basophil leukemia cells,RBL-2H3细胞)用于食物致敏性评价的可行性。方法 实验组和对照组动物血清按照不同倍数稀释,包括1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256和1:512,将稀释后的血清分别与RBL-2H3细胞孵育4 h,然后用MEM完全培养基重新培养24 h。最后,向细胞分别加入含有10μg/ml和100μg/ml OVA的MEM溶液,孵育45 min,测定上清液中β-氨基己糖苷酶含量和细胞内总的β-氨基己糖苷酶含量,计算β-氨基己糖苷酶释放率。结果 对比不同的蛋白刺激浓度发现:100μg/ml OVA刺激后,稀释比例为1:4、1:8、1:16和1:32时,实验组和对照组差异有统计学意义(P〈0.05,P〈0.01);10μg/ml OVA刺激后,稀释比例仅1:4、1:8和1:16时,实验组和对照组差异有统计学意义(P〈0.05,P〈0.01)。对比不同的血清稀释倍数发现,1:4倍稀释时实验组β-氨基己糖苷酶释放率显著高于稀释比例1:256实验组,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论 初步建立了RBL-2H3细胞致敏模型,以期用于食物致敏性评价中。 展开更多
关键词 大鼠嗜碱性白血病粒细胞 卵清蛋白 β-氨基己糖苷酶 释放率
莽草酸抑制大鼠RBL-2H3细胞脱颗粒和组胺释放 认领 被引量:3
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作者 陈先勇 郑倩倩 +3 位作者 柳蔚 喻玲玲 王金龄 李世刚 《细胞与分子免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第5期656-659,663共5页
目的研究莽草酸对大鼠RBL-2H3细胞增殖和化合物48/80(C48/80)诱导后细胞脱颗粒情况及其机制。方法MTT法检测(3、10、30)μg/m L的莽草酸处理后,RBL-2H3细胞的增殖情况,甲苯胺蓝染色观察C48/80诱导RBL-2H3细胞脱颗粒的情况,底物法检... 目的研究莽草酸对大鼠RBL-2H3细胞增殖和化合物48/80(C48/80)诱导后细胞脱颗粒情况及其机制。方法MTT法检测(3、10、30)μg/m L的莽草酸处理后,RBL-2H3细胞的增殖情况,甲苯胺蓝染色观察C48/80诱导RBL-2H3细胞脱颗粒的情况,底物法检测(0、12.5、25、50、80、100)μg/m L C48/80处理后,RBL-2H3细胞内β-氨基己糖苷酶的释放,ELISA检测各处理组细胞上清液中组胺的含量。结果 (3、10、30)μg/m L莽草酸对RBL-2H3细胞增殖无明显抑制作用,RBL-2H3细胞脱颗粒与C48/80的剂量有一定量效关系;莽草酸能抑制大鼠RBL-2H3细胞脱颗粒;与阳性对照组相比,莽草酸处理C48/80刺激后的RBL-2H3细胞,其β-氨基己糖苷酶释放率和组胺释放量均显著降低。结论莽草酸可抑制大鼠RBL-2H3细胞脱颗粒,减少组胺释放。 展开更多
关键词 莽草酸 RBL-2H3细胞 β-氨基己糖苷酶 组胺
青藤碱对大鼠肥大细胞RBL-2H3活化的影响及机制 认领 被引量:1
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作者 史栋梁 郭会卿 《广东医学》 CAS 北大核心 2016年第4期477-480,共4页
目的探讨青藤碱对大鼠肥大细胞RBL-2H3活化的影响及其作用机制。方法将培养的大鼠RBL-2H3细胞随机分为对照Ⅰ组和青藤碱组。青藤碱组用青藤碱溶液处理,对照Ⅰ组则用PBS处理。利用生化法检测两组细胞培养上清中β-氨基己糖苷酶释放率,并... 目的探讨青藤碱对大鼠肥大细胞RBL-2H3活化的影响及其作用机制。方法将培养的大鼠RBL-2H3细胞随机分为对照Ⅰ组和青藤碱组。青藤碱组用青藤碱溶液处理,对照Ⅰ组则用PBS处理。利用生化法检测两组细胞培养上清中β-氨基己糖苷酶释放率,并用荧光定量PCR和Western blot方法检测细胞中信号调节蛋白α(SIRPα)mRNA和蛋白的表达水平。构建SIRPα过表达重组质粒或SIRPαsiRNA,将RBL-2H3细胞分为对照Ⅱ组、空载质粒组、过表达组、对照Ⅲ组、空白组、沉默组,对照Ⅱ组和对照Ⅲ组不进行转染,空载质粒组转染空白质粒,过表达组转染SIRPα过表达质粒,空白组转染非特异性siRNA,沉默组转染SIRPαsiRNA,转染结束后向对照Ⅲ组、空白组、沉默组添加青藤碱处理,并检测SIRPα的表达及炎症因子白细胞介素(IL)-4、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果与对照Ⅰ组比较,青藤碱组细胞中β-氨基己糖苷酶释放率显著降低(P=0.000),SIRPαmRNA及蛋白表达量均显著升高(P=0.000)。与对照Ⅱ组和空载质粒组比较,过表达组细胞中SIRPαmRNA表达量显著升高(P=0.000),IL-4、IL-6和TNF-α含量均明显降低(P=0.000)。与对照Ⅲ组和空白组比较,沉默组细胞SIRPαmRNA表达量显著降低(P=0.000),IL-4、IL-6和TNF-α含量均显著升高(P=0.000)。结论青藤碱处理能够显著抑制大鼠RBL-2H3细胞活化并上调细胞中SIRPα基因的表达,而SIRPα基因介导了青藤碱的这种抑制作用。 展开更多
