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中国对虾来源哈维氏弧菌鉴定及生物学分析 预览
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作者 樊英 许拉 +4 位作者 王晓璐 盖春蕾 叶海斌 刁菁 李天保 《中国农学通报》 2019年第3期34-39,共6页
从患病中国对虾中分离到优势菌株,对其进行生理生化特性及分子生物学分析。TCBS培养基上菌落呈现绿色(以下称为TCBS-G),通过形态学、生理生化分析,菌株TCBS-G为革兰氏阴性菌,短杆状,两端钝圆,有鞭毛;Biolog GIII分析表明,该菌株生长代... 从患病中国对虾中分离到优势菌株,对其进行生理生化特性及分子生物学分析。TCBS培养基上菌落呈现绿色(以下称为TCBS-G),通过形态学、生理生化分析,菌株TCBS-G为革兰氏阴性菌,短杆状,两端钝圆,有鞭毛;Biolog GIII分析表明,该菌株生长代谢利用情况与弧菌吻合,与哈维氏弧菌特征相似。基于16S rRNA、gyrB、HSP60基因序列分析同源性,16S rRNA未将TCBS-G有效鉴定,gyrB、HSP60基因序列与哈维氏弧菌相聚类,聚合置信度可达99%。综合生物学及分子特征,判定TCBS-G为弧菌属的哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)。底物平板试验结果显示TCBS-G菌株胞外产物具有淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶和DNA酶活性;且能够扩增出哈氏弧菌溶血素基因的保守特异性片段。 展开更多
关键词 中国对虾 哈维氏弧菌 BIOLOG 16S RRNA GYRB HSP60
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‘岷县黑裘皮羊’不同组织中HSP60基因的表达定位 预览
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作者 祁磊 张全伟 +4 位作者 王琪 李宗帅 杜嘉祥 张勇 崔焕忠 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期24-29,41共7页
【目的】探讨‘岷县黑裘皮羊’不同组织器官中热休克蛋白60(HSP60)的表达差异及其规律.【方法】以3头成年雄性‘岷县黑裘皮羊’为研究对象,屠宰后采集心脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉和睾丸组织,利用实时荧光定量PCR、免疫组织化学染色和W... 【目的】探讨‘岷县黑裘皮羊’不同组织器官中热休克蛋白60(HSP60)的表达差异及其规律.【方法】以3头成年雄性‘岷县黑裘皮羊’为研究对象,屠宰后采集心脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉和睾丸组织,利用实时荧光定量PCR、免疫组织化学染色和Western-Blotting检测不同组织中HSP60的表达差异及规律.【结果】‘岷县黑裘皮羊’不同组织中均可见HSP60基因和蛋白的表达且存在一定的差异,心脏组织中HSP60基因和蛋白表达最高,脾脏组织中表达最低;心脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉和睾丸组织切片中均有HSP60的阳性表达,心脏组织着色最深.【结论】HSP60可能对维持心脏或心肌细胞的功能具有重要调节作用,上述结果为今后HSP60基因功能的研究以及绵羊抗逆性研究提供参考依据. 展开更多
关键词 热休克蛋白60 绵羊 组织器官
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Neuritin与HSP60在急性肝损伤修复中的表达变化及意义 预览
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作者 王朝阳 朱美意 +1 位作者 欧阳军 张宏伟 《实用医学杂志》 北大核心 2018年第12期1959-1964,1969共7页
