期刊文献+
共找到49篇文章
< 1 2 3 >
每页显示 20 50 100
PK-15细胞源EDC3分子的克隆及生物信息学分析
1
作者 孙勇 李昌红 +2 位作者 袁俊 刘娟娟 温贵兰 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第9期7-12,179共7页
为了研究猪肾细胞(PK-15)中mRNA脱帽激活因子(EDC3)基因并分析其编码区序列特征,试验采用巢式PCR方法获得PK-15细胞源EDC3基因并进行克隆与测序,利用生物信息学相关在线软件检测PK-15细胞与其他宿主EDC3基因的同源性及构建系统进化树,... 为了研究猪肾细胞(PK-15)中mRNA脱帽激活因子(EDC3)基因并分析其编码区序列特征,试验采用巢式PCR方法获得PK-15细胞源EDC3基因并进行克隆与测序,利用生物信息学相关在线软件检测PK-15细胞与其他宿主EDC3基因的同源性及构建系统进化树,并对该基因编码蛋白的跨膜结构、信号肽等分子特性进行分析。结果表明:猪EDC3基因全长为1 326 bp,编码440个氨基酸,比预测片段少201 bp;与预测野猪的核苷酸序列同源性达99.0%,氨基酸序列同源性达97.5%;该基因与野猪的亲缘关系最近,处于同一分支,其次是瘤牛、绵羊;EDC3基因编码蛋白的二级结构中无规则卷曲所占比例为59.09%,α-螺旋所占比例为20.68%,该结构蛋白无信号肽与跨膜结构。 展开更多
关键词 mRNA脱帽激活子基因 猪肾细胞 克隆 生物信息学 基因序列 蛋白质
猪细小病毒感染PK-15细胞后TLRs转录时相的变化 预览 被引量:1
2
作者 周雍 靳晓慧 +4 位作者 李炳晓 景亚星 韩丽 张利卫 魏战勇 《河南农业大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期201-206,共6页
研究猪细小病毒(Porcine Parvovirus,PPV)感染猪肾传代细胞(PK-15 cells)后Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)表达水平变化情况,为探明PPV感染机制提供理论基础。试验利用荧光定量PCR方法检测PPV感染PK-15细胞后TLR1-10的转... 研究猪细小病毒(Porcine Parvovirus,PPV)感染猪肾传代细胞(PK-15 cells)后Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)表达水平变化情况,为探明PPV感染机制提供理论基础。试验利用荧光定量PCR方法检测PPV感染PK-15细胞后TLR1-10的转录时相变化。结果显示,PPV感染PK-15细胞后,TLR1在PPV感染后3h表达上调,约为对照组细胞的3.1倍,其他时段均低于正常水平;TLR3和TLR7 mRNA表达水平在病毒感染早期均低于正常水平;TLR4和TLR8的mRNA含量均在感染后3、12、36 h表达上调,TLR10分别在在3h和36 h表达上调,其他时段均不同程度的降低;而TLR2和TLR9 mRNA表达水平在感染后24 h开始升高,并于48 h达到峰值,分别为对照水平的10.1倍和26.7倍。研究表明,PPV感染PK-15细胞后能够诱导细胞上TLR2和TLR9在mRNA水平显著上调,PPV感染可能通过TLR2和TLR9受体介导感染。 展开更多
关键词 猪细小病毒 TOLL样受体 PK-15细胞 转录时相
在线阅读 下载PDF
病毒组织细胞培养方法及注意事项 预览
3
作者 靳芹 《中国动物保健》 2016年第4期63-64,共2页
细胞培养是病毒学实验研究必不可少的重要工具和手段。本文以猪乙型脑炎病毒在猪肾上皮细胞(PK-15细胞)增殖培养为例,介绍一下病毒的细胞培养方法,和一些注意事项。
关键词 细胞培养 PK-15细胞
在线阅读 下载PDF
猪伪狂犬病毒感染PK15细胞对细胞凋亡及相关凋亡因子的影响 被引量:3
4
作者 肖熹玉 邱先帅 +3 位作者 张浩 任常宝 黄红亮 唐兆新 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期553-557,共5页
