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基于TCGA数据库的RelB与前列腺癌临床相关性分析及功能验证 预览
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作者 夏海燕 游奕琳 魏晓为 《武警后勤学院学报:医学版》 CAS 2019年第6期1-5,共5页
【目的】本研究拟通过癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)公共数据库研究RelB与前列腺癌的关联,验证其诱导前列腺癌放疗抵抗的潜在功能。【方法】在TCGA公共数据库下载前列腺癌患者RelB高通量测序数据及其对应的临床资料,运... 【目的】本研究拟通过癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)公共数据库研究RelB与前列腺癌的关联,验证其诱导前列腺癌放疗抵抗的潜在功能。【方法】在TCGA公共数据库下载前列腺癌患者RelB高通量测序数据及其对应的临床资料,运用SPSS分析RelB在前列腺癌患者中的表达水平以及临床特征,随后建立RelB沉默前列腺癌细胞株PC3,4 Gy X线进行处理,CellTiter-Glo发光法检测细胞活力。【结果】统计分析结果显示前列腺癌肿瘤组织内RelB表达显著高于前列腺增生组织,且与患者年龄、肿瘤T分期有显著性关联,虽然RelB差异表达与患者总生存无显著性关联,但在放疗人群中RelB高表达患者无复发生存期(relapse-free survival,RFS)显著低于RelB低表达组,体外实验进一步发现前列腺癌细胞株中RelB蛋白表达与细胞放疗敏感性呈显著负相关。【结论】RelB可能参与前列腺癌发生发展,且有可能是诱导前列腺癌放疗抵抗的关键因子。 展开更多
关键词 癌症基因组图谱 RELB 前列腺癌 发生发展 放疗抵抗
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利用CRISPR/Cas9技术建立RelB敲除小鼠模型
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作者 徐帜 孙文博 +2 位作者 张妍妍 许勇 唐金海 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期313-319,共7页
目的:利用CRISP/Cas9技术敲除C57BL/6小鼠中的RelB基因,为核因子(nuclear factor,NF)-κB转录因子蛋白家族的RelB基因与肿瘤转移等方面的研究提供RelB基因敲除实验动物模型。方法:利用基因编辑技术CRISPR/Cas9系统,设计并构建针对目的基... 目的:利用CRISP/Cas9技术敲除C57BL/6小鼠中的RelB基因,为核因子(nuclear factor,NF)-κB转录因子蛋白家族的RelB基因与肿瘤转移等方面的研究提供RelB基因敲除实验动物模型。方法:利用基因编辑技术CRISPR/Cas9系统,设计并构建针对目的基因RelB第4外显子sgRNA,同时利用T7 RNA聚合酶体外转录Cas9 mRNA。取C57BL/6小鼠受精卵体外注射sgRNA和Cas9 mRNA后,进行胚胎移植,实现靶基因敲除。待小鼠出生后提取DNA并进行PCR鉴定,获得F0代,后与野生型交配后繁殖,取样提取DNA,测序分析鉴定后获得F1代小鼠,并在蛋白质水平和基因组水平分别验证敲除效果。结果:获得了4个在RelB基因突变的首建鼠,并得到了稳定遗传的RelB基因敲除小鼠。基因组测序结果示,敲除实验组中RelB的mRNA出现无义突变,令其mRNA翻译终止。与对照组相比,敲除实验组检测不到RelB蛋白表达。同时,Western blot结果显示,NF-κB家族中其他成员RelA、p50和p52的蛋白表达不受影响。结论:成功获得特异性敲除RelB的C57BL/6小鼠,为RelB在肿瘤转移、耐药中的研究提供了重要工具。 展开更多
关键词 RELB CRISPR/cas9 基因敲除 C57BL/6小鼠
胃肠间质瘤中RelA和RelB表达、c-Kit/PDGFRA基因突变及其临床意义 预览 被引量:2
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作者 陈昊 戴菡珏 +2 位作者 徐晶晶 程莉 国风 《临床肿瘤学杂志》 CAS 北大核心 2018年第3期216-223,共8页
目的探讨胃肠间质瘤(GIST)中核转录因子RelA和Rel B表达、c-Kit/PDGFRA基因突变及与临床病理特征之间的关系。方法回顾性分析132例GIST患者的临床病理资料,采用免疫组化法检测RelA和Rel B表达情况,采用直接测序法检测c-Kit和PDGFRA基... 目的探讨胃肠间质瘤(GIST)中核转录因子RelA和Rel B表达、c-Kit/PDGFRA基因突变及与临床病理特征之间的关系。方法回顾性分析132例GIST患者的临床病理资料,采用免疫组化法检测RelA和Rel B表达情况,采用直接测序法检测c-Kit和PDGFRA基因突变情况,分析RelA、Rel B表达和c-Kit/PDGFRA基因突变与GIST临床病理特征之间的关系。结果 RelA、Rel B在132例GIST组织标本中的阳性表达率分别为65.2%(86/132)、54.5%(72/132)。NIH危险度分级为高危患者的RelA阳性表达率为76.0%,高于非高危患者的58.5%(P=0.041);而Rel B表达与NIH危险度分级无关(P〉0.05)。