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Trop-2基因在肝癌组织中的表达及对HepG2细胞增殖的影响 预览
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作者 张健 马海 +2 位作者 杨柳 杨红春 何振兴 《癌症进展》 2019年第16期1902-1906,共5页
目的探讨肿瘤相关钙信号转导蛋白2(Trop-2)基因对肝癌发生发展的影响及作用机制。方法收集10例肝癌患者的肝癌组织标本和癌旁正常组织标本,免疫组织化学染色法和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法分别检测不同组织中Trop-2蛋白和mRN... 目的探讨肿瘤相关钙信号转导蛋白2(Trop-2)基因对肝癌发生发展的影响及作用机制。方法收集10例肝癌患者的肝癌组织标本和癌旁正常组织标本,免疫组织化学染色法和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法分别检测不同组织中Trop-2蛋白和mRNA的表达情况;流式细胞术和蛋白质印迹法(Western blot)检测HepG2、HCCLM3、HL-7702细胞中Trop-2蛋白的表达情况;Western blot法检测不同组织和转染后HepG2细胞中Trop-2、蛋白激酶C-α(PKC-α)、磷酸化蛋白激酶C-α(p-PKC-α)和核因子-κB(NF-κB)的表达情况;CCK-8法检测转染后HepG2细胞的增殖率。结果肝癌组织中p-PKC-α、NF-κB、Trop-2蛋白及Trop-2 mRNA的相对表达量均明显高于癌旁正常组织(P﹤0.01);HCCLM3细胞和HepG2细胞中Trop-2蛋白的相对表达量均明显高于HL-7702细胞(P﹤0.01);Trop-2 siRNA组HepG2细胞中Trop-2、p-PKC-α、PKC-α和NF-κB蛋白的相对表达量均低于空白对照组和阴性对照组(P﹤0.05);Trop-2 siRNA组HepG2细胞的增殖率低于阴性对照组(P﹤0.05)。结论Trop-2基因在肝癌组织和肝癌细胞株中均有较高水平的表达,提示其可能是肝癌潜在的治疗靶点。 展开更多
关键词 Trop-2 肝癌 预后 细胞增殖 HEPG2细胞
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抑制ERBB2基因对肝癌HepG2细胞生长及PI3K/AKT信号通路的影响 预览 被引量:1
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作者 顾清 张莉 +2 位作者 张新星 代小松 陈和平 《郑州大学学报:医学版》 CAS 北大核心 2019年第1期19-23,共5页
目的:探讨抑制ERBB2基因表达对肝癌HepG2细胞生长及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:采用脂质体法将ERBB2 siRNA转染至肝癌HepG2细胞,记为实验组(ERBB2-siRNA组),以siRNA对照转染的细胞记为阴性对照组(Con-siRNA组),将不经任何处理的细胞... 目的:探讨抑制ERBB2基因表达对肝癌HepG2细胞生长及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:采用脂质体法将ERBB2 siRNA转染至肝癌HepG2细胞,记为实验组(ERBB2-siRNA组),以siRNA对照转染的细胞记为阴性对照组(Con-siRNA组),将不经任何处理的细胞记为空白对照组。采用qRT-PCR和Western blot法检测转染效率,CCK-8法检测细胞增殖能力,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot法检测HepG2细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、AKT和p-AKT蛋白表达水平。结果:在HepG2细胞中转染ERBB2siRNA能够抑制ERBB2的表达(P<0.05)。与Con-siRNA组比较,抑制ERBB2的表达后细胞生长和克隆形成能力明显被抑制,细胞周期发生G0/G1期阻滞,细胞中PCNA和p-AKT蛋白表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:抑制ERBB2基因表达可抑制肝癌HepG2细胞的生长,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路的激活有关。 展开更多
关键词 ERBB2基因 肝癌 HEPG2细胞 细胞生长 PI3K/AKT信号通路
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HBV PS1反式激活蛋白2基因对HepG2细胞增殖和凋亡的影响 预览
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作者 鞠蔚华 李钦 +4 位作者 韩铭 刘顺爱 吴君 成军 梁跃东 《重庆医学》 CAS 2019年第12期2001-2005,共5页
