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单核细胞与未成熟树突状细胞粘附相关差异表达基因筛选及相互作用分析
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作者 王玉林 胡祖权 +2 位作者 叶远浓 唐福州 曾柱 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第5期2228-2235,共8页
本研究目的是分析单核细胞(monocytes,mon)与未成熟树突状细胞(immature DCs,im DCs)两个不同发育阶段间差异表达基因的功能及其编码蛋白的相互作用,筛选出粘附相关的关键基因,并进行生物信息学分析。我们从NCBI(美国国立生物技术... 本研究目的是分析单核细胞(monocytes,mon)与未成熟树突状细胞(immature DCs,im DCs)两个不同发育阶段间差异表达基因的功能及其编码蛋白的相互作用,筛选出粘附相关的关键基因,并进行生物信息学分析。我们从NCBI(美国国立生物技术信息中心)公共数据平台GEO(Gene Expression Omnibus)下载基因芯片数据GSE15076,使用perl语言将探针id转换成gene symbol。利用R Bioconducto软件(RGui 3.3.1)解析原始数据并筛选差异基因。进一步利用STRING online工具筛选核心差异基因(可信度≥0.4),Cytoscape软件构造蛋白质相互作用网络图。对STRING online工具筛选核心差异基因进行京都基因与基因组百科全书(kyotoencyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析。im DCs相对于mon表达的差异基因,过滤条件为Log FC〉2和adj.p.val〈0.01。通过分析,我们共找到1 223个差异基因,其中567个上调基因,656个下调基因,通过进一步筛选,在网络中的上调基因有399个,下调基因458个,主要涉及m TOR信号通路、细胞代谢、细胞粘附等功能。其中上调基因中CDH1,CD274等差异基因与细胞粘附密切相关,而下调基因中SELL、IL-6、TNF等差异基因与细胞粘附改变密切相关。因此,在单核细胞发育分化到未成熟树突细胞阶段,粘附相关基因的表达变化,对进一步深入理解im DCs独特的生物物理学特性和免疫学功能来说具有重要意义。为进一步研究DCs细胞粘附功能的分子机制提供指导。 展开更多
关键词 单核细胞 未成熟树突状细胞 基因芯片分析 生物信息学 细胞粘附
响应面优化多细胞因子联合诱导分离树突状细胞的工艺
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作者 段训威 肖桂清 +4 位作者 赵艳兰 王礼兴 郑晨娜 董乐 吴文林 《细胞与分子免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第7期896-902,共7页
目的优化多细胞因子联合诱导分离树突状细胞(DC)工艺,提高小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)体外诱导分离效率。方法采用重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)、脂多糖(LPS)、重组小鼠肿... 目的优化多细胞因子联合诱导分离树突状细胞(DC)工艺,提高小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)体外诱导分离效率。方法采用重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)、脂多糖(LPS)、重组小鼠肿瘤坏死因子α(rmTNF-α)和诱导时间为考察因素,未成熟树突状细胞(imDC)和成熟树突状细胞(mDC)获得量为考察指标,采用Box-Behnken设计试验,响应面法分析并验证试验结果,并结合光学显微镜、电子显微镜、流式细胞术分析BMDC形态、表面标志物等指标。结果响应面优化诱导imDC最佳诱导工艺rmGM-CSF为46 ng/mL、rmIL-4为24 ng/mL,诱导时间为6 d;imDC获取量为(4.58±0.28)×10^6个,相对偏差为4.00%。诱导mDC最佳工艺LPS为1.4μg/m L、rmTNF-α为30 ng/m L,诱导时间为1 d;m DC获取量为(4.21±0.15)×10^6个,相对偏差为3.80%。体外诱导5~7 d,可获得足量的具有典型树突状的DC,流式细胞术检测发现imDC较高表达CD11c(68.62%±2.3%),低表达CD86(37.95%±1.8%);mDC高表达CD11c(82.05%±1.6%)和CD86(90.34%±1.4%)。结论单因素实验与响应面优化联合优化多细胞因子体外快速、高效诱导扩增DC,为进一步研究提供了工具。 展开更多
关键词 未成熟树突状细胞 成熟树突状细胞 BOX-BEHNKEN设计 响应面法
BD926对骨髓源性未成熟树突状细胞增殖及吞噬作用的影响 预览
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作者 苏志伟 杨苗 +5 位作者 杨凯 徐灿 彭旭 段佳毅 冷潇 王衍堂 《成都医学院学报》 CAS 2017年第4期420-424,共5页
目的 研究苯并噻唑类衍生物BD926对小鼠骨髓源性未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs)增殖及吞噬作用的影响。方法 分离小鼠骨髓源性单核细胞诱导imDCs,借助PE/Annexin V凋亡检测试剂盒、CFSE细胞增殖试剂盒以及FITC-葡... 目的 研究苯并噻唑类衍生物BD926对小鼠骨髓源性未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs)增殖及吞噬作用的影响。方法 分离小鼠骨髓源性单核细胞诱导imDCs,借助PE/Annexin V凋亡检测试剂盒、CFSE细胞增殖试剂盒以及FITC-葡聚糖,应用流式细胞术检测BD926对imDCs在粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)刺激下的细胞存活、细胞增殖以及吞噬作用的影响。结果 与PBS组相比,25、5、1μM的BD926处理imDCs后,其细胞增殖水平降低,差异有统计学意义(P〈0.05);高、中、低3个剂量组BD926处理后,imDCs与PBS组相比,细胞存活差异无统计学意义(P〉0.05);高、中、低3个剂量组BD926处理后,imDCs与PBS组相比,吞噬作用差异无统计学意义(P〉0.05)。结论 BD926在体外可明显抑制GM-CSF刺激的imDCs增殖作用,对imDCs的细胞存活和吞噬作用则无明显影响。 展开更多
关键词 苯并噻唑类衍生物 未成熟树突状细胞 细胞增殖 吞噬作用 凋亡