RelA和Rel B表达与性别、年龄、肿瘤原发部位、肿瘤大小、肿瘤坏死及肿瘤溃疡均无关(P〉0.05)。82例(62.1%)患者检测到c-Kit和PDGFRA热点突变,c-Kit基因突变者74例(56.1%),PDGFRA基因突变者8例(6.1%)。c-Kit/PDGFRA基因突变患者的RelA阳性表达率为70.7%,高于野生型患者的56.0%(P=0.085);而Rel B表达与c-Kit/PDGFRA基因突变状态无关(P〉0.05)。肿瘤直径〉10 cm的患者c-Kit/PDGFRA基因突变率为78.6%,高于肿瘤直径≤10 cm者的57.7%(P=0.043)。NIH高危者c-Kit/PDGFRA基因突变率为76.0%,高于非高危者的53.7%(P=0.01)。CD34阳性、DOG-1阳性患者的c-Kit/PDGFRA基因突变率分别为70.8%、64.1%,高于相应阴性患者的44.2%(P=0.003)和0(P=0.038)。MBP和Desmin阳性患者的c-Kit/PDGFRA基因突变率分别为52.5%和30.8%,低于相应阴性患者的76.9%(P=0.005)和69.8%(P〈0.001)。结论 RelA阳性或c-Kit/PDGFRA基因突变型患者危险度分级较高,预后可能更差。CD34和DOG-1阳性可能作为c-Kit/PDGFRA基因突变型GIST初步诊断的阳性指标,而MBP和Desmin阳性可能作为排除性诊断指标。 展开更多
关键词 胃肠间质瘤 RELA RELB 基因突变 免疫组化染色
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HIV-1反式激活因子Tat促进RelB转录激活功能及机制初探
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作者 王蒙 杨炜 +3 位作者 胡笑梅 陈宇 谈娟 乔文涛 《南开大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2018年第6期41-47,共7页
人免疫缺陷病毒I型(Human immunodeficiency virus type1,HIV-1)是艾滋病的病原体.Tat是其编码的反式激活因子.为深入解析Tat在转录激活过程中的作用,在实验室前期发现Tat与RelB具有相互作用的基础上,确证了Tat可以促进RelB激活NF-κB;... 人免疫缺陷病毒I型(Human immunodeficiency virus type1,HIV-1)是艾滋病的病原体.Tat是其编码的反式激活因子.为深入解析Tat在转录激活过程中的作用,在实验室前期发现Tat与RelB具有相互作用的基础上,确证了Tat可以促进RelB激活NF-κB;发现Tat促使细胞核内RelB增多;初步机制分析发现Tat不能促进细胞内p100的磷酸化和剪切,但可促进RelB乙酰化、磷酸化修饰.这些结果表明Tat可能通过改变RelB翻译后修饰增强RelB的转录激活活性. 展开更多
关键词 NF-ΚB TAT RELB 转录激活
ROS/TLR_4/RelB、P38通路激活在间歇低氧致树突状细胞表型以及功能改变中的作用 被引量:3
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作者 胡柯 杨宇 +1 位作者 王光伟 涂秋云 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期468-473,共6页
目的探讨ROS/TLR4/RelB、P38通路激活在间歇低氧对人外周血来源树突状细胞(DCs)表型以及功能改变中的作用,为干预睡眠呼吸暂停综合征系统并发症提供新的策略。方法按照不同干预将DCs分为RelB-Snail转染组、P38-PGenesil-1转染组、Snai... 目的探讨ROS/TLR4/RelB、P38通路激活在间歇低氧对人外周血来源树突状细胞(DCs)表型以及功能改变中的作用,为干预睡眠呼吸暂停综合征系统并发症提供新的策略。方法按照不同干预将DCs分为RelB-Snail转染组、P38-PGenesil-1转染组、Snail转染组、PGenesil-1转染组、ROS清除组(CAT浓度为10、50 mmol/L)、TLR4阻断组(HTA125质量浓度为10、50μg/ml)。间歇低氧环境为1.5%低氧浓度,21.0%复氧浓度,低氧/复氧时间比1∶5;设置常氧培养(持续21.0%给氧浓度)以作对照。DCs成熟表型采用CD1a、CD83双标流式细胞仪以及免疫荧光法检测,同种异体混合淋巴细胞增殖反应(MLR)检测DCs刺激T淋巴细胞增殖能力;ELISA法检测IL-12以及MDA的质量浓度;Western blot法检测各组TLR4、RelB以及P38蛋白表达水平。结果 CAT呈剂量依赖性抑制间歇低氧下DCs MDA、TLR4、RelB以及P38表达水平;同时抑制IH下DCs成熟,MLR以及IL-12表达。HTA125剂量依赖性抑制培养后DCs RelB和P38表达,对MDA表达无影响;同样抑制DCs成熟,MLR以及IL-12表达。干预组中,RelB干扰对间歇低氧下DCs成熟抑制最为显著,亦可抑制MLR以及IL-12分泌,但未影响MDA、TLR4以及P38表达。P38干扰对间歇低氧下DCs MLR以及IL-12水平抑制更加显著,亦可影响成熟,同样对MDA、TLR4以及RelB表达无显著影响。结论间歇低氧下DCs主要通过ROS/TLR4/RelB传递成熟信号,通过ROS/TLR4/P38刺激MLR以及IL-12分泌。其中,RelB是DCs分化成熟的关键,MLR以及IL-12分泌主要由P38介导。 展开更多