目的沉默乙型肝炎病毒(HBV)PS1反式激活蛋白2基因(PS1TP2)对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法荧光定量PCR(RT-PCR)用于检测PS1TP2基因在不同肝细胞系中基础表达水平。将PS1TP2小干扰RNA(siRNA PS1TP2)及对应的阴性对照小干扰RNA(si... 目的沉默乙型肝炎病毒(HBV)PS1反式激活蛋白2基因(PS1TP2)对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法荧光定量PCR(RT-PCR)用于检测PS1TP2基因在不同肝细胞系中基础表达水平。将PS1TP2小干扰RNA(siRNA PS1TP2)及对应的阴性对照小干扰RNA(siNC)作为干扰组和对照组分别瞬时转染至HepG2细胞中,培养48 h后,应用CCK-8试剂盒检测两组细胞的增殖活性水平;AnnexinV/7-AAD流式细胞术检测两组细胞凋亡程度;RT-PCR检测两组细胞中PS1TP2、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因mRNA表达水平;Western blot检测两组细胞中Bcl-2、Bax、人腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、雷帕霉素靶蛋白(m-TOR)蛋白水平并计算Bcl-2与Bax的比例。结果 PS1TP2基因在肝癌细胞HepG2中的表达水平明显高于正常肝细胞L02。干扰组HepG2细胞的增殖速率明显慢于对照组。与对照组相比,干扰组的HepG2细胞中Annexin V+细胞数明显升高( P <0.05),HepG2细胞中Bcl-2 mRNA表达量明显下降( P < 0.05 ),Bax mRNA表达量明显上升( P <0.05);同样在干扰组的HepG2细胞中Bcl-2、m-TOR蛋白水平明显下降( P < 0.05 ),而Bax、AMPK蛋白水平则明显升高( P <0.05)。结论干扰掉PS1TP2基因可经过线粒体途径促进HepG2细胞凋亡,可能是通过活化AMPK-m-TOR途径而抑制其增殖。 展开更多
关键词 PS1TP2基因 HEPG2细胞 细胞增殖 细胞凋亡
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白桦脂酸对HepG2细胞的诱导凋亡作用及其机制 预览
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作者 李豪 周万怡 +1 位作者 吴嘉南 陈启和 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第4期47-53,共7页
为研究白桦脂酸对人的HepG2细胞的凋亡作用及其机制。采用不同质量浓度的白桦脂酸处理HepG2细胞,MTT法测定白桦脂酸对HepG2细胞增殖影响;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,PI单染法检测细胞周期,罗丹明123检测线粒体膜电... 为研究白桦脂酸对人的HepG2细胞的凋亡作用及其机制。采用不同质量浓度的白桦脂酸处理HepG2细胞,MTT法测定白桦脂酸对HepG2细胞增殖影响;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,PI单染法检测细胞周期,罗丹明123检测线粒体膜电位。MTT分析表明,白桦脂酸可抑制HepG2细胞增殖并呈剂量依赖关系。白桦脂酸对HepG2细胞24,48,72h的半抑制质量浓度IC50分别为52,26,17.5μg/mL。流式细胞仪检测结果表明,用20,30,40μg/mL的白桦脂酸分别处理48h,总凋亡率分别为49.82%,55.575%,57.46%。细胞周期结果表明,随着白桦脂酸质量浓度的增加,G1期的细胞比例下降,S期的细胞比例增加,说明出现S期的阻滞。用质量浓度分别为20,40,80μg/mL的白桦脂酸处理的各组线粒体膜电位分别为83.63,73.63,64.3,与对照组89.25相比,均明显降低,这表明白桦脂酸诱导细胞凋亡可能与线粒体途径有关。白桦脂酸可抑制肝癌HepG2细胞的增值,诱导HepG2细胞凋亡,这一机制可能与线粒体途径有关,通过将细胞阻滞在S期来实现。 展开更多
关键词 白桦脂酸 HEPG2细胞 细胞凋亡 流式细胞术 MTT试验 细胞周期 线粒体膜电位
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预知子种子提取物对核糖体蛋白抑制HepG2肝癌细胞增殖调控作用研究
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作者 王枭宇 卢涛 +1 位作者 梁超 方肇勤 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2019年第16期1156-1162,共7页
目的预知子是临床常用抗癌中药,具体作用机制仍不明确.本研究观察预知子种子提取物干预HepG2肝癌细胞后,对核糖体蛋白mRNA、蛋白水平及Mdm2-p53信号通路关键蛋白影响,部分明确预知子抑制肿瘤细胞生长的核糖体蛋白相关作用机制.方法 HepG... 目的预知子是临床常用抗癌中药,具体作用机制仍不明确.本研究观察预知子种子提取物干预HepG2肝癌细胞后,对核糖体蛋白mRNA、蛋白水平及Mdm2-p53信号通路关键蛋白影响,部分明确预知子抑制肿瘤细胞生长的核糖体蛋白相关作用机制.方法 HepG2细胞中分别给予预知子种子提取物对照组0μg/mL、低浓度组375μg/mL和高浓度组750μg/mL,观察对细胞生长活力和周期影响,实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测12个核糖体蛋白及p53 mRNA变化,蛋白质印迹法检测典型核糖体蛋白RPS26、RPSA、Mdm2、p53和细胞周期蛋白变化.结果预知子种子提取物干预后,对照组、低浓度组和高浓度组HepG2细胞活力分别为(100.000±1.509、105.060±1.000和61.130±0.700),差异有统计学意义,F=425.760,P<0.001.PCR法检测结果显示,高浓度组RPSA(F=4959.917,P<0.001)、RPS3A(F=725.900,P<0.001)、RPS8(F=350.515,P<0.001)、RPS13(F=198.316,P<0.001)、RPS16(F=41.693,P<0.001)、RPS29(F=536.835,P<0.001)、RPL6(F=119.226,P<0.001)、RPL10(F=49.339,P<0.001)、RPL15(F=35.603,P<0.001)、RPL17(F=188.221,P<0.001)和RPLP0(F=221.837,P<0.001)等11个核糖体蛋白mRNA表达下调,RPS26(F=330.023,P<0.001)mRNA表达上调.蛋白质印迹法结果显示,RPS26(t=7.365,P=0.002)、RPSA(t=4.654,P=0.010)和Mdm2(t=4.048,P=0.016)表达下调,p53蛋白水平(t=3.185,P=0.033)和mRNA水平(t=16.110,P<0.001)表达上调.干预后HepG2细胞S期比例增多,G0/G1期和G2/M期比例减少,细胞进入S期停滞.细胞周期蛋白CCND2(t=6.069,P=0.004)和CCNB1(t=5.481,P=0.005)大幅度下调,CCNE1小幅度下调(t=2.905,P=0.044).结论预知子可能通过上调或下调核糖体蛋白mRNA或蛋白表达,抑制Mdm2并激活p53,诱导HepG2细胞进入S期停滞,抑制HepG2细胞增殖. 展开更多