为研究PRV感染PK-15细胞对其细胞凋亡及相关凋亡因子的影响,本试验采用体外细胞培养技术在不同时间点收集细胞、应用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性、流式细胞仪测定细胞凋亡率、实时荧光定量PCR法检测凋亡相关基因caspase-3,Bcl-2,... 为研究PRV感染PK-15细胞对其细胞凋亡及相关凋亡因子的影响,本试验采用体外细胞培养技术在不同时间点收集细胞、应用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性、流式细胞仪测定细胞凋亡率、实时荧光定量PCR法检测凋亡相关基因caspase-3,Bcl-2,Bax和Bcl-xl的表达情况。结果显示,PRV感染24 h后可明显抑制细胞的增殖,这种抑制与时间密切相关,与感染剂量无显著差异。流式细胞仪检测也显示PRV能明显提高其凋亡率,PT-PCR显示PRV感染后caspase-3,Bax表达量明显上调,Bcl-xl,Bcl-2表达量明显下调。结果表明,PRV在感染过程中对细胞的生长的影响与时间紧密联系,能够诱发细胞凋亡,Bax,Bcl-2,Bcl-xl,caspase-3,起着重要的调控作用。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 PK-15细胞 MTT 细胞凋亡
山羊源伪狂犬病病毒的分离与鉴定 预览 被引量:3
5
作者 朱玲云 张正学 +6 位作者 郑龙龙 刘萍丹 毕峻龙 赵谦 刘佳 杨贵树 尹革芬 《动物医学进展》 北大核心 2016年第12期113-117,共5页
为确诊一例发病山羊是否感染伪狂犬病病毒,采集发病羊体的肺脏和脑组织进行伪狂犬病病毒gE基因PCR检测,并将病料接种至PK-15细胞分离病毒,以及进行小鼠感染试验和gD基因分析。结果表明,PCR检测结果PRV阳性,病料接种PK-15细胞24h后... 为确诊一例发病山羊是否感染伪狂犬病病毒,采集发病羊体的肺脏和脑组织进行伪狂犬病病毒gE基因PCR检测,并将病料接种至PK-15细胞分离病毒,以及进行小鼠感染试验和gD基因分析。结果表明,PCR检测结果PRV阳性,病料接种PK-15细胞24h后,细胞开始出现细胞病变;将病毒感染小鼠,36h后小鼠出现局部奇痒、死亡;gD基因序列分析发现,分离毒株与GenBank中的PRVgD基因序列同源性均在98%以上,氨基酸同源性在99%以上;在分离毒株gD基因的808bp-837bp位置上存在缺失与变异、高变重复区。本研究成功分离获得一株羊源伪狂犬病毒,为云南省羊伪狂犬病防控和基础研究提供资料。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 PCR鉴定 PK-15细胞 基因分析 山羊
在线阅读 下载PDF
猪瘟病毒E0蛋白在PK-15中的表达与鉴定 预览
6
作者 周景明 刘芳冰 +3 位作者 祁艳华 张改平 栗宁 王爱萍 《安徽农业科学》 CAS 2016年第10期160-162,186共4页
[目的]研究猪瘟病毒(CSFV)E0基因在PK-15细胞中的表达特性。[方法]通过PCR方法克隆了E0基因全长681 bp的片段,连接到真核表达载体p EGFP-C1上,构建出重组质粒并进行双酶切鉴定。[结果]成功构建出重组质粒p EGFP-E0。通过双酶切鉴定,PC... [目的]研究猪瘟病毒(CSFV)E0基因在PK-15细胞中的表达特性。[方法]通过PCR方法克隆了E0基因全长681 bp的片段,连接到真核表达载体p EGFP-C1上,构建出重组质粒并进行双酶切鉴定。[结果]成功构建出重组质粒p EGFP-E0。通过双酶切鉴定,PCR鉴定和测序确定了目的基因大小一致,插入位置完全正确后,利用Lipofecta mine 2000转染试剂盒将重组质粒转染到猪肾细胞PK-15中,转染48 h后在荧光显微镜下观察,可以看到大多数细胞呈现出绿色荧光,说明转染成功。通过G418筛选后,在荧光显微镜下仍能观察到部分细胞能够呈现出绿色荧光,这表明重组融合蛋白p EGFP-E0在PK-15细胞中得到了表达。[结论]获得的能够表达重组融合蛋白的细胞克隆,为进一步大量表达与纯化E0糖蛋白、制备其单抗以及研究猪瘟病毒E0糖蛋白的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E0蛋白 增强型绿色荧光蛋白 PK-15细胞
在线阅读 下载PDF
猪圆环病毒2型诱导PK-15细胞产生IFN-β的信号通路研究 预览 被引量:1