关键词 间歇低氧 树突状细胞 RELB P38
宫颈癌发生与ApoE、 CLU和RelB表达调控的关系及意义 被引量:2
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作者 迪拉热·力迪甫 努尔满古力·肉孜 +4 位作者 热孜亚·肉孜阿洪 艾尔肯·肉孜比拉力 吾尼且木·吐拉克 卿松 Abulizi Abudula 《医学分子生物学杂志》 CAS 2016年第3期143-148,共6页
目的:以往研究显示,宫颈癌发生可能与体内ApoE、 CLU、 RelB和mTOR等血浆蛋白质表达水平变化存在一定的关系。此研究探讨宫颈癌发生与肿瘤组织中上述蛋白质的表达水平的关系,为建立宫颈癌早期预警指标提供依据。方法收集维吾尔族和... 目的:以往研究显示,宫颈癌发生可能与体内ApoE、 CLU、 RelB和mTOR等血浆蛋白质表达水平变化存在一定的关系。此研究探讨宫颈癌发生与肿瘤组织中上述蛋白质的表达水平的关系,为建立宫颈癌早期预警指标提供依据。方法收集维吾尔族和汉族妇女宫颈鳞癌( cervical squamous cell carcinoma, CSCC)组织标本36例和正常对照组织25例。设计与合成ApoE、 CLU、 RelB和mTOR的mRNA序列特异性引物,采用定量RT?PCR方法,对宫颈癌和正常对照组织RNA进行mRNA表达水平鉴定。结果肿瘤组织中ApoE、 CLU和RelB 3种基因的转录水平上调,与正常对照组比较有显著差异(P<0.05),但是mTOR表达水平无统计学差异(P>0.05),其中ApoE、 CLU和RelB表达水平变化与以往研究报道的血浆水平变化一致。结论宫颈癌的发生与肿瘤组织内ApoE、 CLU和RelB表达水平上调存在密切关系,与血浆水平变化一致,证明这些基因可能成为宫颈癌早期预警的组织和血浆检测指标。 展开更多
关键词 宫颈癌 肿瘤组织 凝集素
miR-155调控前列腺癌细胞NF-κB通路机制研究 预览 被引量:3
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作者 董青川 程继 +5 位作者 王志刚 刘全海 赵华才 赵文彩 张海燕 程永毅 《检验医学与临床》 CAS 2016年第20期2845-2846,2849共3页
目的探讨miR-155调控前列腺癌细胞核因子转录κB(NF-κB)通路的分子机制。方法前列腺癌DU145和PC-3细胞株经Anti-miRTM miR-155抑制剂(anti-miR-155)转染后(实验组),采用蛋白印迹法(Western blot)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR... 目的探讨miR-155调控前列腺癌细胞核因子转录κB(NF-κB)通路的分子机制。方法前列腺癌DU145和PC-3细胞株经Anti-miRTM miR-155抑制剂(anti-miR-155)转染后(实验组),采用蛋白印迹法(Western blot)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测转染后细胞中RelA和RelB蛋白及mRNA表达水平,同时检测NF-κB活性及细胞因子水平。以转染AntimiR~(TM)阴性对照的DU145和PC-3细胞株为对照组。结果与对照组相比,实验组细胞RelA、白细胞介素(IL-6)、白细胞介素(IL-21)表达水平,以及NF-κB活性显著降低(P〈0.05),RelB表达水平比较差异无统计学意义(P〉0.05)。结论降低人前列腺癌细胞NF-κB活性和RelA表达水平,可能是miR-155参与调控前列腺癌生物学行为的分子机制之一。 展开更多
关键词 MIR-155 前列腺癌 核因子转录κB RELA RELB
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间歇性低氧致树突状细胞迁徙能力改变及其通路机制探讨 预览 被引量:1
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作者 胡柯 王光伟 +2 位作者 杨宇 徐国耀 李玉娴 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第30期4200-4202,4206共4页
目的通过模拟人阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)间歇性低氧(IH)环境,观察其对人外周血来源树突状细胞(DCs)迁徙能力的影响,并通过干预RelB、p38的表达探讨IH致DCs迁徙能力改变的可能通路机制。方法培养前将DCs分为RelB、p38干扰... 目的通过模拟人阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)间歇性低氧(IH)环境,观察其对人外周血来源树突状细胞(DCs)迁徙能力的影响,并通过干预RelB、p38的表达探讨IH致DCs迁徙能力改变的可能通路机制。方法培养前将DCs分为RelB、p38干扰及非干扰质粒组。利用间歇低氧舱设置低氧环境,其中,给氧浓度为0.5%、1.5%、5.0%、10.0%,低氧/再氧合时间比为1∶1、1∶3、1∶5、1∶9,常氧对照组予以持续21.0%氧浓度供应。体外培养结束后蛋白质印迹法检测RelB、p38的表达,侵袭小室检测DCs的迁徙能力。结果相对于常氧,体外IH下DCs整体迁徙能力下降,且DCs迁徙能力与IH环境下平均氧分压水平呈正相关(r=0.867,P〈0.05),IH可促进DCs胞内RelB、p38表达,而干预二者表达均未逆转IH下迁徙能力的改变。结论体外IH可导致DCs迁徙能力下降,且可能与RelB、p38激活无关。 展开更多