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未成熟树突状细胞快速分离与体外诱导培养及其鉴定研究 预览 被引量:5
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作者 朱娜 王海桃 +3 位作者 李昌 李海僖 郭焱 金宁一 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第7期1043-1047,共5页
目的:以人外周血来源的单核细胞为前体细胞,建立体外快速分离和诱导培养未成熟树突状细胞(Immature dendritic cell,iDC)的方法。方法:采用Ficoll密度梯度离心方法和MACS磁珠分选系统,收集高纯度CD14~+单核细胞;用rhGM-CSF、rhIL-... 目的:以人外周血来源的单核细胞为前体细胞,建立体外快速分离和诱导培养未成熟树突状细胞(Immature dendritic cell,iDC)的方法。方法:采用Ficoll密度梯度离心方法和MACS磁珠分选系统,收集高纯度CD14~+单核细胞;用rhGM-CSF、rhIL-4联合诱导培养CD14~+单核细胞,第4天获得未成熟树突状细胞(iDC),应用流式细胞术检测细胞表面标记(CCR5)和抗原吞噬能力,普通光学显微镜、扫描电镜和透射电镜观察细胞表面和内部结构特征。结果:CD14免疫磁珠技术获得CD14~+单核细胞纯度达94%以上,诱导分化第4天的iDC具有CCR5特征性标志和吞噬能力,普通光学显微镜及电镜观察到iDC出现树突状细胞典型特征。结论:体外快速诱导培养是获得大量具有典型特征的iDC的有效方法,并可应用于进一步实验研究。 展开更多
关键词 单核细胞 未成熟树突状细胞 诱导培养 鉴定
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SOCS1基因调控未成熟DC及其预防小鼠移植物抗宿主病的功能研究 被引量:3
5
作者 王苑 张琦 +2 位作者 张艳霞 张敬军 夏荣 《中国输血杂志》 CAS 北大核心 2015年第5期497-503,共7页
目的构建慢病毒干扰的树突状细胞(DC)用于预防移植物抗宿主病(GVHD)。方法通过慢病毒转染小鼠骨髓来源DC,构建过表达细胞因子信号抑制因子1(SOCS1)基因的DC(DC-SOCS1)。用荧光实时定量PCR(RT-PCR)和Western blot方法检测慢病... 目的构建慢病毒干扰的树突状细胞(DC)用于预防移植物抗宿主病(GVHD)。方法通过慢病毒转染小鼠骨髓来源DC,构建过表达细胞因子信号抑制因子1(SOCS1)基因的DC(DC-SOCS1)。用荧光实时定量PCR(RT-PCR)和Western blot方法检测慢病毒转染后的细胞SOCS1在基因和蛋白水平的表达量变化。通过脂多糖(LPS)刺激后,以流式细胞仪检测DC-SOCS1是否依然保持未成熟DC(i DC)的特性。将C57BL/6小鼠分为4组(n≥5),DC-GFP组:输注DC-GFP+异基因小鼠骨髓细胞和脾细胞;DC-SOCS1组:输注DC-SOCS1+异基因小鼠骨髓细胞和脾细胞;i DC组:输注i DC+异基因小鼠骨髓细胞和脾细胞;磷酸盐缓冲液(PBS)组:输注PBS+异基因小鼠骨髓细胞和脾细胞。输注的异基因骨髓细胞量为1×10^7/只,脾细胞量为2×10^7/只,DC-SOCS1和DC-GFP的输注量为2×10^6/只。通过眼静脉将指定细胞输入各组实验小鼠体内,观察小鼠体重、外周血和靶器官组织的病理学变化。以微量标本多指标流式蛋白定量技术(CBA)检测各组Th1细胞因子的分泌水平。结果 1)RT-PCR和Western blot均证实转染后DC-SOCS1细胞内SOCS1表达量明显提高,2)流式检测LPS刺激前后DC-GFP组、DC-SOCS1组和i DC组胞表面共刺激分子表达量,CD80:LPS刺激前为25.34%、23.74%、29.16%,LPS刺激后为67.92%、52.17%、82.42%;CD86:LPS刺激前为46.61%、44.77%、46.18%,LPS刺激后为:80.47%、57.11%、74.10%;MHC-Ⅱ:LPS刺激前27.61%、23.67%、22.86%,LPS刺激后为:90.33%、48.57%、94.58%。3)移植后21 d各组小鼠血细胞恢复情况,WBC(×10^9/L):2.18±0.32、3.37±0.37、1.12±0.05、1.48±0.20;Plt:330.83±53.04、563.25±71.76、153.27±16.97、101.00±6.01;Hb(g/L):103.83±8.24、128.00±6.19、88.14±7.45、99.75±8.16(P〈0.05)。4)与DCSOCS1组小鼠相比,其他各组均有不同程度靶组织损伤表现:小肠绒毛断裂坏死,粘膜下层及肌层水肿;肺组� 展开更多
关键词 树突状细胞 未成熟DC 移植物抗宿主病 异基因移植骨髓移植 细胞因子信号抑制因子1 慢病毒载体
小鼠AChR(m97-116)肽段-CD205融合单链抗体的表达及活性检测 预览
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作者 孙超 袁媛 +5 位作者 郑鹏飞 高星 赵元琳 李乐 常婷 李柱一 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 2015年第1期4-8,共5页
目的构建小鼠AChR(m97-116)肽段-CD205融合单链抗体原核表达载体,表达融合单链抗体(m97-116-scFv205),检测其对未成熟树突状细胞(iDC)的亲和力,为通过iDC诱导AChR特异性免疫耐受提供实验基础。方法分离培养小鼠原代骨髓祖细胞,经... 目的构建小鼠AChR(m97-116)肽段-CD205融合单链抗体原核表达载体,表达融合单链抗体(m97-116-scFv205),检测其对未成熟树突状细胞(iDC)的亲和力,为通过iDC诱导AChR特异性免疫耐受提供实验基础。方法分离培养小鼠原代骨髓祖细胞,经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)10ng/mL和白细胞介素4(IL-4)10ng/mL刺激培养,经脂多糖(LPS)1ng/mL诱导24h后,高倍显微镜及扫描电镜观察细胞形态;流式细胞术(FCM)检测细胞表面相关分子表达,对iDC表型进行鉴定;构建原核表达载体m97-116-scFv205-pET22b(+),0.1 mmol/mL异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)18℃诱导表达18h,镍(Ni)柱纯化,SDSPAGE和Western blot检测融合单链抗体m97-116-scFv205表达及纯化;FCM检测其与iDC的亲和力。结果形态学观察提示培养细胞为DC,FCM结果显示培养细胞符合iDC表型;SDS-PAGE和Western blot在上清中检测到m97-116-scFv205可溶性表达;亲和力检测显示m97-116-scFv205与iDC具有较高亲和力。结论成功构建并表达m97-116-scFv205融合单链抗体,该抗体与iDC具有较高的亲和力,为下一步靶向iDC诱导AChR特异性免疫耐受治疗重症肌无力奠定了良好的实验基础。 展开更多