7
作者 张新晨 赵其岭 +4 位作者 陈萌萌 孙嘉瑞 鲍恩东 张书霞 吕英军 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期2008-2016,共9页
【目的】研究猪圆环病毒2型(porcine circovirus type2,PCV2)感染PK-15细胞后调控β-干扰素(interferon-β,IFN-β)生成的信号通路,为猪圆环病毒病的发生机理和防治提供理论基础。【方法】将PK-15细胞随机分成5组:对照组、PCV2组、... 【目的】研究猪圆环病毒2型(porcine circovirus type2,PCV2)感染PK-15细胞后调控β-干扰素(interferon-β,IFN-β)生成的信号通路,为猪圆环病毒病的发生机理和防治提供理论基础。【方法】将PK-15细胞随机分成5组:对照组、PCV2组、BX795(TBK1/IKKε抑制剂)组、BAY 11-7082(NF-κB抑制剂)组和BX795+BAY11-7082(混合抑制剂)组。BX795组、BAY 11-7082组、BX795+BAY 11-7082组分别用0.5μmol BX795、5μmol BAY11-7082、0.5μmol BX795+5μmol BAY 11-7082预先处理1 h,然后感染PCV2。于感染后3、12、24、48和72 h收集细胞,提取RNA。用荧光定量PCR检测IFN-β、模式识别受体(TLR3、TLR9、RIG-1、MDA-5、DAI)、接头蛋白(TRIF、MyD88、Sting、MAVS、IRF3)的mRNA 含量。【结果】PCV2感染PK-15细胞后,IFN-β的mRNA 含量在48、72 h显著升高(P〈0.01),表明PCV2感染可以诱导PK-15细胞生成IFN-β;TLR3的mRNA 含量在48 h显著升高(P〈0.01),TLR9的表达量在48、72 h显著升高(P〈0.01);TLR3和TLR9下游的接头蛋白MyD88和TRIF的mRNA 含量在48 h显著升高(P〈0.01),表明PCV2激活了Toll样受体介导的NF-κB信号途径;MDA-5的mRNA 含量在48、72 h显著升高(P〈0.01),RIG-1的mRNA 含量在72 h显著升高(P〈0.01),MDA-5和RIG-1下游的接头蛋白MAVS、Sting、IRF3的mRNA 含量在48 h显著升高(P〈0.01),表明PCV2激活了RIG-1样受体介导的IRF3信号途径;DAI的mRNA 含量在48、72 h显著升高(P〈0.01),表明PCV2亦激活了DNA模式识别受体介导的IRF3信号途径;分别用BX795和BAY 11-7082抑制IRF3和NF-κB介导的信号通路,结果显示NF-κB抑制剂组的IFN-β的mRNA 含量与PCV2组相比无显著性差异(P〉0.05),TBK1/IKKε抑制剂组的IFN-β的mRNA 含量与PCV2组相比明显下降(P〈0.05),表明PCV2诱导IFN-β的产生主要由IRF3信号途径调控。【结论】PCV2感染可以诱导PK-15细胞中IFN-β表达量的上调,其上调主要与IRF3信号通路有关。 展开更多
关键词 PCV2 PK-15细胞 IFN-Β 信号通路 接头蛋白
在线阅读 下载PDF
猪伪狂犬病病毒多克隆抗体的制备及免疫学活性研究 预览 被引量:1
8
作者 孟日增 刘韬 +3 位作者 马文晨 王伟琳 吴连鹏 罗雁非 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第6期1417-1423,共7页
本研究旨在获得抗猪伪狂犬病病毒(PRV)闽A株的多克隆抗体,为PRV的治疗与检测提供理论基础。本研究在PK-15细胞上进行PRV的增殖,测定其TCID50为10-7.372,粗提蛋白后,测定PRV蛋白浓度为3.6mg/mL。试验选用25只健康、雄性、体重为2.5kg&#... 本研究旨在获得抗猪伪狂犬病病毒(PRV)闽A株的多克隆抗体,为PRV的治疗与检测提供理论基础。本研究在PK-15细胞上进行PRV的增殖,测定其TCID50为10-7.372,粗提蛋白后,测定PRV蛋白浓度为3.6mg/mL。试验选用25只健康、雄性、体重为2.5kg±0.2kg的新西兰大白兔为试验动物,用获得的PRV为抗原免疫后,获得抗PRV多克隆抗体。测定其抗血清效价为1∶32 000,抗原包被稀释度为1∶40,最佳包被条件为4℃12h,最佳封闭时间为1h,酶标二抗最佳工作稀释度为1∶8 000。细胞病变中和试验结果表明,本研究制备的PRV抗血清在1∶16的稀释情况下能保护50%的PK-15细胞免受PRV的攻击,而阴性血清不能保护PK-15细胞免受PRV的感染。结果表明本研究成功制备了PRV多克隆抗体。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒(PRV) 多克隆抗体 PK-15细胞
