期刊文献+
共找到180篇文章
< 1 2 9 >
每页显示 20 50 100
High-quality total RNA extraction from Magnolia sieboldii K.Koch seeds:a comparative evaluation 预览
1
作者 Jun Wei Xiaolin Zhang +1 位作者 Zhe Hou Xiujun Lu 《林业研究:英文版》 CAS CSCD 2019年第1期371-379,共9页
Magnolia sieboldii K.Koch seed is characterized with having deep dormancy.The inner molecular regulation mechanism has not been investigated because of the absence of a protocol for total RNA(ribonucleic acid)extracti... Magnolia sieboldii K.Koch seed is characterized with having deep dormancy.The inner molecular regulation mechanism has not been investigated because of the absence of a protocol for total RNA(ribonucleic acid)extraction.The extraction of high-quality RNA is important and can be a limiting factor in plant molecular biology experiments.Sufficient high-quality total RNA is required to elucidate the molecular regulation mechanism of germination.However,M.sieboldii seeds with large amounts of secondary metabolites also contain recalcitrant tissues for RNA isolation.We found two simple and low-cost RNA extraction methods for M.sieboldii seeds by evaluating and selecting eight types of methods and further optimizing these methods.The two methods were not only suitable for extracting M.sieboldii seed RNA but also applicable to RNAs from several other tissues.Total RNA extracted through these approaches was applicable for general molecular biology experiments such as qRT-PCR(quantitative real-time polymerase chain reactions).The protocols also meet the strict harsh requirements for transcriptome sequencing and small RNA sequencing.This study provides a powerful approach for future studies at the transcription level. 展开更多
关键词 Seed DORMANCY RNA isolation QRT-PCR Small RNA MAGNOLIA sieboldii
在线阅读 下载PDF
基于β-actin的3种刺胞动物系统发育分析 预览
2
作者 黄亮天 范程辉 +2 位作者 黄文靖 陈相玲 刘丽 《海南热带海洋学院学报》 2019年第2期35-39,共5页
