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鞘鞍醇激酶-2在转化生长因子-β1诱导心脏成纤维细胞增殖与活化过程中作用 预览
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作者 史承勇 王波 +3 位作者 郭显 刁繁荣 余慧 赵仙先 《临床军医杂志》 CAS 2019年第5期525-528,531共5页
目的探讨鞘鞍醇激酶-2(SPHK2)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导心脏成纤维细胞增殖与活化中的作用。方法分离乳鼠心脏成纤维细胞并体外培养。利用慢病毒分别将对照或SPHK2小分子干扰RNA(siRNA)转染心脏成纤维细胞。采用Western blot检测... 目的探讨鞘鞍醇激酶-2(SPHK2)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导心脏成纤维细胞增殖与活化中的作用。方法分离乳鼠心脏成纤维细胞并体外培养。利用慢病毒分别将对照或SPHK2小分子干扰RNA(siRNA)转染心脏成纤维细胞。采用Western blot检测siRNA对SPHK2蛋白的干扰效率;采用酶联免疫吸附法检测心脏成纤维细胞1-磷酸鞘鞍醇(S1P)水平;采用TGF-β1处理诱导对照组和SPHK2 siRNA组心脏成纤维细胞增殖与活化后,CCK8法检测心脏成纤维细胞增殖能力,Western blot检测心脏成纤维细胞活化的标记蛋白α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)的表达,q-PCR检测心脏成纤维细胞胶原蛋白Ⅰ(ColⅠ)和胶原蛋白Ⅲ(ColⅢ)的mRNA水平。结果慢病毒转染SPHK2 siRNA后,心脏成纤维细胞SPHK2蛋白表达水平显著低于对照组,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。SPHK2 siRNA组心脏成纤维细胞S1P水平显著低于对照组,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。给予TGF-β1处理后,SPHK2 siRNA组心脏成纤维细胞增殖能力、α-SMA蛋白和mRNA表达、ColⅠ和ColⅢ的mRNA表达显著低于对照组,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论下调SPHK2表达可抑制TGF-β1诱导心脏成纤维细胞的增殖与活化。 展开更多
关键词 心脏成纤维细胞 鞘鞍醇激酶-2 转化生长因子-Β1 增殖 活化
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白藜三醇通过调控AUF1抑制心肌成纤维细胞的增殖及胶原分泌
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作者 钱云 魏叶 +5 位作者 张凤云 张尧 胡晓芹 李承宗 张超群 王志荣 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1118-1123,1141共7页
目的:研究白藜三醇(resveratrol,Res)对乳鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖和胶原分泌的影响,并探讨其可能的机制。方法:采用胰酶、Ⅰ型胶原酶双酶消化法、差速贴壁法和免疫荧光法分离培养及鉴定乳鼠CFs;将2~3代CFs随机分... 目的:研究白藜三醇(resveratrol,Res)对乳鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖和胶原分泌的影响,并探讨其可能的机制。方法:采用胰酶、Ⅰ型胶原酶双酶消化法、差速贴壁法和免疫荧光法分离培养及鉴定乳鼠CFs;将2~3代CFs随机分为Con组(正常对照组)、DMSO组(溶剂对照组)、AngⅡ组(模型组)、AngⅡ+Res组(药物干预组)。通过CCK-8及EdU染色法检测细胞增殖;羟脯氨酸法检测细胞胶原分泌水平;qRT-PCR检测AU碱基富集区RNA结合蛋白1(AU-rich element RNAbinding factor 1,AUF1)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)mRNA的表达;Western blot检测AUF1和TGF-β1蛋白表达。结果:成功提取新生大鼠原代CFs且波形蛋白(Vimentin)显著阳性;与Con组比,AngⅡ组细胞增殖和胶原分泌增加,AUF1、TGF-β1 m RNA及蛋白表达水平升高;经Res干预后,AngⅡ+Res组细胞增殖和胶原分泌水平较AngⅡ组降低,AUF1、TGF-β1 mRNA及蛋白表达减少;而DMSO组上述指标与Con组相比差异无统计学意义。结论:白藜三醇对AngⅡ诱导的乳鼠CFs的增殖和胶原分泌具有抑制作用,其机制可能与抑制了AUF1和TGF-β1的表达有关。 展开更多
关键词 白藜三醇 AUF1 AngⅡ 心肌纤维化 心肌成纤维细胞
北五味子多糖通过ERK1/2通路对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖的作用机制 预览
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作者 孙红霞 胡波 林慧娇 《北华大学学报:自然科学版》 CAS 2019年第5期640-644,共5页