关键词 预知子 肝癌 HEPG2细胞 核糖体蛋白 Mdm2-p53信号通路
槲皮素抑制人肝癌细胞HepG2的体内外活性研究 预览
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作者 周孟 廖祥明 +2 位作者 王珊 巩仔鹏 张荣红 《安徽医药》 CAS 2019年第11期2136-2141,共6页
目的系统评价槲皮素(Qu)体内外干预HepG2人肝癌细胞增殖效果。方法使用MTT法检测不同浓度Qu在不同作用时间对HepG2细胞的体外抑制活性;采用裸鼠移植瘤实验,评价腹腔注射Qu对HepG2人肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用;使用TUNEL法检测凋亡指... 目的系统评价槲皮素(Qu)体内外干预HepG2人肝癌细胞增殖效果。方法使用MTT法检测不同浓度Qu在不同作用时间对HepG2细胞的体外抑制活性;采用裸鼠移植瘤实验,评价腹腔注射Qu对HepG2人肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用;使用TUNEL法检测凋亡指数。结果Qu作用HepG2细胞24、48和72h的IC50分别为110.50,63.73和46.38μmol/L;12.5,25和50mg/kg的Qu都能显著抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,且呈浓度依赖性;其中50mg/kg的Qu对人肝癌HepG2细胞裸鼠皮下肿瘤模型的抑瘤率为46.65%,差异有统计学意义(P<0.05),相对肿瘤增殖率为46.68%。同时Qu还会导致约20.17%的体内肿瘤细胞发生凋亡,且几乎无毒性,表现出良好的抑瘤效果。结论Qu能较为显著的抑制体内外HepG2肝癌细胞的增殖并会导致其发生凋亡,且由于极低的毒性及在自然界的广泛分布,使Qu成为新型抗肝癌药物开发的重要资源。 展开更多
关键词 槲皮素 肝癌 HEPG2细胞 抗肿瘤活性 细胞凋亡
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携带AFP启动子凋亡诱导配体基因的间充质干细胞与5-FU联用对HepG2细胞移植瘤的抑制作用
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作者 范冬梅 杨圆圆 +3 位作者 杨铭 颜次慧 熊冬生 苑庆华 《药物生物技术》 CAS 2019年第3期194-198,共5页
利用人脐带组织来源的MSCs (Human umbilical cord-derived MSCs,HUMSCs)运载AFP启动子驱动的凋亡诱导基因ILZ-sTRAIL,并与化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用,探讨其对Hep G2肝癌原位移植瘤的抑制作用。以克隆载体pUp-AFP、报告基因载体... 利用人脐带组织来源的MSCs (Human umbilical cord-derived MSCs,HUMSCs)运载AFP启动子驱动的凋亡诱导基因ILZ-sTRAIL,并与化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用,探讨其对Hep G2肝癌原位移植瘤的抑制作用。以克隆载体pUp-AFP、报告基因载体pGL3-basic及慢病毒表达载体pLentiR. ILZ-sTRAIL、pLentiR. Cop GFP为基础,采用PCR、酶切、连接的方法构建AFP启动子特异性驱动TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达的载体pLentiR. AFPILZ-sTRAIL及其对照载体p LentiR. AFPCop GFP。利用双荧光素酶法检测Hep G2、MCF-7和3T3细胞中AFP启动子的特异性活性;利用慢病毒感染的方法将HUMSCs标记AFP启动子驱动的Luc(MSC. AFPILZ-sTRAIL),建立Balb/c裸鼠的Hep G2肝癌原位移植瘤模型。应用MSC. AFPILZ-sTRAIL与5-FU联合进行治疗,利用Western blot检测ILZ-sTRAIL蛋白于肿瘤部位的表达,并于治疗后对肝脏中的肿瘤进行测量,同时眼眶取血检测血浆中谷氨酸转氨酶(ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的表达水平。结果表明,成功构建了报告基因载体p GL3-AFP、慢病毒表达载体p LentiR. AFPILZ-sTRAIL及pLentiR. AFPCop GFP,测序正确。AFP启动子在Hep G2细胞中的相对活性为49. 05%±5. 47%,由AFP启动子调控表达ILZ-sTRAIL基因的慢病毒可有效的感染HUMSCs。成功建立了Balb/c裸鼠的Hep G2肝癌原位移植瘤模型,ILZ-sTRAIL蛋白能特异的表达于肿瘤部位。MSC. AFPILZ-sTRAIL+5-FU组的肿瘤体积明显小于PBS组(P<0. 01),并且效果强于MSC. AFPILZs TRAIL单独治疗组;MSC. AFPILZ-sTRAIL+5-FU组可见肿瘤细胞固缩、坏死,并有不同程度的淋巴细胞浸润。MSC. AFPILZ-sTRAIL+5-FU组裸鼠血浆中ALT和AST的表达水平较对照组显著下降,其中ALT下降的更为明显(ALT,P<0. 01;AST,P <0. 05)。这一调控性治疗模式与5-FU联合应用在肝癌原位治疗中取得了良好的治疗效果,为肝癌的基因治疗和临床化疗提供了新思路。 展开更多