关键词 重症肌无力 未成熟树突状细胞 融合单链抗体 CD205
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CCR7基因修饰的未成熟树突状细胞在大鼠高危角膜移植免疫排斥反应中的作用 预览 被引量:4
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作者 周琨 高晓唯 +4 位作者 蔡岩 李文静 胡裕坤 田丽丽 付燕 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2014年第1期17-21,共5页
目的研究趋化因子受体7(chemokinereceptor7,CCR7)基因重组腺病毒体外转染供体骨髓来源的未成熟树突状细胞(immaturedendriticcells,imDC)对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的作用。方法以60只SD大鼠为受体,30只Wistar大鼠为供体... 目的研究趋化因子受体7(chemokinereceptor7,CCR7)基因重组腺病毒体外转染供体骨髓来源的未成熟树突状细胞(immaturedendriticcells,imDC)对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的作用。方法以60只SD大鼠为受体,30只Wistar大鼠为供体,碱烧伤建立高危角膜移植模型。将sD大鼠分为空白对照组、未修饰imDC组、imDC+腺病毒空载体组(imDC+Ad组)和imDC+CCR7腺病毒组(imDCs+Ad.CCR7组),每组15只;各组受体术前7d和术后3d经尾静脉注入PBS液0.1mL、供体来源的未修饰imDC10×10^6个(0.1mL)、空载体腺病毒转染后的imDC10×10^6个(0.1mL)和携带CCR7腺病毒转染后的imDC10X10^6个(0.1mL);术后受体大鼠每天裂隙灯下观察角膜植片存活情况并对角膜植片的混浊、水肿及新生血管程度进行评分;术后14d每组随机处死5只大鼠取角膜行HE切片观察。结果角膜植片存活时间:空白对照组(10.44±1.88)d,im-DC组(16.00±2.18)d。imDC4-Ad组(15.11±2.03)d,imDC+Ad.CCR7组(23.67±2.83)d,4组间比较差异有统计学意义(F=53.005,P=0.000);与空白对照组相比,imDC组、imDC-4-Ad组、imDC4-Ad-CCR7组角膜植片存活时间均明显延长(均为P〈0.01):imDC4-Ad-CCR7组较imDC组与imDC-4-Ad组均明显延长(均为P〈0.01)。角膜植片HE染色切片显示,imDC+Ad-CCR7组的植片轻度水肿、基质层板层纤维排列有序,未修饰imDC组和imDC+Ad组呈不同程度的水肿,基质层板层纤维排列轻度紊乱、有少量炎性细胞;空白对照组植片高度水肿、角膜基质板层纤维紊乱并出现大量炎性细胞和新生血管。结论静脉注入CCR7采因修饰的imDC可以明显延长大鼠高危角膜移植后角膜植片存活时间.抑制角膜移植免疫排斥反应。 展开更多
关键词 趋化因子受体7 未成熟树突状细胞 角膜移植 免疫耐受
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Mechanism of immune tolerance induced by donor derived immature dendritic cells in rat high-risk corneal transplantation
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作者 Xiao-Wei Gao Yan Fu +3 位作者 Wen-Jing Li An-Jie Du Xia Li Xu-Dong Zhao 《国际眼科杂志:英文版》 SCIE CAS 2013年第3期269-275,共7页
AIM: To study the role of immature dendritic cells (imDCs) on immune tolerance in rat penetrating keratoplasty (PKP) in high -risk eyes and to investigate the mechanism of immune hyporesponsiveness induced by donor-d... AIM: To study the role of immature dendritic cells (imDCs) on immune tolerance in rat penetrating keratoplasty (PKP) in high -risk eyes and to investigate the mechanism of immune hyporesponsiveness induced by donor-derived imDCs. ·METHODS: Seventy-five SD rats (recipient) and 39 Wistar rats (donor) were randomly divided into 3 groups: control, imDC and mature dendritic cell (mDC) group respectively. Using a model of orthotopic corneal transplantation in which allografts were placed in neovascularized high -risk eyes of recipient rat. Corneal neovascularization was induced by alkaline burn in the central cornea of recipient rat. Recipients in imDC group or mDC group were injected donor bone marrow-derived imDCs or mDCs of 1 ×10 6 respectively 1 week before corneal transplantation via tail vein. Control rat received the same volume of PBS. In each group, 16 recipients were kept for determination of survival time and other 9 recipients were executed on day 3, 7 and 14 after transplantation. Cornea was harvested for hematoxylin - eosin staining and acute rejection evaluation, Western blot was used to detect the expression level of Foxp3. ·RESULTS: The mean survival time of imDC group was significantly longer than that of control and mDC groups (all P 【0.05). The expression level of Foxp3 on CD4 + CD25 + T cells of imDC group (2.24 ±0.18) was significantly higher than that in the control (1.68 ±0.09) and mDC groups (1.46±0.13) (all P 【0.05).