对二异角孔珊瑚(Goniopora duofasciat)和端行绿海葵(Sagartia carcinophilus)提取RNA的最佳量和部位进行了研究,并克隆得到了二异角孔珊瑚、端行绿海葵及稀杯盔形珊瑚(Galaxea astreata)约200 bp的β-actin基因片段,然后利用NJ法构建... 对二异角孔珊瑚(Goniopora duofasciat)和端行绿海葵(Sagartia carcinophilus)提取RNA的最佳量和部位进行了研究,并克隆得到了二异角孔珊瑚、端行绿海葵及稀杯盔形珊瑚(Galaxea astreata)约200 bp的β-actin基因片段,然后利用NJ法构建系统发育树.结果表明:二异角孔珊瑚与中国角菊珊瑚(favites chinensis)、Montastraea franksi亲缘关系较近,稀杯盔形珊瑚与肾形真叶珊瑚(Euphyllia ancora)亲缘关系较近,端行绿海葵与襟疣海葵(Anthopleura elegantissima)亲缘关系较近. 展开更多
关键词 共生刺胞动物 Β-ACTIN 分子系统发育
在线阅读 下载PDF
A Simple and High Quality Method for Isolation and Extraction of Total RNA of Pholiota adipose 预览
3
作者 Zhimin WEI Shunguo LI +4 位作者 Meng LIU Xueyan XIA Yu ZHAO Hanzhang ZHOU Chengang GUO 《亚洲农业研究:英文版》 2018年第1期40-44,共5页
在线阅读 免费下载
适用于结核分枝杆菌RNA抽提的实验方法学研究 预览 被引量:2
4
作者 俞垭美 王姗姗 +3 位作者 褚丽花 冯宜 葛洪斌 张喆 《临床肺科杂志》 2016年第4期609-612,共4页
目的分枝杆菌的细胞壁结构和成分特殊而复杂,在RNA提取的实验方法学上是否区别于一般的细菌,有待考察。本文使用了异硫氰酸胍提取法与商业化的细菌RNA抽提试剂盒法进行对照,对减活牛型分枝杆菌卡介苗(BCG)进行RNA的抽提,进而确定... 目的分枝杆菌的细胞壁结构和成分特殊而复杂,在RNA提取的实验方法学上是否区别于一般的细菌,有待考察。本文使用了异硫氰酸胍提取法与商业化的细菌RNA抽提试剂盒法进行对照,对减活牛型分枝杆菌卡介苗(BCG)进行RNA的抽提,进而确定了适用于分枝杆菌RNA抽提的最优方法。方法分别用异硫氰酸胍提取法和E.Z.N.ATM BacterialRNA提取试剂盒从一定量的卡介苗细菌培养物中提取RNA,用Nanodrop2000c检测抽提所得的RNA的浓度和纯度。结果用异硫氰酸胍法从1到30nag的BCG中均能提取到大量的RNA,而用E.Z.N.ATM BacterialRNA提取试剂盒几乎未提取到RNA,而且在纯度上前者好于后者。结论异硫氰酸胍的裂解效率远远高于溶菌酶。对于分枝杆菌例如结核分枝杆菌RNA的提取应该使用异硫氰酸胍法。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 RNA提取 异硫氰酸胍(GTC)
在线阅读 下载PDF
蓝藻Synechococcus elongatus PCC7 942荧光实时定量RT-PCR实验体系的优化
5
作者 来盼 李鹏飞 +6 位作者 蔡若淼 蔡静 卞乾笑 姜雅雯 常天亮 赵宇玮 许耀 《云南大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期307-316,共10页