关键词 间充质干细胞 TRAIL 5-氟尿嘧啶 HepG2细胞 移植瘤 原位
乙肝病毒S基因Pre-S区突变的人肝癌细胞HepG2稳定株构建及其生物学行为变化 预览
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作者 郑羽飘 钱宝鑫 +4 位作者 覃琴 骆莹 朱争艳 高英堂 王凤梅 《山东医药》 CAS 2019年第2期36-39,共4页
目的构建稳定过表达乙肝病毒(HBV)S基因Pre-S区突变(Pre-S1缺失突变、Pre-S2缺失突变)的HepG2细胞株,并观察该突变对HepG2细胞生物学行为的影响。方法以NCBI中HBV JX661479.1的Pre-S/S片段序列信息为模板,设计并确定Pre-S1突变、Pre-S2... 目的构建稳定过表达乙肝病毒(HBV)S基因Pre-S区突变(Pre-S1缺失突变、Pre-S2缺失突变)的HepG2细胞株,并观察该突变对HepG2细胞生物学行为的影响。方法以NCBI中HBV JX661479.1的Pre-S/S片段序列信息为模板,设计并确定Pre-S1突变、Pre-S2突变的核苷酸序列,采用全基因合成法获得目的片段并定向导入带有FLAG标签的pLVX慢病毒质粒载体(pLenti-CMV-3FLAG-PGK-Puro),PCR、双酶切、Sanger测序技术检测重组质粒中目的片段的准确性。将HepG2细胞随机分为5组,空白对照组不处理,pLVX-vector组、野生型组、Pre-S1突变组、Pre-S2突变组分别感染pLVX-vector、pLVX-Pre-S/S、pLVX-Pre-S1 mut/S、pLVX-Pre-S2 mut/S慢病毒液;利用嘌呤霉素筛选HepG2稳定株,采用Western blotting法鉴定目的蛋白,分别采用克隆形成、细胞划痕试验观察HepG2细胞稳定株增殖、迁移能力。结果构建的pLVX-Pre-S/S、pLVX-Pre-S1 mut/S、pLVX-Pre-S2 mut/S重组表达质粒PCR电泳产物与理论值相符,经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后电泳产物与理论值相符;Sanger测序结果显示,pLVX-Pre-S1 mut/S、pLVX-Pre-S2 mut/S突变型除突变序列外,其他序列与HBV S基因野生型序列完全相同。空白对照组HepG2细胞全部死亡,其余组HepG2细胞部分存活。在野生型组、Pre-S1突变组、Pre-S2突变组43 kD分子量位置检测到目的条带表达,而pLVX-vector组无法检测到相应条带。与其他组比较,Pre-S2突变组HepG2的第14天克隆形成数增多、细胞相对迁移距离增大(P均<0.05)。结论成功构建了HBV Pre-S/S基因野生型及Pre-S突变型的HepG2细胞稳定株,HBV的S基因Pre-S2缺失突变导致肝癌HepG2细胞增殖及迁移能力增强。 展开更多
关键词 乙肝病毒 S基因Pre-S突变 肝癌 HEPG2细胞 细胞增殖 细胞迁移
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败酱草单萜环烯醚酯类对Hep G2、MCF7细胞增殖及凋亡的影响?
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作者 计莉强 吴景敏 +2 位作者 闵炜 陈毅芳 谢明华 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期692-697,共6页
目的探讨败酱草单萜环烯醚酯类(patrinia monoterpene iridoid ether esters,PMIEE)对HepG2和MCF7细胞增殖抑制和凋亡的影响。方法 HepG2和MCF7细胞经PMIEE作用后,采用CCK8法检测细胞增殖抑制情况;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检... 目的探讨败酱草单萜环烯醚酯类(patrinia monoterpene iridoid ether esters,PMIEE)对HepG2和MCF7细胞增殖抑制和凋亡的影响。方法 HepG2和MCF7细胞经PMIEE作用后,采用CCK8法检测细胞增殖抑制情况;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡及周期情况;细胞划痕实验检测细胞迁移状况;Western blot法检测Bcl-2、Bax、caspase3、cdc2和CyclinB1的表达情况。结果 CCK8、划痕实验和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测显示,PMIEE对HepG2和MCF7细胞均有显著的增殖抑制、促凋亡率和降低迁移率作用(P<0.05),呈一定量效关系,且PMIEE对HepG2细胞的周期阻滞以G2/M期为主,MCF7细胞以G0/G1期为主;Western blot结果显示,PMIEE可显著下调2种细胞Bcl-2、cdc2、CyclinB1的表达,上调Bax和caspase3的表达水平。结论 PMIEE可诱导HepG2和MCF7细胞增殖抑制和凋亡,下调Bcl-2、cdc2和CyclinB1表达及上调Bax和caspase3表达,其抗癌的潜在机制可能与此有关。 展开更多
关键词 败酱草 HEPG2细胞 MCF7细胞 增殖 凋亡
香叶醇联合对丙基苯甲醛抑制肝癌HepG2细胞增殖作用及机制研究 预览
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作者 付薛艳 黄羽静 +1 位作者 王玲 杨扬 《重庆医学》 CAS 2019年第6期921-924,共4页