关键词 青藤碱 RBL-2H3细胞 信号调节蛋白α β-氨基己糖苷酶 炎症因子
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资木瓜总苷对大鼠嗜碱性白血病-2H3肥大细胞脱颗粒的作用 认领 被引量:1
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作者 贾云莉 李世刚 +2 位作者 柳蔚 喻玲玲 曾小威 《医药导报》 CAS 2016年第8期819-822,共4页
目的 研究资木瓜总苷对大鼠嗜碱性白血病-2H3(RBL-2H3)肥大细胞脱颗粒释放β-己糖胺酶的影响。方法 培养大鼠来源的RBL-2H3细胞,资木瓜总苷与RBL-2H3细胞共培养,噻唑蓝(MTT)法检测资木瓜总苷对肥大细胞的毒性作用,用荧光分光光度法... 目的 研究资木瓜总苷对大鼠嗜碱性白血病-2H3(RBL-2H3)肥大细胞脱颗粒释放β-己糖胺酶的影响。方法 培养大鼠来源的RBL-2H3细胞,资木瓜总苷与RBL-2H3细胞共培养,噻唑蓝(MTT)法检测资木瓜总苷对肥大细胞的毒性作用,用荧光分光光度法定量检测RBL-2H3细胞释放的β-己糖胺酶量,计算其释放率,ELISA法检测细胞上清液肿瘤坏死因子(TNF)-α的释放量。结果 资木瓜总苷与不同抗原刺激的RBL-2H3细胞作用后,细胞的β-己糖胺酶释放率及TNF-α与对照组相比均显著降低。结论 资木瓜总苷可抑制RBL-2H3细胞脱颗粒,并存在着明显的量效关系,为研究抑制变态反应发生的机制提供了一定的依据。 展开更多
关键词 资木瓜总苷 嗜碱性白血病-2H3 大鼠 β-己糖胺酶 肿瘤坏死因子
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资木瓜乙酸乙酯萃取物对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响 认领
7
作者 郑倩倩 柳蔚 +2 位作者 喻玲玲 陈先勇 李世刚 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期2356-2358,共3页
目的研究资木瓜乙酸乙酯萃取物对不同抗原诱导的RBL-2H3细胞脱颗粒的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTT法测定不同浓度资木瓜乙酸乙酯萃取物对细胞活性的影响,采用底物法检测不同浓度资木瓜乙酸乙酯萃取物对不同抗原引起的细胞... 目的研究资木瓜乙酸乙酯萃取物对不同抗原诱导的RBL-2H3细胞脱颗粒的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTT法测定不同浓度资木瓜乙酸乙酯萃取物对细胞活性的影响,采用底物法检测不同浓度资木瓜乙酸乙酯萃取物对不同抗原引起的细胞内β-氨基己糖苷酶释放的影响,采用流式细胞分析仪检测不同浓度资木瓜乙酸乙酯萃取物对细胞表面受体FcεRIα表达的影响。结果在-定浓度范围内,对细胞活性没有显著性影响的资木瓜乙酸乙酯萃取物可显著抑制细胞内β-氨基己糖苷酶的释放和降低细胞表面受体FcεRIα的表达,且呈量效关系。结论资木瓜乙酸乙酯萃取物对RBL-2H3细胞脱颗粒具有显著的抑制作用,其作用可能与RBL-2H3细胞表面受体FcεRIα的表达降低有关。 展开更多
关键词 资木瓜乙酸乙酯萃取物 RBL-2H3细胞 细胞活性 β-氨基己糖苷酶 FcεRIα
清开灵注射液及其中间品类过敏反应的实验研究 认领 被引量:2
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作者 王欢 王庆甫 王庆国 《辽宁中医杂志》 CAS 北大核心 2015年第10期1947-1949,I0002共4页