蓝藻(Synechococcu elongatus PCC 7942)是最简单的原核生物钟模式生物,研究其生物钟基因表达模式具有重要的科学意义.然而由于该蓝藻高质量RNA提取困难,目前应用荧光实时定量RT-PCR(qPCR)实验方案对其特定基因表达模式进行研究的... 蓝藻(Synechococcu elongatus PCC 7942)是最简单的原核生物钟模式生物,研究其生物钟基因表达模式具有重要的科学意义.然而由于该蓝藻高质量RNA提取困难,目前应用荧光实时定量RT-PCR(qPCR)实验方案对其特定基因表达模式进行研究的报道较少.研究尝试通过对影响RNA提取质量的溶菌酶作用时间、起始细胞数量等因素,以及对影响qPCR反应特异性和重现性的c DNA模板浓度、引物浓度、引物退火温度等条件进行优化,初步建立了一套适用于S.elongatus PCC 7942的qPCR实验体系.结果表明震荡培养至OD750≈0.4时,取10 m L蓝藻细胞起始提取实验,使用3 mg/m L溶菌酶处理10 min后,再经试剂盒法提取总RNA的策略,RNA得率最高且质量最好.蓝藻的qPCR优化结果显示c DNA终质量浓度0.1μg/μL,引物终浓度4 pmol/L,并根据引物对Tm值调整退火温度是最佳反应条件. 展开更多
关键词 蓝藻 RNA提取 实时定量PCR 生物钟基因 表达模式
蓝莓组织RNA提取方法的研究 预览 被引量:1
6
作者 余柯达 叶美娟 +3 位作者 陈文荣 朱凯丽 张常晶 郭卫东 《浙江师范大学学报:自然科学版》 CAS 2016年第1期60-64,共5页
为建立蓝莓组织RNA提取方法,以蓝莓幼果为材料,比较了5种RNA提取方法,建立了改良的十六烷基三甲基溴化铵-乙酸钾(CTAB-KAc)提取方法,并比较了CTAB-KAc法对蓝莓根、成熟叶、幼茎、花、幼果和成熟果实组织RNA的提取效果.结果表明:CTAB-... 为建立蓝莓组织RNA提取方法,以蓝莓幼果为材料,比较了5种RNA提取方法,建立了改良的十六烷基三甲基溴化铵-乙酸钾(CTAB-KAc)提取方法,并比较了CTAB-KAc法对蓝莓根、成熟叶、幼茎、花、幼果和成熟果实组织RNA的提取效果.结果表明:CTAB-KAc法提取RNA的过程只需3h,蓝莓幼果RNA的A260/A280和A260/A230值分别达到2.02和2.46,且无基因组DNA污染,RNA产量达到143.37μg·g^-1;用CTAB-KAc法成功提取了蓝莓成熟叶、幼茎、花、幼果和成熟果实组织的RNA,但是根的RNA提取方法还需优化.把上述RNA反转录成cDNA后进行PCR,扩增出预期大小的目的片段,可满足后续分子生物学实验的要求. 展开更多
关键词 蓝莓 RNA提取 十六烷基三甲基溴化铵-乙酸钾法 多糖 逆转录PCR
在线阅读 下载PDF
莲雾果实高质量总RNA提取方法的建立 预览 被引量:2
7
作者 尹珍珍 吴光斌 +1 位作者 陈发河 谢潮添 《食品科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第14期1-4,共4页
为从莲雾果实中提取高质量RNA,以"黑珍珠"莲雾果实为材料,采用试剂盒法、十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)法、十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyltrimethylammonium bromide,CTAB)法、改良CTAB法和Trizol法5种总RNA提取... 为从莲雾果实中提取高质量RNA,以"黑珍珠"莲雾果实为材料,采用试剂盒法、十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)法、十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyltrimethylammonium bromide,CTAB)法、改良CTAB法和Trizol法5种总RNA提取方法进行比较分析。结果表明,SDS法得到的总RNA质量较差,有严重的降解和DNA污染;Trizol法提取物中有较多蛋白和多糖等残留,无条带出现。CTAB法、改良CTAB法和试剂盒法均能获得质量较好的莲雾果实总RNA,经实时荧光定量聚合酶链反应验证得到条带与目的片段大小一致,表明该RNA均能满足后续分子生物学研究。 展开更多
关键词 莲雾果实 RNA提取 多糖 多酚 方法
在线阅读 下载PDF
玉米成熟子粒RNA提取方法的改良与优化
8
作者 张园园 赵吉强 +5 位作者 姜丽君 史艳慧 陈磊 郭善利 宋建成 Paula E Jameson 《玉米科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期38-42,47共6页