关键词 间歇性低氧 树突状细胞 迁徙能力 RELB P38
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沉默RelB表达诱导耐受性树突状细胞产生
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作者 祝恒成 邱涛 +3 位作者 刘修恒 胡春海 高瑞辉 但超 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期2123-2125,共3页
目的 利用RelB短发卡RNA(shRNA)慢病毒转染树突状细胞(DC)诱导耐受性DC的产生.方法 将Lenti-RelB shRNA转染未成熟DC后,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测DC中RelB的表达;流式细胞仪检测DC凋亡以及表型分子人... 目的 利用RelB短发卡RNA(shRNA)慢病毒转染树突状细胞(DC)诱导耐受性DC的产生.方法 将Lenti-RelB shRNA转染未成熟DC后,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测DC中RelB的表达;流式细胞仪检测DC凋亡以及表型分子人类主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅱ、CD80、CD86、CD83的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测分泌的细胞因子白细胞介素(IL)-10、IL-12、转化生长因子-β1(TGF-β1)以及核因子(NF)-κB各亚基的DNA结合活性.结果 比较不成熟组、成熟组、空载体对照组DC 、Lenti-RelB shRNA-DC下调RelB的表达;而凋亡率同其余3组比较差异无统计学意义(P>0.05);同时下调DC表型分子MHC-Ⅱ(0.34±0.04)、CD80(0.38±0.03)、CD86(0.17 ±0.02)、CD83(0.21 ±0.02)的表达;转染后的DC低表达IL-12[(96.3±32.8)ng/L],高表达IL-10[(218.2 ±43.3) ng/L];而RelB的DNA结合活性(0.28±0.06)较其他组显著下降,但其他亚基的DNA结合活性各组差异无统计学意义(P>0.05).结论 利用LentiRelB shRNA沉默RelB表达可体外诱导耐受性DC的产生. 展开更多
关键词 RELB 树突状细胞 RNA干扰 基因沉默
RNA干扰RelB基因对小鼠RM-1前列腺癌细胞株放射敏感性的影响及其机制 被引量:4
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作者 朱斌 杨罗艳 +2 位作者 赵晓昆 蒋宏毅 朱梁 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2012年第7期595-599,共5页
目的:探讨RNA干扰RelB基因对鼠RM-1前列腺癌细胞株放射敏感性的影响及其机制。方法:利用靶向胁旧基因的慢病毒载体(pLentilox—sh-RelB),脂质体介导转染RM一1细胞后进行放射(2,4,6,和8Gy剂量)处理培养,分别采用RT—PCR、West... 目的:探讨RNA干扰RelB基因对鼠RM-1前列腺癌细胞株放射敏感性的影响及其机制。方法:利用靶向胁旧基因的慢病毒载体(pLentilox—sh-RelB),脂质体介导转染RM一1细胞后进行放射(2,4,6,和8Gy剂量)处理培养,分别采用RT—PCR、Western印迹法及流式细胞术等方法检测RelB的mRNA和蛋白表达,锰超氧化物歧化酶(Mn—SOD)活力及细胞放射敏感性的变化。结果:转染后放射处理培养,siRelB—RM-1组RelB的mRNA和蛋白表达水平明显低于siVector—RM-1组和nontrans—RM-1组(P〈0.05);放射处理培养后siRelB-RM-1组细胞凋亡百分率明显高于siVector—RM一1组和nontrans—RM-1组(P〈0.05);培养后siRelB—RM-1组细胞Mn—SOD活力下降,放射增敏比为5.13。结论:RNA干扰RelB基因可增强鼠RM-1前列腺癌细胞株放射后的放射敏感性,其机制可能与RNA干扰RelB基因,抑制细胞增殖,降低Mn—SOD活力和诱导凋亡有关。 展开更多
关键词 RNA干扰 RELB MN-SOD 前列腺癌 放射敏感性
前列腺癌细胞中核因子κB家族成员调控乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂表达的机制
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作者 马亮 沈雅颖 +2 位作者 周鹏 周珺 国风 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期 165-168,共4页