目的:研究清开灵注射液及其生产过程中的中间品对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响,评价清开灵注射液及其中间品的类过敏反应。方法:将清开灵注射液以5个不同浓度稀释,其中间品以IC50浓度稀释,分别作用于RBL-2H3细胞,45 min后,底物显色法测定... 目的:研究清开灵注射液及其生产过程中的中间品对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响,评价清开灵注射液及其中间品的类过敏反应。方法:将清开灵注射液以5个不同浓度稀释,其中间品以IC50浓度稀释,分别作用于RBL-2H3细胞,45 min后,底物显色法测定β-氨基己糖苷酶释放度;ELISA法测定组胺释放量。结果:不同浓度的清开灵注射液对RBL-2H3细胞脱颗粒程度并无浓度依赖性,但最高浓度下脱颗粒程度相对较高。同时,在其不同中间品中,金银花促进RBL-2H3细胞脱颗粒作用最明显。结论:在体外,不同浓度的清开灵注射液均可不同程度的引起肥大细胞脱颗粒,释放活性物质,引起类过敏反应,而金银花可能是致敏的主要成分。本研究为进一步研究清开灵注射液不良反应的作用机制提供实验依据。 展开更多
关键词 清开灵注射液 中间品 β-氨基己糖苷酶 组胺 类过敏
致敏RBL-2H3细胞在清开灵、痰热清中药注射剂过敏性评价中的应用 认领 被引量:3
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作者 李黎明 金若敏 +3 位作者 谢家骏 姚广涛 符胜光 徐婷婷 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期86-89,共4页
目的探索采用血清抗体致敏的RBL-2H3细胞对清开灵、痰热清2种中药注射剂过敏性进行初步评价。方法以阳性药卵白蛋白(OVA)、清开灵注射液、痰热清注射液分别与Al(OH)3凝胶佐剂混合作为致敏源,Wistar大鼠sc致敏源制备抗体血清,采用放... 目的探索采用血清抗体致敏的RBL-2H3细胞对清开灵、痰热清2种中药注射剂过敏性进行初步评价。方法以阳性药卵白蛋白(OVA)、清开灵注射液、痰热清注射液分别与Al(OH)3凝胶佐剂混合作为致敏源,Wistar大鼠sc致敏源制备抗体血清,采用放免法检测血清总Ig E水平。取抗体血清致敏RBL-2H3细胞,48 h后再以药物激发致敏细胞,检测细胞脱颗粒后上清液中β-氨基己糖苷酶释放率。另取大鼠进行被动皮肤过敏(PCA)实验,观察动物皮肤蓝斑阳性反应率。结果与对照组相比,OVA、清开灵、痰热清组大鼠抗体血清总Ig E水平著显升高(P〈0.05、0.01)。致敏细胞脱颗粒结果显示:采用OVA和清开灵、痰热清注射液抗体血清致敏细胞,再经药物激发后RBL-2H3细胞上清液中β-氨基己糖苷酶释放率明显增加(P〈0.05、0.01),与对照组比较,最大的相对释放倍数分别为3.7、1.53、1.98。大鼠PCA实验结果显示,各给药组大鼠蓝斑阳性反应最高百分率分别为100%、100%、86%。RBL-2H3细胞实验与PCA实验结果具有较好的一致性。结论血清抗体致敏RBL-2H3细胞模型可以用于对中药注射剂过敏性的初筛或评价。 展开更多
关键词 致敏RBL-2H3细胞 清开灵注射液 痰热清注射液 过敏性 β-氨基己糖苷酶
资木瓜总苷抑制RBL-2H3细胞脱颗粒及其机制研究 认领 被引量:2
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作者 贾云莉 李世刚 +2 位作者 柳蔚 喻玲玲 曾小威 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期864-867,共4页
目的研究资木瓜总苷对RBL-2H3肥大细胞脱颗粒的影响及其作用机制。方法培养大鼠来源的RBL-2H3肥大细胞,资木瓜总苷与RBL-2H3细胞共培养,MTT检测资木瓜总苷对肥大细胞的毒性作用,用荧光分光光度法定量检测RBL-2H3细胞释放的β-己糖胺酶量... 目的研究资木瓜总苷对RBL-2H3肥大细胞脱颗粒的影响及其作用机制。方法培养大鼠来源的RBL-2H3肥大细胞,资木瓜总苷与RBL-2H3细胞共培养,MTT检测资木瓜总苷对肥大细胞的毒性作用,用荧光分光光度法定量检测RBL-2H3细胞释放的β-己糖胺酶量,计算其释放率,ELISA检测细胞上清TNF-α的释放,流式细胞术检测细胞表面高亲和力Ig E受体FcεRIα的表达,Western blot检测胞内信号Lyn/P-Lyn、PLCγ1/P-PLCγ1的表达。结果与空白对照组相比,资木瓜总苷可显著降低β-己糖胺酶释放率以及TNF-α释放量,降低肥大细胞表面FcεRIα表达,减弱肥大细胞Lyn和PLCγ1磷酸化水平。结论资木瓜总苷可显著抑制RBL-2H3肥大细胞脱颗粒,并存在着明显的量效关系,其作用机制可能是通过Ig E-FcεRIα-Lyn-PLCγ1通路抑制肥大细胞活化脱颗粒。 展开更多
关键词 资木瓜总苷 RBL-2H3 β-己糖胺酶 TNF-Α FcεRiα
资木瓜总苷抑制体外培养的原代小鼠骨髓源性肥大细胞脱颗粒 认领 被引量:2