目的探讨Neuritin与HSP60在肝损伤修复过程中的表达变化以及可能的分子机制,为研究肝损伤修复提供实验基础。方法将48只Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机分为空白组(n=6)和实验组(n=42),空白组不做任何处理,实验组均行70%肝左叶切除... 目的探讨Neuritin与HSP60在肝损伤修复过程中的表达变化以及可能的分子机制,为研究肝损伤修复提供实验基础。方法将48只Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机分为空白组(n=6)和实验组(n=42),空白组不做任何处理,实验组均行70%肝左叶切除以诱导急性肝损伤,并于术后6、12、24、48 h和3、7、14 d再次切除残余肝左叶,采用免疫印迹技术(Western blot)检测Neuritin与HSP60在相应时间点肝组织中的表达变化差异,行苏木精-伊红染色(HE)观察各时间点肝脏病理学改变,同时于尾缘静脉采血检测ATL和AST水平变化。结果 (1)与空白组相比,实验组于术后6、12、24、48 h血清ALT、AST含量持续增高并于48 h达到高峰,3 d开始降低、7 d几乎接近正常,差异具有统计学意义(P〈0.05)。病理学提示:与空白组相比,实验组肝小叶结构排列紊乱,气球样变明显,在术后48 h最为明显;(2)在肝损伤修复的整个过程中,Neuritin与HSP60的表达变化呈现截然相反的差异,Neuritin的表达与肝损伤的加重或修复存在显著的负相关性(P〈0.001),并且在肝损伤最重的48 h时其表达量最低;HSP60的表达与肝损伤的加重或修复存在显著的正相关性(P〈0.001),并且在肝损伤最重的48 h时其表达量最高。结论 (1)采用单纯性70%肝左叶切除术,成功建立了SD大鼠的肝损伤修复模型,其损伤在术后第48小时最重,该方法造模成功率为100%(42/42),操作简单、实用性强,为研究肝再生、肝损伤、肝移植等提供了一种可靠且简便的动物模型;(2)Neuritin的表达在肝损伤后逐渐降低,并在第48小时达到最低,而HSP60的表达逐渐升高,并在第48小时达到最高;(3)Neuritin与HSP60的表达变化与肝损伤修复过程密切相关(P〈0.001),呈现出一定变化规律,两者可能通过某种相互作用而产生相应的生物效应,共同参与并促进了肝损伤的再生修复。 展开更多
关键词 肝损伤 肝修复 大鼠 NEURITIN HSP60
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鸡Hsp60基因的克隆表达及多克隆抗体制备
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作者 武琥琮 倪杰 +5 位作者 谢菁 李拓凡 吕璐 任丹 秦爱建 叶建强 《中国家禽》 北大核心 2018年第23期14-17,共4页
研究对鸡Hsp60基因进行了扩增以及原核与真核表达载体构建。构建的原核表达载体GST-HSP60经IPTG诱导,SDS-PAGE分析获得了Hsp60的融合表达蛋白。采用纯化的GST-HSP60蛋白免疫小鼠制备抗Hsp60多克隆抗体。Western blot以及间接免疫荧光分... 研究对鸡Hsp60基因进行了扩增以及原核与真核表达载体构建。构建的原核表达载体GST-HSP60经IPTG诱导,SDS-PAGE分析获得了Hsp60的融合表达蛋白。采用纯化的GST-HSP60蛋白免疫小鼠制备抗Hsp60多克隆抗体。Western blot以及间接免疫荧光分析证明,所制备的抗Hsp60多克隆抗体不仅能识别转染真核表达载体pcDNA3.1-Hsp60表达的外源性鸡源Hsp60蛋白,而且能有效识别内源性鸡源以及人源的Hsp60蛋白。这些Hsp60基因表达载体的构建以及抗Hsp60蛋白特异性多克隆抗体的制备为进一步研究Hsp60生物学功能及其在家禽疫病中的潜在作用奠定了基础。 展开更多
关键词 HSP60 多克隆抗体
Genes encoding heat shock proteins in the endoparasitoid wasp,Cotesia chilonis,and their expression in response to temperatures 预览
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作者 PAN Dan-dan CAO Shuang-shuang +2 位作者 LU Ming-xing HANG San-bao DU Yu-zhou 《农业科学学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2018年第5期1012-1022,共11页
关键词 温度变化 基因编码 蛋白质 HSP60 氨基酸序列 HSP90 黄蜂 RT-PCR