玉米成熟子粒含有较多的多糖、蛋白质和脂类,传统的RNA提取方法难以提取到高质量的RNA。以授粉后28 d灌浆后期的玉米子粒为试材,以授粉后7 d的玉米子粒为对照,对目前国内外常用的Trizol法、Biozol法、RNAiso Plus法、三种硅胶柱商业试... 玉米成熟子粒含有较多的多糖、蛋白质和脂类,传统的RNA提取方法难以提取到高质量的RNA。以授粉后28 d灌浆后期的玉米子粒为试材,以授粉后7 d的玉米子粒为对照,对目前国内外常用的Trizol法、Biozol法、RNAiso Plus法、三种硅胶柱商业试剂盒总RNA提取方法以及本研究建立的改良提取方法进行比较。结果表明,以授粉后7 d的玉米子粒为材料时,各种方法都能获得较好提取效果;以灌浆后期接近成熟玉米子粒为试材时,采用本研究改良或新建立的提取法,可以大幅降低提取成本,快速提取高质量和高得率的RNA。 展开更多
关键词 玉米 子粒 RNA提取
水稻、玉米、小麦成熟种子总RNA的快速提取 被引量:1
9
作者 杜何为 黄敏 何凯 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期2091-2094,共4页
本研究以水稻、玉米、小麦的成熟种子为试验材料,使用液氮分别进行研磨,研磨后的样品先用10%SDS和50 mmol/L Tris-HCl处理,再使用TRIzol试剂盒提取,并将提取的总RNA分别进行了电泳、浓度测定、反转录与Real-time PCR分析。结果显示:18S ... 本研究以水稻、玉米、小麦的成熟种子为试验材料,使用液氮分别进行研磨,研磨后的样品先用10%SDS和50 mmol/L Tris-HCl处理,再使用TRIzol试剂盒提取,并将提取的总RNA分别进行了电泳、浓度测定、反转录与Real-time PCR分析。结果显示:18S r RNA和28S r RNA条带清晰;A260/A280比值介于1.95~2.08之间;小麦的得率高于200μg/g,水稻的得率高于300μg/g,而玉米的得率低于230μg/g。Real-time PCR结果表明:0.1μmol/L或10μmol/L GA处理后,水稻种子中SLRL1基因的表达水平显著升高。研究结果表明,本方法提取的水稻、玉米、小麦成熟种子总RNA质量较好,能满足成熟种子中基因表达的检测。 展开更多
关键词 RNA 提取 成熟种子 水稻 玉米 小麦
紫山药组织RNA的提取方法 预览 被引量:1
10
作者 罗火林 张亚楠 杨柏云 《南昌大学学报:理科版》 CAS 北大核心 2014年第4期373-376,共4页
针对紫山药富含次生代谢物质的特点,探索出一种可有效去除其酚类、多糖和 DNA等杂质的紫山药总RNA提取方法。在 SDS法的基础上,于粉碎材料时,用水不溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVP)防止酚类物质氧化,同时以高盐溶液去除多糖污染。利用这... 针对紫山药富含次生代谢物质的特点,探索出一种可有效去除其酚类、多糖和 DNA等杂质的紫山药总RNA提取方法。在 SDS法的基础上,于粉碎材料时,用水不溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVP)防止酚类物质氧化,同时以高盐溶液去除多糖污染。利用这一方法提取的紫山药多个组织的总 RNA,经琼脂糖电泳鉴定,可见清晰的18和28 S RNA的2条带型,表明 RNA完整,无弥散或降解;经过紫外吸收分析,A260/A380、A260/A2300分别在1.86~2.01,2.17~2.65,纯度良好,所提取的总 RNA质量可以满足进一步分子生物学研究的要求。 展开更多
关键词 RNA提取 紫山药 分子生物学
在线阅读 下载PDF
成熟油菜次生休眠种子RNA的快速高效提取方法 预览 被引量:3
11
作者 赵祥祥 刘福霞 +3 位作者 唐瑭 赵祥强 王兴龙 卢长明 《扬州大学学报:农业与生命科学版》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期64-67,共4页