目的观察北五味子多糖(polysaccharide of Schisandra chinensis,SCP)对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(CFb)增殖作用,并探讨其作用机制.方法以培养的新生Wistar大鼠乳鼠CFb为实验模型,实验分为对照组、模型组... 目的观察北五味子多糖(polysaccharide of Schisandra chinensis,SCP)对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(CFb)增殖作用,并探讨其作用机制.方法以培养的新生Wistar大鼠乳鼠CFb为实验模型,实验分为对照组、模型组、3个药物剂量组.采用胰酶消化、差速贴壁法培养CFb;四氮唑盐(MTT)比色法检测CFb增殖;羟脯氨酸(Hyp)法测定胶原含量;分光光度计测定CFb中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)水平;硝酸还原酶法和分光光度法分别测定不同干预条件下CFb培养液中一氧化氮合酶(NOS)活性及一氧化氮(NO)水平;免疫组化技术检测CFb中细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)蛋白表达.结果SCP能够显著抑制AngⅡ诱导的CFb增殖(P<0.05或P<0.01),降低Hyp含量,提高SOD活力,降低MDA水平(P<0.05,P<0.01),提高NOS活性及NO水平(P<0.05,P<0.01),减低ERK1/2蛋白表达(P<0.05,P<0.01).结论SCP可通过抑制ERK1/2信号通路提高NOS活性,并升高NO水平,增强抗AngⅡ诱导的CFb增殖能力. 展开更多
关键词 北五味子多糖 血管紧张素Ⅱ 心肌成纤维细胞 ERK1/2通路
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新生大鼠心肌成纤维细胞的内皮细胞分化潜能
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作者 张俊悦 殷国田 郭志坤 《解剖学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期443-449,共7页
目的探讨心肌成纤维细胞(CFs)向内皮细胞分化以及成血管潜能。方法新鲜左心室组织,体外分离、培养、纯化CFs,利用内皮细胞诱导液对第3代CFs诱导培养,连续诱导培养28 d后,换用内皮细胞培养基(ECM),并消化传代扩增至第3代。观察诱导... 目的探讨心肌成纤维细胞(CFs)向内皮细胞分化以及成血管潜能。方法新鲜左心室组织,体外分离、培养、纯化CFs,利用内皮细胞诱导液对第3代CFs诱导培养,连续诱导培养28 d后,换用内皮细胞培养基(ECM),并消化传代扩增至第3代。观察诱导细胞生长情况和形态变化,利用免疫细胞化学法、流式细胞术和血管形成分析实验对诱导后细胞的内皮细胞标志物的表达和功能特性进行评价。结果新生大鼠第3代CFs,呈三角形、梭形和多边形,增殖速度迅速;波形蛋白(vimentin)、盘状结构受体2(DDR2)均呈阳性表达。诱导第3天细胞开始汇合,21 d部分细胞形成串珠样连接,28 d出现细胞汇集成环状样形状;免疫组织化学标记vWF和CD31呈阳性表达;细胞免疫荧光标记vWF、CD34、CD105均呈阳性表达;流式细胞术检测诱导后细胞表面标志物CD31表达率为50.5%,对照组CD31表达率为5.82%。结论血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)体外定向诱导CFs可使其向血管内皮细胞分化,并表现其功能特征。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 碱性成纤维生长因子 心肌成纤维细胞 内皮细胞分化 细胞培养 大鼠
虾青素对AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞胶原蛋白合成的影响 预览
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作者 陈素琴 黎明江 +1 位作者 吴限 张文艳 《医学研究杂志》 2018年第2期36-40,共5页
目的探讨虾青素对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心脏成纤维细胞(cardiacfibroblasts,CFs)胶原蛋白合成的影响。方法体外培养sD乳鼠的CFs,分为5组,分别为对照组、AngⅡ组、AngII+虾青素低剂量组(20μmol/L)、Ang... 目的探讨虾青素对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心脏成纤维细胞(cardiacfibroblasts,CFs)胶原蛋白合成的影响。方法体外培养sD乳鼠的CFs,分为5组,分别为对照组、AngⅡ组、AngII+虾青素低剂量组(20μmol/L)、AngⅡ+虾青素中剂量组(40txmol/L)、AngII组+虾青素高剂量组(80μmol/L),干预24h后,采用Westernblot法检测I型胶原蛋白的含量,RT-PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscleactin,α-SMA)的含量,活细胞计数试剂盒(CCK8)测定CFs增殖情况。结果AngⅡ可以使I型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白表达上升(P〈0.05),CFs增殖增加,不同浓度的虾青素均可以抑制这种作用(P〈0.05)。结论在一定的浓度范围内,虾青素可抑制心脏成纤维细胞胶原蛋白的合成,抑制心脏成纤维细胞的增殖。 展开更多
关键词 虾青素 心脏成纤维细胞 心肌纤维化 I型胶原蛋白
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阿司匹林对TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞增殖的抑制作用
6