目的探讨核因子κB(NF—κB)家族成员(RelA、pSO、RelB和p52)调控抑癌基因乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂(Maspin)表达的可能机制。方法采用Westernblot法检测前列腺癌细胞株DUl45、PC-3和LNCaP中NF-κB家族成员和Maspin蛋白的表达情况... 目的探讨核因子κB(NF—κB)家族成员(RelA、pSO、RelB和p52)调控抑癌基因乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂(Maspin)表达的可能机制。方法采用Westernblot法检测前列腺癌细胞株DUl45、PC-3和LNCaP中NF-κB家族成员和Maspin蛋白的表达情况。采用RNA干扰技术结合Westernblot法,检测RelB或RelA沉默对前列腺癌DUl45细胞中Maspin蛋白表达的影响。采用流式细胞术检测RelB沉默后前列腺癌DUl45细胞的死亡情况。通过转染RelB表达质粒并建立稳定表达细胞株,观察过表达RelB对前列腺癌PC-3细胞中Maspin蛋白表达的影响。结果RelA、pSO、RelB和p52蛋白在雄激素非依赖型前列腺癌细胞株DUl45和PC-3中呈持续性高表达,其中RelB蛋白在DUl45细胞中的表达最为显著。Maspin蛋白在LNCaP和DUl45细胞中低表达,而在PC-3细胞中高表达。在DUl45细胞中,沉默RelB可以诱导Maspin蛋白表达上调,同时促进细胞死亡[死亡率为(13.3±4.2)%]。在PC.3细胞中,过表达RelB可抑制Maspin的内源性表达。RelA沉默对DUl45细胞中Maspin蛋白的表达无显著影响。结论在雄激素非依赖型前列腺癌细胞株中,NF-κB经典与非经典通路蛋白持续性活化,RelB与Maspin的表达呈负相关性。RelB负性调控了内源性Maspin的表达,进而影响了前列腺癌细胞的存活。RelA并不参与对Maspin表达的调控。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 核因子ΚB 人v-rel禽网状内皮细胞过多症病毒癌基因同源物B 乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂
RelB在蛋白酶体抑制剂诱导的maspin表达中的作用研究 预览 被引量:1
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作者 国风 郭凌川 +3 位作者 沈雅颖 顾冬梅 朱卫东 康苏娅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期 1279-1284,共6页
目的:探讨前列腺癌细胞中,核转录因子NF-κB家族成员之一RelB在蛋白酶体抑制剂作用下maspin蛋白表达调控中的作用机制。方法:采用Western blotting法检测前列腺癌细胞中内源性及蛋白酶体抑制剂MG-132作用下RelA、RelB和maspin的蛋白表... 目的:探讨前列腺癌细胞中,核转录因子NF-κB家族成员之一RelB在蛋白酶体抑制剂作用下maspin蛋白表达调控中的作用机制。方法:采用Western blotting法检测前列腺癌细胞中内源性及蛋白酶体抑制剂MG-132作用下RelA、RelB和maspin的蛋白表达;采用免疫组化法检测前列腺癌组织中RelB和maspin的表达情况;通过转染小分子RNA至前列腺癌细胞中沉默RelB的表达;采用Western blotting法检测RelB沉默对MG-132诱导的maspin蛋白表达情况的影响;PI染色法结合流式细胞术检测细胞死亡率。结果:雄激素非依赖型前列腺癌细胞DU145中RelB表达增强而maspin表达明显降低。在检测的10例前列腺癌组织样本中,恶性度高(Gleason评分4-5)的样本普遍同时存在胞核内RelB强染色和maspin表达缺失。MG-132作用DU145细胞24 h后RelB在胞浆和胞核中表达水平下调,伴随着maspin在胞核内的表达上调。MG-132处理RelB表达沉默的DU145细胞8和24 h后,maspin的表达无明显变化,而RelA蛋白的表达水平呈时间依赖性的下调。结论:在雄激素非依赖型前列腺癌细胞和晚期前列腺癌组织中,maspin与RelB的表达呈负相关性。蛋白酶体抑制剂诱导maspin的表达上调过程中,RelB是重要的调控因子。 展开更多
关键词 蛋白酶体抑制剂 RELB MASPIN 前列腺肿瘤
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抑制小鼠骨髓树突状细胞RelB基因诱导免疫耐受的体外研究 被引量:1
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作者 包杰 王前 +2 位作者 郑磊 熊石龙 裘宇容 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期488-492,共5页