在线阅读 下载PDF
抗猪圆环病毒药物的体外筛选 预览 被引量:2
9
作者 王克宁 刘聚祥 +1 位作者 姜富成 刘静 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期95-99,共5页
本试验主要检测抗病毒药物(金刚烷胺、利巴韦林、盐酸阿比朵尔、黄连、金银花、连翘、板蓝根)对猪圆环病毒的有效性,为临床用药提供依据。使用PK-15细胞建立抗猪圆环病毒药物的体外筛选模型,采用MTT法检测,然后计算病毒的抑制率。... 本试验主要检测抗病毒药物(金刚烷胺、利巴韦林、盐酸阿比朵尔、黄连、金银花、连翘、板蓝根)对猪圆环病毒的有效性,为临床用药提供依据。使用PK-15细胞建立抗猪圆环病毒药物的体外筛选模型,采用MTT法检测,然后计算病毒的抑制率。结果显示:金刚烷胺、利巴韦林、盐酸阿比朵尔、黄连、金银花、连翘、板蓝根7种药物的治疗指数分别是124.9,33.8,33.1,13.8,4.1,4.6,5.0。结果表明7种药物在细胞水平上对猪圆环病毒均有抑制作用,而且金刚烷胺和黄连的效果最显著。 展开更多
关键词 MTT法 筛选 猪圆环病毒 PK-15细胞
在线阅读 下载PDF
PCV-2感染对PK-15细胞IL mRNA转录水平的影响 预览
10
作者 商艳红 刘欣辛 +5 位作者 李金磊 王淑娟 魏静 赵岩 崔保安 魏战勇 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2012年第1期 8-14,共7页
【目的】观察猪圆环病毒2型(PCV-2)感染对猪肾传代细胞(PK-15细胞)炎性细胞因子白细胞介素(IL)mRNA转录水平的影响,探讨宿主与病毒之间的作用关系及细胞炎性反应机制。【方法】以未感染PCV-2的PK-15细胞为对照组,运用相对定量PCR... 【目的】观察猪圆环病毒2型(PCV-2)感染对猪肾传代细胞(PK-15细胞)炎性细胞因子白细胞介素(IL)mRNA转录水平的影响,探讨宿主与病毒之间的作用关系及细胞炎性反应机制。【方法】以未感染PCV-2的PK-15细胞为对照组,运用相对定量PCR技术,测定和分析PCV-2感染PK-15细胞后,PCV-2DNA相对含量的变化,以及炎性细胞因子IL-6、IL-8、IL-12p35、IL-12p40、IL-13、IL-17、IL-18mRNA转录水平在1,6,12,24,48,和72h的变化。【结果】PCV-2感染后,PK-15细胞的IL-6、IL-13、IL-17、IL-18的mRNA转录水平在12h显著增加,24h后mRNA转录水平下降;IL-8的mRNA转录水平在48h时最高,为对照组的2.5倍,但72h时恢复至与对照组水平相当;随着感染时间的延长,IL-12p35、IL-12p40的mRNA转录水平显著下降。【结论】PCV-2感染后可引起PK-15细胞中IL-6、IL-8、IL-13、IL-17、IL-18等细胞因子mRNA转录水平增加,而IL-12mRNA转录水平下降,提示PCV-2感染后引起的PK-15细胞炎性反应与其分泌的炎性细胞因子的改变有关。 展开更多
关键词 PK-15细胞 炎性细胞因子 白细胞介素 mRNA转录水平 猪圆环病毒2型
在线阅读 下载PDF
抗猪繁殖与呼吸综合征病毒转基因细胞系的建立
11
作者 马汝钧 罗碧平 +1 位作者 剧世强 芮荣 《畜牧与兽医》 北大核心 2012年第1期 8-11,共4页