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Characterization of T-complex polypeptide 1 (TCP-1) from the Chilo suppressalis HSP60 family and its expression in response to temperature stress 预览
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作者 YU Tong-ying LU Ming-xing CUI Ya-dong 《农业科学学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2018年第5期1032-1039,共8页
关键词 HSP60 温度 多肽 家庭 应力影响 蛋白质 PCR 氨基酸
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HSP60对天祝白牦牛原代培养的支持细胞增殖的影响 预览
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作者 阮崇美 王相生 +3 位作者 张勇 马友记 胡俊杰 赵兴绪 《核农学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期1486-1493,共8页
HSP60对动物的睾丸发育、精子发生起着重要的调控作用。支持细胞是睾丸内唯一与生精细胞直接发生联系的体细胞,对精子发生、成熟等过程有直接影响。为研究HSP60对白牦牛睾丸支持细胞增殖的调控作用,本试验通过组合酶消化法分离培养白牦... HSP60对动物的睾丸发育、精子发生起着重要的调控作用。支持细胞是睾丸内唯一与生精细胞直接发生联系的体细胞,对精子发生、成熟等过程有直接影响。为研究HSP60对白牦牛睾丸支持细胞增殖的调控作用,本试验通过组合酶消化法分离培养白牦牛原代支持细胞,通过差速贴壁法和Tris-HCL低渗缓冲液进行纯化处理,运用免疫荧光染色和Feulgen染色鉴定细胞,经流式细胞仪检测得到96.2%高纯度支持细胞。构建HSP60过表达载体p IRES2-EGFP-HSP60,合成靶向siRNA沉默HSP60,瞬时转染支持细胞后,经qPCR检测发现过表达组HSP60 mRNA在24、48、72 h等时间点均上调,沉默组HSP60 mRNA在24、48、72 h等时间点均下调。MTS试验检测细胞的增殖情况,过表达HSP60组中的支持细胞增殖效率各时间点均显著高于空白对照组和空质粒组;沉默HSP60组中支持细胞的增值率各时间点均低于空白对照组和阴性对照组,但差异不显著。qPCR检测细胞增殖标志基因细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和增殖细胞核抗原(PCNA),结果表明,过表达HSP60组的cyclin D1基因在48 h时的表达显著高于空白对照组和空质粒组,PCNA基因的表达在24、48、72 h时均显著高于空白对照组和空质粒组;沉默HSP60组cyclin D1基因和PCNA基因的表达在24、48、72 h时均低于空白对照组和阴性对照组,但差异不显著。综上,HSP60在白牦牛睾丸支持细胞增殖调控中的作用是正向调控。本试验结果为进一步研究HSP60对白牦牛睾丸发育和精子发生的影响奠定了理论基础。 展开更多
关键词 HSP60 天祝白牦牛 支持细胞 细胞增殖
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半滑舌鳎弧菌病病原的分离鉴定 预览 被引量:2
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作者 徐晓丽 叶红梅 +3 位作者 侯纯强 蔡琰 钟文慧 李贺密 《中国兽医杂志》 北大核心 2017年第8期86-90,共5页
从患病半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)内脏中分离到2株优势菌株,人工感染试验证实菌株150803对半滑舌鳎具有致病性;采用形态学观察、生理生化特性分析、16S r RNA等方法对所分离菌株进行鉴定,结果显示,菌株150803为革兰阴性杆菌,... 从患病半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)内脏中分离到2株优势菌株,人工感染试验证实菌株150803对半滑舌鳎具有致病性;采用形态学观察、生理生化特性分析、16S r RNA等方法对所分离菌株进行鉴定,结果显示,菌株150803为革兰阴性杆菌,生化特性与溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)较为接近,以hsp60基因为遗传标记构建的系统发育树将菌株150803与溶藻弧菌聚为一支,置信度为99%,采用特异性引物扩增溶藻弧菌dnaJ基因得到预期144 bp的基因片段。综合以上结果判定引起此次半滑舌鳎发病的病原为溶藻弧菌。对22种抗菌药物的敏感性试验表明,菌株150803对恩诺沙星、环丙沙星、庆大霉素、菌必治敏感,对氟苯尼考、呋喃唑酮、苯唑青霉素等具有抗性。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 溶藻弧菌 HSP60 DNAJ