作者 甘诗泉 徐旖旎 +1 位作者 付凌云 沈祥春 《中国医院药学杂志》 北大核心 2018年第19期1996-1999,共4页
目的:研究阿司匹林(ASA)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导心肌成纤维细胞(CFs)异常增殖的干预作用并探讨其可能的作用机制。方法:通过组织块法以及差速贴壁法获得并培养CFs,免疫细胞化学法检测波形蛋白的表达用于鉴定CFs,建立TGF... 目的:研究阿司匹林(ASA)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导心肌成纤维细胞(CFs)异常增殖的干预作用并探讨其可能的作用机制。方法:通过组织块法以及差速贴壁法获得并培养CFs,免疫细胞化学法检测波形蛋白的表达用于鉴定CFs,建立TGF-β1诱导CFs增殖模型,实验分为对照组(无血清DMEM)、TGF-β1组(TGF-β1,20 ng·mL^-1)、TGF-β1+ASA组(ASA,0.5、1、2μmol·L^-1)。MTT法检测ASA对TGF-β1诱导CFs增殖的影响,羟脯氨酸含量试剂盒检测细胞内以及培养液上清中羟脯氨酸的含量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)分析Smad2、Smad3蛋白表达的变化。结果:MTT结果显示,与对照组比较,TGF-β1显著诱导CFs增殖,与TGF-β1组相比,ASA可显著抑制TGF-β1诱导的CFs增殖;羟脯氨酸含量检测显示,与对照组比较,TGF-β1组羟脯氨酸含量明显升高,与TGF-β1组相比,ASA可降低其含量;Western blot结果显示,与对照组比较,TGF-β1显著诱导Smad2、Smad3蛋白水平表达升高,与TGF-β1组相比,ASA可显著降低Smad2、Smad3蛋白水平的表达。结论:ASA对TGF-β1诱导的CFs增殖具有显著的抑制作用,其作用机制可能与抑制TGF-β1/Smads信号通路下游蛋白Smad2、Smad3的表达相关。 展开更多
关键词 阿司匹林 转化生长因子Β1 心肌成纤维细胞 心肌纤维化
粉防己碱对心肌成纤维细胞增殖、活化的影响 预览 被引量:2
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作者 李乾 常亮 +1 位作者 苏冬梅 马旭 《北京大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第2期331-334,共4页
目的:探讨粉防己碱(tetrandrine,Tet)对大鼠心肌成纤维细胞增殖、活化的影响。方法:采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8C,CCK-8)的方法检测不同浓度Tet对心肌成纤维细胞增殖的抑制作用;采用蛋白质印迹(Western blot)法检测Tet对由... 目的:探讨粉防己碱(tetrandrine,Tet)对大鼠心肌成纤维细胞增殖、活化的影响。方法:采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8C,CCK-8)的方法检测不同浓度Tet对心肌成纤维细胞增殖的抑制作用;采用蛋白质印迹(Western blot)法检测Tet对由转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)诱导的心肌成纤维细胞β-链蛋白(β-catenin)、波形蛋白(vimentin,Vm)、纤连蛋白(fibronectin,Fn)及平滑肌α-肌动蛋白(smooth muscleα-actin,SMA)的表达上调的影响作用;采用实时荧光定量PCR的方法检测Tet作用下,TGF-β诱导的心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原(collagen-1,Col-1)和Ⅲ型胶原(collagen-3,Col-3)的表达上调的变化。结果:CCK-8检测结果显示,分别用0.5、1、2、4、8μmol/L的Tet处理心肌成纤维细胞,其增殖活力分别下降至对照组的94.4%、84.9%、74.9%、63.8%、50.3%,差异有统计学意义(所有P值<0.05;1、2、4、8μmol/L处理组P值<0.001)。Western blot检测结果显示:5μg/L的TGF-β显著上调β-catenin、Vm、Fn及SMA的表达(P值分别为0.001、0.008、0.010、0.001),而用0.5μmol/L的Tet预处理心肌成纤维细胞后,可以阻断由TGF-β诱导的β-catenin、Fn、SMA的表达上调(P值分别为0.009、0.005、0.019),但不改变Vm的表达变化(P>0.05)。荧光定量PCR检测结果表明:用0.5μmol/L的Tet预处理心肌成纤维细胞,可以减弱由TGF-β诱导的Ⅰ型及Ⅲ型胶原的表达上调,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:Tet可以显著抑制心肌成纤维细胞的增殖,并阻断由TGF-β诱导的心肌成纤维细胞活化,据此推断,Tet可能具有抗心肌纤维化的作用,进而阻断心肌重塑。 展开更多
关键词 粉防己碱 心肌成纤维细胞 心肌重塑
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ALK4对心肌梗死后心肌纤维化的影响和作用机制 预览
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作者 陈一和 林慧 +2 位作者 逯朝阳 相银 刘俊 《中国现代医生》 2018年第36期29-33,共5页