·CONCLUSION: Donor -derived imDC is an effective treatment in inducing immune hyporesponsiveness in rat PKP. The mechanism of immune tolerance induced by imDC might be inhibit T lymphocytes responsiveness by regulatory T cells. 展开更多
关键词 IMMATURE dendriti ccell HIGH-RISK KERATOPLASTY REGULATORY T cells
未成熟树突状细胞在大鼠高危角膜移植免疫排斥反应中的作用 预览 被引量:7
9
作者 付燕 杜安杰 +3 位作者 高晓唯 李文静 李霞 赵旭东 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第2期130-134,共5页
目的研究供体骨髓来源的未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用,探讨imDC抑制排斥反应的机理。方法以60只SD大鼠为受体,30只Wistar大鼠为供体,碱烧伤建立同种异体高危角膜移植模... 目的研究供体骨髓来源的未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用,探讨imDC抑制排斥反应的机理。方法以60只SD大鼠为受体,30只Wistar大鼠为供体,碱烧伤建立同种异体高危角膜移植模型。受体SD大鼠随机分为对照组、imDC组、成熟树突状细胞(mature dendritic cell,mDC)组,每组20只;对照组:术前7d经尾静脉注射PBS液0.1mL;imDC组:术前7d经尾静脉注射体外培养的供体骨髓来源的imDC1×106个;mDC组:术前7d经尾静脉注射体外培养的供体骨髓来源的mDC1×106个。术后每天裂隙灯观察各组角膜植片存活情况并评分;于术后3d、7d、14d每组随机处死4只大鼠,取角膜植片行HE染色,Westernblot分析检测各组大鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞表面特异性标志转录因子Foxp3编码的Scurfin蛋白的表达。结果 imDC组角膜植片存活时间为(19.6±1.1)d,较对照组的(9.5±0.9)d和mDC组的(7.0±1.6)d明显延长,差异均有统计学意义(均为P〈0.01);Westernblot检测结果显示,术后3d、7d、14dimDC组Foxp3编码的Scurfin蛋白的表达(相对吸光度值分别为2.21±0.76、2.31±0.68、2.24±0.18)明显高于对照组(相对吸光度值分别为1.41±0.12、1.47±0.25、1.68±0.09)和mDC组(相对吸光度值分别为1.43±0.14、1.58±0.41、1.46±0.13),差异均有统计学意义(均为P〈0.05)。结论应用体外培养的供体来源的imDC可以抑制大鼠同种异体高危角膜移植免疫排斥反应,而诱导CD4+CD25+调节性T细胞的产生是其降低大鼠角膜移植术后免疫排斥反应的机制之一。 展开更多
关键词 未成熟树突状细胞 角膜移植 免疫耐受 调节性T细胞
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大鼠髓系来源的树突状细胞的体外诱导及功能鉴定 预览 被引量:1
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作者 汪泳 程云生 +2 位作者 周晓俊 秦磊 钱海鑫 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2013年第2期133-137,共5页
目的探讨建立合适的大鼠骨髓源性未成熟树突状细胞(imDC)的培养方法,并对其生物学特性进行评价。方法分别以不同剂量的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素(IL)4诱导分化获得大鼠骨髓源性树突状细胞(DC),比较收获率... 目的探讨建立合适的大鼠骨髓源性未成熟树突状细胞(imDC)的培养方法,并对其生物学特性进行评价。方法分别以不同剂量的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素(IL)4诱导分化获得大鼠骨髓源性树突状细胞(DC),比较收获率及特异性标记蛋白(OX62)阳性的DC数量,获得最佳细胞因子浓度。并用流式细胞仪分析DC表型,混合淋巴细胞反应(MLR)检测其刺激同种T细胞增殖能力,ELISA法测定MLR上清IL-12、γ-免疫反应性纤维结合素(IFN-γ)水平。结果GM—CSF5ng/ml可诱导出更高的收获率及OX62的阳性率。GM—CSF5ng/ml培养7d的DC,表达中等水平的主要组织相容性(抗原)复合物Ⅱ类(MHCII)和低水平的CD86;其分泌少量IL-12;刺激同种T细胞增殖能力极低。脂多糖(LPS)刺激后MHCⅡ、CD86表达明显增加;分泌IL-12和IFN-γ增加;刺激同种T细胞增殖能力增强。结论GM—CSF5 ng/ml为诱导大鼠骨髓源性imDC的最佳剂量,培养7—9d可以获得足够数量和纯度的imDC。 展开更多
关键词 大鼠 骨髓 未成熟树突状细胞 诱导
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未成熟树突状细胞诱导Th1/Th2偏移抑制大鼠高危角膜移植排斥反应的实验研究 预览 被引量:9
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作者 付燕 高晓唯 +3 位作者 王梦斐 杜安杰 李霞 赵旭东 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第3期220-224,共5页