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马铃薯甲虫热激蛋白基因Ld-HSP60的克隆、序列分析及温度胁迫下的表达 预览 被引量:2
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作者 魏长平 蒋健 +5 位作者 李祥瑞 张云慧 张方梅 程登发 郭文超 刘怀 《昆虫学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期523-532,共10页
【目的】马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata是一种世界性检疫害虫,对温度胁迫具有极强的适应性,为进一步明确其对温度胁迫适应性的分子机制,研究了热激蛋白HSP60在马铃薯甲虫温度胁迫应答过程中的作用。【方法】采用RT-PCR及RACE技... 【目的】马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata是一种世界性检疫害虫,对温度胁迫具有极强的适应性,为进一步明确其对温度胁迫适应性的分子机制,研究了热激蛋白HSP60在马铃薯甲虫温度胁迫应答过程中的作用。【方法】采用RT-PCR及RACE技术克隆马铃薯甲虫热激蛋白HSP60基因的cDNA全长序列;利用生物信息学软件分析该基因及其编码蛋白质的序列特性;运用实时荧光定量PCR技术分析该基因在温度胁迫下的表达模式。【结果】克隆得到马铃薯甲虫热激蛋白HSP60基因,命名为Ld-HSP60(Gen Bank登录号:KC556801),其cDNA全长2 234 bp,开放阅读框(ORF)长1 731 bp,编码576个氨基酸,相对分子量约为61.27 kD,理论等电点为5.51,5’端非翻译区(UTR)长101 bp,3’UTR长402 bp。氨基酸序列中含有HSP60家族典型的特征序列。实时荧光定量PCR结果表明,低温胁迫(-10和0℃)下未检测到马铃薯甲虫雌雄成虫中Ld-HSP60的诱导表达;高温胁迫(38和44℃)诱导马铃薯甲虫雄成虫Ld-HSP60上调表达,随着胁迫温度的升高LdHSP60表达量呈现先升高后降低的趋势,38℃高温胁迫下表达量最高,胁迫时间越长Ld-HSP60表达量也越高。【结论】相比其他热激蛋白,HSP60对温度敏感性较低,推测HSP60可能在马铃薯甲虫雄成虫抵御高温胁迫中发挥作用。 展开更多
关键词 马铃薯甲虫 热激蛋白 HSP60 基因克隆 温度胁迫 实时荧光定量PCR
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急性肝损伤大鼠肝组织HSP60的变化及意义 预览 被引量:1
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作者 曹东 朱美意 +2 位作者 吴江文 周涛 欧阳军 《中华灾害救援医学》 2017年第2期72-77,共6页
目的观察大鼠急性肝损伤过程中热休克蛋白60(heat shock protein 60,HSP60)的变化及其与肝损伤的相关性.方法126只清洁级SD大鼠,随机分为空白组(n=42)、非肝损伤组(n=42)和肝损伤组(n=42).空白组不作任何处理;非肝损伤组大鼠进... 目的观察大鼠急性肝损伤过程中热休克蛋白60(heat shock protein 60,HSP60)的变化及其与肝损伤的相关性.方法126只清洁级SD大鼠,随机分为空白组(n=42)、非肝损伤组(n=42)和肝损伤组(n=42).空白组不作任何处理;非肝损伤组大鼠进行左腿大腿骨折处理,肝损伤组用改良型BIM-Ⅳ(biological impact machine-Ⅳ)生物撞击机撞击诱导急性肝损伤.各组处理后于6h、12h、1d、2d、3d、5d、7d取血液检测丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST)水平;之后杀鼠取肝,苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin,HE)染色观察肝组织病理变化;免疫组化染色检测HSP60蛋白表达.