采用脂质体法将具有抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的shRNA质粒pEGFP—N1-shRNA导入PK—15细胞中,经G418药物筛选后,分离扩增绿色荧光蛋白阳性细胞,获得抗PRRSV转基因PK细胞系。通过对转染方法和条件的优化,确立最佳的转... 采用脂质体法将具有抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的shRNA质粒pEGFP—N1-shRNA导入PK—15细胞中,经G418药物筛选后,分离扩增绿色荧光蛋白阳性细胞,获得抗PRRSV转基因PK细胞系。通过对转染方法和条件的优化,确立最佳的转染及筛选步骤;对得到的阳性转基因细胞进行冷冻.解冻,并作PCR检测。结果表明,G418最佳筛选浓度为600μg/mL,脂质体与质粒的最佳转染比例为7:2,最佳转染时间为24h。本研究成功建立抗PRRSV转基因细胞系,为进一步的功能验证及体细胞核移植奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 PK-15细胞 转基因细胞系
PPV感染PK-15细胞后对4种抗病毒细胞因子mRNA转录时相的影响 预览 被引量:1
12
作者 耿静微 李厚伟 +5 位作者 尹海燕 陈红英 李金磊 韩志涛 崔保安 魏战勇 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2011年第2期17-22,共6页
【目的】了解猪细小病毒(PPV)感染对抗病毒相关细胞因子mRNA转录时相的影响,探讨宿主-病毒之间的作用关系。【方法】对PPV感染PK-15细胞的病变进行了显微观察,运用荧光定量PCR技术,测定和分析PPV感染PK-15细胞后,细胞病毒DNA含量及巨... 【目的】了解猪细小病毒(PPV)感染对抗病毒相关细胞因子mRNA转录时相的影响,探讨宿主-病毒之间的作用关系。【方法】对PPV感染PK-15细胞的病变进行了显微观察,运用荧光定量PCR技术,测定和分析PPV感染PK-15细胞后,细胞病毒DNA含量及巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)、转化生长因子β1(TGF-β1)、磷酸甘油酸激酶1(PGK1)和MURR1等细胞因子mRNA相对表达量的变化。【结果】PPV可以快速诱导PK-15细胞产生细胞病变。感染后1 h即可检测到PPV DNA,随着时间的延长,PPV DNA含量逐渐增加,并于48 h时达到峰值,相对含量为1 800左右。MIP-1α和PGK1 mRNA的相对表达量在感染后2 h显著增加,之后下降;TGF-β1 mRNA的相对表达量在72 h时显著增加;MURR1 mRNA的相对表达量在24 h时显著增加,48 h后下降。【结论】PPV感染可引起PK-15细胞抗病毒因子mRNA表达水平升高。 展开更多
关键词 猪细小病毒 细胞因子 PK-15细胞 转录时相
在线阅读 下载PDF
靶向FMDV受体猪源整联蛋白αv亚基基因抑制FMDV复制的最佳siRNA筛选 预览
13
作者 骆继怀 独军政 +2 位作者 高闪电 张国锋 常惠芸 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期 1732-1737,共6页
筛选靶向FMDV受体猪源整联蛋白αV亚基基因抑制FMDV复制的最佳siRNA。根据猪源αV mRNA序列,设计并合成siRNA,Lipofectamine 2000转染siRNA于PK-15细胞,利用qRT-PCR检测RNAi组(iαV-480、iαV-1719和iαV-2077)、空白组(Mock)和阴... 筛选靶向FMDV受体猪源整联蛋白αV亚基基因抑制FMDV复制的最佳siRNA。根据猪源αV mRNA序列,设计并合成siRNA,Lipofectamine 2000转染siRNA于PK-15细胞,利用qRT-PCR检测RNAi组(iαV-480、iαV-1719和iαV-2077)、空白组(Mock)和阴性对照组(Control)中αVmRNA表达情况;在转染siRNA12h后通过接种100TCID50,收集病毒液,测定TCID50,确定其抗病性变化。结果显示,瞬间转染PK-15后,与阴性对照组和空白组相比,3个RNAi组均不同程度抑制αV亚基基因表达,在24hiαV-480组在mRNA水平抑制90.1%,作用最明显。TCID50测定表明iαV-480组有较低的病毒滴度,说明其抗病性增加。针对猪源整联蛋白αV亚基基因的最佳siRNA的筛选成功,为深入研究干扰FMDV受体抗FMDV转基因路线奠定了基础。 展开更多
关键词 FMDV SIRNA 转染 PK-15细胞 αv亚基基因 病毒滴度