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作者 贾云莉 李世刚 +2 位作者 柳蔚 喻玲玲 曾小威 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1350-1353,1357共5页
目的 研究资木瓜总苷对小鼠骨髓来源的肥大细胞(BMMC)脱颗粒影响。方法 从C57BL/6小鼠股骨获得骨髓细胞, 用含 100 mL/L胎牛血清、20 ng/mL IL-3和40 ng/mL干细胞因子(SCF)的 RPMI1640培养基, 培养4周; 流式细胞术检测CD117、 FcεR... 目的 研究资木瓜总苷对小鼠骨髓来源的肥大细胞(BMMC)脱颗粒影响。方法 从C57BL/6小鼠股骨获得骨髓细胞, 用含 100 mL/L胎牛血清、20 ng/mL IL-3和40 ng/mL干细胞因子(SCF)的 RPMI1640培养基, 培养4周; 流式细胞术检测CD117、 FcεRIα双阳性细胞的比例, 甲苯胺蓝染色法观察细胞的成熟度。资木瓜总苷与诱导成功的BMMC共培养, CCK-8法检测资木瓜总苷对BMMC的毒性作用, 荧光分光光度法定量检测β-己糖胺酶释放量, 并计算其释放率, ELISA检测类胰蛋白酶释放量。结果 原代培养诱导4周后, CD117 和FcεRIα双阳性细胞比例大于 95%, 且核被染蓝色,胞质为紫红色, 呈现肥大细胞特性。(0.01、 0.03、 0.10) mg/mL的资木瓜总苷作用12 h, 对BMMC无毒性作用。与空白对照组相比, 资木瓜总苷与交联牛血清白蛋白的二硝基苯半抗原(DNP-BSA)、A23187刺激的BMMC作用后, 细胞的β-己糖胺酶释放率和类胰蛋白酶的释放量均显著降低。结论 资木瓜总苷对不同抗原刺激原代培养的小鼠BMMC脱颗粒具有显著抑制作用, 且存在量效关系。 展开更多
关键词 资木瓜总苷 骨髓来源的肥大细胞 β-己糖胺酶 类胰蛋白酶
粉尘螨过敏原β-己糖胺酶的表达、纯化和生物信息学分析 认领 被引量:4
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作者 莫丽华 刘玉琳 +3 位作者 杨利桃 范小琴 刘志刚 杨平常 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期159-160,F0003共3页
合成粉尘螨β-己糖胺酶基因并连接至pET-28a载体,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组β-己糖胺酶蛋白。通过生物信息学软件分析粉尘螨β-己糖胺酶蛋白基本特性。表达菌经诱导后,高效表达出β-己糖胺酶蛋白,SDS-PAGE结... 合成粉尘螨β-己糖胺酶基因并连接至pET-28a载体,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组β-己糖胺酶蛋白。通过生物信息学软件分析粉尘螨β-己糖胺酶蛋白基本特性。表达菌经诱导后,高效表达出β-己糖胺酶蛋白,SDS-PAGE结果显示表达产物相对分子质量(Mr)约为55 000。粉尘螨β-己糖胺酶基因序列全长1 410 bp,编码469个氨基酸,位于胞外,无信号肽,属亲水性蛋白,其二级结构由14.71%的片层,30.70%的螺旋和54.58%的环组成。 展开更多
关键词 粉尘螨 &beta -己糖胺酶 原核表达
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SELEX技术筛选钙通道特异性核酸适配体及其抗肥大细胞活化的作用 认领 被引量:2
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作者 杨永强 陈晓红 +4 位作者 李怡然 陈波 冉新泽 杨涛 孙仁山 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期307-312,共6页
目的筛选针对Orai1分子第1膜外区蛋白的核酸适配体,探讨适配体通过拮抗钙离子释放激活通道(Ca2+ release activation channel,CRAC)抑制肥大细胞活化的效应。方法构建随机单链DNA文库,利用不对称PCR对单链DNA文库进行扩增。采用... 目的筛选针对Orai1分子第1膜外区蛋白的核酸适配体,探讨适配体通过拮抗钙离子释放激活通道(Ca2+ release activation channel,CRAC)抑制肥大细胞活化的效应。方法构建随机单链DNA文库,利用不对称PCR对单链DNA文库进行扩增。采用聚苯乙烯酶联板为介质的指数富集配体系统进化(systematic evolution of ligand by exponential enrichment,SELEX)技术筛选核酸适配体。