结果(1)空白组与非肝损伤组在上述各时间段的ALT、AST表达水平差异无统计学意义(P〉0.05);与空白组及非肝损伤组相比,肝损伤组于6h、12h、1d、2d、3d、5d、7d血清ALT、AST含量显著增高(P〈0.05),且在6h显著升高[(104.17±4.07)U/L,(271.00±15.84)U/L],12h达到顶峰[(424.50±10.84)U/L,(787.70±32.68)U/L],之后不断下降,在3d时恢复正常;(2)HE染色示,肝损伤组肝小叶结构排列紊乱,气球样变明显,在12h最为明显;(3)免疫组化HSP60染色,肝损伤组织在6h开始显著高于空白组和非肝损伤组,12h达到顶峰,1~3d持续高于空白组和非肝损伤组,5d时恢复正常水平;(4)HSP60蛋白表达与血清中ALT(r=0.9064,P〈0.05)、AST(r=0.9294,P〈0.05)表达呈正相关.结论大鼠急性肝损伤过程中HSP60的表达量有明显的动态变化规律,与大鼠肝脏损伤程度变化-致. 展开更多
关键词 大鼠 肝损伤 HSP60 丙氨酸转氨酶 天冬氨酸转氨酶
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敲低HSP60对结肠癌SW480细胞增殖能力的影响及其机制探究
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作者 余群 徐仁华 +2 位作者 王鹤霖 郭建影 邓海腾 《现代生物医学进展》 CAS 2017年第7期1201-1205,1209共6页
目的:研究热休克蛋白60(HSP60)敲低对结肠癌SW480细胞增殖的影响,并进一步探究其作用机制。方法:通过含HSP60sh RNA载体的慢病毒感染加上流式细胞仪无菌分选的方法构建结肠SW480 HSP60基因稳定RNA干扰(RNAi)单克隆细胞系,利用West... 目的:研究热休克蛋白60(HSP60)敲低对结肠癌SW480细胞增殖的影响,并进一步探究其作用机制。方法:通过含HSP60sh RNA载体的慢病毒感染加上流式细胞仪无菌分选的方法构建结肠SW480 HSP60基因稳定RNA干扰(RNAi)单克隆细胞系,利用Western blot和q-PCR验证结肠癌细胞中HSP60的敲低效率;使用CCK-8试剂检测结肠癌细胞增殖能力,并用流式细胞仪检测其HSP60敲低对细胞周期的影响。结果:Western blot和q-PCR结果验证了HSP60在结肠癌细胞中的敲低效率,与对照组细胞相比,实验组细胞HSP60的m RNA水平和蛋白水平均降低了60%以上。CCK-8实验结果表明,敲低HSP60后SW480细胞的增殖能力下降了约70%;流式细胞周期实验显示敲低HSP60后SW480细胞中G0/G1期、S期、G2/M期的分布比例变化不大。结论:敲低HSP60能够显著抑制SW480细胞的增殖能力,而SW480细胞周期并没有发生明显变化,推测HSP60的敲低引起的线粒体损伤导致细胞生长速度变慢。 展开更多
关键词 热休克蛋白60 结肠癌细胞 细胞增殖 细胞周期
宁夏医学生人感染H7N9禽流感知信行调查 预览 被引量:1
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作者 李凡 郎冰 +5 位作者 张楠 马骄 张蕊 丁斐嘉 李云鸿 王银 《宁夏医学杂志》 CAS 2017年第1期1-2,共2页
目的 了解医学生人感染H7N9禽流感防控知识、态度、行为、心理焦虑等情况,为学校开展疾病防控教育提供依据。方法 采用分层抽样方法用自编问卷对宁夏医科大学生进行调查。结果 学生对H7N9禽流感知识总知晓率偏低(37.48%),不同年级学... 目的 了解医学生人感染H7N9禽流感防控知识、态度、行为、心理焦虑等情况,为学校开展疾病防控教育提供依据。方法 采用分层抽样方法用自编问卷对宁夏医科大学生进行调查。结果 学生对H7N9禽流感知识总知晓率偏低(37.48%),不同年级学生知识总知晓率和行为总发生率差异均有统计学意义(P〈0.05),随年级增加均呈线性上升趋势(P〈0.05);不同年级和专业学生临床表现和防控措施知晓率均高于传播途径和消毒方式。女生心理焦虑高于男生,差异有统计学意义(P〈0.05);90.76%的学生认为学校应普及H7N9知识,学生从学校途径获得信息仅为19.90%,最希望获得H7N9知识的途径是网络和专家讲座,最想了解H7N9防控措施。结论 学生对H7N9知识了解不足,有积极防控疾病的态度和行为,学校应加强健康教育,关注学生心理疏导和医学生专业素养培养。 展开更多
关键词 医学生 H7N9禽流感 知信行 健康教育