目的探讨香叶醇联合对丙基苯甲醛抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用及机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测香叶醇和对丙基苯甲醛单独及联合用药对HepG2细胞的抑制作用,分析不同浓度的香叶醇和对丙基苯甲醛对HepG2细胞增殖的影响,以Annex... 目的探讨香叶醇联合对丙基苯甲醛抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用及机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测香叶醇和对丙基苯甲醛单独及联合用药对HepG2细胞的抑制作用,分析不同浓度的香叶醇和对丙基苯甲醛对HepG2细胞增殖的影响,以AnnexinV-FITC/PI双染法结合流式细胞术检测香叶醇与对丙基苯甲醛单独及联合作用对肝癌HepG2细胞凋亡的影响。结果浓度依次递增的香叶醇和对丙基苯甲醛单独作用于HepG2细胞增殖的抑制率分别为(2.33±0.22)%、(3.25±0.08)%、(9.23±0.06)%、(12.00±0.26)%、(6.86±0.23)%、(12.86±0.18)%、(14.43±0.30)%、(26.49±0.50)%,香叶醇和对丙基苯甲醛均对HepG2细胞增殖有一定的抑制作用。联合用药处理HepG2细胞的抑制率较单独用药组明显提高(P<0.05),均表现出协同作用。与对照组比较,单独用药组促进了肝癌HepG2细胞的凋亡,联合用药组与单独用药组相比促凋亡能力更明显。结论香叶醇和对丙基苯甲醛联合应用可能通过成分间的协同作用有效地抑制HepG2细胞增殖并促进其凋亡。 展开更多
关键词 香叶醇 对丙基苯甲醛 HEPG2细胞 药物疗法 联合 细胞凋亡
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对乙酰氨基酚诱导HepG2细胞氧化应激损伤模型的构建 预览
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作者 龚业滔 邹思 +4 位作者 杨彬君 吴岩斌 易骏 吴锦忠 吴建国 《海峡药学》 2019年第11期19-23,共5页
目的建立以对乙酰氨基酚(Acetaminophen,APAP)诱导的HepG2细胞氧化应激损伤模型。方法噻唑蓝〔MTT〕法检测HepG2细胞活力;微板法检测细胞培养液中天门冬氨酸氨基转氨酶(AST)、丙氨酸氨基转氨酶(ALT)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量,细胞中超氧... 目的建立以对乙酰氨基酚(Acetaminophen,APAP)诱导的HepG2细胞氧化应激损伤模型。方法噻唑蓝〔MTT〕法检测HepG2细胞活力;微板法检测细胞培养液中天门冬氨酸氨基转氨酶(AST)、丙氨酸氨基转氨酶(ALT)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量,细胞中超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)活性;利用荧光探针(DCFH-DA)法对HepG2细胞内活性氧的水平(ROS)进行检测;JC-1染色法检测不同浓度APAP对HepG2细胞线粒体膜电位的影响;Hoechst染色观察细胞凋亡情况。结果随着APAP处理时间和浓度增加,HepG2细胞相对活力明显降低,细胞数量减少,并伴随着皱缩、变圆甚至漂浮等形态学变化;细胞培养液中的ALT、AST和LDH含量显著升高,而细胞中的CAT和SOD活性明显下降;另外,胞内ROS水平和线粒体膜电位发生显著变化,细胞凋亡显著增加。诱导Hep G2细胞产生氧化应激损伤模型最佳条件为APAP浓度30mmol·L-1,细胞作用时间12h。结论本研究构建了APAP体外氧化应激细胞损伤模型,为保肝活性药物筛选及其作用机制研究提供细胞学模型。 展开更多
关键词 对乙酰氨基酚 HEPG2细胞 氧化应激损伤 细胞模型
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HIF-1α基因沉默联合丹参酮ⅡA抑制低氧人肝癌HepG2细胞增殖及其机制
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作者 李国平 蒲泽锦 +4 位作者 刘丽璇 项梦琦 胡敏敏 黄聪武 吴灵飞 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期733-738,共6页
目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因沉默联合丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)对低氧条件下人肝癌HepG2细胞增殖的影响及其机制。方法依据人HIF-1α基因信息筛选RNAi有效靶序列,设计慢病毒载体引物并构建质粒,包装慢病毒表达载体,转... 目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因沉默联合丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)对低氧条件下人肝癌HepG2细胞增殖的影响及其机制。方法依据人HIF-1α基因信息筛选RNAi有效靶序列,设计慢病毒载体引物并构建质粒,包装慢病毒表达载体,转染HepG2细胞,沉默低氧条件下HepG2细胞株中HIF-1α基因表达。将细胞分为正常对照组(野生型HepG2细胞)、干扰对照组(HepG2细胞转染NC-shRNA)、干扰组(HepG2细胞转染HIF-1α-shRNA),应用化学缺氧法(150μmol/L CoCl2)加入培养液模拟肿瘤细胞低氧微环境,采用Western Blot检测各组细胞HIF-1α蛋白表达证实基因沉默效果,采用CCK-8检测5 mg/L TanⅡA处理对低氧条件下各组细胞增殖活性的影响,采用Western Blot检测TanⅡA处理对各组细胞内p53和p21 CIP1/WAF1蛋白表达的影响。结果(1)HIF-1α-shRNA慢病毒载体包装成功且转染效率高,低氧培养各组细胞24 h后,与正常对照组及干扰对照组比较,干扰组细胞中HIF-1α蛋白表达明显降低(P<0.01)。(2)TanⅡA能时间依赖性抑制低氧条件下各组细胞增殖,与正常对照组及干扰对照组比较,干扰组细胞增殖明显活性下降(P<0.01,P<0.05)。(3)低氧培养各组细胞24 h,与正常对照组及干扰对照组比较,干扰组细胞中p53和p21 CIP1/WAF1蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。结论 HIF-1α基因沉默可增强TanⅡA对低氧HepG2细胞的增殖抑制作用,其机制可能与p53和p21 CIP1/WAF1蛋白水平上调有关。 展开更多
