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miR-30a的高表达促进K562细胞的凋亡
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作者 徐敏 高雯琬 +2 位作者 雒钰杰 王毅 陶崑 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期396-402,共7页
目的:探讨miR-30a的高表达对慢性髓系白血病K562细胞株的促凋亡作用及其机制。方法:构建pEGFP-pre-miR-30a重组质粒并转染K562细胞,采用实时定量PCR法检测miR-30a和BCR/ABL mRNA的表达水平,应用annexinV-FITC/PI双集流式细胞术(flow cyt... 目的:探讨miR-30a的高表达对慢性髓系白血病K562细胞株的促凋亡作用及其机制。方法:构建pEGFP-pre-miR-30a重组质粒并转染K562细胞,采用实时定量PCR法检测miR-30a和BCR/ABL mRNA的表达水平,应用annexinV-FITC/PI双集流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析K562细胞凋亡百分率,应用蛋白印迹法(Western blot)分析BCR/ABL融合蛋白、凋亡相关蛋白BCL-2、BAX及PTEN、AKT、p-AKT的变化。结果:测序与酶切图谱证实成功构建重组质粒。与pEGFP-C1-K562阴性对照组和K562空白对照组比,重组质粒pEGFP-pre-miR-30a转染组miR-30a表达水平显著升高,BCR/ABL mRNA与蛋白表达明显下调,凋亡细胞所占比例明显增加(P<0.05),抗凋亡蛋白BCL-2水平降低,促凋亡蛋白BAX表达增加,抑癌蛋白PTEN表达明显上升,AKT无明显变化,但活性形式的p-AKT显著降低,差异均有统计学意义。结论:高表达的miR-30a能抑制K562细胞癌基因BCR/ABL mRNA及蛋白的表达并促进细胞凋亡,其机制可能与抑制BCR/ABL-PTEN/AKT信号通路的活性有关。 展开更多
关键词 miR-30a 慢性髓系细胞白血病 BCR/ABL PTEN/AKT通路 细胞凋亡
SEPT6对膀胱癌EJ细胞增殖、凋亡的影响及其机制的研究 预览
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作者 骆雨 刘锋 +8 位作者 严春晖 朱亮 郭征 周帆 张炜 曲巍 张红玉 赵昌林 王小璞 《临床肿瘤学杂志》 CAS 北大核心 2018年第3期211-215,共5页
目的探讨干扰SEPT6基因的表达对膀胱癌EJ细胞株增殖、凋亡的影响以及潜在的机制。方法用特异性SEPT6基因小干扰RNA序列转染膀胱癌EJ细胞作为SEPT6沉默组,以转染非特异性序列作为对照组。采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测转染效率,流式... 目的探讨干扰SEPT6基因的表达对膀胱癌EJ细胞株增殖、凋亡的影响以及潜在的机制。方法用特异性SEPT6基因小干扰RNA序列转染膀胱癌EJ细胞作为SEPT6沉默组,以转染非特异性序列作为对照组。采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测转染效率,流式细胞仪检测转染后细胞的周期变化;同时采用Hoechst 33342细胞染色法检测转染后EJ细胞的凋亡;Western blotting检测相关信号通路蛋白的表达变化。结果 QPCR检测显示,SEPT6沉默组SEPT6 mRNA的表达水平为(23.4±2.3)%,显著低于对照组的(100.0±2.2)%,差异有统计学意义(P〈0.05)。转染72 h后,对照组和SEPT6沉默组细胞的吸光值(A)分别为3.7±0.4、2.3±0.1,差异有统计学意义(P〈0.05)。流式细胞仪检测显示,转染48 h后,对照组和SEPT6沉默组G_0/G_1期细胞比例分别为(43.3±4.2)%和(64.5±2.8)%,差异有统计学意义(P〈0.05)。Hoechst 33342细胞凋亡荧光染色结果显示,对照组和SEPT6沉默组的细胞凋亡比例分别为(8.2±1.4)%、(24.2±3.2)%,差异有统计学意义(P〈0.05)。Western blotting检测显示,与对照组比较,SEPT6沉默组PTEN蛋白表达增加、Akt蛋白磷酸化降低。结论干扰SEPT6基因的表达能显著抑制膀胱癌EJ细胞的增殖,导致其凋亡增加。其机制可能与PTEN/Akt信号通路的激活有关。 展开更多
关键词 膀胱癌 SEPT6基因 PTEN/Akt信号通路
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Akt1通过磷酸化泛素结合酶E2S增强胶质瘤放化疗抵抗的实验研究