在线阅读 免费下载
猪细小病毒感染PK-15细胞抗病毒相关因子转录变化的分析 预览 被引量:9
14
作者 李厚伟 魏战勇 +4 位作者 尹海燕 陈红英 李金磊 韩志涛 崔保安 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期48-55,共8页
为了解猪细小病毒(PPV)感染后引起干扰素及其相关细胞因子的反应,探讨宿主—病毒之间的作用关系,作者运用荧光定量PCR技术,测定和分析PPV感染PK-15细胞引起的病毒DNA量的变化和细胞因子IFN-β、IFN-γ、IFNAR-1、IFNAR-2、MHC-Ⅰ、MHC... 为了解猪细小病毒(PPV)感染后引起干扰素及其相关细胞因子的反应,探讨宿主—病毒之间的作用关系,作者运用荧光定量PCR技术,测定和分析PPV感染PK-15细胞引起的病毒DNA量的变化和细胞因子IFN-β、IFN-γ、IFNAR-1、IFNAR-2、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、MX1、iNOS、2-5AS、RNase L和IRF-3的转录水平。结果显示,PPV感染PK-15细胞12h病毒开始大量迅速增殖,48h达到最高峰;PPV感染后可引起PK-15细胞中IFN-β、IFN-γ、IFNAR-1、IFNAR-2、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、Mx1、iNOS、2-5AS、RNase L和IRF-3的转录量显著增加,其中Mx1基因在24h转录量达到8 423倍。猪细小病毒感染可引起PK-15细胞抗病毒相关因子转录增加。 展开更多
关键词 猪细小病毒 细胞因子 PK-15细胞 转录时相
在线阅读 免费下载
PCV-2感染对PK-15细胞抗病毒相关因子转录时相的影响 预览 被引量:2
15
作者 韩志涛 李金磊 +5 位作者 陈红英 王淑娟 耿静微 翟阿官 魏战勇 崔保安 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2011年第6期15-19,24共6页
【目的】了解猪圆环病毒2型(PCV-2)感染对PK-15细胞抗病毒相关因子转录时相的影响,探讨宿主-病毒之间的作用关系。【方法】运用荧光定量PCR技术,测定和分析PCV-2感染PK-15细胞后0(未接种病毒),1,6,12,24,48,72 h时病毒DNA含量及细... 【目的】了解猪圆环病毒2型(PCV-2)感染对PK-15细胞抗病毒相关因子转录时相的影响,探讨宿主-病毒之间的作用关系。【方法】运用荧光定量PCR技术,测定和分析PCV-2感染PK-15细胞后0(未接种病毒),1,6,12,24,48,72 h时病毒DNA含量及细胞因子IFN-βI、FN-γI、FNAR-1I、FNAR-2、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、MX1、NOS、RNaseL和IRF-3 mRNA转录水平的变化。【结果】PCV-2感染PK-15后1 h就可以检测到病毒DNA,在感染后24 h病毒开始大量迅速增殖,于感染72 h时达到最高峰。与0 h相比,PCV-2感染后IFN-βI、RF-3的表达量在感染12 h时显著增加,其他时间表达量下降;IFN-γ、MHC-Ⅱ的表达量在感染12 h时增加不明显,其他时间表达量下降;感染PCV-2后IFNAR-2、MHC-Ⅰ、MX1的表达量下降;RNaseL的表达量在感染12 h时显著减少,其他时间表达量增加,48 h时表达量增加显著;IFNAR-1的表达量在感染72 h时显著增加,其他时间表达量下降;未检测出NOS的表达。【结论】随着PCV-2病毒含量的增加,以上几种主要抗病毒因子的表达量不明显或有所下降,表明PCV-2感染PK-15细胞后可逃避机体的抗病毒作用机制。 展开更多
关键词 细胞因子 PK-15细胞 猪圆环病毒2型 转录时相
在线阅读 下载PDF
PK-15细胞膜蛋白提取方法的比较及猪瘟病毒膜表面受体的初步鉴定 被引量:2
16
作者 周斌 刘晓东 +2 位作者 王凤鹃 刘珂 陈溥言 《畜牧与兽医》 北大核心 2011年第5期1-4,共4页