目的研究供体来源的未成熟树突状细胞(immaturedendriticcell,imDC)对高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用及其机制。方法以45只SD大鼠为受体,23只Wist—ar大鼠为供体,碱烧伤建立同种异体高危角膜移植模型。受体SD大鼠随机分为对... 目的研究供体来源的未成熟树突状细胞(immaturedendriticcell,imDC)对高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用及其机制。方法以45只SD大鼠为受体,23只Wist—ar大鼠为供体,碱烧伤建立同种异体高危角膜移植模型。受体SD大鼠随机分为对照组、imDC组、成熟树突状细胞(maturedendriticcell,mDC)组,每组15只;对照组:术前7d经尾静脉注射PBS液0.1mL:imDC组:于术前7d经尾静脉注射体外培养的供体骨髓来源的imDC10^6个;mDC组:于术前7d经尾静脉注射体外培养的供体骨髓来源的mDC10^6个。术后每天裂隙灯观察各组角膜植片存活情况并评分;于术后14d每组随机处死5只大鼠,RT-PCR检测角膜植片Th1/Th2细胞因子白细胞介素(interleukin,IL)-12、IL-15、IL-18、IL-4、IL.10mRNA表达水平。结果imDC组角膜植片存活时间为(19.8±2.1)d,较对照组的(9.2±1.9)d和mDC组的(7.9±1.4)d显著延长,差异均有统计学意义(均为P〈0.01)。RT-PCR结果显示,imDC组Th1型细胞因子IL-12、IL-15、IL-18mRNA表达较对照组和mDC组明显降低;Th2型细胞因子IL-4、IL-10mRNA表达明显升高。结论体外培养的供体来源的imDC可以抑制大鼠同种异体高危角膜移植免疫排斥反应,而调节受体Th1/Th2细胞因子比例是其降低大鼠角膜移植术后免疫排斥反应的机制之一。 展开更多
关键词 未成熟树突状细胞 角膜移植 免疫耐受 TH1 TH2
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应用iDC从G-CSF动员的外周血中诱导产生CD4^+CD25^+调节性T细胞 预览
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作者 苏虹 王忱诚 +1 位作者 王保龙 彭美玲 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第5期 500-504,共5页
目的探讨在粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员的外周血单个核细胞(PBMC)中诱导产生CD4^+CD25^+调节性T细胞(Treg)的可行性及其表型和功能。方法收集G-CSF动员和未动员的BALB/c♀鼠的PBMC,采用磁活性标记的细胞分选法(MACS)分选BA... 目的探讨在粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员的外周血单个核细胞(PBMC)中诱导产生CD4^+CD25^+调节性T细胞(Treg)的可行性及其表型和功能。方法收集G-CSF动员和未动员的BALB/c♀鼠的PBMC,采用磁活性标记的细胞分选法(MACS)分选BALB/c♀鼠的CD4^+CD25-T细胞和CD4^+CD25^+T细胞及C57BL/6♂鼠的CD11c+未成熟树突细胞(iDC),建立细胞培养体系,经iDC体外诱导G-CSF动员和未动员的CD4^+CD25-T细胞转换为CD4^+CD25^+Treg细胞(iTreg)。分别应用流式细胞术、混合淋巴细胞反应技术检测诱导后细胞的CD25、Foxp3的表达水平以及抑制功能,比较G-CSF动员与非动员组间iTreg的表型和抑制功能的差异。结果 iDC诱导G-CSF未动员和动员的组间CD25^+分子表达率分别为(76.8±4.1)%和(90.4±5.3)%,差异有统计学意义(P〈0.01);两组诱导产生的CD25^+T细胞的Foxp3表达水平分别为(64.1±2.7)%和(59.5±3.2)%,差异有统计学意义(P〈0.05)。iDC诱导G-CSF未动员和动员的外周血产生的iCD4^+CD25^+Treg均表现出免疫抑制功能,其中动员后诱导生成的iTreg的免疫抑制效应明显增强。结论应用iDC从G-CSF动员的外周血中诱导产生的iCD4^+CD25^+Treg具有更强的体外抑制效应,为自身免疫性疾病的治疗提供新的思路和手段。 展开更多
关键词 粒细胞集落刺激因子 未成熟树突细胞 CD4+CD25+调节性T细胞 叉状头/翅膀状螺旋转录因子
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雷帕霉素对未成熟树突状细胞RelB表达的影响研究 预览
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作者 李成文 周云刚 +3 位作者 罗蕾 卢俊 吴文桥 李幼平 《泸州医学院学报》 2012年第3期 237-240,共4页
目的:研究雷帕霉素(mpanlycin,RAPA)对未成熟树突状细胞(immature dendriticcell,imDC)RelB表达的影响.为回输RAPA处理的imDC(RAPA—imDC)N导移植耐受的机制研究提供实验依据。方法:分离诱导imDC、RAPA—imDC、成熟树突状细... 目的:研究雷帕霉素(mpanlycin,RAPA)对未成熟树突状细胞(immature dendriticcell,imDC)RelB表达的影响.为回输RAPA处理的imDC(RAPA—imDC)N导移植耐受的机制研究提供实验依据。方法:分离诱导imDC、RAPA—imDC、成熟树突状细胞(maturedendriticcell,mDC),光镜和电镜观察其形态,流式细咆仪检测其CDS0、CD86、MHC一Ⅱ表达,用免疫荧光法检测其RelB表达。结果:①电镜结果显示imDC与RAPA—imDC形态相似,呈未成熟状态,榭突少、粗短;mDC树突较多.细长。②mDc表面CDS0、CD86、MHC—Ⅱ表达显著高于imDC和RAPA—imDC(P〈0.05);而imDC的表达也明显高于R.APA—imDC(P〈0.05)。⑧免疫荧光法检测结果显示imDC、RAPA—intDCRelB表达量无显著变化,而mDC表达量高。结论:雷帕霉素能降低imDC表面的CD80、CD86、MHC—Ⅱ表达,但对其RelB表达没有明显影响。 展开更多
关键词 雷帕霉素 未成熟树突状细胞 RelB表达
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白细胞介素-12对实验性自身免疫性重症肌无力耐受的影响 预览 被引量:1
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作者 李罗清 孙圣刚 +1 位作者 曹学兵 王云甫 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 2011年第1期 41-44,共4页