目的研究ALK4在心梗后心肌纤维化中的作用及分子机制。方法利用ALK4^+/-小鼠和野生型C57BL/6小鼠构建心梗模型,通过天狼星红染色检测纤维化,用WB、Real-timePCR、免疫组化技术检测梗死边缘区α-SMA、collagen1a-1、CTGF的表达,探讨ALK4... 目的研究ALK4在心梗后心肌纤维化中的作用及分子机制。方法利用ALK4^+/-小鼠和野生型C57BL/6小鼠构建心梗模型,通过天狼星红染色检测纤维化,用WB、Real-timePCR、免疫组化技术检测梗死边缘区α-SMA、collagen1a-1、CTGF的表达,探讨ALK4在心梗后心肌纤维化中的作用。分离及培养原代ALK4^+/-小鼠心脏成纤维细胞,在低氧刺激下(1%O2)研究ALK4对心脏成纤维细胞增殖、分化和分泌合成功能的影响。结果心梗后第28天,梗死边缘区ALK4蛋白表达水平升高,ALK4敲除后则显著少其表达。与野生型同窝对照小鼠(WT)相比,ALK4^+/-小鼠梗死后生存率提高[ALK^+/-(77.1)%vsWT(54.3)%,P<0.05],心脏功能改善[LVEF:ALK^+/-(48.5±3.5)%vsWT(29.3±3.8)%,P<0.05;FS:ALK^+/-(24.5±2.2)%vsWT(13.9±1.9)%,P<0.05],梗死边缘区心肌纤维化减少[ALK^+/-(32.1±2.0)%vsWT(22.5±2.2)%,P<0.05]。细胞实验中,ALK4敲除则显著抑制低氧刺激下心脏成纤维细胞增殖[ALK4^+/-(2.68±0.23)vsW(1.86±0.42),P<0.05]、分化[ALK4^+/-(2.72±0.21)vsWT(1.43±0.31),P<0.05]和分泌合成[ALK4^+/-(9.87±0.74)vsWT(4.13±1.31),P<0.05]。ALK4^+/-敲除抑制低氧下Smad3的磷酸化水平[ALK4^+/-(1.64±0.17)vsWT(2.79±0.32),P<0.05]而不影响Smad4表达量。结论ALK4表达抑制可显著抑制心梗后心肌纤维化,改善心室功能和生存率以及钝化心脏成纤维细胞对低氧刺激的反应,其作用主要通过抑制Smad3/4信号通路。 展开更多
关键词 ALK4 心肌梗死 心肌纤维化 心脏成纤维细胞
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Angiotensin Ⅱ upregulates fibroblastmyofibroblast transition through Cx43- dependent CaMKⅡ and TGF-β1 signaling in neonatal rat cardiac fibroblasts
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作者 Li Cao Yunlin Chen +4 位作者 Li Lu Yihao Liu Yaowen Wang Jinqi Fan Yuehui Yin 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2018年第9期843-852,共10页
关键词 成纤维细胞 TGF-β 血管收缩 老鼠 心脏 新生 CX43 细胞激活
心脏成纤维细胞生物表型多样性
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作者 常玉巧 李辞霞 +1 位作者 贾阳阳 郭志坤 《解剖学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期317-323,共7页
目的探讨心脏成纤维细胞(CFs)生物表型多样性。方法新生1-3天SD大鼠12只,胰蛋白酶/胶原酶联合消化法分离培养新60只生大鼠CFs,比较原代和传代培养细胞形态学变化,免疫组织化学学检测鉴定常见成纤维细胞标记波形蛋白(vimentin)、成... 目的探讨心脏成纤维细胞(CFs)生物表型多样性。方法新生1-3天SD大鼠12只,胰蛋白酶/胶原酶联合消化法分离培养新60只生大鼠CFs,比较原代和传代培养细胞形态学变化,免疫组织化学学检测鉴定常见成纤维细胞标记波形蛋白(vimentin)、成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1)和盘状结构域受体(DDR2)的表达,细胞免疫荧光检测CFs干细胞标记nanog、c-kit、sca-1、CD73和CD90的表达,细胞免疫荧光三标技术检测CFs干细胞标记间的共表达情况。结果酶联合消化法分离培养的CFs收获细胞量大,第3代细胞活力好、纯度高。Vimentin、FSP1和DDR2在CFs中均表达,但DDR2在CFs中呈强表达。部分CFs分别表达nanog、c-kit、sca-1、CD73和CD90,部分nanog阳性的CFs分别和CD73、CD90和sca-1,及其CD90和sca-1存在共表达,nanog-+/CD73-+共表达阳性率最高(59.02%±8.39%),与其他3组相比差异均有极显著性(P〈0.01);而nanog-+/CD90-+共表达阳性率与nanog-+/sca-1-+之间差异无显著性(P〉0.05),但这两组与CD90-+/sca-1-+相比差异均有极显著性(P〈0.01);CD90-+/sca-1-+共表达阳性率均低于其他3组,差异具有极显著意义(P〈0.01)。结论 CFs是具有干细胞特征混合细胞群,在表型上具有多样性。 展开更多
关键词 心脏成纤维细胞 干细胞标记 细胞培养 免疫组织化学 新生大鼠
Cardiac Fibroblast-Specific Activating Transcription Factor 3 Promotes Myocardial Repair after Myocardial Infarction
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作者 Yu-Lin Li Wen-Jing Hao +2 位作者 Bo-Ya Chen Jing Chen Guo-Qi Li 《中华医学杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2018年第19期2302-2309,共8页