采用rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导培养小鼠骨髓树突状细胞(bone marrow dendritic cells),经免疫磁珠方法纯化;利用慢病毒载体制备RelB shRNA慢病毒,与小鼠骨髓树突状细胞共培养,经流式细胞术观察树突状细胞表面分子MHCⅡ、CD86和CD40的... 采用rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导培养小鼠骨髓树突状细胞(bone marrow dendritic cells),经免疫磁珠方法纯化;利用慢病毒载体制备RelB shRNA慢病毒,与小鼠骨髓树突状细胞共培养,经流式细胞术观察树突状细胞表面分子MHCⅡ、CD86和CD40的表达;采用CD3+免疫磁珠分离纯化小鼠T细胞;分别采用四唑蓝(MTT)比色法和液相芯片法检测异基因T细胞增殖的程度以及Th1/Th2细胞因子的分泌水平。此外,实验设LPS-DC组、未处理组和LPS RNAi RelB DC组。发现核因子RelB抑制的树突状细胞表面分子MHCⅡ、CD86和CD40均低水平表达,显著低于LPS-DC表面分子的表达(P〈0.05),且该DC经LPS刺激后(LPS RNAi RelB DC)表面上述3类分子的表达水平仍显著低于LPS-DC组(P〈0.05),与未处理组(immature DC)表面分子表达水平相当。其刺激异基因小鼠T细胞增殖的能力和Th1/Th2分子的分泌水平与未成熟DC组相当。表明抑制核因子RelB的骨髓树突状细胞在体外具有诱导T细胞免疫耐受的能力,是一种新型的致耐受树突状细胞研究方法。 展开更多
关键词 RELB 基因抑制 树突状细胞 免疫耐受
核转录因子RelB抑制途径对骨髓树突状细胞表面分子表达的影响研究 被引量:2
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作者 包杰 王前 +3 位作者 郑磊 熊石龙 姜朝新 裘宇容 《热带医学杂志》 CAS 2010年第5期574-577,F0004共5页
目的探讨核转录因子RelB抑制途径对小鼠骨髓树突状细胞(bone marrow dendritic cells)的表面分子表达的影响,为致耐受树突状细胞的研究提供新方法。方法 rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导培养体系培养小鼠骨髓树突状细胞,免疫磁珠方法纯化;... 目的探讨核转录因子RelB抑制途径对小鼠骨髓树突状细胞(bone marrow dendritic cells)的表面分子表达的影响,为致耐受树突状细胞的研究提供新方法。方法 rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导培养体系培养小鼠骨髓树突状细胞,免疫磁珠方法纯化;用慢病毒载体制备RelB shRNA慢病毒,与小鼠骨髓树突状细胞共培养,流式细胞术观察树突状细胞表面分子MHC-II、CD86和CD40的表达,设LPS-DC对照组、未处理组和LPSRNAi RelB DC组。结果核转录因子RelB抑制的树突状细胞表面分子MHC-II、CD86和CD40均低水平表达,显著低于成熟DC表面分子的表达(P〈0.05),且经LPS刺激后(LPS RNAi RelB DC)DC表面上述三类分子的表达水平仍显著低于LPS-DC组(P〈0.05),与未处理组(immature DC)表面分子表达水平相当。结论核转录因子RelB抑制的骨髓树突状细胞表面分子表达水平低,呈现出致耐受的树突状细胞的特点,是致耐受树突状细胞研究的一种新方法。 展开更多
关键词 RELB 慢病毒 树突状细胞 免疫耐受
RelB基因沉默的髓源树突状细胞负载Tα146-162对TAChR预致敏T细胞免疫反应的影响 预览 被引量:3
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作者 张勇 杨欢 +1 位作者 肖波 鲁特飞 《中南大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期 38-44,共7页
目的:探讨胁坍基因沉默的髓源树突状细胞(BMDC)负载电鳗乙酰胆碱受体(TAChR)优势肽段Tα146~162在TAChR预致敏C57BL/6小鼠中能否诱导免疫耐受。方法:制备产生RelBsiRNA分子的重组慢病毒和对照病毒。慢病毒感染BMDC后,给予LPS... 目的:探讨胁坍基因沉默的髓源树突状细胞(BMDC)负载电鳗乙酰胆碱受体(TAChR)优势肽段Tα146~162在TAChR预致敏C57BL/6小鼠中能否诱导免疫耐受。方法:制备产生RelBsiRNA分子的重组慢病毒和对照病毒。慢病毒感染BMDC后,给予LPS刺激,相应的DC命名为DC—siRelB和DC—control。应用实时定量PCR和Western印迹分析细胞中RelB表达,流式细胞仪检测细胞表型,ELISA检测上清白细胞介素(IL)-12水平。36只C57BL/6小鼠随机分为A1,A2,A3,K1,K2,K3共6组。实验前1天,A1-A3组用TAChR+完全福氏佐剂(CFA)致敏;K1~K3组用钥孔戚血清蛋白(KLH)4-CFA致敏。第7天,A2和K2组注射Tα146-162脉冲的DC-siRelB;A3和K3组注射Tα146-162脉冲的DC—control;A1和K1组给予PBS。第14天,^3H-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖反应。结果:成功构建了含RelB^shRNA基因的重组慢病毒,RelBsiRNA可显著下调DC中RelB的表达。与DC—control相比,DC—siRelB中CD80,CD86,MHCII表达及IL-12水平显著降低。与A1和A3组相比,A2组TAChR刺激下淋巴细胞增殖反应显著降低(P〈0.05),ConA和KLH刺激下淋巴细胞增殖反应差异无统计学意义(P〉0.05)。K1,K2和K3组在KLH刺激下淋巴细胞增殖反应差异均无统计学意义(P〉0.05)。结论:慢病毒介导的RelB基因沉默的BMDC可抵制成熟诱导反应并能在TAChR预致敏的C57BL/6小鼠中诱导抗原特异性免疫耐受,为研究其用于治疗重症肌无力奠定了基础。 展开更多