关键词 短发卡RNA 丹参酮ⅡA 缺氧诱导因子-1Α HEPG2细胞 低氧 细胞增殖
邻苯二甲酸单乙基己基酯对HepG2细胞内三酰甘油合成的影响
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作者 贺真 白剑英 +4 位作者 李耀福 姜雪霞 谭清 夏娜 杨守林 《环境与职业医学》 CSCD 北大核心 2019年第4期339-344,共6页
[目的]邻苯二甲酸盐是一类公认的环境内分泌干扰物,其作为塑化剂的普遍应用性使得人们可通过各种途径广泛接触,并越来越关注其健康危害。尽管现有的文献报道了邻苯二甲酸盐的肝脏毒性,但是具体机制还需进一步研究。本研究通过观察邻苯... [目的]邻苯二甲酸盐是一类公认的环境内分泌干扰物,其作为塑化剂的普遍应用性使得人们可通过各种途径广泛接触,并越来越关注其健康危害。尽管现有的文献报道了邻苯二甲酸盐的肝脏毒性,但是具体机制还需进一步研究。本研究通过观察邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)对Hep G2细胞内三酰甘油(TG)合成的影响,从而进一步探讨MEHP对脂肪代谢的影响。[方法]分别用不同浓度的MEHP(0、0.8、4.0、20.0、100.0μmol/L)以及0.05 mmol/L油酸(OA,阳性对照)对HepG2细胞染毒24、48 h,用化学-酶法测定HepG2细胞内以及细胞培养液上清中TG含量。用不同浓度的MEHP(0、0.01、1.0、10.0、100.0μmol/L)以及1 mmol/L OA (阳性对照)对HepG2细胞进行染毒6、24、48 h,采用实时定量PCR法检测细胞内TG合成相关基因GPAM、AGPAT2、LPIN2、DGAT2的mRNA表达水平。[结果]与阴性对照组比较:染毒24 h,仅0.5 mmol/L OA可使Hep G2细胞上清TG含量增加,20.0~100.0μmol/L MEHP和0.5 mmol/L OA可使Hep G2细胞内TG含量增加(P<0.05);染毒48 h,100.0μmol/L MEHP和0.5 mmol/L OA可使Hep G2细胞上清TG含量增加,20.0~100.0μmol/L MEHP和0.5 mmol/L OA可使Hep G2细胞内TG含量增加(P<0.05)。与阴性对照组比较:1.0~100.0μmol/L MEHP染毒6 h,100.0μmol/L MEHP染毒24 h以及10.0~100.0μmol/L MEHP染毒48 h均可使Hep G2细胞内GPAM mRNA的表达水平升高(P<0.05);不同浓度MEHP染毒6、24、48 h,AGPAT2 mRNA的表达水平均升高(P<0.05);染毒6、24、48 h,LPIN2 mRNA表达水平在10.0、100.0μmol/L MEHP剂量组均升高(P<0.05);染毒6 h,10.0、100μmol/L MEHP使细胞内DGAT2 mRNA的表达水平升高(P<0.05);染毒24 h,仅有100.0μmol/L MEHP可使DGAT2 mRNA表达水平升高(P<0.05);染毒48 h,MEHP染毒各剂量组均可使DGAT2 mRNA表达水平升高(P<0.05)。[结论]高剂量MEHP染毒可引起HepG2细胞内TG含量增加,导致肝细胞内脂质代谢紊乱。 展开更多
关键词 邻苯二甲酸单乙基己基酯 HEPG2细胞 三酰甘油 脂质累积
根皮苷对油酸诱导HepG2细胞脂肪及胆固醇代谢基因表达的影响 预览
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作者 王振强 杨胜楠 王浩 《粮食与油脂》 北大核心 2019年第6期25-29,共5页
以噻唑兰(MTT)比色法检测细胞活力,筛选出合适的根皮苷药物浓度及油酸浓度,建立油酸诱导肝癌细胞(HepG2)产生脂肪堆积体外模型。分别以MTT值、HepG2细胞形态、Oil Red O脂滴染色、甘油三酯(TG值)、胆固醇(TC值)、脂肪代谢及胆固醇代谢基... 以噻唑兰(MTT)比色法检测细胞活力,筛选出合适的根皮苷药物浓度及油酸浓度,建立油酸诱导肝癌细胞(HepG2)产生脂肪堆积体外模型。分别以MTT值、HepG2细胞形态、Oil Red O脂滴染色、甘油三酯(TG值)、胆固醇(TC值)、脂肪代谢及胆固醇代谢基因SREBP-1C、FAS、CPT-1、PPARα、HMGCR mRNA表达水平为指标,考察根皮苷对油酸高脂模型细胞的影响。根皮苷能够显著抑制油酸诱导的HepG2细胞脂肪堆积作用,90μmol/L根皮苷能够降低脂肪合成相关基因的表达,提高脂肪氧化代谢基因的表达,降低胆固醇合成相关基因的表达。 展开更多
关键词 根皮苷 油酸 脂肪代谢 胆固醇代谢 HEPG2细胞
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美他多辛通过诱导细胞自噬抑制肝细胞脂肪变性的作用机制研究
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作者 王海舫 黄静 +2 位作者 张岁 贾蓓 杨大伟 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第16期1752-1755,共4页
