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不同CHO工程细胞株表达的VEGFR-Fc唾液酸化修饰的研究 预览
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作者 刘培 宋礼华 +4 位作者 范清林 刘道琴 张伟 魏利 赵婷 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第6期778-782,共5页
目的比较中国仓鼠卵巢细胞(CHO)工程细胞株表达的VEGFR-Fc的唾液酸化程度的差异,为CHO工程细胞株的筛选提供参数依据。方法从唾液酸单糖、寡糖链这两个层次分析VEGFR-Fc的唾液酸化程度。唾液酸单糖的定量:酸水解释放出的唾液酸用荧... 目的比较中国仓鼠卵巢细胞(CHO)工程细胞株表达的VEGFR-Fc的唾液酸化程度的差异,为CHO工程细胞株的筛选提供参数依据。方法从唾液酸单糖、寡糖链这两个层次分析VEGFR-Fc的唾液酸化程度。唾液酸单糖的定量:酸水解释放出的唾液酸用荧光试剂1,2-diamino-4,5-methylenedioxybenzene(DMB)衍生后,采用荧光-亲水保留液相色谱(HILIC-FLD)检测。寡糖链的结构分析:糖苷酶PNGase F释放出的寡糖链经邻氨基苯甲酰胺(2-AB)衍生后,一部分利用阴离子交换色谱原理分析寡糖链上唾液酸的平均数;一部分经HILIC原理分析VEGFR-Fc寡糖链指纹图谱。结果 6株工程细胞株表达的VEGFR-Fc唾液酸含量在3-12 mol NANA/mol蛋白之间,参考品Aflibercept为10.46 mol NANA/mol蛋白;每个寡糖链的唾液酸平均数在0.28-1.0之间;寡糖链的特征指纹谱图显示VEGFR-Fc有12个共有峰,各样品、参考品均有以上共有峰,但各峰的峰高有差异。结论不同的CHO工程细胞株所表达的糖蛋白的唾液酸化程度存在差异。 展开更多
关键词 唾液酸 唾液酸化 糖基化 HILIC-FLD
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