关键词 树突状细胞 RELB RNA干扰 慢病毒载体 重症肌无力
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RNAiRelBDC对CD4+CD25+双阳性T细胞诱导效应的实验研究
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作者 郑磊 颜晓慧 +2 位作者 王前 包杰 裘宇容 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期 104-106,共3页
目的:探讨核转录因子NF—κB/RelB基因沉默的树突状细胞(RNAi RelB dendriticcell,RNAi RelB DC)诱导异基因CD4+CD25+双阳性T细胞生成的生物效应。方法:实验分为Contr01.DC组、LPS—DC组、RNAiRelBDC组和LPS—RNAiRelBDC组,各... 目的:探讨核转录因子NF—κB/RelB基因沉默的树突状细胞(RNAi RelB dendriticcell,RNAi RelB DC)诱导异基因CD4+CD25+双阳性T细胞生成的生物效应。方法:实验分为Contr01.DC组、LPS—DC组、RNAiRelBDC组和LPS—RNAiRelBDC组,各组DC均与同种异基因T淋巴细胞混合反应后,采用流式细胞术(FCM)分析各组CD4+CD25+双阳性T细胞生成比例。结果:Control—DC组DC较LPS—DC组DC诱导CD4+CD25+双阳性T细胞的增高幅度更显著,两者差异具有统计学意义(P〈0.01)。RNAiReIBDC组和LPS—RNAiRelBDC组DC诱导CD4+CD25+双阳性T细胞生成比例与LPS—DC组相比均存在显著差异(P〈0.01),RNAiRelBDC组DC诱导CD4+CD25+双阳性T细胞生成能力较Control—DC组强,差异具有统计学意义(P〈0.05)。结论:RelB基因被沉默后DC具有较强的诱导CD4+CD25+双阳性T细胞生成的能力,表现出未成熟DC的特点,这种RNAirELbDC有望成为一种新型的致耐受DC用于免疫耐受的诱导研究。 展开更多
关键词 RELB 基因沉默 树突状细胞 生物学效应
RelB基因沉默对骨髓树突细胞生物学效应的影响 预览 被引量:2
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作者 郑磊 颜晓慧 +2 位作者 王前 包杰 平宝红 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期 336-338,共3页
目的探讨核转录因子NFκ-B/RelB基因沉默对树突细胞(DC)生物学效应的影响。方法采用细胞因子诱导培养法体外扩增小鼠骨髓DC,并经免疫磁珠纯化,获得高纯度骨髓DC后,行RelB基因沉默,获得RNAi RelB-DC,扫描电镜和透射电镜观察细胞形态特... 目的探讨核转录因子NFκ-B/RelB基因沉默对树突细胞(DC)生物学效应的影响。方法采用细胞因子诱导培养法体外扩增小鼠骨髓DC,并经免疫磁珠纯化,获得高纯度骨髓DC后,行RelB基因沉默,获得RNAi RelB-DC,扫描电镜和透射电镜观察细胞形态特点,并利用流式细胞术分析细胞表面分子的表达水平,同种异基因混合淋巴细胞反应(MLR)法分析RNAi RelB-DC刺激异基因T细胞增殖的能力。结果扫描电镜下RNAi RelB-DC细胞表面突起较少而短,细胞表面多皱褶;透射电镜下可见细胞内多吞噬泡样结构;流式细胞术分析显示细胞表面分子MHC-Ⅱ、CD86和CD40的表达水平相对较低;MLR显示该DC刺激异基因T细胞增殖的能力相对较弱。结论RelB基因沉默DC的生物学效应表现为未成熟DC的特点,这种RNAi RelB-DC作为一种新型的致耐受DC,有望应用于免疫耐受的诱导研究。 展开更多
关键词 RELB 基因沉默 树突细胞
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DC2.4表面分子与RelB基因表达的关系 预览 被引量:4
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作者 包杰 郑磊 +4 位作者 曾方银 杨红玲 裘宇容 李娟 王前 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期 56-58,共3页
目的探讨DC2.4表面分子表达水平与RelB基因表达间的关系。方法用RPMI1640完全培养液培养DC2.4细胞系,光学显微镜观察培养细胞的形态特征;透射电镜观察DC2.4的细胞结构;流式细胞术分析DC2.4的表面标记(MHC-II、CD86和CD40);RT-... 目的探讨DC2.4表面分子表达水平与RelB基因表达间的关系。方法用RPMI1640完全培养液培养DC2.4细胞系,光学显微镜观察培养细胞的形态特征;透射电镜观察DC2.4的细胞结构;流式细胞术分析DC2.4的表面标记(MHC-II、CD86和CD40);RT-PCR检测DC2.4的RelB表达水平。结果光镜观察DC2.4细胞表面有明显的树突状突起,形态极不规则;透射电镜显示DC2.4细胞内含许多质地均匀的脂滴,可见吞噬小泡样的结构。流式细胞术显示MHC-II类分子和CD40呈低水平表达,而CD86分子却呈高水平表达;RT-PCR结果显示Re鹏呈低水平表达.与骨髓源性DC中的未成熟状态DC的RelB表达水平接近。结论DC2.4具有强吞噬功能,其表面CD40分子和细胞内舶鹏基因均呈低水平表达,提示DC2.4是一种未成熟状态的细胞系。 展开更多