关键词 成纤维细胞 心肌 心脏 修理 梗塞 激活 自我保护 CF
Macrophage migration inhibitory factor suppresses angiotensin II-induced expression of fibrosis-associated genes by inactivating Smad3 and activating Nrf2 in cardiac fibroblasts
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作者 XIAO Zhen ZOU Xiao +8 位作者 ZHU Jie-ning LIANG Jing-nan LIN Qiu-xiong DENG Chun-yu YANG Min FU Yong-heng XUE Yu-mei WU Shu-lin SHAN Zhi-xin 《岭南心血管病杂志:英文版》 CAS 2017年第4期312-319,共8页
AMPK激活通过负性调控C/EBPβ抑制鼠心脏成纤维细胞TGFpl表达 被引量:2
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作者 肖晗 朴成实 +1 位作者 陈瑞飞 张幼怡 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期123-128,共6页
腺昔酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)激活具有抗纤维化的作用,但其具体机制仍不十分清楚。本研究拟在心脏成纤维细胞中,明确AMPK激活对血管紧张素II(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)引起的转化生长因子β1(transform... 腺昔酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)激活具有抗纤维化的作用,但其具体机制仍不十分清楚。本研究拟在心脏成纤维细胞中,明确AMPK激活对血管紧张素II(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)引起的转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGFβ1)表达的作用及其具体机制。分离培养成年小鼠心脏成纤维细胞,酶联免疫吸附实验检测TGFβ1蛋白表达,免疫印迹实验检测AMPK活性和CCAAT/增强子结合蛋白β(CCAAT/enhancer-binding protein β,C/EBPβ)表达,双荧光素酶报告基因实验检测TGFβ1转录活性。结果显示,给予AMPK激活剂AICAR预处理可以抑制AngⅡ引起的TGFβ1产生增加,这一抑制作用可被AMPK抑制剂compoulld C逆转。生物信息学分析显示在小鼠Tgtbl启动子区存在C/EBPβ转录因子可能的结合位点。双荧光素酶报告基因实验表明,对于转染Tgfbl启动子区序列质粒的小鼠胚胎成纤维细胞,AngⅡ可以增加TGFβI转录活性;但是对于转染缺失C/EBPβ结合位点的Tgfbl启动子区序列质粒的细胞,AngⅡ则不能增加其转录活性,提示C/EBPβ介导了AngⅡ引起的TGFβ1转录表达。进一步免疫印迹实验显示,AICAR可以抑制AngⅡ引起的C/EBPβ增加。上述结果表明,AMPK激活可以抑制AngII引起的TGFβ1表达增加,其作用机制是通过抑制转录因子C/EBPβ表达,进而抑制TGFβ1表达。该研究结果提示了AMPK抗纤维化作用的一个新机制。 展开更多
关键词 腺苷酸活化蛋白激酶 C/EBPΒ 心脏成纤维细胞 转化生长因子Β1
丹酚酸B抑制血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖与分化的作用 被引量:5
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作者 黄海烽 王春花 +5 位作者 赵玲璐 罗红 徐旖旎 陶玲 张敏 沈祥春 《中国实验方剂学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第13期128-132,共5页
目的:研究丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal-B)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的新生SD大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖与分化的影响,探讨Sal-B是否具有对抗心肌纤维化的作用。方法:胰酶消化,差速贴... 目的:研究丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal-B)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的新生SD大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖与分化的影响,探讨Sal-B是否具有对抗心肌纤维化的作用。方法:胰酶消化,差速贴壁分离纯化CFs,抗波形蛋白免疫细胞化学法鉴定CFs。建立AngⅡ诱导的CFs增殖分化模型。实验分为空白组(无血清DMEM),模型组(1×10^(-6)mol·L^(-1)AngⅡ),Sal-B低剂量组(2.5×10^(-5)mol·L^(-1)Sal-B+1×10^(-6)mol·L^(-1)AngⅡ)及Sal-B高剂量组(5×10^(-5)mol·L^(-1)Sal-B+1×10^-6mol·L^(-1)AngⅡ)共4组。