利用酶联免疫吸附实验检测各轮筛选序列与靶蛋白的亲和力,验证适配体与靶蛋白的特异性结合;激光共聚焦显微镜观察适配体对细胞内钙离子浓度变化的影响;利用IgE介导的肥大细胞脱颗粒模型,观察适配体对β-氨基己糖苷酶释放的抑制效应。结果经过12轮SELEX筛选,获得了7条核酸适配体,其中AptamerY1解离常数(Kd值)为1.72×10-8 mol/L。以终浓度2 μg/mL的AptamerY1可抑制由IgE介导的人肥大细胞系LAD2钙离子内流,并对LAD2细胞的β-氨基己糖苷酶释放抑制率达95%。结论通过SELEX筛选,获得了7条针对Orai1分子第1膜外区的核酸适配体,所获得适配体可对肥大细胞LAD2钙内流有效抑制,进而抑制肥大细胞活化和β-氨基己糖苷酶的释放。 展开更多
关键词 肥大细胞 SELEX适体技术 钙离子释放激活通道 β-氨基己糖苷酶
聚山梨酯80化学组分对肥大细胞RBL-2H3溶酶体损伤的作用研究 认领 被引量:5
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作者 张锐 王玉 +3 位作者 邓向亮 周联 张海燕 杨明 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期371-376,共6页
目的研究8类聚山梨酯80的化学组分刺激肥大细胞RBL-2H3脱颗粒的作用,阐明聚山梨酯80中引发类过敏反应的物质基础。方法以不同浓度的8类聚山梨酯80的化学组分处理RBL-2H3细胞,测定β-氨基己糖苷酶释放率,并通过四甲基偶氮唑蓝法研究... 目的研究8类聚山梨酯80的化学组分刺激肥大细胞RBL-2H3脱颗粒的作用,阐明聚山梨酯80中引发类过敏反应的物质基础。方法以不同浓度的8类聚山梨酯80的化学组分处理RBL-2H3细胞,测定β-氨基己糖苷酶释放率,并通过四甲基偶氮唑蓝法研究受试物对RBL-2H3细胞的毒性作用。结果聚氧乙烯山梨醇酐一油酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐二油酸酯和聚氧乙烯异山梨醇一油酸酯均能直接刺激RBL-2H3细胞脱颗粒,呈浓度依赖性;聚氧乙烯山梨醇酐和聚氧乙烯异山梨醇在本研究的浓度范围内均不能直接刺激RBL-2H3细胞脱颗粒;聚氧乙烯山梨醇酐三油酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐四油酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐二油酸酯刺激RBL-2H3细胞脱颗粒的作用较弱,并呈浓度依赖性。聚氧乙烯山梨醇酐一油酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐二油酸酯和聚氧乙烯异山梨醇一油酸酯有明显的细胞毒性;聚氧乙烯山梨醇酐和聚氧乙烯异山梨醇无细胞毒性;聚氧乙烯山梨醇酐三油酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐四油酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐二油酸酯显示低的细胞毒性,并呈浓度依赖性。结论聚氧乙烯异山梨醇一油酸酯是聚山梨酯80最主要的毒性物质来源,必须加以限量控制。 展开更多
关键词 聚山梨酯80 化学组分 类过敏反应 肥大细胞 β-氨基己糖苷酶 四甲基偶氮唑蓝
甜瓜β-氨基己糖苷酶基因家族的全基因组分析 认领 被引量:1
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作者 赵爱奇 刘嘉荣 +1 位作者 郝金凤 哈斯阿古拉 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期185-188,205,F0003共6页
β-氨基己糖苷酶(β-Hexosaminidase,β-Hex,EC 3.2.1.52)是生物界广泛存在的一种糖苷水解酶.通过全基因组信息鉴定甜瓜β-氨基己糖苷酶基因家族,初步在甜瓜全基因组数据库中发现5个β-Hex基因成员,采用Pfam等在线软件预测候选蛋白的... β-氨基己糖苷酶(β-Hexosaminidase,β-Hex,EC 3.2.1.52)是生物界广泛存在的一种糖苷水解酶.通过全基因组信息鉴定甜瓜β-氨基己糖苷酶基因家族,初步在甜瓜全基因组数据库中发现5个β-Hex基因成员,采用Pfam等在线软件预测候选蛋白的结构域,去除2个不完整的基因,最后将筛选出的3个基因与拟南芥、青椒、番茄、可可树、谷子、葡萄和黄瓜的相应基因编码的蛋白序列进行进化分析比对、建立系统发生树和保守基序的预测分析.结果表明,进化树亚族成员中基序相同,并且在保守区序列高度相似;亚族之间基序差异也较小,保守区序列也具有较高相似性. 展开更多