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分子生物学方法在鉴定双歧杆菌中的应用 预览
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作者 田亮 卢勉飞 +3 位作者 蔡芷荷 吴清平 李艳嫦 李兴 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2016年第19期216-219,共4页
依靠传统生理生化、菌落表观形态等鉴定双歧杆菌,很难区分生化相近的菌株,例如双歧杆菌和婴儿双歧杆菌或者动物双歧杆菌和乳酸双歧杆菌,这给食品风险监测和卫生监督带来严峻的挑战。随着分子生物学方法的成熟,大量分子生物学方法成为了... 依靠传统生理生化、菌落表观形态等鉴定双歧杆菌,很难区分生化相近的菌株,例如双歧杆菌和婴儿双歧杆菌或者动物双歧杆菌和乳酸双歧杆菌,这给食品风险监测和卫生监督带来严峻的挑战。随着分子生物学方法的成熟,大量分子生物学方法成为了鉴定双歧杆菌种属高效的鉴定方法,这些分子生物学方法包括16S r RNA基因序列、小分子保守序列hsp60、多重PCR、核糖体DNA序列扩增片段限制性内切酶分析(ARDRA)、变性梯度凝胶电泳(DGGE)、脉冲场凝胶电泳(PFGE)以及能够对样品中双歧杆菌进行鉴别和定量的实时荧光定量PCR技术。本文对分子生物学方法在鉴定双歧杆菌的应用进行了综述。 展开更多
关键词 双歧杆菌 HSP60 鉴定 序列
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基于电镜和免疫组化的线粒体数目标志物评估肝癌的初步研究 被引量:4
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作者 曹海燕 翟玉龙 +4 位作者 孙夏承 安家泽 吕英华 邢金良 黄启超 《现代生物医学进展》 CAS 2016年第14期2646-2650,共5页
目的:研究线粒体数目与肝癌生长的相关性。方法:利用电子显微镜技术定量肝癌组织中线粒体数目,利用免疫组织化学技术评估肝癌组织中的线粒体标志物COX Ⅳ及HSP60表达水平,分析电镜肝癌线粒体定量结果与COX Ⅳ及HSP60表达量之间的相关... 目的:研究线粒体数目与肝癌生长的相关性。方法:利用电子显微镜技术定量肝癌组织中线粒体数目,利用免疫组织化学技术评估肝癌组织中的线粒体标志物COX Ⅳ及HSP60表达水平,分析电镜肝癌线粒体定量结果与COX Ⅳ及HSP60表达量之间的相关性,并比较肝癌中线粒体数目、COX Ⅳ及HSP60表达量与肝癌直径之间的关系。结果:与癌旁相比,肝癌组织中线粒体数目(P〈0.001)、COX Ⅳ及HSP60的表达量显著降低(P=0.0417,P=0.0290)。COX Ⅳ及HSP60表达水平与线粒体数目无显著相关(r^2=0.009,P=0.5468;r^2=0.056,P=0.1396)。线粒体数目与肿瘤直径显著负相关(r^2=0.1086,P=0.0434),COX Ⅳ及HSP60表达量与肿瘤直径无显著相关(r^2=0.0251,P=0.3287;r^2=0.0461,P=0.1830)。结论:线粒体数目是潜在的肝癌生长标志物。但常用的线粒体定量分子HSP60与COX Ⅳ并不能准确定量肝癌线粒体。 展开更多
关键词 线粒体定量 电子显微镜 COX HSP60
分子伴侣幽门螺杆菌Hsp60与UreB的相互作用分析 被引量:1
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作者 赵慧琳 季晓飞 +5 位作者 张艳丽 柏雪莲 李娇娇 陈醒醒 张玉梅 李波清 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第11期977-981,共5页
目的检测并分析幽门螺杆菌(Hp)尿素酶β亚基(UreB)与Hsp60之间的相互作用。方法克隆Hp 26695的尿素酶β亚基基因(UreB)融合GST标签和Hsp60基因融合His标签,分别在大肠埃希菌中进行异源表达。提取两种蛋白,采用pull-down方法检测... 目的检测并分析幽门螺杆菌(Hp)尿素酶β亚基(UreB)与Hsp60之间的相互作用。方法克隆Hp 26695的尿素酶β亚基基因(UreB)融合GST标签和Hsp60基因融合His标签,分别在大肠埃希菌中进行异源表达。提取两种蛋白,采用pull-down方法检测两者间的相互作用。利用Modeller 9v2软件,以E.coli的GroEL为基础模建Hp Hsp60的三维结构,再与已知的UreB结构利用AutoDock 4.2软件进行分子共模拟,分析二者的相互作用面和关键氨基酸。