Sal-B预保护1 h,加入AngⅡ共同作用24 h后,采用噻唑蓝(MTT)法分析Sal-B对AngⅡ诱导CFs增殖的细胞存活率,采用试剂盒(消化法)测定羟脯氨酸含量,蛋白质免疫印迹(Western blot)分析α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)的表达情况。结果:MTT结果显示,与空白组比较,模型组AngⅡ显著诱导CFs异常增殖(P〈0.01),与模型组比较,Sal-B低、高剂量显著抑制AngⅡ诱导的CFs增殖(P〈0.01);羟脯氨酸含量测定结果显示,与空白组比较,模型组羟脯氨酸含量显著升高(P〈0.01),与模型组比较,Sal-B低、高剂量组含量均显著降低(P〈0.01);Western blot结果显示,与空白组比较,模型组α-SMA,ColⅠ蛋白表达显著上调(P〈0.01),与模型组比较,Sal-B低、高剂量组α-SMA,ColⅠ蛋白表达明显下调(P〈0.05,P〈0.01)。结论:Sal-B可抑制AngⅡ诱导的CFs增殖,减少α-SMA,ColⅠ蛋白的表达,对AngⅡ体外诱导心肌纤维化进程具有抑制作用。 展开更多
关键词 血管紧张素Ⅱ 心肌纤维化 心肌成纤维细胞 丹酚酸B 增殖 分化
慢病毒-基质细胞衍生因子-1α-绿色荧光蛋白载体转染大鼠心肌成纤维细胞 被引量:1
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作者 朱占占 侯宾 +3 位作者 孙雯雯 院慧芳 张永春 蔡新华 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期43-47,共5页
目的探讨慢病毒-基质细胞衍生因子-1α-绿色荧光蛋白(LV-SDF-1α-GFP)对心肌成纤维细胞影响,最佳感染条件及目的蛋白表达和分泌特点。方法差速贴壁法分离培养乳大鼠心肌成纤维细胞,观察和免疫荧光鉴定。不同滴度及条件的LV-SDF-1α-GF... 目的探讨慢病毒-基质细胞衍生因子-1α-绿色荧光蛋白(LV-SDF-1α-GFP)对心肌成纤维细胞影响,最佳感染条件及目的蛋白表达和分泌特点。方法差速贴壁法分离培养乳大鼠心肌成纤维细胞,观察和免疫荧光鉴定。不同滴度及条件的LV-SDF-1α-GFP转染心肌成纤维细胞,观察荧光表达,探索最佳转染条件。LV-SDF-1α-GFP目的基因病毒以及阴性对照CON145病毒的转染心肌成纤维细胞,绘制生长曲线,探索转染对心肌成纤维细胞的增殖有无明显影响。利用最佳转染剂量组转染心肌成纤维细胞,斑点印迹法(Dot blotting)检测SDF-1α目的蛋白分泌。计量资料进行统计学分析。结果心肌成纤维细胞具很高活性,传至4代纯度高,折光度好,无自发性搏动。LV-SDF-1α-GFP最佳转染感染复数(MOI)值为10,添加感染增强液,聚凝胺组感染效果最好,效率达80%。LV-SDF-1α-GFP组以及阴性对照CON145组对心肌成纤维细胞毒性作用小,细胞形态无明显变化,与非转染组生长曲线相似,差异无统计学意义(P〉0.05)。转染LV-SDF-1α-GFP的心肌成纤维细胞培养至第4天SDF-1α蛋白分泌量达最高值,差异具有统计学意义(P〈0.05)。结论 LV-SDF-1α-GFP载体对心肌成纤维细胞具很高的转染效率,细胞毒性小,并能够分泌SDF-1α目的蛋白。 展开更多
关键词 心肌成纤维细胞 慢病毒-基质细胞衍生因子-1α绿色荧光蛋白载体 转染 斑点印迹法 乳大鼠
苦参碱对PDGF诱导心肌成纤维细胞胶原分泌及表型转化的保护作用及其可能机制 被引量:1
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作者 李晓娜 常煜胤 +1 位作者 路明 刘春梅 《临床心血管病杂志》 CSCD 北大核心 2017年第6期592-595,共4页
目的:观察苦参碱对血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)诱导心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)胶原分泌及表型转化的影响,同时探讨PI3K/Akt通路在其中发挥的作用。方法:通过胰酶消化法和差速贴壁法... 目的:观察苦参碱对血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)诱导心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)胶原分泌及表型转化的影响,同时探讨PI3K/Akt通路在其中发挥的作用。方法:通过胰酶消化法和差速贴壁法分离、纯化及培养大鼠CFs,将CFs随机分为5组:空白对照组(培养时不加药物);PDGF组(10μg/L PDGF);苦参碱小剂量组(10μg/L PDGF+0.25mmol/L苦参碱);苦参碱中剂量组(10μg/LPDGF+0.5mmol/L苦参碱);苦参碱大剂量组(10μg/L PDGF+1.0mmol/L苦参碱)。ELISA法检测细胞上清液中胶原蛋白含量,RT-PCR法测定平滑肌激动蛋白-α(α-SMA)、PI3K和Akt mRNA的表达;Western Blot法测p-Akt及α-SMA蛋白的表达。结果:干预48h后,与空白对照组比较,PDGF组上清液胶原含量明显增加(P〈0.05);α-SMA、PI3K、Akt mRNA及α-SMA、p-Akt蛋白表达上调(P〈0.05);与PDGF组比较,苦参碱小、中和大剂量组CFs上清液胶原含量均明显减少(P〈0.05),α-SMA、PI3K、Akt mRNA及α-SMA、p-Akt蛋白表达均下调(P〈0.05)。结论:苦参碱可能通过下调PI3K/Akt通路减少胶原分泌、抑制表型转化,从而发挥抗心肌纤维化作用。 展开更多
关键词 心肌纤维化 心肌成纤维细胞 PDGF 苦参碱 PI3K/Akt
石斛碱抑制高钠盐诱导的心脏成纤维细胞增殖