关键词 甜瓜 β-氨基己糖苷酶 进化分析 生物信息学
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脉络宁针剂致敏RBL-2H3细胞的实验研究 认领
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作者 余海滨 刘青 崔琳 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2013年第3期245-248,共4页
目的:通过研究临床含有绿原酸的中药注射剂脉络宁针剂对RBL-2H3细胞(大鼠嗜碱性白血病细胞系)脱颗粒、释放介质的影响,探讨绿原酸与中药注射剂发生严重过敏反应的关系,为临床安全用药提供依据。方法:以含有绿原酸的中药针剂脉络... 目的:通过研究临床含有绿原酸的中药注射剂脉络宁针剂对RBL-2H3细胞(大鼠嗜碱性白血病细胞系)脱颗粒、释放介质的影响,探讨绿原酸与中药注射剂发生严重过敏反应的关系,为临床安全用药提供依据。方法:以含有绿原酸的中药针剂脉络宁为研究对象,以不含绿原酸的葛根素针剂为阴性对照,以绿原酸对照品为阳性对照,通过对体外培养RBL-2H3细胞模型的作用,观察该细胞模型发生脱颗粒反应和细胞形态变化,检测β-己糖胺酶释放量。结果:脉络宁、绿原酸组可显著引起RBL-2H3细胞释放β-己糖胺酶(P〈0.05);葛根素注射液组能不同程度促进β-己糖胺酶的释放。结论:脉络宁组可显著引起RBL-2H3细胞释放β-己糖胺酶,提示绿原酸与中药注射剂脉络宁发生严重过敏反应有密切关系。 展开更多
关键词 中药注射剂 RBL-2H3细胞 β-己糖胺酶
抗炎一号对活化嗜碱性白血病细胞脱颗粒的影响 认领
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作者 章晓鹰 徐平 +2 位作者 张慧敏 李斌 余建秀 《国际中医中药杂志》 2013年第7期607-609,共3页
目的探讨抗炎一号对抗二硝基苯基化免疫球蛋白IgE(anti-dinitrophenolspecificimmunoglubinE,抗-DNPIgE)与二硝基苯基化牛白蛋白(dinitrophenol-bovineserumalbumin,DNP-BSA)复合物刺激大鼠嗜碱性自血病细胞(RBL-2H3)脱颗粒与... 目的探讨抗炎一号对抗二硝基苯基化免疫球蛋白IgE(anti-dinitrophenolspecificimmunoglubinE,抗-DNPIgE)与二硝基苯基化牛白蛋白(dinitrophenol-bovineserumalbumin,DNP-BSA)复合物刺激大鼠嗜碱性自血病细胞(RBL-2H3)脱颗粒与白细胞介素4(IL-4)释放的抑制作用,从而阐明其抗过敏机理。方法用RBL.2H3细胞脱颗粒抑制率来评价抗炎一号细胞膜稳定作用,RBL-2H3细胞释放颗粒中的β-氨基己糖苷酶(β-hexosaminidase)与白细胞介素4(IL-4)分别用PNAG(p-硝基苯基-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷,β-nitrophenyl-N-acetyl-β-D-glucosaminide)底物反应比色法与ELISA方法检测。结果抗炎一号能抑制RBL-2H3细胞释放13.氨基己糖苷酶与IL.4,药物浓度为8μg/ml时即具有42.47%的脱颗粒抑制作用泸〈0.01),浓度增至80gg/ml、800μg/ml、8000μg/ml时,抑制率分别为52.40%、68.26%、72.15%,对IL-4释放抑制作用分别为13.87%、23.27%、31.95%、39.99%。抗炎一号B.氨基己糖苷酶释放最大抑制率为地塞米松最大抑制率的84.48%,抑制IL-4作用与地塞米松相当。结论抗炎一号具有肥大细胞膜稳定作用,故可干预I型变态反应。 展开更多
关键词 抗炎一号 嗜碱性白血病细胞 脱颗粒 β-氨基己糖苷酶 IL-4 地塞米松
Studies on the Degranulation of RBL-2H3 Cells Induced by Traditional Chinese Medicine Injections 认领
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作者 Jia-Ming Tang Jiong Liu Wenbin Wu 《中医(英文)》 2012年第4期200-208,共9页