结果构建了Hp Hsp60和尿素酶β亚基(UreB)的大肠埃希菌异源表达体系并获得纯化蛋白;Pull-down试验显示部分未融合GST标签的Hsp60出现在GST-UreB的洗脱液中,表明Hsp60与GST-UreB之间存在相互作用;以E.coli的GroEL为基础模建了Hp Hsp60的三维结构,利用docking技术构建UreB与Hp Hsp60的相互作用模型,发现其主要的相互作用面位于Hsp60的α9与UreB的α2之间,其可能形成氢键的关键位点为UreB的α2上的T147氨基酸与Hsp60的α9上的E237、K238。结论 Hp Hsp60能直接与尿素酶β亚基(UreB)相互作用,Hsp60可能通过这种相互作用在UreB成熟过程中发挥分子伴侣功能。这为阐明Hp尿素酶的组装与成熟机制奠定了基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 尿素酶 HSP60 分子伴侣 相互作用
高糖对THP-1细胞TLR4介导的信号调节的影响 被引量:1
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作者 曹爽 史志勤 +4 位作者 魏艳静 刘东梅 胡佳 朱立坤 尹晓琳 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期953-957,965共6页
目的探讨高糖状态下巨噬细胞株THP-1经TLR4不同配体刺激后信号通路激活的改变,明确巨噬细胞激活在糖尿病肾病中的炎症机制。方法用正常和高糖培养THP-1细胞,用TLR4的配体LPS和HSP60刺激,收集上清和细胞,采用ELISA和Real-time PCR检测IL... 目的探讨高糖状态下巨噬细胞株THP-1经TLR4不同配体刺激后信号通路激活的改变,明确巨噬细胞激活在糖尿病肾病中的炎症机制。方法用正常和高糖培养THP-1细胞,用TLR4的配体LPS和HSP60刺激,收集上清和细胞,采用ELISA和Real-time PCR检测IL-10、IL-1β、TNF-α的蛋白及m RNA的表达水平,用Western blot检测NF-κB(P65)、AKT(Ser473)介导的信号通路分子的表达水平。结果高糖刺激下IL-10 m RNA表达的高峰值晚于正常组,出现延迟现象,但蛋白表达无明显变化。而IL-1β和TNF-α无论m RNA和蛋白水平的表达均高于正常对照组。Western blot结果显示LPS刺激细胞0、15、30、60、120、180 min,正常组P-NF-κB p65的表达于60 min达到高峰,而高糖组15 min时达到高峰,P-AKT的表达于60 min时表达增高,高糖组在同一时间点总体高于正常组;高糖状态下LPS和HSP60刺激细胞0、30、60、180 min后,P-NF-κB p65、P-AKT(Ser473)均高于对照组。结论高糖状态能促进TLR4介导的促炎因子的表达,不同配体刺激的结果相似。 展开更多
关键词 TLR4 糖尿病肾病 巨噬细胞 LPS HSP60
血浆HSP60和TSGF联合检测甲状腺癌的早期诊断价值 被引量:4
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作者 李学庆 王晖 +4 位作者 汤承辉 柯文才 刘启岑 史永照 沈芳 《现代生物医学进展》 CAS 2016年第27期5293-5295,共3页
目的:究血浆热休克蛋白-60(HSP60)与肿瘤特异性生长因子(TSGF)联合检测对甲状腺癌的早期诊断价值。方法:于2011年1月~2015年11月期间选取254例甲状腺癌患者(定为甲状腺癌组)、156例结节性甲状腺肿患者(结节性甲状腺肿组)和20... 目的:究血浆热休克蛋白-60(HSP60)与肿瘤特异性生长因子(TSGF)联合检测对甲状腺癌的早期诊断价值。方法:于2011年1月~2015年11月期间选取254例甲状腺癌患者(定为甲状腺癌组)、156例结节性甲状腺肿患者(结节性甲状腺肿组)和202例健康者(健康组)为研究对象,采用ELISA法检测三组血浆HSP60、TSGF水平,分析其与甲状腺癌病理因素的关系及诊断的敏感度和特异度。结果:甲状腺癌组的血浆HSP60、TSGF水平均显著高于结节性甲状腺肿组以及健康组,且结节性甲状腺肿组高于健康组,差异均具有统计学意义(P〈0.05)。甲状腺癌患者血浆HSP60、TSGF水平与年龄、性别、临床分期均无相关性(P〉0.05)。血浆HSP60、TSGF单独诊断甲状腺癌的敏感度和特异度分别为68.75%、81.82%和83.33%、71.88%,两者联合诊断的敏感度和特异度则分别达到了88.89%和86.72%。结论:在甲状腺癌的早期诊断中,采用血浆HSP60和TSGF联合检测的方式可靠性较高,值得推广应用。 展开更多