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作者 刘婵 刘娟 商黔惠 《中国动脉硬化杂志》 北大核心 2017年第7期649-654,共6页
目的 探讨高钠盐诱导心脏成纤维细胞(CF)增殖的作用机制及石斛碱的干预效应。方法 体外组织块贴壁法培养大鼠CF,实验分为3组:对照组(139 mmol/L Na+)、高钠盐组(161 mmol/L Na+)、石斛碱组(161 mmol/L Na++10-5mol/L石斛碱... 目的 探讨高钠盐诱导心脏成纤维细胞(CF)增殖的作用机制及石斛碱的干预效应。方法 体外组织块贴壁法培养大鼠CF,实验分为3组:对照组(139 mmol/L Na+)、高钠盐组(161 mmol/L Na+)、石斛碱组(161 mmol/L Na++10-5mol/L石斛碱),培养48 h。CCK-8细胞增殖试剂盒与MTT比色法检测各组细胞增殖情况;Western blot检测细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)、磷酸化核因子κBp65(p-NF-κB p65)蛋白表达水平;实时荧光定量PCR检测细胞单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)mRNA表达水平。结果 与对照组比较,高钠盐组培养48 h后,CF增殖明显增加;与高钠盐组相比,10-5mol/L石斛碱显著抑制CF增殖。与对照组相比,高钠盐组CF中p-ERK1/2、p-NF-κBp65蛋白表达增高,炎性因子MCP-1、VCAM-1和ICAM-1 mRNA表达增加;与高钠盐组相比,石斛碱可明显降低PC-NA、p-NF-κB p65蛋白表达及MCP-1 mRNA表达,但对p-ERK1/2、VCAM-1和ICAM-1表达无明显影响。结论 高钠盐诱导CF增殖及炎性因子表达,其机制与p-ERK1/2、p-NF-κB p65表达上调有关;石斛碱抑制上述效应,其机制与抑制p-NF-κB p65有关。 展开更多
关键词 高钠盐 心脏成纤维细胞 石斛碱 细胞增殖
Effects of linagliptin and liraglutide on glucose- and angiotensin Ⅱ-induced collagen formation and cytoskeleton degradation in cardiac fibroblasts in vitro
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作者 Xian-wei WANG Fen-xi ZHANG +4 位作者 Fen YANG Zu-feng DING Nidhi AGARWAL Zhi-kun GUO Jawahar L MEHTA 《中国药理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2016年第10期1349-1358,共10页
瞄准:象 Glucagon 一样 peptide-1 (GLP-1 ) 收缩筋和 dipeptidyl peptidase-4 (DPP-4 ) 禁止者不能仅仅降低血葡萄糖层次,而且减轻在心肌的局部缺血和高血压以后的心脏的改变。在现在的学习,我们在葡萄糖上调查了一个 DPP-4 禁止者(... 瞄准:象 Glucagon 一样 peptide-1 (GLP-1 ) 收缩筋和 dipeptidyl peptidase-4 (DPP-4 ) 禁止者不能仅仅降低血葡萄糖层次,而且减轻在心肌的局部缺血和高血压以后的心脏的改变。在现在的学习,我们在葡萄糖上调查了一个 DPP-4 禁止者(linagliptin ) 和 GLP-1 使活跃之物(liraglutide ) 的效果 -- 并且血管收缩素 II (Ang II ) 在 vitro 在心脏的成纤维细胞导致了骨胶原形成和细胞骨架重组,并且阐明相关 mechanisms.Methods:心脏的成纤维细胞从 6-week-old C57BL/6 老鼠的心被孤立,然后为 24 h 暴露了到葡萄糖或 Ang II 的不同集中。fibrotic 的表达式发信号(象 ERK1/2 和 NF-&#x003BA 一样的 fibronectin, collagen-1, -3 和 -4), ;在成纤维细胞的 B-p65 用西方的弄污被检验试金。F 肌动朊降级在在成纤维细胞的共焦的显微镜与玫瑰精 phalloidin.Results 染色了的转换激光下面被检测:葡萄糖(1-40 mmol/L ) 和 Ang II (10 <sup>&#x02212;8</sup>-10<sup>&#x02212;5</sup> mol/L ) dose-dependently 增加了 fibronectin,骨胶原, phospho-ERK1/2 和 phospho-NF-&#x003BA 的表示;在心脏的成纤维细胞的 B-p65。葡萄糖的高集中(&#x02265; 40 mmol/L ) 并且 Ang II (&#x02265; 10 <sup>&#x02212;6</sup> mol/L ) 引起了 F 肌动朊(更少的集会 F 肌动朊纤维和更多拆卸纤维) 的重要降级。ERK1/2 禁止者 U0126 (10 &#x003BC; mol/L ) 并且 NF-&#x003BA; B 禁止者 JSH-23 (10 &#x003BC; mol/L ) 两个显著地压制了葡萄糖 -- 并且血管收缩素在心脏的成纤维细胞的导致 II 的 fibronectin 和骨胶原表情。而且,有 liraglutide (10-100 nmol/L ) 的预告的处理或 linagliptin (3 和 30 nmol/L ) 显著地减少了葡萄糖 -- 并且 fibrotic 信号, phospho-ERK1/2 和 phospho-NF-&#x003BA 的 Ang 导致 II 的表示;在心脏的成纤维细胞的 B-p65。而且,然而,有 liraglutide (30 nmol/L ) 的预告的处理或 liraglutide (100 nmol/L ) 显著地禁止了导致葡萄糖的 F 肌动 展开更多