目的探讨白细胞介素(IL)-12对未成熟树突状细胞(iDC)诱导实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)耐受的影响。方法采用乙酰胆碱受体(AChR)负载的iDC接种Lewis大鼠,IL-12组大鼠在接种DC的同时和次日分别给予重组大鼠白细胞介素-12(r... 目的探讨白细胞介素(IL)-12对未成熟树突状细胞(iDC)诱导实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)耐受的影响。方法采用乙酰胆碱受体(AChR)负载的iDC接种Lewis大鼠,IL-12组大鼠在接种DC的同时和次日分别给予重组大鼠白细胞介素-12(rrlL-12)腹腔注射,200ng/次。3周后以AChR和完全福氏佐剂(CFA)进行免疫,观察免疫7周后大鼠重症肌无力(MG)相关指标的改变。结果接种AChR负载的iDC的大鼠和健康大鼠经AChR和CFA免疫后MG相关指标无明显改变;而经IL-12干预的大鼠和EAMG对照组大鼠均产生明显的MG症状,重复电刺激出现明显衰减,血清AChR抗体滴度明显增高,神经肌肉接头呈现典型的MG样改变。结论IL-12可阻止AChR负载的iDC诱导EAMG耐受,提示DC功能异常和IL-12可能在MG异常免疫反应的启动机制中具有重要作用。 展开更多
关键词 重症肌无力 未成熟树突状细胞 免疫耐受 白细胞介素-12
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Mechanism of Immune Hyporesponsiveness Induced by Recipientderived Immature Dendritic Cells in Rat Liver Transplantation 预览
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作者 LI Li ZHANG Sheng-ning RAN Jiang-hua LIU Jing LI Zhu ZHAO Yong-heng LI Lai-bang 《中国生物医学工程学报:英文版》 2011年第1期 36-46,共11页
客观:导出施主的不成熟的树枝状的房间(imDC ) 的使用成为了一条有希望的途径导致有免疫力的忍耐或有免疫力的 hyporesponsiveness。然而,导出施主的 imDC 需要被收获一些天并且在移植前在 5-10 天内输了进接受者,它在施主机关主要... 客观:导出施主的不成熟的树枝状的房间(imDC ) 的使用成为了一条有希望的途径导致有免疫力的忍耐或有免疫力的 hyporesponsiveness。然而,导出施主的 imDC 需要被收获一些天并且在移植前在 5-10 天内输了进接受者,它在施主机关主要从死尸被收获的一个临床的背景实际上是不可能的。而且,导出施主的 imDC 可能被抵消导致的有免疫力的忍耐或有免疫力的 hyporesponsiveness 的 allogeneic 反应清除。在我们的学习,我们进一步探索了 donor-antigen-unloaded 导致的有免疫力的 hyporesponsiveness 的内在的机制由在肝移植前在 1 天内输这些 imDC 进老鼠的导出接受者的 imDC。这份报纸是导出接受者的 imDC 和它在老鼠的肝接枝的保护到有免疫力的 hyporesponsiveness 的机制由 donor-antigen-unloaded 导致了的学习。方法:40 只 SD 老鼠(施主) 和 40 只男 Wistar 老鼠(接受者) 随机被划分成 4 个组:控制, cyclosporine A (CsA ) ,成熟 DC (mDC ) ,和 imDC;带着为每个组的 10 只 SD 老鼠和 10 只 Wistar 老鼠。尖锐接枝拒绝的动物模型带着这些老鼠被建立。相应治疗在移植前后被给。在控制组, Wistar 老鼠没接受除肝移植以外的处理。在 CsA 组, Wistar 老鼠加 CsA 治疗经历了肝移植(10 mg/kg 湩 ? 湵敮散獳牡 ? 楴敭愠摮洠瑡牥慩獬椠 ? 桴 ? 潣牵敳漠 ? 硥数楲敭瑮琠? 敧 ? 摩慥? 浩条獥 展开更多
关键词 WISTAR大鼠 树突状细胞 诱导免疫 反应机制 肝移植 成熟 调节性T细胞 免疫耐受
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Mechanism of Immune Hyporesponsiveness Induced by Recipientderived Immature Dendritic Cells in Liver Transplantation Rat 预览
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作者 Li Li Sheng-ning Zhang Jiang-hua Ran Jing Liu Zhu Li Lai-bang Li 《中国医学科学杂志:英文版》 CAS CSCD 2011年第1期 28-35,共8页
Objective To investigate the mechanism of immune hyporesponsiveness induced by donor-antigen-unloaded recipient-derived immature dendritic cell (imDC) of liver grafts in rats.Methods Forty Sprague-Dawley rats (donor) ... Objective To investigate the mechanism of immune hyporesponsiveness induced by donor-antigen-unloaded recipient-derived immature dendritic cell (imDC) of liver grafts in rats.Methods Forty Sprague-Dawley rats (donor) and forty male Wistar rats (recipient) were randomly divided into 4 groups:control,cyclosporine A (CsA),mature DC (mDC),and imDC groups respectively,with 10 donor rats and 10 recipient rats in each group.Recipient rats in CsA group were treated with 10 mg·kg-1·d-1 CsA starting day 2 after the transplantation.Recipients in the mDC or imDC groups were given Wistar rat derived mDCs (1×106/rat) or