关键词 甲状腺癌 HSP60 TSGF 联合检测 早期诊断
HSP60及S100A9在结肠癌中的表达及意义 预览 被引量:2
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作者 李园园 韦丽华 《哈尔滨医药》 2016年第2期140-141,共2页
目的探讨HSP60及S100A9蛋白在人结肠癌与癌旁正常结肠组织的差异表达及其与人结肠癌发生、发展的关系。方法采用免疫组织化学染色法检测结肠癌40例及正常结肠组织30例中HSP60及S100A9蛋白的表达。结果结肠癌中HSP60及S100A9阳性表达率... 目的探讨HSP60及S100A9蛋白在人结肠癌与癌旁正常结肠组织的差异表达及其与人结肠癌发生、发展的关系。方法采用免疫组织化学染色法检测结肠癌40例及正常结肠组织30例中HSP60及S100A9蛋白的表达。结果结肠癌中HSP60及S100A9阳性表达率分别为82.5%及77.5%,均显著高于正常组。结肠癌中HSP60与S100A9的表达呈正相关。结论 HSP60及S100A9的高表达可能与结肠癌的发生、发展有关,二者联合检测可以作为诊断结肠癌的潜在标志物。 展开更多
关键词 结肠癌 HSP60 S100A9 免疫组织化学
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过氧化氢诱导前列腺癌PC3细胞HSP60表达和Akt蛋白磷酸化的研究 预览
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作者 席红军 张师红 李炳义 《信阳师范学院学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2016年第1期47-49,共3页
以不同浓度H2O2刺激PC3细胞24h,应用MTT法分析细胞活力变化,并采用蛋白印迹方法检测HSP60蛋白、Akt蛋白(总Akt蛋白)和磷酸化Akt蛋白的表达水平.结果表明,15.625μmol/L的H2O2可诱导PC3细胞内HSP60表达显著升高(p〈0.05),7.312μmol/... 以不同浓度H2O2刺激PC3细胞24h,应用MTT法分析细胞活力变化,并采用蛋白印迹方法检测HSP60蛋白、Akt蛋白(总Akt蛋白)和磷酸化Akt蛋白的表达水平.结果表明,15.625μmol/L的H2O2可诱导PC3细胞内HSP60表达显著升高(p〈0.05),7.312μmol/L和15.625μmol/L的H2O2均会导致磷酸化Akt蛋白的量显著下降(p〈0.01),但该两种浓度的刺激对细胞内总Akt蛋白量并无显著影响(p〉0.05). 展开更多
关键词 热休克蛋白60 AKT蛋白 PC3细胞 氧化应激 过氧化氢
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热休克蛋白60在药物性聋大鼠模型中的表达变化 预览
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作者 田克勇 宋勇莉 +4 位作者 孙菲 王人凤 岳波 王敏 邱建华 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第2期251-254,共4页
目的探讨HSP60在大鼠耳蜗中的表达及硫酸卡那霉素损伤后的表达变化。方法正常成年雌性SD大鼠20只随机分为两组:对照组(生理盐水)和实验组(硫酸卡纳霉素),按500mg/kg剂量每天给药一次,连续腹腔注射21天。ABR检测听力变化;实时定量PC... 目的探讨HSP60在大鼠耳蜗中的表达及硫酸卡那霉素损伤后的表达变化。方法正常成年雌性SD大鼠20只随机分为两组:对照组(生理盐水)和实验组(硫酸卡纳霉素),按500mg/kg剂量每天给药一次,连续腹腔注射21天。ABR检测听力变化;实时定量PCR和Western Blot分别检测HSP60的m RNA和蛋白表达量的变化;免疫荧光染色观察HSP60在耳蜗中的表达变化及分布。结果 ABR检测显示实验组较对照组明显升高(P〈0.05)。实时定量PCR、WesternBlot和基底膜铺片免疫荧光染色的结果显示实验组HSP60表达量降低(P〈0.05)。冰冻切片免疫荧光染色,观察到HSP60表达于Corti器上的支持细胞内。结论 HSP60表达于支持细胞,正常生理情况下即表达,慢性药物中毒性耳聋模型中表达量降低,推测HSP60可能参与了药物性耳聋的发生过程。 展开更多
关键词 热休克蛋白60 听力损失 支持细胞
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