以猪肾细胞(PK-15)为材料,比较真核细胞膜蛋白提取试剂盒、超声破碎法、反复冻融法、低渗裂解法4种不同方法对PK-15细胞膜蛋白提取的影响,结果表明,通过超声破碎的膜制备方法提取的PK-15细胞膜蛋白较理想。用此方法提取PK-15细胞... 以猪肾细胞(PK-15)为材料,比较真核细胞膜蛋白提取试剂盒、超声破碎法、反复冻融法、低渗裂解法4种不同方法对PK-15细胞膜蛋白提取的影响,结果表明,通过超声破碎的膜制备方法提取的PK-15细胞膜蛋白较理想。用此方法提取PK-15细胞膜蛋白,经SDS-PAGE后转印NC膜,利用病毒铺覆蛋白印迹技术(VOPBA)鉴定CSFV病毒的细胞受体。结果发现,PK-15细胞膜上有3种能与CSFV结合的蛋白质,分子量在90~100ku之间,暗示这些蛋白可能是CSFV受体或者受体复合物。 展开更多
关键词 PK-15细胞 膜蛋白提取 猪瘟 病毒受体
微载体培养PK-15细胞试验条件的优化 预览 被引量:6
17
作者 何锡忠 李春华 +2 位作者 倪建平 蒋风英 邹勇 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第8期 20-23,共4页
为了优化PK-15细胞在微载体上的生长条件,在微载体浓度5 mg/mL、低糖DMEM+100 mL/L NBS培养液条件下,观察4.5×104cells/mL和8.7×104cells/mL的细胞接种密度对细胞生长的影响;在低糖DMEM+100 mL/L NBS培养液、接种密度5×... 为了优化PK-15细胞在微载体上的生长条件,在微载体浓度5 mg/mL、低糖DMEM+100 mL/L NBS培养液条件下,观察4.5×104cells/mL和8.7×104cells/mL的细胞接种密度对细胞生长的影响;在低糖DMEM+100 mL/L NBS培养液、接种密度5×104cells/mg条件下,观察3、5、10 mg/mL微载体浓度对细胞生长的影响;在3 mg/mL微载体浓度条件下、接种密度25×104cells/mL,观察MEM、高糖DMEM和低糖DMEM培养基对细胞生长的影响。结果表明,以微载体接种细胞密度4.5×104cells/mg、微载体浓度5 mg/mL在低糖DMEM培养基中培养方式效果最为理想。优化的培养工艺适用于PK-15细胞的生产。 展开更多
关键词 微载体培养 PK-15细胞 培养条件
在线阅读 下载PDF
4种中药多糖体外抗猪伪狂犬病毒的作用研究 预览 被引量:7
18
作者 张红英 胡梅 +3 位作者 夏平安 王学兵 魏战勇 崔保安 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期 532-535,共4页
采用先加多糖与细胞作用后再加病毒(研究多糖对病毒的阻断作用)、先病毒吸附细胞后再加多糖(研究多糖对病毒的抑制作用)和病毒与多糖作用之后再加细胞(研究多糖对病毒的直接杀灭作用)3种不同用药方式,用细胞培养和中性红染色法,... 采用先加多糖与细胞作用后再加病毒(研究多糖对病毒的阻断作用)、先病毒吸附细胞后再加多糖(研究多糖对病毒的抑制作用)和病毒与多糖作用之后再加细胞(研究多糖对病毒的直接杀灭作用)3种不同用药方式,用细胞培养和中性红染色法,测定了板蓝根多糖(IRPS)、黄芪多糖(APS)、牛膝多糖(ARPS)和山药多糖(CYPS)抗猪伪狂犬病毒(PRV)感染的作用效果。结果表明,4种中药多糖对PRV感染均具有显著的阻断作用,其中APS、IRPS还具有抑制和直接杀灭PRV作用。 展开更多
关键词 中药多糖 伪狂犬病毒 PK-15 中性红
在线阅读 下载PDF
Effects of Pretreatment by the Flavanol Ampelopsin on Porcine Kidney Epithelial Cell Injury Induced by Hydrogen Peroxide 预览 被引量:2
19
作者 TAN Gao-yi ZHANG Min-hong FENG Jing-hai HAN Ai-yun ZHENG Shan-shan XIE Peng 《中国农业科学:英文版》 CAS CSCD 2010年第4期 598-604,共7页