目的研究自噬在美他多辛(MTD)抑制肝细胞脂肪变性中的作用。方法用0.5mmol·L-1油酸(OA)处理人肝癌细胞株(HepG2)24h建立肝细胞脂肪变性模型。将细胞分为4组:空白组、模型组、对照组和实验组。在模型细胞的基础上,对照组加30μmol&#... 目的研究自噬在美他多辛(MTD)抑制肝细胞脂肪变性中的作用。方法用0.5mmol·L-1油酸(OA)处理人肝癌细胞株(HepG2)24h建立肝细胞脂肪变性模型。将细胞分为4组:空白组、模型组、对照组和实验组。在模型细胞的基础上,对照组加30μmol·L-1MTD继续处理24h;实验组加10mmol·L-13-甲基腺嘌呤(3-MA)处理1h后,加入30μmol·L-1MTD处理23h;空白组给予等体积的溶剂处理。以细胞脂质比色法检测细胞脂质含量,以蛋白免疫印迹法检测自噬标志蛋白MAP1LC3B2和细胞溶质内激素敏感脂酶(HSL)的表达水平。结果空白组、模型组、对照组和实验组的脂质含量(OD值)分别为0.16±0.04,0.32±0.08,0.21±0.02和0.26±0.07,模型组与空白组比较,或者对照组和实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);上述这4组的MAP1LC3B2/β-actin分别为0.51±0.07,0.62±0.04,1.21±0.12和0.71±0.09;上述这4组的p-T-HSL/β-actin分别为0.16±0.05,2.13±0.24,1.34±0.16和1.79±0.13,对照组与模型组比较,MAP1LC3B2表达显著增加;实验组能明显抑制MTD诱导的MAP1LC3B2的表达;模型组中p-HSL水平明显高于空白组;对照组p-HSL水平明显低于模型组,上述指标的差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论美他多辛能通过诱导自噬而改善OA引起的肝细胞脂肪变性。 展开更多
关键词 HEPG2细胞 肝脂肪变性 美他多辛 自噬
基于灰色关联分析的茜草醇提物抗氧化、抗肝癌谱效关系研究
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作者 李慧 包永睿 +2 位作者 王帅 李天娇 孟宪生 《中南药学》 CAS 2019年第6期815-819,共5页
目的研究茜草特征图谱与其抗氧化、抗肝癌的相关性,探讨茜草抗氧化及抗肝癌活性的物质基础。方法采用高效液相色谱法建立不同批次茜草的指纹图谱;采用ABTS法评价茜草提取物的抗氧化活性,MTT法检测茜草提取物对肝肿瘤细胞的影响;采用灰... 目的研究茜草特征图谱与其抗氧化、抗肝癌的相关性,探讨茜草抗氧化及抗肝癌活性的物质基础。方法采用高效液相色谱法建立不同批次茜草的指纹图谱;采用ABTS法评价茜草提取物的抗氧化活性,MTT法检测茜草提取物对肝肿瘤细胞的影响;采用灰色关联度分析方法进行“谱-效”关联分析。结果建立茜草特征指纹图谱,标定了26个色谱峰;药效实验结果表明不同茜草样品抗氧化及抑制肝肿瘤细胞(HepG2)增殖活性存在差异;灰色关联分析结果表明7个色谱峰与抗氧化活性密切相关(γ>0.90),分别是1、5、6、9、23、24、26号色谱峰;9个色谱峰与抗肿瘤细胞活性密切相关(γ> 0.90),分别是1、3、6、14、15、18、19、23、24。通过与对照品比对,14、18、19、26号峰为新橙皮苷、山柰酚、茜草素及大叶茜草素。结论茜草抗氧化、抗肿瘤的药效是多种成分共同作用的结果,明确了茜草抗氧化活性与抗肝癌活性的物质基础,为开展以药效为导向的茜草药材质量评价研究提供科学依据。 展开更多
关键词 茜草 指纹图谱 ABTS法 HepG2细胞 抗氧化 抗肝癌 灰色关联度分析 谱效关系
齐墩果酸对PCSK9mRNA表达及罗苏伐他汀降血脂作用的影响 预览
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作者 李雪飞 张天杰 胡雷蕾 《湘南学院学报:医学版》 2019年第2期6-10,共5页
目的探讨齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对大鼠肝脏、HepG2细胞PCSK9mRNA表达的影响,及OA与罗苏伐他汀(RSV)联用的降脂效果。方法 40只Wistar大鼠随机分为5组,每组8只。正常对照组以基础饲料喂养5周,高脂模型组、RSV组、OA组、OA联合RSV... 目的探讨齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对大鼠肝脏、HepG2细胞PCSK9mRNA表达的影响,及OA与罗苏伐他汀(RSV)联用的降脂效果。方法 40只Wistar大鼠随机分为5组,每组8只。正常对照组以基础饲料喂养5周,高脂模型组、RSV组、OA组、OA联合RSV组以高脂饲料喂养5周,其中后3组从第4周开始分别给予RSV 10 mg/(kg·d)、OA 30 mg/(kg·d)、RSV 10 mg/(kg·d)+OA 30 mg/(kg·d)治疗2周。实验结束后,检测各组大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C水平,qPCR检测各组大鼠肝脏PCSK9mRNA和LDLRmRNA的表达。体外培养HepG2细胞,分为正常对照组,阳性对照组,RSV组(10μmol/L RSV),OA组(100μmol/L OA),OA联合RSV组(10μmol/L RSV+100μmol/L OA),其中后4组加入25 mg/L LDL。药物孵育24 h,qPCR检测各组HepG2细胞PCSK9mRNA和LDLRmRNA的表达。结果与高脂模型组比较,RSV组、OA组、OA联合RSV组的血清TC、TG、LDL-C水平均下降(P<0.05),其中OA联合RSV组下降更显著(P<0.05)。肝组织及HepG2细胞的qPCR结果显示:与高脂模型组或阳性对照组比较,RSV组PCSK9mRNA、LDLRmRNA表达增加(P<0.05),OA组PCSK9mRNA表达减少(P<0.05)、LDLRmRNA表达无明显变化(P>0.05);OA联合RSV组PCSK9mRNA、LDLRmRNA的表达介于RSV组与OA组两组间,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 OA可抑制肝脏、HepG2细胞PCSK9mRNA的表达,能拮抗RSV上调PCSK9mRNA表达的作用,与RSV联用能增强其降脂效果。 展开更多