针对成熟油菜次生休眠种子富含多糖和多酚、老健组织部分富含RNA酶、生理活性低等特点,通过选用RNAplant plus reagent植物总RNA提取试剂,添加β-巯基乙醇抑制RNA酶活性、防止酚类物质氧化,应用醋酸钠去除多糖类物质对RNA的影响,以及缩... 针对成熟油菜次生休眠种子富含多糖和多酚、老健组织部分富含RNA酶、生理活性低等特点,通过选用RNAplant plus reagent植物总RNA提取试剂,添加β-巯基乙醇抑制RNA酶活性、防止酚类物质氧化,应用醋酸钠去除多糖类物质对RNA的影响,以及缩短抽提时间等措施,建立成熟油菜次生休眠种子RNA的快速高效提取方法。结果表明:采用本方法提取的RNA D260nm/D280nm为1.92~2.05,28SrRNA和18SrRNA条带清晰而完整,且无明显降解,可以应用于后续的mRNA分离、建库和高通量转录组测序。 展开更多
关键词 油菜 种子 次生休眠 RNA提取
在线阅读 免费下载
神秘果果实总RNA提取方法比较研究 预览 被引量:9
12
作者 谭才邓 李静 邓毛程 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期409-412,共4页
以神秘果果实为材料,以获得高质量RNA为目的,以针对性地去除多糖、酚类物质为出发点,比较了Trizol法、CTAB法,并相应加以改良。结果显示:CTAB粗提法方便快捷,CTAB精提法提取的总RNA完整性好、纯度高,RT-PCR反应表明提取的总RNA都能满... 以神秘果果实为材料,以获得高质量RNA为目的,以针对性地去除多糖、酚类物质为出发点,比较了Trizol法、CTAB法,并相应加以改良。结果显示:CTAB粗提法方便快捷,CTAB精提法提取的总RNA完整性好、纯度高,RT-PCR反应表明提取的总RNA都能满足分子生物学实验的要求。 展开更多
关键词 神秘果 果实 RNA提取
在线阅读 下载PDF
核桃内果皮RNA提取方法研究 预览 被引量:3
13
作者 唐燕 徐龙 +1 位作者 王新建 张锐 《北方园艺》 CAS 北大核心 2012年第12期 117-119,共3页
以核桃果壳硬化期的内果皮为试材,针对核桃内果皮木质化程度高且富含多酚多糖的特点,比较CTAB法Ⅰ、CTAB法Ⅱ和试剂盒3种方法提取核桃内果皮RNA的效果。结果表明:3种方法提取的RNA均可见3条带。CTAB法Ⅰ提取的RNA略微拖带,OD260/OD280... 以核桃果壳硬化期的内果皮为试材,针对核桃内果皮木质化程度高且富含多酚多糖的特点,比较CTAB法Ⅰ、CTAB法Ⅱ和试剂盒3种方法提取核桃内果皮RNA的效果。结果表明:3种方法提取的RNA均可见3条带。CTAB法Ⅰ提取的RNA略微拖带,OD260/OD280为1.540,RNA产率为75.9μg/g,RNA完整性差,质量低;CTAB法Ⅱ的RNA图谱较完整,但亮度较弱,OD260/OD280为1.801,产率为86.1μg/g,但RNA提取过程耗时太长;试剂盒法提取的RNAOD260/OD280为2.055,RNA产率96.4μg/g,RNA图谱清晰、稳定、明亮,证明得到的RNA多糖及酚类等去除较彻底,纯度、完整性和产率均较高。因此,应用复杂植物总RNA提取试剂的试剂盒法可获得高质量与高产率的核桃内果皮总RNA,完全满足后续分子生物学研究。 展开更多
关键词 核桃内果皮 RNA提取 CTAB法 试剂盒法
在线阅读 下载PDF
荒漠甲虫总RNA提取方法的比较与分析 被引量:2
14
作者 王鹏 热依汗古丽·阿里木 刘忠渊 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期36-39,共4页
目的:昆虫总RNA由于其自身结构特点,存在与动物植物完全不同的电泳条带,本文通过对比探索光滑鳖甲总RNA提取的最优方案。方法:实验采用5龄光滑鳖甲幼虫,利用TRIzol、CTAB、热酚法、及BioTeKe Kit、TianGen Kit试剂盒提取方法提取光滑... 目的:昆虫总RNA由于其自身结构特点,存在与动物植物完全不同的电泳条带,本文通过对比探索光滑鳖甲总RNA提取的最优方案。方法:实验采用5龄光滑鳖甲幼虫,利用TRIzol、CTAB、热酚法、及BioTeKe Kit、TianGen Kit试剂盒提取方法提取光滑鳖甲总RNA。