Aims: To study RBL-2H3 cell degranulation phenomena induced by some TCMIs through cell morphological and ultra-structural observation, released enzyme activity and establish RBL-2H3 cell degranulation test indicated ... Aims: To study RBL-2H3 cell degranulation phenomena induced by some TCMIs through cell morphological and ultra-structural observation, released enzyme activity and establish RBL-2H3 cell degranulation test indicated by β- hexosaminidase activity as a method to evaluate TCMIs at nonclinical stage. Methods: RBL-2H3 cells were used to study the degranulation by co-culture with positive control C48/80 and some TCMIs through morphological and ultra-structure observation, β-hexosaminidase activity detection. RBL-2H3 cell degranulation test was established to detect β-hexosaminidase activity caused by 17 kinds of TCMIs and their ingredients. The cytotoxicity effect of some TCMIs on both RBL 2H3 and BRL cells was measured by CCK-8 assay. Results: Toluidine blue staining and ultra-structure of electronic microscope observation of treated RBL-2H3 cells showed degranulation morphologically. Detection of β-hexosaminidase activity in the supernatant of treated cells showed some TCMIs had elevated enzyme release rates. Further analysis of the ingredients and compound in Tanreqing Injection and Shengmai Injection showed Scutellaria baicalensis Georgi in Tanreqing Injection, Red ginseng and Fructus Schisandrae Chinensis in Shengmai Injection were responsible to the degranulation of RBL-2H3 cells. Osmotic pressures and pH influenced RBL-2H3 degranulation. High Osmotic pressure of Tanreqing Injection and low pH of chlorogenic acid at 2.5 and 5.0 mmol/L congcentration might be responsible to high β-hexosaminidase activity. Most of the TCMIs inducing degranulation had cytotoxicity effect for both RBL-2H3 and BRL cells, but some TCMIs inducing degranulation had no cytotoxicity effect. Conclusion: Some TCMIs can induce degranulation of RBL-2H3 cells;RBL-2H3 cell degranulation test can be used in non-clinical stage to detect the risk causing anaphylactoid reactions. Osmotic pressures and pH influenced RBL-2H3 degranulation, and they should be measured before testing. The mechanism of degranulation caused by some TCMIs is cytotoxic 展开更多