imDCs (1×106/rat) via dorsal vein of the penis respectively 1 day before the transplantation.In each group,5 recipients were kept for determination of survival time and the other 5 rats were executed at day 10 after transplantation.Blood samples were collected for the measurement of serum alanine aminotransferase (ALT),total bilirubin (TBIL),interleukin 2 (IL-2),interferon gamma (IFN-γ),IL-4,and IL-10 levels.Liver tissue was harvested for HE staining and acute rejection evaluation.Expression levels of Fas-L/Fas in the grafts were detected by immunohistochemical staining;and Western blot was used to detect the expression level of Scurfin.Results The survival time of CsA and imDC groups was significantly longer than that of control and mDC groups (all P<0.05).The levels of serum ALT and TBIL in the control group (2072.20±217.93 IU/L and 147.42±22.02 μmol/L) and mDC group (2117.00±285.13 IU/L and 141.58±20.82 μmol/L) were significantly higher than those in the CsA group (59.68±13.48 IU/L and 15.40±2.13 μmol/L) or imDC group (50.80±9.63 IU/L and 14.44±3.49 μmol/L) (all P<0.05).In the CsA and imDC groups,the levels of IL-2 (22.52±3.75 pg/mL and 22.12±3.90 pg/mL) and IFN-γ (309.20±25.19 pg/mL and 321.00±21.64 pg/mL) were significantly lower,but the levels of IL-4 (297.60±25.07 pg/mL and 277.00±22.47 pg/mL) and IL-10 (1226.00±140.49 pg/mL and 1423.00±106.39 pg/mL) were higher than those of th 展开更多
关键词 WISTAR大鼠 树突状细胞 反应机制 诱导免疫 肝移植 成熟 免疫组织化学染色 MDCS
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NOD小鼠未成熟树突状细胞体外诱导淋巴细胞生成并扩增调节性T细胞的研究 预览 被引量:2
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作者 李永海 张淦 +4 位作者 李明 陈栋 向莹 郭晖 张伟杰 《器官移植》 CAS 2011年第3期 129-134,共6页
目的探索非肥胖糖尿病(non-obese diabetic,NOD)小鼠未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)诱导并扩增调节性T细胞(regulatory Tcells,Treg)的优化方案。方法分离、培养NOD小鼠骨髓来源的imDC和淋巴细胞,并进行混合淋... 目的探索非肥胖糖尿病(non-obese diabetic,NOD)小鼠未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)诱导并扩增调节性T细胞(regulatory Tcells,Treg)的优化方案。方法分离、培养NOD小鼠骨髓来源的imDC和淋巴细胞,并进行混合淋巴细胞培养,分别加入白介素(IL)-2、转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1、抗CD3抗体和抗CD28抗体刺激淋巴细胞增殖、分化。实验分为4组:对照组(淋巴细胞+IL-2)、实验1组(淋巴细胞+imDC+TGF-β1+IL-2)、实验2组(淋巴细胞+imDC+抗CD3抗体+抗CD28抗体+IL-2)、实验3组(淋巴细胞+imDC+抗CD3抗体+抗CD28抗体+TGF-β1+IL-2)。用流式细胞仪检测各组培养3d后淋巴细胞的扩增情况及混合培养6d淋巴细胞中CD4、CD25及Foxp3的表达。结果 imDC和淋巴细胞混合培养3d后,对照组、实验1组、实验2组和实验3组增殖指数分别为(1.04±0.03)%、(1.26±0.02)%、(1.36±0.01)%和(1.55±0.02)%。实验3组的增殖指数较实验1组和实验2组明显升高(均为P〈0.01)。混合培养6d后,对照组、实验1组、实验2组和实验3组的CD4+CD25+T淋巴细胞亚群所占比例分别为(2.41±0.02)%、(17.98±1.02)%、(30.67±2.68)%、(42.84±1.41)%,而CD4+CD25+T淋巴细胞中Foxp3+细胞的比例4组分别为(65.55±1.41)%、(86±1.72)%、(70.29±1.39)%、(92.3±1.99)%,实验3组的淋巴细胞CD4+CD25+、Foxp3+的表达水平较实验1组和实验2组明显升高(均为P〈0.01)。结论在imDC和淋巴细胞混合培养时加入TGF-β1、抗CD3抗体、抗CD28抗体可明显刺激imDC诱导扩增Treg,是体外诱导扩增Treg的理想方案之一。 展开更多
关键词 未成熟树突状细胞 非肥胖糖尿病 小鼠 转化生长因子-β1 抗CD3抗体 抗CD28抗体 调节性T细胞
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未成熟树突状细胞诱导半相合骨髓移植免疫耐受的实验研究
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作者 周吉成 杨海燕 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期922-925,共4页