关键词 DC2.4 RELB 基因表达
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小鼠RelB基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定 预览 被引量:7
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作者 包杰 王前 +5 位作者 郑磊 曾方银 刘杰 熊石龙 裘宇容 李娟 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期 585-587,共3页
目的构建小鼠RelB基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,有效沉默骨髓树突细胞(Dc)的RelB基因表达,为构建骨髓致耐受DC用于自身免疫病的防治提供研究基础。方法利用Invitrogen公司在线软件设计小鼠RelB基因(NM_009046)shRNA序列,合成... 目的构建小鼠RelB基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,有效沉默骨髓树突细胞(Dc)的RelB基因表达,为构建骨髓致耐受DC用于自身免疫病的防治提供研究基础。方法利用Invitrogen公司在线软件设计小鼠RelB基因(NM_009046)shRNA序列,合成、退火形成dsoligo后克隆到pENTR^TM/U6载体的黏性末端,测序,得到的阳性重组子再与慢病毒载体进行重组,转化stb13感受态细胞,测序鉴定,在脂质体的介导下将慢病毒的包装混合物和RelB基因重组慢病毒载体导入293FT细胞,包装成病毒后,收集病毒上清,采用系列稀释法测定病毒滴度。结果测序结果显示pENTR^TM/U6-RelB-shRNA为阳性克隆,将该阳性重组载体与慢病毒载体重组,转化,氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,U6前引物测序鉴定,测序结果显示该重组慢病毒载体也为阳性克隆,在293FT细胞中进行病毒包装,收集上清并在-80℃贮存。系列稀释法检测病毒悬液的滴度为6×10^5TU/ml。结论成功构建出小鼠RelB基因shRNA慢病毒RNAi表达载体,为制备致耐受DC和研究DC在自身免疫病中的应用提供了稳定的转染细胞载体。 展开更多
关键词 基因 RelB RNA干扰 慢病毒载体 滴度
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小鼠骨髓源性树突状细胞和DC2.4中RelB基因表达水平的比较研究 预览 被引量:1
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作者 郑磊 包杰 +3 位作者 王前 顾春瑜 裘宇容 李娟 《热带医学杂志》 CAS 2006年第7期 745-748,772,共5页
目的比较研究体外分离培养的小鼠骨髓来源的树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BM-DC)和DC2.4中核转录因子RelB基因的表达水平。方法无菌从C57BL/6小鼠股骨和胫骨中取出骨髓细胞,利用rmGM-CSF和rmlL-4联合诱导体系... 目的比较研究体外分离培养的小鼠骨髓来源的树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BM-DC)和DC2.4中核转录因子RelB基因的表达水平。方法无菌从C57BL/6小鼠股骨和胫骨中取出骨髓细胞,利用rmGM-CSF和rmlL-4联合诱导体系扩增骨髓前体细胞的方法产生未成熟的BM—DC,未成熟的BM—DC在培养结束前18h经LPS刺激获得成熟的BM-DC;DC2.4细胞系用含10%胎牛血清的RPMI1640完全培养液于37℃,5%CO2条件孵箱中培养。用流式细胞术分析它们的表型,用RT-PCR和免疫荧光染色法检测成熟的BM-DC、未成熟的BM-DC和DC2.4.Rel BmRNA和其蛋白的表达。结果流式细胞术分析显示MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子CD40在未成熟的BM-DC和DC2.4中均呈低水平表达,在成熟的BM-DC中则呈高水平表达:共刺激分子CD86在成熟的BM-DC和DC2.4中均呈高水平表达,而在未成熟的BM—DC中呈低水平表达。RT-PCR和免疫荧光染色法检测结果均显示.RelB基因在未成熟的BM-DC和DC2.4中均呈低水平表达:而在成熟的BM-DC中呈高水平表达,成熟的BM-DC与未成熟BM-DC及DC2.4均存在显著差异(P〈0.01)。结论RelB基因的表达与小鼠BM-DC的成熟状态密切相关。RelB基因在DC2.4中呈低水平表达,提示DC2.4是一种不成熟的DC细胞系。DC2.4具有的未成熟DC的特点可能与RelB基因的低水平表达有一定关系。抑制骨髓DC中RelB基因的表达,有可能诱导产生具有耐受原性的未成熟的DC。 展开更多
关键词 小鼠 骨髓源性树突状细胞 DC2.4 RELB 基因表达
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