结果:(1)所采用的实验方法提取的光滑鳖甲总RNA均呈现出与植物、哺乳动物血细胞、哺乳动物组织样总RNA不同的条带,28S弱于18S条带亮度;(2)TRIzol法、CTAB法、改进热酚法所得光滑鳖甲总RNA条带清晰、完整,D260/D280值为1.89~1.98,D260/D230值为1.94~2.09,纯度较好;(3)TRIzol法RNA提取得率为304.3~365.4μg/g,BioTeKe Kit RNA提取得率为73.38~128.22μg/g。结论:综合所有参数,所选取的方法中,TRIzol法可获得高质量、高产量的光滑鳖甲总RNA,可用于RT-PCR、文库构建等高要求RNA的提取。 展开更多
关键词 光滑鳖甲 异长足漠甲 幼虫 RNA提取 方法选择与优化
观赏海棠不同组织中RNA的几种提取方法 预览
15
作者 刘艳娜 李育奇 +1 位作者 宋婷婷 于凤鸣 《北京农学院学报》 2012年第4期7-9,共3页
以观赏海棠不同组织为试材,用常用的CTAB法、异硫氰酸胍法及Tris-硼酸法,比较其提取RNA的质量和纯度。结果表明:CTAB法提取RNA成本低、RNA质量较高;异硫氰酸胍法提取RNA的质量好、纯度高、提取效率高;而Tris-硼酸法则较不适合于果... 以观赏海棠不同组织为试材,用常用的CTAB法、异硫氰酸胍法及Tris-硼酸法,比较其提取RNA的质量和纯度。结果表明:CTAB法提取RNA成本低、RNA质量较高;异硫氰酸胍法提取RNA的质量好、纯度高、提取效率高;而Tris-硼酸法则较不适合于果实类多酚多糖组织的RNA提取。 展开更多
关键词 RNA 提取 CTAB 异硫氰酸胍 Tris-硼酸法
在线阅读 免费下载
牛大力总RNA提取的CTAB法改进及优化 预览 被引量:4
16
作者 郝宏刚 李志英 +1 位作者 丛汉卿 徐立 《广东农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第18期165-166,共2页
采用改良CTAB法提取牛大力总RNA,采用琼脂糖凝胶电泳、核酸蛋白分析仪和RT—PCR检测所提取总RNA样品的质量。结果表明,改良CTAB法提取的牛大力不同组织或器官的RNA纯度和完整性良好,可满足RT-PCR反应等后续试验的要求。
关键词 牛大力 RNA提取 RT—PCR
在线阅读 下载PDF
两种铁皮石斛总RNA提取方法的比较研究 预览 被引量:4
17
作者 容天聚 文国松 +2 位作者 钱雄 查应洪 徐绍忠 《云南农业大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期703-707,共5页
铁皮石斛是我国重点保护药材,因其富含多糖及次生代谢物,用普通的方法难以从叶中提取到能满足构建全长cDNA文库等分子生物学实验对高质量RNA需要的总RNA。分别通过对异硫氰酸胍法和CTAB法进行改良。异硫氰酸胍法:往裂解液中加入PVP... 铁皮石斛是我国重点保护药材,因其富含多糖及次生代谢物,用普通的方法难以从叶中提取到能满足构建全长cDNA文库等分子生物学实验对高质量RNA需要的总RNA。分别通过对异硫氰酸胍法和CTAB法进行改良。异硫氰酸胍法:往裂解液中加入PVP,通过PVP去除多酚;用56%热水水浴5min加速组织细胞裂解;抽提时间由原来15min缩短为5min;根据材料多糖多酚的多寡情况适当增加裂解液。CTAB法:根据材料多糖多酚的多寡情况适当增加CTAB裂解液;用LiCl对RNA进行选择性过夜沉淀;灵活处理,适当增大LiCl浓度。结果表明用改良后的2种方法均可提取到总RNA,经对比发现,改良CTAB法提取效果更好,可重复性强,抽取到的RNA更适合于后续的分子生物学实验。 展开更多
关键词 铁皮石斛 多糖 RNA提取 异硫氰酸胍法 CTAB法
在线阅读 免费下载
一种改进的苹果总RNA高效提取方法 预览 被引量:1
18
作者 杨凤秋 高燕 +4 位作者 曾广娟 李春敏 陈东玫 赵永波 张新忠 《河北农业科学》 2012年第6期24-26,共3页