关键词 TRADITIONAL Chinese MEDICINE INJECTION (TCMI) RBL-2H3 Cells DEGRANULATION β-Hexosaminidase Anaphylactoid Reaction
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常用注射用辅料刺激RBL-2H3细胞脱颗粒的作用 认领 被引量:4
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作者 关翠雯 金晶 +5 位作者 李佳 李萍 邱玉文 涂家生 孙会敏 黄芝瑛 《毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期 98-101,共4页
目的研究多种注射用辅料刺激肥大细胞RBL-2H3脱颗粒的作用,建立和完善注射用辅料引发类过敏反应的筛选评价体系。方法以不同浓度的注射用辅料羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)、甲氧基聚乙二醇-聚乳酸共聚物40/60(mPEG-PDLLA40/60)、聚... 目的研究多种注射用辅料刺激肥大细胞RBL-2H3脱颗粒的作用,建立和完善注射用辅料引发类过敏反应的筛选评价体系。方法以不同浓度的注射用辅料羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)、甲氧基聚乙二醇-聚乳酸共聚物40/60(mPEG-PDLLA40/60)、聚乙二醇400(PEG400)、聚乙二醇600(PEG600)、聚氧乙烯蓖麻油(CrEL)和吐温80处理RBL-2H3细胞,测定β-氨基己糖苷酶释放率,并通过MTT法进一步研究有脱颗粒作用的受试物对RBL-2H3细胞的毒性作用。结果 HP-β-CD、高浓度的mPEG-PDLLA40/60(40 mg/ml)和吐温80(3.0 mg/ml)均能直接刺激RBL-2H3细胞脱颗粒,呈浓度依赖性;PEG400、PEG600和CrEL在本研究的浓度范围内均不能直接刺激RBL-2H3细胞脱颗粒。HP-β-CD有明显的细胞毒性,但不呈浓度依赖性;mPEG-PDLLA40/60无细胞毒性;吐温80没有明显的细胞毒性,但呈浓度依赖性。结论 RBL-2H3细胞的β-氨基己糖苷酶释放试验方法灵敏、重复性好,其结果与临床报道有一定的相关性,提示其有评价注射用辅料类过敏反应的潜在应用价值。高浓度的吐温80直接刺激肥大细胞脱颗粒的作用可能是由其细胞毒性引起的。 展开更多
关键词 注射用辅料 类过敏反应 肥大细胞 β-氨基己糖苷酶 MTT
中药注射剂致RBL-2H3细胞脱颗粒的研究 认领 被引量:8
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作者 刘炯 汤家铭 吴文斌 《上海中医药大学学报》 CAS 2012年第5期85-91,共7页
目的:探讨中药注射剂引起RBL-2H3细胞脱颗粒情况及其机制。方法:RBL-2H3细胞分别与阳性药物C48/80及15种中药注射剂作用,从形态学和超微结构观察、β-氨基己糖苷酶释放检测等方面研究RBL-2H3细胞脱颗粒情况。用WST-8法检测中药注射剂... 目的:探讨中药注射剂引起RBL-2H3细胞脱颗粒情况及其机制。方法:RBL-2H3细胞分别与阳性药物C48/80及15种中药注射剂作用,从形态学和超微结构观察、β-氨基己糖苷酶释放检测等方面研究RBL-2H3细胞脱颗粒情况。用WST-8法检测中药注射剂对RBL-2H3细胞和BRL细胞的细胞毒作用。结果:甲苯胺蓝染色和电镜观察细胞超微结构变化从形态学上证明中药注射剂引起RBL-2H3细胞脱颗粒。上清中β-氨基己糖苷酶释放率检测表明脉络宁、清开灵、参麦和痰热清注射液明显促进酶的释放,酶释放率在20%以上,与阴性对照组比较差异有显著性意义(P〈0.05)。进一步的研究发现,痰热清注射液成分中的黄芩和生脉注射液成分中的红参、五味子与RBL-2H3细胞的脱颗粒有关。大部分中药注射剂致RBL-2H3细胞脱颗粒的作用与细胞毒作用相关,但有的中药注射剂致脱颗粒无细胞毒作用。结论:一些中药注射剂可致RBL-2H3细胞脱颗粒,中药注射剂中有的成分与RBL-2H3细胞脱颗粒相关;有的中药注射剂致RBL-2H3细胞脱颗粒与细胞毒作用有关,而pH和渗透压可影响细胞的脱颗粒。 展开更多
关键词 中药注射剂 RBL-2H3细胞 脱颗粒 β-氨基己糖苷酶 类过敏反应
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