This study investigated the protective effects of ampelopsin on H2O2-induced oxidative injury in porcine kidney epithelial cell line, PK-15; cells were pretreated with medium containing 0, 15, 30, and 60 μg mL-1 ampe... This study investigated the protective effects of ampelopsin on H2O2-induced oxidative injury in porcine kidney epithelial cell line, PK-15; cells were pretreated with medium containing 0, 15, 30, and 60 μg mL-1 ampelopsin, respectively, for 1 h prior to the addition of 100 μmol L-1 H2O2. After 2 h, the cell viability, intracellular superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px) activity, cellular malondialdehyde (MDA) content, and DNA strand breakage were determined. Results showed that ampelopsin pretreatment did not modify the SOD and GSH-Px inactivation but significantly decreased MDA production; except for the medium dose (30 μg mL-1), all the tested concentrations of ampelopsin did not significantly inhibit cell viability reduction and gave no influence on DNA damage. The results suggested that all the tested doses of ampelopsin pretreatment before H2O2 addition can protect PK-15 cell from H2O2-induced lipid peroxidation, which might not be mediated by the SOD and GSH-Px responsees. The appropriate dose of ampelopsin pretreatment prevents PK-15 cell from DNA damage and cell viability reduction. 展开更多
关键词 上皮细胞 过氧化氢 氧化损伤 蛇葡萄 预处理 猪肾脏 诱导 谷胱甘肽过氧化物酶
在线阅读 下载PDF
稳定表达猪水疱病病毒P1基因的PK-15细胞系的建立 预览 被引量:2
20
作者 田宏 吴锦艳 +5 位作者 龚真莉 郑海学 孙世琪 尚佑军 刘湘涛 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期 478-482,共5页
从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性... 从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,在Polybrene的介导下感染PK-15细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。免疫荧光连续检测阳性克隆传代细胞,发现在不同代次的细胞中均有SVDV P1蛋白表达,而且表达的蛋白可被SVD阳性血清所识别;同时应用PCR技术,可从体外反复传代阳性细胞基因组中扩增到SVD P1基因。表明本次所筛选的阳性细胞克隆不但能持续稳定地表达SVD P1蛋白,而且可携带外源基因进行传代,具有良好的遗传稳定性。 展开更多
关键词 猪水疱病病毒P1基因 重组逆转录病毒载体 PK-15细胞 基因表达
在线阅读 免费下载
上一页 1 2 3 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