在改进的CTAB提取法基础上,结合总RNA的LiCl沉淀法,摸索出了一套适合苹果组织总RNA提取和纯化的方法。该方法得到的苹果总RNA完整性好,纯度和得率高,且成本低,容易操作。解决了RNA易降解以及木本植物组织中多酚和多糖含量高导致的... 在改进的CTAB提取法基础上,结合总RNA的LiCl沉淀法,摸索出了一套适合苹果组织总RNA提取和纯化的方法。该方法得到的苹果总RNA完整性好,纯度和得率高,且成本低,容易操作。解决了RNA易降解以及木本植物组织中多酚和多糖含量高导致的在提取过程中RNA被氧化和共沉淀从而导致RNA产率低的问题。 展开更多
关键词 苹果 RNA 分离 提取方法
在线阅读 免费下载
Isolation of Functional RNA from Heavily Infested, Wilted and Necrotic Leaf Tissues of Tea with High Polyphenol Content 预览
19
作者 Tirthankar Bandyopadhyay Raju Bharalee +7 位作者 Bomali Gohain Sushmita Gupta Niraj Agarwala H. RanjitSingh Setu Chakrabarty Priyadarshini Bhorali Mohan C. Kalita Sudripta Das 《农业科学与技术:B》 2012年第1期 121-127,共7页
关键词 mRNA分离 RNA提取 植物组织 CDNA末端快速扩增技术 多酚含量 茶叶 枯萎 聚乙烯吡咯烷酮
在线阅读 下载PDF
Trizol RNA提取法在雪貂组织的流感病毒H3N2定量PCR检测中优于RNeasy mini kit(Qiagen)柱子法 预览 被引量:2
20
作者 占玲俊 鲍琳琳 +3 位作者 李枫棣 吕琦 许黎黎 秦川 《中国比较医学杂志》 2012年第2期 22-27,共6页
目的比较RNeasy mini kit(Qiagen)柱子法和Trizol法提取RNA在雪貂肺和肠组织H3N2 SYBRGreen PCR定量中的去干扰作用,从而找到适合该定量体系的RNA提取方法。方法比较Trizol法,RNeasy minikit柱子法,改良RNeasy mini kit柱子法1和改良R... 目的比较RNeasy mini kit(Qiagen)柱子法和Trizol法提取RNA在雪貂肺和肠组织H3N2 SYBRGreen PCR定量中的去干扰作用,从而找到适合该定量体系的RNA提取方法。方法比较Trizol法,RNeasy minikit柱子法,改良RNeasy mini kit柱子法1和改良RNeasy mini kit柱子法2提取肺肠组织RNA的质量,RNA逆转录成cDNA后,利用SYBR Green PCR方法检测样品中H3N2的载量,比较产物的特异性,综合评价RNA提取方法。结果 4种方法提取的肺和肠组织的RNA质量不相同,紫外分光光度仪测得RNeasy mini kit柱子法提取的RNA的A260/280低于1.8,其余3种方法的A 260/280在1.8~2.1之间,A 260/230只有Trizol法能达到2.0左右,其余3种方法均远低于2.0。电泳可见Trizol法提取的RNA有3条带:28 s、18 s和5 s,而RNeasy mini kit柱子法的RNA除了有28 s、18 s外,还有基因组DNA,改良RNeasy mini kit柱子法1和2提取的RNA只有28 s和18 s带。RNA逆转录后进行荧光定量PCR,从溶解曲线看,不论是鼻甲刮取物还是肺肠组织的样品模板,4种方法获得的样品与标准品均为单一峰溶解曲线峰,并且波峰位置重叠。而鼻甲刮取物定量的产物跑琼脂糖凝胶电泳均为单一的特异性条带,而肺肠组织的产物电泳发现:Trizol法获得的模板定量产物与标准品一致,为单一的特异性条带,而其它3种方法获得的模板则均有非特异性条带。结论鼻甲刮取物的病毒定量选用RNeasy mini kit柱子法提取定量结果与Trizol法一样可靠,说明对于简单样品该体系及引物非常适用,结果可信。对于组织样品肺和肠,Trizol法获得的样品定量结果比其它3种方法可靠。 展开更多
关键词 雪貂 H3N2 RNA提取 SYBRGreen荧光定量PCR
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 9 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