关键词 齐墩果酸 罗苏伐他汀 枯草溶菌素转化酶9 低密度脂蛋白受体 高脂血症 HEPG2细胞
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骨髓间充质干细胞条件培养液对H2O2损伤HepG2细胞保护作用的研究 预览
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作者 王东明 邢晓伟 +4 位作者 叶晓梅 陈稚 李宝红 苟占平 吴都督 《广东医科大学学报》 2019年第3期234-239,共6页
目的探讨骨髓间充质干细胞条件培养液(BMCs-CM)对H2O2损伤HepG2细胞的保护作用。方法用200μmol/LH2O2处理HepG2细胞,构建氧化损伤细胞模型,再用不同含量BMCs-CM处理,检测细胞增殖、乳酸脱氢酶、丙二醛、超氧化物歧化酶、Nrf-2水平。结... 目的探讨骨髓间充质干细胞条件培养液(BMCs-CM)对H2O2损伤HepG2细胞的保护作用。方法用200μmol/LH2O2处理HepG2细胞,构建氧化损伤细胞模型,再用不同含量BMCs-CM处理,检测细胞增殖、乳酸脱氢酶、丙二醛、超氧化物歧化酶、Nrf-2水平。结果BMCs-CM提高氧化损伤HepG2细胞存活率、超氧化物歧化酶水平(P<0.01),降低乳酸脱氢酶、丙二醛含量(P<0.01);高含量BMCs-CM上调氧化损伤HepG2细胞中Nrf-2蛋白表达(P<0.01)。结论BMCs-CM对H2O2诱导的氧化损伤HepG2细胞有保护作用,其机制可能与Nrf-2蛋白表达有关。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 条件培养液 氧化损伤 HEPG2细胞
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CDC25A与IL-6在肝癌HepG2细胞中的表达及相互作用研究 预览
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作者 陈思 唐艳萍 曹骥 《海南医学院学报》 CAS 2019年第13期961-964,969共5页
目的:本研究旨在进一步研究CDC25A基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭和转移的影响,探讨CDC25A与IL-6在肝癌中是否存在相互作用。方法:用慢病毒CDC25A-shRNA转染HepG2细胞以特异性阻断CDC25A的表达为实验组(KD组),用慢病毒阴性shRNA转染作... 目的:本研究旨在进一步研究CDC25A基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭和转移的影响,探讨CDC25A与IL-6在肝癌中是否存在相互作用。方法:用慢病毒CDC25A-shRNA转染HepG2细胞以特异性阻断CDC25A的表达为实验组(KD组),用慢病毒阴性shRNA转染作为阴性对照组(NC组),用常规培养的HepG2细胞为空白对照组(Control组)。采用实时荧光定量PCR、Westernblot检测CDC25A、IL-6的mRNA及蛋白的表达水平。结果:实验组IL-6mRNA的表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。IL-6的蛋白表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:沉默肝癌HepG2细胞中的CDC25A基因,IL-6的表达下调。CDC25A可能通过调节IL-6的表达,在肝癌的发生发展及侵袭过程中发挥作用。 展开更多
关键词 CDC25A IL-6 肝癌 HEPG2细胞
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马齿苋多糖抑制HepG2细胞存活的作用机制 预览
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作者 胡庆娟 牛庆川 +3 位作者 宋皓 白书瑜 贺文杰 李玉萍 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2019年第3期38-44,共7页
探讨马齿苋多糖(polysaccharide of Portulaca oleracea L.,POP-A)对HepG2细胞的抑制作用及作用机制。体外培养HepG2细胞,分别用不同浓度的POP-A处理细胞,采用四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazoliu... 探讨马齿苋多糖(polysaccharide of Portulaca oleracea L.,POP-A)对HepG2细胞的抑制作用及作用机制。体外培养HepG2细胞,分别用不同浓度的POP-A处理细胞,采用四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]法、荧光定性定量法、免疫印迹法以及反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)法等检测POP-A对HepG2细胞存活率、线粒体膜电位、细胞内钙离子以及相关凋亡蛋白与基因表达的影响。结果表明:当POP-A浓度为1.25、2.5、5 mg/mL时,POP-A能够显著抑制HepG2肝癌细胞、降低线粒体膜电位、增加细胞内的钙离子浓度、提高p53和Bax的基因及蛋白表达。说明POP-A有抑制HepG2肝癌细胞的作用,其作用机制与促进HepG2细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 马齿苋 多糖 HEPG2细胞 细胞存活率 细胞凋亡
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