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作者 胡力 沈红 +5 位作者 刘利 谢春成 王海洋 刘琴芳 翁长江 林志国 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第2期194-199,共6页
目的 探讨Akt1增强胶质瘤放、化疗抵抗的机制.方法 通过免疫荧光实验检测正常星形细胞和4种恶性胶质瘤细胞(U87、U251、SF767以及U373)中泛素结合酶E2S(UBE2S)的表达情况;通过Western blot实验检测PTEN基因突变型和野生型胶质瘤细胞... 目的 探讨Akt1增强胶质瘤放、化疗抵抗的机制.方法 通过免疫荧光实验检测正常星形细胞和4种恶性胶质瘤细胞(U87、U251、SF767以及U373)中泛素结合酶E2S(UBE2S)的表达情况;通过Western blot实验检测PTEN基因突变型和野生型胶质瘤细胞中UBE2S的表达差异;构建激活型Akt1载体,分别与UBE2S野生型或T152位点突变型载体共表达,观察PTEN/Akt信号通路对UBE2S的作用,以及UBE2S过表达后对非同源末端连接复合物的影响;采用流式细胞仪检测稳定敲低UBE2S的U87胶质瘤细胞对放、化疗的敏感性.结果 与正常星形细胞相比,胶质瘤细胞高表达UBE2S蛋白;PTEN突变型的胶质瘤细胞UBE2S的表达较野生型更稳定.构建激活型Akt1磷酸化UBE2S的T152位点,可促进UBE2S的稳定表达.UBE2S与Ku70、Ku80相互作用能促进Ku70的表达(P =0.009).免疫印迹结果显示,敲低UBE2S的表达后,Ku70、Ku80和DNA-PKcs的表达量显著降低(P〈0.001).流式细胞检测结果显示,UBE2S敲低可增强胶质瘤对放、化疗的敏感性(P〈0.001).结论 UBE2S在恶性胶质瘤中高表达;Akt1可磷酸化UBE2S的T152位点,从而增强UBE2S的稳定性;敲低UBE2S能降低非同源末端连接复合物介导的DNA修复效率,从而增强胶质瘤细胞对放、化疗的敏感性. 展开更多
关键词 神经胶质瘤 化放疗 泛素结合酶E2S PTEN/Akt信号通路
miR-221在H2O2诱导的大鼠心肌细胞损伤中的作用及机制研究 预览 被引量:1
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作者 符丽珍 黄茂芹 +2 位作者 劳之勇 肖孟生 朱德康 《中国比较医学杂志》 北大核心 2017年第5期83-88,共6页
目的探讨miR-221在过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠心肌细胞(H9c2)损伤中的作用及机制研究。方法 MTT法检测不同浓度H2O2对H9c2细胞的损伤作用,RT-PCR法检测miR-221表达量。通过Lipofectamine2000将miR-221 inhibitor及阴性对照转入H9c2... 目的探讨miR-221在过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠心肌细胞(H9c2)损伤中的作用及机制研究。方法 MTT法检测不同浓度H2O2对H9c2细胞的损伤作用,RT-PCR法检测miR-221表达量。通过Lipofectamine2000将miR-221 inhibitor及阴性对照转入H9c2心肌细胞,并将实验分为4组,正常对照组,模型对照组(H2O2组),阴性对照组(H2O2+阴性对照组),抑制组(H2O2+miR-221 inhibitor组)。MTT法检测细胞活力,吖啶橙染色检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bax,Bcl-2,10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因蛋白(PTEN)及p-蛋白激酶(AKT)表达。结果 0、25、50、100、200、400μmol/L H2O2对H9c2细胞活力的抑制作用逐渐加强,其中200μmol/L H2O2对细胞活力抑制程度适中,因此作为后续诱导剂量。与正常对照组比较,模型对照组及阴性对照组中miR-221表达量显著上调(P〈0.01),H9c2细胞活力降低(P〈0.01),细胞凋亡率显著提高(P〈0.01),Bax及PTEN表达量上调(P〈0.01),Bcl-2及p-AKT表达量下调(P〈0.01)。与模型对照组及阴性对照组比较,抑制组中miR-221表达量显著下调(P〈0.01),H9c2细胞活力提高(P〈0.01),细胞凋亡率显著降低(P〈0.01),Bax及PTEN表达量下调(P〈0.01),Bcl-2及p-AKT表达量上调(P〈0.01)。结论 miR-221低表达能显著抑制H2O2诱导的H9c2心肌细胞氧化应激损伤,与调控PTEN/AKT信号通路有关。 展开更多
关键词 MIR-221 H9C2心肌细胞 氧化应激 凋亡 PTEN/AKT信号通路
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