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枯草芽孢杆菌β-葡聚糖酶基因的克隆和表达 预览
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作者 孙珂 王亚楠 +2 位作者 张亚南 朱文华 程殿林 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第B05期49-52,共4页
背景:β-葡聚糖已广泛用于保健和临床治疗。通过酶水解的方法得到分子量大小适中的β-葡聚糖,这一研究日益受到重视。目的:实验旨在构建高表达β-葡聚糖酶的工程菌。并对该酶活性及热稳定性做出分析,为今后能够利用到临床医学奠定... 背景:β-葡聚糖已广泛用于保健和临床治疗。通过酶水解的方法得到分子量大小适中的β-葡聚糖,这一研究日益受到重视。目的:实验旨在构建高表达β-葡聚糖酶的工程菌。并对该酶活性及热稳定性做出分析,为今后能够利用到临床医学奠定基础。方法:通过克隆得到枯草芽孢杆菌β-葡聚糖酶的基因,利用分子生物学技术将β-葡聚糖酶基因与表达载体pET28b+构建重组质粒后导入大肠杆菌中构建工程菌株。利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导其表达目的蛋白,通过镍离子螯合树脂纯化得到目的蛋白。结果与结论:实验成功编码枯草芽孢杆菌β-葡聚糖酶的基因被克隆到大肠杆菌中,并能高效的表达。根据酶活力测定发现,该酶在50-60℃有较高的酶活性,在50℃最高。β-葡聚糖酶在30—40℃保持较高的热稳定性。实验初步发现,β-葡聚糖酶的工程菌表达产物能分解它的底物,但是否适用于临床治疗需要进行更多的研究。 展开更多
关键词 组织工程 枯草芽孢抒菌 大肠杆菌 质粒 Β-葡聚糖酶 临床医学 保健 克隆 表达 酶活性 治疗
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重组产番茄红素大肠杆菌工程菌株中异戊烯异构酶(IDI)基因的筛选 被引量:1
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作者 韩莉 张莎莎 +4 位作者 王博军 刘京国 刘伟丰 王艳萍 陶勇 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第13期137-142,共6页
番茄红素是一类在食品、医药等领域具有广泛应用价值的萜类化合物。异戊烯基焦磷酸异构酶(isopentenyl diphosphate isomerase,IDI)是番茄红素合成途径中的关键酶,也是代谢工程改造的主要靶点。本研究为了系统比较不同来源IDI对重组... 番茄红素是一类在食品、医药等领域具有广泛应用价值的萜类化合物。异戊烯基焦磷酸异构酶(isopentenyl diphosphate isomerase,IDI)是番茄红素合成途径中的关键酶,也是代谢工程改造的主要靶点。本研究为了系统比较不同来源IDI对重组大肠杆菌番茄红素(Lycopene)产量的影响,分别克隆了原核微生物、真核微生物、植物、古菌等多种来源的I型及II型异戊烯基焦磷酸异构酶(IDI)基因,在大肠杆菌E.coli中异源表达,在加强自身2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸(MEP)代谢途径的背景下,通过优化多靶点组合及转化时间提高番茄红素的合成水平。结果表明酿酒酵母来源的I型IDI(Sc IDI)及枯草芽孢杆菌来源的II型IDI(Bs IDI)在经优化的背景下可以获得最高的番茄红素产量,产量分别达到9.96 mg/g DCW,8.78 mg/g DCW,番茄红素积累在转化8 h达到最高,最高能达到10.29 mg/g DCW。本研究最终确定了不同类型IDI发挥功能的条件,为后续番茄红素以及萜类化合物的代谢途径的改造提供依据。 展开更多
关键词 异戊烯基焦磷酸异构酶(IDI) 大肠杆菌 番茄红素 代谢工程 MEP途径
Dose findings of antofloxacin hydrochloride for treating bacterial infections in an early clinical trial using PK-PD parameters in healthy volunteers
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作者 Yun-fei LI Kun WANG +3 位作者 Fang YIN Ying-chun HE Ji-han HUANG Qing-shan ZHENG 《中国药理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2012年第11期1424-1430,共7页
瞄准: 为阶段 II 临床的 trial using 发现新奇抗菌剂代理人 antofloxacin 的适当剂量政体在健康志愿者和最小的禁止的集中(MIC ) 的人口 pharmacokinetic (PPK ) 研究作为 pharmacodynamic (PD ) 参数。
关键词 临床试验 临床治疗 细菌感染 志愿者 剂量 健康 盐酸盐 最小抑菌浓度
腹泻羔羊中大肠杆菌的分离鉴定及耐药基因检测分析 预览 被引量:1
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作者 张学勇 简莹娜 +5 位作者 李秀萍 韩旭 王戈平 蔡其刚 王光华 马利青 《青海畜牧兽医杂志》 2017年第5期27-34,共8页
为了解我省羔羊腹泻性大肠杆菌的耐药性并检测其相关耐药基因的分布,本研究从患腹泻的不同羔羊中分离到14株大肠杆菌,经过分离培养鉴定后,对六大类抗菌药物的耐药基因进行PCR扩增鉴定分析。结果显示,14株大肠杆菌对喹诺酮类和β-内酰胺... 为了解我省羔羊腹泻性大肠杆菌的耐药性并检测其相关耐药基因的分布,本研究从患腹泻的不同羔羊中分离到14株大肠杆菌,经过分离培养鉴定后,对六大类抗菌药物的耐药基因进行PCR扩增鉴定分析。结果显示,14株大肠杆菌对喹诺酮类和β-内酰胺类抗生素的耐药基因携带率较高,分别为100.00%和71.43%,GyrA/GyrB/ParC喹诺酮类耐药基因是抗生素耐药基因中最为流行的基因型,β-内酰胺类耐药基因型TEM/SHV(71.43%)的检出率较高,四环素类耐药基因型TetC(71.43%)、TetA(57.14%)的检出率较高,氯霉素类耐药基因型Cat(57.14%)检出率较高,磺胺类耐药基因型Sul1/Sul2/Sul3(42.86%)中等检出率;氨基糖苷类耐药基因型aphA3/aadA/aacC2(28.57%)和aacC4(0.00)的检出率较低。结果表明,本次分离的羔羊腹泻性大肠杆菌的耐药性非常严重,同时存在多重耐药现象,提示养殖场应合理使用抗生素。 展开更多
关键词 羔羊 大肠杆菌 抗生素 耐药基因 PCR检测
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