目的探讨未成熟树突状细胞(imDC)诱导半相合骨髓移植(HBMT)免疫耐受的疗效。方法用雄性SD大鼠及雌性Wistar大鼠建立HBMT动物模型,取供鼠外周血诱导培养imDC,实验组(n=10):接受HBMT+供鼠imDC输注;对照组(n=10)只接受HBMT;观察... 目的探讨未成熟树突状细胞(imDC)诱导半相合骨髓移植(HBMT)免疫耐受的疗效。方法用雄性SD大鼠及雌性Wistar大鼠建立HBMT动物模型,取供鼠外周血诱导培养imDC,实验组(n=10):接受HBMT+供鼠imDC输注;对照组(n=10)只接受HBMT;观察比较2组受鼠的急性移植物抗宿主病(aGVHD)发生率及其严重程度。结果 1)实验组受鼠的aGVHD发生率为60%(6/10)明显低于对照组的100%(10/10)(P〈0.05);2)实验组受鼠的临床aGVHD评分为(2.7±1.0)分,明显低于对照组的(6.9±1.5)分(P〈0.05);3)实验组受鼠小肠aGVHD的发生率44.4%(4/9)明显低于对照组的100%(10/10)(P〈0.05)。结论 imDC可降低大鼠HBMT后aGVHD的发生率并减轻大鼠HBMT后aGVHD的严重程度。 展开更多
关键词 未成熟树突状细胞 骨髓移植 免疫耐受性 移植物抗宿主病
胸腺基质淋巴细胞生成素受体剔降的未成熟树突状细胞调节哮喘小鼠Thl/Th2失衡的研究 预览 被引量:5
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作者 李子玲 张方 +4 位作者 钱桂生 罗向东 索立俊 宋勇 施毅 《医学研究生学报》 CAS 2010年第8期 813-817,共5页
目的树突细胞疫苗是治疗哮喘的新途径,文中探讨经鼻滴注基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoetin,TSLP)受体剔降的未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)对哮喘模型小鼠过敏性气道炎症及Th1/Th2免疫失衡的影响,... 目的树突细胞疫苗是治疗哮喘的新途径,文中探讨经鼻滴注基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoetin,TSLP)受体剔降的未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)对哮喘模型小鼠过敏性气道炎症及Th1/Th2免疫失衡的影响,为免疫调节治疗哮喘提供理论和实验基础。方法36只C57BL/6小鼠随机分为胸腺TSLP受体剔降的imDC治疗组(A组)、imDC治疗组(B组)和哮喘组(C组)。以卵蛋白(ovalbumin,OVA)、氢氧化铝免疫建立哮喘模型,A组和B组分别于激发前气道内滴注100μl的细胞悬液,分别含有1×106TSLPR剔降的imDC、imDC,C组气道内滴注100μl的PBS;各组激发后肺泡灌洗分析细胞组份,分离肺淋巴细胞测定细胞因子分泌水平,以流式细胞仪检测CD4+干扰素-γ(interferonγ,IFN-γ)+、CD4+白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)+百分比及IFN-γ+/IL-4+比值,比较各组肺组织学改变。结果TSLP受体剔降的imDC治疗组与其他组比较:①可明显抑制OVA抗原激发后气道内嗜酸性粒细胞的浸润(P〈0.01);②明显抑制肺淋巴细胞产生IL-4、IL-5,增加了IFN-γ的产生;③肺淋巴细胞CD4+IFN-γ+百分比及IFN-γ+/IL-4+明显升高(P〈0.01),而CD4+IL-4+百分比则明显下降(P〈0.01);④明显抑制哮喘鼠气道内及肺泡内的过敏性炎症反应。结论激发前经鼻滴注TSLP受体剔降的imDC对哮喘小鼠过敏性气道炎症有明显的防治作用,其机制可能与抑制树突细胞TSLP-TSLP受体信号通路,调整Thl/Th2失衡有关。 展开更多
关键词 哮喘 胸腺基质淋巴细胞生成素受体 未成熟树突状细胞 TH1/TH2失衡 免疫调节
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受体来源未成熟树突状细胞诱导大鼠肝移植免疫低反应性的实验研究 预览 被引量:3
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作者 李立 张升宁 +4 位作者 冉江华 刘静 李铸 赵永恒 李来邦 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2009年第1期 32-38,共7页
目的研究不负载供者抗原的受者未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)对大鼠肝移植的保护作用,探讨imDC抑制排斥反应的机理。方法以SD大鼠作为供体,雄性Wistar大鼠作为受体,随机分为4组,每组10只,建立肝移植急性排斥... 目的研究不负载供者抗原的受者未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)对大鼠肝移植的保护作用,探讨imDC抑制排斥反应的机理。方法以SD大鼠作为供体,雄性Wistar大鼠作为受体,随机分为4组,每组10只,建立肝移植急性排斥反应模型,移植前对受体进行不同的处理。对照组:受体未接受任何处理;环孢素A(CsA)组:术后第2d开始给予CsA[10mg/(kg·d)]灌胃;成熟树突状细胞(mDC)组:受体术前1d经阴茎背静脉注射受体来源的mDC1×10^6个/只;imDC组:受体术前1d经阴茎背静脉注射受体来源的imDC1×10^6个/只。模型建立后10d各组随机处死5只,取移植肝脏组织行HE染色和免疫组化(FasL/Fas)染色,观察肝脏组织形态结构和排斥反应,根据Banff评分系统判断排斥反应程度;Western blot分析检测各组Foxp3编码的Scurfin蛋白的表达。另留5只大鼠观察术后存活时间;收集血标本,全自动生化分析仪测定ALT、TBIL;双抗体夹心EI。ISA法检测血清IL-2、IFN-γ、IL-4和IL10水平。结果CsA组和imDC组术后大鼠中位生存时间明显长于对照组和mDC组,差异有统计学意义(P〈0.05)。移植术后各组大鼠血清生化检查:对照组和mDC组ALT及TBIL明显高于CsA组和imDc组(P〈0.05);且IL-2和IFN-γ也明显高于csA组和imDC组(P〈0.01),但IL4和IL-10明显低于CsA组和imDC组(P〈0.01)。移植肝脏形态学检测:对照组和mDC组与CsA组和imDC组比较,排斥反应更严重(P〈0.05)。Westernblot检测:imDC组Foxp3编码的Scurfin蛋白的表达明显高于其他3组(P〈0.05)。结论imDC通过阻断间接识别能明显延长移植物存活时间。imDC可能通过以下机理诱导免疫低反应:诱导T细胞凋亡;选择性激活Th2细胞亚群,诱导Th1/Th2偏移;诱导调节性T细胞产生。 展开更多
关键词 大鼠 肝移植 排斥反应 未成熟树突状细胞 免疫低反应
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