关键词 心脏的改变 心脏的成纤维细胞 葡萄糖 血管收缩素 II 骨胶原形成 细胞骨架组织 LINAGLIPTIN LIRAGLUTIDE
骨髓间充质干细胞条件膜微粒对心脏成纤维细胞的影响 预览 被引量:3
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作者 陈棉 王珏 +6 位作者 耿志敏 潘璐璐 金增游 贾连红 卢家程 黄念念 褚茂平 《温州医科大学学报》 CAS 2016年第9期625-628,共4页
目的:探讨体外缺氧条件下骨髓间充质干细胞(MSCs)凋亡膜微粒(MSC-MPs)对心脏成纤维细胞(CFs)增殖、迁移和胶原合成的影响。方法:提取SD大鼠MSCs,在缺氧低营养条件下培养,收集上清液并提取MSC-MPs,用MSC-MPs刺激大鼠CFs,用CCK-8... 目的:探讨体外缺氧条件下骨髓间充质干细胞(MSCs)凋亡膜微粒(MSC-MPs)对心脏成纤维细胞(CFs)增殖、迁移和胶原合成的影响。方法:提取SD大鼠MSCs,在缺氧低营养条件下培养,收集上清液并提取MSC-MPs,用MSC-MPs刺激大鼠CFs,用CCK-8和划痕实验分别检测CFs增殖和迁移,qRT-PCR检测CFs中I型胶原、II型胶原、血管平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波型蛋白和纤连蛋白的合成情况。结果:CFs被MSC-MPs刺激后,与对照组比较,其增殖能力明显增加(P〈0.05),迁移能力无明显变化(P〉0.05),I型胶原、I型胶原、波型蛋白和纤连蛋白合成增加(均P〈0.05)。结论:体外缺氧条件下MSC-MPs可促进CFs的增殖和胶原合成能力,而对CFs的迁移能力无明显影响。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 膜微粒 心脏成纤维细胞 增殖 迁移 胶原合成
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微小RNA-1在高糖培养下心肌成纤维细胞致纤维化中的调控作用 被引量:3
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作者 王安 孙波 +2 位作者 仇佳 乔世刚 王琛 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1113-1117,共5页
目的探讨微小RNA-1(miR-1)在高糖培养下心肌成纤维细胞致纤维化中的作用。方法取1-3日龄SD大鼠心尖组织培养原代成纤维细胞,选用3-4代细胞并随机分为正常糖空病毒组(CON+Lv-Vehicle组)、正常糖miR-1沉默组(CON+Lv-miR1组)、高... 目的探讨微小RNA-1(miR-1)在高糖培养下心肌成纤维细胞致纤维化中的作用。方法取1-3日龄SD大鼠心尖组织培养原代成纤维细胞,选用3-4代细胞并随机分为正常糖空病毒组(CON+Lv-Vehicle组)、正常糖miR-1沉默组(CON+Lv-miR1组)、高糖空病毒组(HG+Lv-Vehicle组)、高糖miR-1沉默组(HG+Lv-miR1组)4组,分别置于含葡萄糖5.5mmol/L(正常糖)或25mmol/L(高糖)的DMEM培养基中,并分别接种含miR-1沉默序列的慢病毒或慢病毒载体,于12h后更换新鲜培养基。接种病毒3d后病毒转染效率达90%时,采用实时定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-1表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ的分泌量,蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ、基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)及自噬相关蛋白微管相关蛋白l轻链3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)、死骨片重组蛋白1(P62/SQSTM1)、组织蛋白酶D(Cathepsin D)的蛋白表达。结果与CON+Lv-Vehicle组比较,CON+Lv-miR1组各指标差异均无统计学意义;HG+Lv-Vehicle组miR-1表达明显升高(2^△△Ct:1.82±0.17比1.00±0.04),胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ的分泌量(mg/L:14.55±0.33比7.28±0.22,157.50±13.22比61.25±8.54)及表达量(灰度值:432.35±56.00比100.00±15.00,320.35±47.00比100.00±15.00)明显升高,MMP-2、MMP-9、LC3B-Ⅱ、P62/SQSTM1蛋白表达明显增高(灰度值:249.0±21.0比100.0±15.0,142.3±20.0比100.0±16.0,178±19比100±14,378.3±20.0比100.0±15.0),而CathepsinD表达明显降低(灰度值:60±14比100±10),差异均有统计学意义(均P〈0.01)。与HG+Lv-Vehicle组比较,HG+Lv-miR1组miR-1表达明显降低(2^△△Ct:1.21±0.10比1.82±0.17),胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ的分泌量(mg/L:10.68±0.54比14.55±0.33,87.25±13.55比157� 展开更多
关键词 高糖损伤 心肌成纤维细胞 纤维化 微小RNA 自噬
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